Name: a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice
Uploaded: 2019-08-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

Wij zijn mevrouw Jennifer munguia zeer erkentelijk voor haar artistieke illustratie van het schematische diagram. We danken de heer Michael R. Honig in het publieke radio station van Houston, KPFT, voor zijn redactionele hulp. Deze studie werd gesteund door American Diabetes Association #1 -15-BS-177 (YS), en NIH R56DK118334/R01DK118334 (YS). Dit werk werd ook gesteund door het USDA National Institute of Food and Agriculture, Hatch project 1010840 (YS) en R01 DK095118 (SG).

Alle hier beschreven methoden zijn goedgekeurd door het Dierenzorg-en gebruiks Comité (ACUC) van Texas A & M University. De chirurgische gereedschappen moeten worden weergegeven in Figuur 1 en het schematische schema van de procedure wordt weergegeven in Figuur 2.
1. oplossingen
<ol><li>Bereid de uitgebalanceerde zoutoplossing van Hank (HBSS) voor door 100 mL 10X HBSS (uit voorraad) toe te voegen aan 900 mL gedistilleerd water om 1...

<ol>
	<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>O'Dowd, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+purification+of+rodent+pancreatic+islets+of+Langerhans.">The isolation and purification of rodent pancreatic islets of Langerhans.</a> Methods in Molecular Biology. 560, 37-42 (2009).</li><li>Do, O. H., Low, J. T., Thorn, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lepr(db)+mouse+model+of+type+2+diabetes:+pancreatic+islet+isolation+and+live-cell+2-photon+imaging+of+intact+islets.">Lepr(db) mouse model of type 2 diabetes: pancreatic islet isolation and live-cell 2-photon imaging of intact islets.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (99), e52632 (2015).</li><li>Stull, N. D., Breite, A., McCarthy, R., Tersey, S. A., Mirmira, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+islet+of+Langerhans+isolation+using+a+combination+of+purified+collagenase+and+neutral+protease.">Mouse islet of Langerhans isolation using a combination of purified collagenase and neutral protease.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (67), (2012).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Differences+in+Islet+Distribution+in+the+Human+Pancreas+-+Preferential+Beta-Cell+Loss+in+the+Head+Region+in+Patients+with+Type+2+Diabetes.">Regional Differences in Islet Distribution in the Human Pancreas - Preferential Beta-Cell Loss in the Head Region in Patients with Type 2 Diabetes.</a> PLOS ONE. 8, (2013).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (88), e50374 (2014).</li><li>Scharp, D. W., Lacy, P. E., Finke, E., Olack, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+culture+of+human+islets+isolated+by+the+distention+method+and+purified+with+Ficoll+or+Percoll+gradients.">Low-temperature culture of human islets isolated by the distention method and purified with Ficoll or Percoll gradients.</a> Surgery. 107 (5), e50374 (1987).</li><li>Salvalaggio, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+filtration:+a+simple+and+rapid+new+purification+procedure+that+avoids+ficoll+and+improves+islet+mass+and+function.">Islet filtration: a simple and rapid new purification procedure that avoids ficoll and improves islet mass and function.</a> Transplantation. 74 (66), 877-879 (2002).</li><li>Saliba, Y., Bakhos, J. J., Itani, T., Fares, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+for+purification+of+functional+islets+of+Langerhans.">An optimized protocol for purification of functional islets of Langerhans.</a> Laboratory Investigation. 97 (1), 70-83 (2017).</li><li>Pradhan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+stimulates+glucose-induced+insulin+secretion+through+ghrelin+receptor+GHS-R.">Obestatin stimulates glucose-induced insulin secretion through ghrelin receptor GHS-R.</a> Scientific Reports. 7 (1), 979 (2017).</li><li>Shapiro, A. M. J., Hao, E., Rajotte, R. V., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+and+stationary+digestion--a+comparison+with+standard+technique.">High yield of rodent islets with intraductal collagenase and stationary digestion--a comparison with standard technique.</a> Cell Transplantation. 5 (6), 631-638 (1996).</li></ol>

Dit protocol omvat Collagenase perfusie en spijsvertering, gevolgd door zuivering van eilandjes. De meest kritieke stappen van dit protocol zijn effectieve injectie en volledige perfusie van de alvleesklier1,4,7. De leveringsmethode van dit protocol kan het enzym de anatomische routes doorkruisen om het exocriene weefsel rond de eilandjes1beter te verteren. Bovendien is deze techniek zeer geschikt voor vo...

Er zijn twee veelgebruikte methoden in de literatuur voor de isolatie van de eiland alvleesklier. Men vereist het exciseren van de alvleesklier en het diceren in kleine stukjes met behulp van chirurgische schaar, en vervolgens verteerd in een Collagenase oplossing1,2,3. Een andere preciezere methode is het gebruik van het netwerk van kanalen aanwezig in de alvleesklier te introduceren spijsverterings enzym. De volgende sites zijn gebruikt voor de digestieve enzym injectie: de kruising van de gal en Cystic duct, de galblaas in de Galgang, of de gemeenschappelijke gal duct zelf1,4,5. Het is bekend dat eilandjes niet gelijkmatig worden verdeeld in de alvleesklier; de regio milt bevat de meeste eilandjes6. Terwijl de tweede methode met behulp van anatomische routes voor het leveren van spijsverteringsenzymen zorgt voor een vollediger perfusie van de alvleesklier, met inbegrip van de milt regio, deze procedure vereist vaak klemmen of het versterken van de Papil van Vater die technisch Uitdagende. In termen van de zuivering van het eilandje, zijn meerdere dichtheidsgradiënten, evenals celstrainers en magnetische terugtrekking gebruikt om de eilandjes op3,7te zuiveren. Het gebruik van deze gradiënten kan tijdrovend zijn en de Ficoll gradiënten kunnen leiden tot toxische schade aan eilandjes8.
Het huidige protocol is gebaseerd op de methode die wordt beschreven door Li et al.7, met aanvullende wijzigingen toegevoegd op basis van de ervaring van onszelf en anderen1,4. De meest kritische stappen van ons protocol zijn het klemmen van de galwegen in de buurt van het lever uiteinde, het injecteren van Collagenase P via de Papil van Vater om het exocriene weefsel te verteren en vervolgens een schud waterbad te gebruiken om de spijsvertering mechanisch te versnellen1, 4,7. Vervolgens wordt een ' STOP'-oplossing toegepast om de verdere vertering van de eilandjes te remmen; HBSS wordt gebruikt om de resterende Collagenase P-en STOP oplossing af te spoelen. Wanneer de Ficoll-methode werd gebruikt om menselijke eilandjes te zuiveren, werd de opbrengst gerapporteerd als tweemaal de eilandjes met een grotere functionele capaciteit (bijv. insuline secretie) in vergelijking met het gebruik van Percoll gradiënten9. Studies hebben echter het gebruik van Ficoll gradiënt betwist vanwege het toxische effect op de eilandjes1,10. Er is gemeld dat de histopaque gradiënt optimale zuiverings kinetiek biedt voor het isoleren van muizen eilandjes, wat een goede opbrengst oplevert van hoogwaardige eilandjes met eenvoudigere stappen en lagere kosten1. In ons protocol wordt Histopaque-1077 gebruikt om eilandjes van ander rest weefsel8,11te zuiveren. De geoogste eilandjes kunnen worden gekweekt in complete RPMI-1640-media, of rechtstreeks worden gebruikt in RNA/eiwit quantitatie.
Ons protocol, met behulp van een combinatie van Collagenase P spijsvertering en een enkele gradiënt zuivering stap, is eenvoudiger dan andere gepubliceerde protocollen. Onze methode vereist geen veeleisende chirurgische procedures en heeft slechts een paar eenvoudige stappen. Wat nog belangrijker is, dit protocol produceert consequent een goede opbrengst van hoogwaardige functionele eilandjes (250-350/muis) zoals we gemeld12.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Hoding collagenase P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-396</td>
			<td>Holding skin of mouse to aid incision procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Holding tissues during pancreas removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>B13B16A</td>
			<td>To anaesthetize mice prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30-2041</td>
			<td>Used for islet culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G. &#189; inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>For penetration of Ampulla of vater to deliver Collagenase P - this guage is used as it fits well in most CBDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>Holding digested pancreatic tissue, collagenase P, and purified islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent pads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82020-845</td>
			<td>To absorb blood from syurgical procesdudes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R with swing bucket and deceleration capability</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5811FJ478114</td>
			<td>Use for pelleting tissues, pellet is formed at bottom of conical tube - swing bucket centrifuge is needed. Also the decelaration feature is important to form the gradient layers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P- 1g</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>11249002001</td>
			<td>For digestion of exocrine pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved surgical scissors</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>13-804-21</td>
			<td>For cutting open mouse abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>Used for identification of key anatomical structures to accurately deliver collagenase into pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td>Washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBF5100</td>
			<td>For gradient formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Leeds</td>
			<td>LR92240</td>
			<td>Enhancing visibility of microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>For removing RNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Media w/o L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-040-CV</td>
			<td>Culturing Islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz micro serrefines (Microvascular clamp)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18052-01</td>
			<td>Clamping common bile duct and hepatic artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking waterbath</td>
			<td>Boekel/Grant</td>
			<td>8R0534008</td>
			<td>Important for mechanical digestion of exocrine tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td>Cuttitng tissue that atached to pancreas</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice

Pancreas eilandjes, ook wel de eilandjes van Langerhans, zijn een cluster van endocriene cellen die hormonen produceert voor glucoseregulatie en andere belangrijke biologische functies. De eilandjes bestaan hoofdzakelijk uit vijf soorten hormonen-afscheidende cellen: α-cellen scheiden glucagon, β-cellen scheiden insuline, δ cellen scheiden Somatostatine, ε cellen afscheiden ghreline, en PP cellen scheiden alvleesklier polypeptide. 60 tot 80% van de cellen in de eilandjes zijn β-cellen, die de belangrijkste celpopulatie zijn om de insuline secretie te bestuderen. Pancreatic eilandjes zijn een cruciaal modelsysteem om ex vivo insuline secretie te bestuderen. Het verwerven van hoge kwaliteit eilandjes is van groot belang voor diabetesonderzoek. De meeste eilandje isolatie procedures vereisen technisch moeilijk te benaderen site van Collagenase injectie, harde en complexe spijsvertering procedures, en meerdere dichtheid gradiënt zuivering stappen. Dit papier is voorzien van een eenvoudige, hoge opbrengst muis eiland isolatiemethode met gedetailleerde beschrijvingen en realistische demonstraties, met de volgende specifieke stappen: 1) injectie van Collagenase P bij de Papil van Vater, een klein gebied dat lid wordt van de alvleesklier en de Galgang, 2) enzymatische vertering en mechanische scheiding van de exocriene alvleesklier, en 3) een enkele gradiënt zuiveringsstap. De voordelen van deze methode zijn de injectie van spijsverterings enzym met behulp van de toegankelijker Papil van Vater, completere spijsvertering met behulp van combinatie van enzymatische en mechanische benaderingen, en een eenvoudigere enkele gradiënt zuivering stap. Dit protocol produceert ongeveer 250 — 350 eilandjes per muis; en eilandjes zijn geschikt voor verschillende ex vivo-studies. Mogelijke waarschuwingen van deze procedure zijn potentieel beschadigde eilandjes als gevolg van enzymatische spijsvertering en/of langdurige gradiënt incubatie, die allemaal grotendeels kunnen worden vermeden door zorgvuldige advertentie-rechtvaardiging van incubatietijd.

Juiste voltooiing van deze procedure vereist enig begrip van muis anatomie in de buikholte. Dit zorgt voor een juiste identificatie van de Papil van Vater en klemmen van de Galgang. De gehele procedure duurt normaal 1 – 2 uur. Het is efficiënter om eilandjes van 4 – 6 muizen tegelijkertijd te isoleren, zodat verschillende monsters samen kunnen worden gecentrifugeerd. De tijd voor eilandje-plukken varieert, afhankelijk van het aantal eilandjes en de efficiëntie van de spijsvertering; het kan ongeveer een uur duren o...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Dit eilandje isolatie protocol beschreef een roman route van Collagenase injectie om het exocriene weefsel te verteren en een vereenvoudigde gradiënt procedure om de eilandjes van muizen te zuiveren. Het gaat om enzymatische spijsvertering, gradiënt scheiding/zuivering en eilandje hand-picking. Succesvolle isolatie kan 250 – 350 hoge kwaliteit en volledig functionele eilandjes per muis opleveren.

Een eenvoudig hoog rendement protocol voor isolatie van de alvleesklier eiland van muizen

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Dit protocol vereist het gebruik van een enkele dichtheid gradiënt waardoor het aanzienlijk minder arbeidsintensief en kosteneffectiever in vergelijking met meer complexe conventionele eilandje isolatie methoden. Het belangrijkste voordeel van dit protocol is dat het enzym rechtstreeks aan de alvleesklier wordt geleverd, wat resulteert in een verbeterde weefselvertering en verhoogde eilandjesopbrengst. Begin met het aftappen van de ledematen van de muis in de supine positie en spuit het lichaam met 70%ethanol.Met behulp van coverglass tang en gebogen chirurgische schaar, maak een ongeveer drie centimeter horizontale buikhuid incisie en trek de huid open om de buikwand bloot te leggen. Maak een verticale incisie van drie tot vier centimeter op het buikbaargtonum om de alvleesklier volledig bloot te leggen en plaats de muis onder een ontledende microscoop. Duw de leverkwab superieur aan de galbuis die verschijnt als een lichtroze buis bloot te stellen en voorzichtig bewegen de darmen van de rechter lenden- en iliacale regio aan de rechterkant van de buikholte om de galwegen en leverslagader bloot te stellen.Gebruik Schwartz micro serrefines om het gemeenschappelijke galkanaal zo dicht mogelijk bij de lever te klemmen en de ampulla van Vater te identificeren die zich op de duodenale papillen bevindt en gevormd wordt door de vereniging van het alvleesklierkanaal en het gemeenschappelijke galkanaal. Met behulp van micro Adson tangen om de gemeenschappelijke gal buis onderwezen te trekken, steek een 30 meter halve-inch naald bevestigd aan een drie milliliter spuit met drie milliliter van vers bereide collagenase P oplossing in de ampulla van Vater duwen de naald in het kanaal parallel aan het vat voor ongeveer een kwart van de lengte van het vat. Zodra de naald op zijn plaats is, stabiliseer de naald met micro Adson tangen en langzaam en gestaag injecteren drie milliliter collagenase P oplossing in het kanaal.De injectie wordt als succesvol beschouwd als de hoofd-, nek-, lichaams- en staartgebieden van de alvleesklier volledig zijn opgeblazen. Een goede intrede in de ampulla en cannulation van de gemeenschappelijke galbuis zijn van cruciaal belang voor een succesvolle spijsvertering oogst. Piercing de ductal muren vermindert de werkzaamheid van de isolatie.Met behulp van gebogen en micro Adson tangen, zorgvuldig trek de opgeblazen alvleesklier te beginnen bij de milt en verder in de richting van de maag en langs de twaalfvingerige darm. Plaats vervolgens de alvleesklier in een 50 milliliter spijsverteringsbuis met drie milliliter ijskoude collagenase P-oplossing. Om de eilandjes te oogsten, gebruik je eerst een fijne chirurgische schaar om de alvleesklier drie tot vijf seconden te hakken voordat je de buis in een waterbad van 37 graden Celsius plaatst bij 100 tot 120 rotaties per minuut gedurende 12 tot 13 minuten.Schud aan het einde van de incubatie de buis ongeveer 30 seconden zachtjes om het weefsel te verstoren totdat de oplossing homogeen is, zoals bevestigd door fijne zandachtige pancreasweefseldeeltjes. Zodra het weefsel is verteerd, plaats de buis op ijs en voeg 40 milliliter ijskoude stopoplossing toe om de enzymatische reactie te beëindigen. Na het zachtjes verstoren van de pellet, spin het verteerde weefsel in een swingende emmer centrifuge gevolgd door twee centrifugaties met 20 milliliter verse stopoplossing per wasbeurt.Na de laatste wasbeurt, resuspend de pellet in 40 milliliter ijskoud HBSS voor drie extra wasbeurten, resuspending de pellet in vijf milliliter van kamertemperatuur dichtheid gradiënt oplossing na de laatste wasbeurt. Vortex de buis kort bij lage snelheid totdat de oplossing is gehomogeniseerd alvorens nog eens vijf milliliter kamertemperatuur dichtheid gradiënt aan de buis. Gebruik nu een pipet van 10 milliliter om voorzichtig en langzaam 10 milliliter kamertemperatuur HBSS aan de buis toe te voegen op een druppelwijze om de vorming van een gradiënt mogelijk te maken en gebruik een swingende emmercentrifuge om de celpopulaties te isoleren door dichtheidsgradiëntscheiding.Gebruik aan het einde van de centrifugatie een pipet van 10 milliliter voorwet met koude HBSS om vijf tot 10 milliliter van de eilandjelaag tussen de dichtheidsgradiënt en de HBSS te verzamelen. Breng de eilandjes over in een nieuwe buis van 50 milliliter met 20 milliliter verse ijskoude HBSS en verzamel de cellen door centrifugeren in een swingende emmercentrifuge. Zorgvuldig aanzuigen alle, maar de laatste drie milliliter van de supernatant zonder verstoring van de pellet en was de eilandjes ten minste drie keer met 20 milliliter verse HBSS per wasbeurt.Vervang na de laatste wasbeurt de supernatant door vier milliliter van 37 graden Celsius RMPI 1640 medium en draai de buis voorzichtig om de pellet los te maken. Giet de eilandjes onmiddellijk in een petrischaaltje van 100 millimeter en was de buis met vijf milliliter vers RPMI 1640 medium om de resterende eilandjes te verzamelen die de was met de andere eilandjes bundelen. Gebruik vervolgens een dissectie microscoop en een 20 microliter pipet tip om gezonde bolvormige of langwerpige goudbruine eilandjes met een glad oppervlak van de petrischaal te kiezen voor overdracht in een nieuwe petrischaal met 10 milliliter van volledige RPMI 1640 medium.Wanneer alle eilandjes zijn verzameld, plaats de eilandjes in een steriele couveuse op 37 graden Celsius en 5% kooldioxide in bevochtigde lucht 's nachts. Goede gezonde eilandjes lijken een gladde ronde vorm te hebben, terwijl slechte beschadigde eilandjes ruwe randen vertonen. Onverteerd exocrine weefsel is doorschijnend van uiterlijk en toont een onregelmatige vorm aan.Een goede cannulation en distributie van het collagenase P enzym kan worden bevestigd door een inflatie van het miltgedeelte van de alvleesklier. 's Nachts incubatie in lage glucose media kan prime de eilandjes voor een glucose-gestimuleerde insuline secretie test op de volgende dag waardoor inzicht in de insuline secretoire capaciteit van de eilandjes.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine eilandjes van Langerhans Isolatie

Neutrophil Isolation Protocol

Neutrofielen Isolatie Protocol

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Human eilandjes van Langerhans Isolatie: Deel I: Spijsvertering en verzameling van alvleesklierweefsel

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

Human eilandjes van Langerhans Isolatie: Deel II: Zuivering en cultuur van de mens Eilandjes

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Isolatie van stamcellen uit menselijke pancreaskanker xenotransplantaten

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

Een eenvoudig protocol voor het extraheren van hemocyten van Wild Rupsen

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Een methode voor muis eilandjes van Langerhans Isolatie en intracellulaire cAMP Bepaling

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Alvleesklier Islet insluiten voor paraffine secties

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imaging calcium dynamica in subpopulaties van muizen pancreatic eilandje cellen

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...