Name: a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice
Uploaded: 2019-08-30T12:30:00
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हम योजनाबद्ध आरेख के अपने कलात्मक चित्रण के लिए सुश्री जेनिफर Munguia के लिए अत्यंत आभारी हैं. हम अपने संपादकीय सहायता के लिए ह्यूस्टन के सामुदायिक सार्वजनिक रेडियो स्टेशन KPFT में श्री माइकल आर Honig धन्यवाद. इस अध्ययन अमेरिकन डायबिटीज एसोसिएशन #1-15-बीएस-177 (वाईएस), और NIH R56DK118334/R01DK118334 (YS) द्वारा समर्थित किया गया था। इस काम को यूएसडीए राष्ट्रीय खाद्य एवं कृषि संस्थान, हैच परियोजना 1010840 (वाईएस) और आर01 डीके095118 (एसजी) द्वारा भी सहायता प्रदान की गई थी।

यहाँ वर्णित सभी तरीकों टेक्सास ए एंड एम विश्वविद्यालय के पशु देखभाल और उपयोग समिति (ACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है. शल्य चिकित्सा उपकरणों की आवश्यकता चित्र 1 में दिखाई गई है और प्रक्रिया का य...

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	<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>O'Dowd, J. 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J., Itani, T., Fares, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+for+purification+of+functional+islets+of+Langerhans.">An optimized protocol for purification of functional islets of Langerhans.</a> Laboratory Investigation. 97 (1), 70-83 (2017).</li><li>Pradhan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+stimulates+glucose-induced+insulin+secretion+through+ghrelin+receptor+GHS-R.">Obestatin stimulates glucose-induced insulin secretion through ghrelin receptor GHS-R.</a> Scientific Reports. 7 (1), 979 (2017).</li><li>Shapiro, A. M. J., Hao, E., Rajotte, R. V., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+and+stationary+digestion--a+comparison+with+standard+technique.">High yield of rodent islets with intraductal collagenase and stationary digestion--a comparison with standard technique.</a> Cell Transplantation. 5 (6), 631-638 (1996).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में कोलाजनेस भ्रम और पाचन शामिल है, इसके बाद आइलेट्स की शुद्धि की जाती है। इस प्रोटोकॉल के सबसे महत्वपूर्ण कदम प्रभावी इंजेक्शन और अग्न्याशय के पूर्ण भ्रमहैं 1,4,<...

अग्नाशयी आइलेट अलगाव के लिए साहित्य में दो आम तरीके हैं. एक अग्न्याशय excising और यह शल्य कैंची का उपयोग कर छोटे टुकड़ों में dicing की आवश्यकता है, और फिर यह एक कोलैजा समाधान में पचा1,2,3. एक और अधिक सटीक विधि पाचन एंजाइम परिचय करने के लिए अग्न्याशय में मौजूद नलिकाओं के नेटवर्क का उपयोग करने के लिए है। निम्नलिखित साइटों पाचन एंजाइम इंजेक्शन के लिए इस्तेमाल किया गया है: पित्त और सिस्टिक नलिका के जंक्शन, सामान्य पित्त नली में पित्ताशय की थैली, या आम पित्त नली ही1,4,5. यह ज्ञात है कि islets समान रूप से अग्न्याशय में वितरित नहीं कर रहे हैं; स्प्लेनिक क्षेत्र में सबसे अधिक आइलेट्स6होते हैं। जबकि पाचन एंजाइमों को वितरित करने के लिए शारीरिक मार्गों का उपयोग करने की दूसरी विधि अग्न्याशय का एक अधिक पूर्ण प्रसार के लिए अनुमति देता है, प्लीहा क्षेत्र सहित, इस प्रक्रिया को अक्सर शिकंजा या Vater के ampulla के suturing की आवश्यकता है कि तकनीकी रूप से है चुनौतीपूर्ण. आइलेट शोधन के संदर्भ में अनेक घनत्व प्रवणता तथा कोशिका प्रभेदकतथा चुंबकीय प्रत्याकर्षण का प्रयोग आइलेट्स3,7को शुद्ध करने के लिए किया गया है। इन प्रवणताओं का उपयोग समय लगता है और फिकॉल ग्रेडिएंट के परिणामस्वरूप आइलेट्स8की विषाक्त क्षति हो सकती है .
वर्तमान प्रोटोकॉल ली एट अल द्वारा वर्णित विधि पर बनाया गया है,अतिरिक्त संशोधनों के साथ अपने आप को और दूसरों के अनुभव के आधार पर जोड़ा1,4. हमारे प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण कदम जिगर के अंत के पास आम पित्त नली के clamping रहे हैं, Vater के ampulla के माध्यम से कोलैनाज पी इंजेक्शन एक्सोक्रिन ऊतक पचाने के लिए, और फिर एक मिलाते हुए पानी स्नान का उपयोग करने के लिए पाचन यंत्रवत्1, 4,7. बाद में, आइलेट्स के आगे पाचन को बाधित करने के लिए एक 'STOP' समाधान लागू किया जाता है; HBSS शेष collagenase पी और बंद करो समाधान धोने के लिए प्रयोग किया जाता है. जब फिकॉल विधि का उपयोग मानव आइलेट्स को शुद्ध करने के लिए किया गया था, तो पर्कॉल ग्रेडिएंट्स9के उपयोग की तुलना में उपज को अधिक कार्यात्मक क्षमता (उदाहरण के लिए, इंसुलिन स्राव) के साथ दो बार आइलेट्स होने की सूचना दी गई थी। तथापि, अध्ययनों से आईलेट्स1,10पर इसके जहरीले प्रभाव के कारण फिकॉल ग्रेडिएंट के उपयोग पर प्रश्न उठाया गया है। यह सूचित किया गया है कि हिस्टोपैकी प्रवणता माउस आइलेट आइसोलेशन के लिए इष्टतम शुद्धि गतिज प्रदान करती है, जो सरल चरणों और कम लागत1के साथ उच्च गुणवत्ता वाले आइलेट्स की अच्छी उपज पैदा करती है। हमारे प्रोटोकॉल में, हिस्टोपाक-1077 का उपयोग अन्य अवशिष्ट ऊतक8,11से आइलेट्स को शुद्ध करने के लिए किया जाता है। काटा islets पूर्ण RPMI-1640 मीडिया में सुसंस्कृत किया जा सकता है, या सीधे आरएनए में उपयोग /
हमारे प्रोटोकॉल, collagenase पी पाचन और एक एकल ढाल शुद्धि कदम का एक संयोजन का उपयोग कर, अन्य प्रकाशित प्रोटोकॉल की तुलना में सरल है. हमारी विधि शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं की मांग की आवश्यकता नहीं है और बस कुछ ही सरल कदम है. इससे भी महत्वपूर्ण बात, इस प्रोटोकॉल लगातार उच्च गुणवत्ता कार्यात्मक islets (250-350/

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Hoding collagenase P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-396</td>
			<td>Holding skin of mouse to aid incision procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Holding tissues during pancreas removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>B13B16A</td>
			<td>To anaesthetize mice prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30-2041</td>
			<td>Used for islet culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G. &#189; inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>For penetration of Ampulla of vater to deliver Collagenase P - this guage is used as it fits well in most CBDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>Holding digested pancreatic tissue, collagenase P, and purified islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent pads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82020-845</td>
			<td>To absorb blood from syurgical procesdudes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R with swing bucket and deceleration capability</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5811FJ478114</td>
			<td>Use for pelleting tissues, pellet is formed at bottom of conical tube - swing bucket centrifuge is needed. Also the decelaration feature is important to form the gradient layers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P- 1g</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>11249002001</td>
			<td>For digestion of exocrine pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved surgical scissors</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>13-804-21</td>
			<td>For cutting open mouse abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>Used for identification of key anatomical structures to accurately deliver collagenase into pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td>Washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBF5100</td>
			<td>For gradient formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Leeds</td>
			<td>LR92240</td>
			<td>Enhancing visibility of microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>For removing RNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Media w/o L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-040-CV</td>
			<td>Culturing Islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz micro serrefines (Microvascular clamp)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18052-01</td>
			<td>Clamping common bile duct and hepatic artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking waterbath</td>
			<td>Boekel/Grant</td>
			<td>8R0534008</td>
			<td>Important for mechanical digestion of exocrine tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td>Cuttitng tissue that atached to pancreas</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice

अग्नाशयis, भी Langerhans के Islets कहा जाता है, अंत: स्रावी कोशिकाओं का एक समूह है जो ग्लूकोज विनियमन और अन्य महत्वपूर्ण जैविक कार्यों के लिए हार्मोन का उत्पादन कर रहे हैं. इसलेट्स में मुख्य रूप से पांच प्रकार की हार्मोन-स्रावित कोशिकाएं होती हैं: जेड कोशिकाएं ग्लूकागन को स्रावित करती हैं, जेड कोशिकाएं इंसुलिन को स्रावित करती हैं, जेड कोशिकाओं को सोमेटोस्टेटिन, जेड कोशिकाओं को स्रावित करता है। इस्लेट्स में 60 से 80% कोशिकाएं हैं- कोशिकाएं, जो इंसुलिन स्राव का अध्ययन करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण कोशिका जनसंख्या हैं। अग्नाशयी आइलेट्स पूर्व विवो इंसुलिन स्राव का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल प्रणाली है। मधुमेह अनुसंधान के लिए उच्च गुणवत्ता islets प्राप्त बहुत महत्व का है. अधिकांश आइलेट अलगाव प्रक्रियाओं कोकोलैनेज इंजेक्शन, कठोर और जटिल पाचन प्रक्रियाओं, और कई घनत्व ढाल शुद्धि कदम की साइट का उपयोग करने के लिए तकनीकी रूप से मुश्किल की आवश्यकता होती है। इस कागज विस्तृत विवरण और यथार्थवादी प्रदर्शनों के साथ एक सरल उच्च उपज माउस आइलेट अलगाव विधि सुविधाएँ, निम्नलिखित विशिष्ट चरणों दिखा: 1) Vater के ampulla पर collagenase पी का इंजेक्शन, एक छोटा सा क्षेत्र अग्नाशय ीduct में शामिल होने और आम पित्त नली, 2) एंजाइमी पाचन और एक्सोक्रिन अग्न्याशय के यांत्रिक जुदाई, और 3) एक एकल ढाल शुद्धि कदम. इस विधि के लाभ Vater के अधिक सुलभ ampulla का उपयोग कर पाचन एंजाइम के इंजेक्शन, एंजाइमी और यांत्रिक दृष्टिकोण के संयोजन का उपयोग कर अधिक पूरा पाचन, और एक सरल एकल ढाल शुद्धि कदम हैं. यह प्रोटोकॉल प्रति माउस लगभग 250-350 islets उत्पन्न करता है; और islets विभिन्न पूर्व vivo अध्ययन के लिए उपयुक्त हैं. इस प्रक्रिया के संभावित चेतावनी एंजाइमी पाचन और/या लंबे समय तक ढाल ऊष्मायन के कारण संभावित रूप से क्षतिग्रस्त हो जाती हैं, जिनमें से सभी को ऊष्मायन समय के सावधानीपूर्वक विज्ञापन औचित्य से काफी हद तक बचा जा सकता है।

इस प्रक्रिया के उचित पूरा होने के पेट की गुहा में माउस शरीर रचना विज्ञान की कुछ समझ की आवश्यकता है. यह Vater के ampulla की उचित पहचान और आम पित्त नली के clamping के लिए अनुमति देता है. संपूर्ण प्रक्रिया सामान्यतः 1-2 ज ले?...

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A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

इस आइलेट अलगाव प्रोटोकॉल exocrine ऊतक को पचाने के लिए कोलैडेज इंजेक्शन के एक उपन्यास मार्ग और चूहों से islets को शुद्ध करने के लिए एक सरलीकृत ढाल प्रक्रिया का वर्णन किया। यह एंजाइमी पाचन, ढाल जुदाई / शुद्धीकरण, और आइलेट हाथ उठा शामिल है। सफल अलगाव 250-350 उच्च गुणवत्ता और माउस प्रति पूरी तरह कार्यात्मक islets उपज कर सकते हैं.

चूहे से अग्नाशयी आइलेट अलगाव के लिए एक सरल उच्च दक्षता प्रोटोकॉल

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

इस प्रोटोकॉल के लिए एक घनत्व ढाल के उपयोग की आवश्यकता होती है जिससे यह अधिक जटिल पारंपरिक आइलेट अलगाव विधियों की तुलना में काफी कम श्रम गहन और अधिक लागत प्रभावी हो जाता है। इस प्रोटोकॉल का मुख्य लाभ यह है कि एंजाइम सीधे अग्न्याशय में वितरित किया जाता है जिसके परिणामस्वरूप एक बढ़ाया ऊतक पाचन और बढ़ी हुई आइलेट उपज होती है। रीढ़ की स्थिति में माउस के अंगों को टेप करके शुरू करें और 70% इथेनॉल के साथ शरीर को छिड़कें।कवरग्लास संदंश और घुमावदार सर्जिकल कैंची का उपयोग करके, लगभग तीन सेंटीमीटर क्षैतिज पेट की त्वचा चीरा बनाएं और पेट की दीवार को बेनकाब करने के लिए त्वचा को खोलें। अग्न्याशय को पूरी तरह से बेनकाब करने और माउस को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखने के लिए पेट पेरिटोनम पर तीन से चार सेंटीमीटर ऊर्ध्वाधर चीरा बनाएं। एक पीली गुलाबी नली के रूप में प्रकट होने वाली पित्त वाहिनी को बेनकाब करने के लिए जिगर पालि को बेहतर ढंग से पुश करें और पित्त वाहिनी और हेपेटिक धमनी को बेनकाब करने के लिए सही काठ और इलियाक क्षेत्र से आंतों को पेट की गुहा के दाईं ओर ले जाएं।श्वार्ट्ज माइक्रो सेरेफिन का उपयोग संभव के रूप में जिगर के करीब के रूप में आम पित्त वाहिनी को ध्यान से दबाने और वेटर के एम्पुला की पहचान करने के लिए करें जो डुओडेनल पैपिला में स्थित है और अग्नाशय वाहिनी और आम पित्त वाहिनी के संघ द्वारा गठित है। आम पित्त वाहिनी को खींचने के लिए माइक्रो एडसन संदंश का उपयोग करना, एक 30 गेज आधा इंच सुई एक तीन मिलीलीटर से जुड़ी सुई डालें जिसमें तीन मिलीलीटर हौसले से तैयार कोलेजनेस पी समाधान के तीन मिलीलीटर होते हैं, जो वेटर के एम्पुला में सुई को पोत की लंबाई के लगभग एक चौथाई के लिए पोत के समानांतर डक्ट में धकेलते हैं। एक बार सुई जगह में है, माइक्रो Adson संदंश के साथ सुई को स्थिर और धीरे और तेजी से वाहिनी में कोलेजनेस पी समाधान के तीन मिलीलीटर सुई ।इंजेक्शन को सफल माना जाता है यदि अग्न्याशय के सिर, गर्दन, शरीर और पूंछ क्षेत्र पूरी तरह से फुलाए जाते हैं। एक सफल पाचन फसल के लिए आम पित्त वाहिनी के एम्पुला और कैनुलेशन में उचित प्रवेश महत्वपूर्ण हैं। डक्टल दीवारों को छेदने से अलगाव की प्रभावकारिता कम हो जाती है।घुमावदार और माइक्रो एसन संदंश का उपयोग करके, प्लीहा से शुरू होने वाले फुलाया अग्न्याशय को ध्यान से बाहर निकालें और पेट की ओर और डुओडेनम के साथ जारी रखें। फिर अग्न्याशय को 50 मिलीलीटर पाचन ट्यूब में रखें जिसमें तीन मिलीलीटर बर्फ ठंड कोलेजनेस पी समाधान हो। आइलेट्स को फसल करने के लिए, पहले 12 से 13 मिनट के लिए प्रति मिनट १०० से १२० घूर्णन पर ३७ डिग्री सेल्सियस पानी स्नान में ट्यूब रखने से पहले तीन से पांच सेकंड के लिए अग्न्याशय को काटने के लिए ठीक सर्जिकल कैंची का उपयोग करें ।इनक्यूबेशन के अंत में, धीरे के बारे में 30 सेकंड के लिए ट्यूब हिला ऊतक को बाधित करने के लिए जब तक समाधान समरूप है के रूप में ठीक रेत की तरह अग्नाशय के ऊतक कणों द्वारा पुष्टि की है । जैसे ही ऊतक पचा जाता है, ट्यूब को बर्फ पर रखें और एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया को समाप्त करने के लिए 40 मिलीलीटर बर्फ कोल्ड स्टॉप समाधान जोड़ें। धीरे से गोली में खलल न डालें के बाद, एक झूल बाल्टी अपकेंद्रित्र में पचा ऊतक नीचे स्पिन धोने प्रति ताजा बंद समाधान के 20 मिलीलीटर के साथ दो अपकेंद्री के बाद ।अंतिम धोने के बाद, तीन अतिरिक्त वॉश के लिए बर्फ ठंडे एचबीएसएस के 40 मिलीलीटर में गोली को फिर से खर्च करें, अंतिम धोने के बाद कमरे के तापमान घनत्व ढाल समाधान के पांच मिलीलीटर में गोली को फिर से खर्च करें। भंवर ट्यूब संक्षेप में कम गति से जब तक समाधान ट्यूब के लिए कमरे के तापमान घनत्व ढाल के एक और पांच मिलीलीटर जोड़ने से पहले समरूप है । अब धीरे-धीरे और धीरे-धीरे एक बूंद-वार तरीके से ट्यूब में कमरे के तापमान एचबीएसएस के 10 मिलीलीटर जोड़ने के लिए एक ढाल के गठन की अनुमति देने के लिए एक 10 मिलीलीटर पाइप का उपयोग करें और घनत्व ढाल जुदाई द्वारा सेल आबादी को अलग करने के लिए एक झूल बाल्टी अपकेंद्रित्र का उपयोग करें।अपकेंद्रित्र के अंत में, घनत्व ढाल और एचबीएसएस के बीच आइलेट परत के पांच से 10 मिलीलीटर इकट्ठा करने के लिए ठंडे एचबीएसएस के साथ 10 मिलीलीटर पिपेट प्री-वेट का उपयोग करें। आइलेट्स को एक नई 50 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें जिसमें 20 मिलीलीटर ताजा बर्फ ठंडी एचबीएसएस होती है और एक झूलती बाल्टी अपकेंद्रित्र में अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं को इकट्ठा करें। ध्यान से सभी लेकिन गोली परेशान किए बिना सुपरनेटेंट के अंतिम तीन मिलीलीटर और प्रति धोने ताजा एचबीएसएस के 20 मिलीलीटर के साथ कम से कम तीन बार आइलेट्स धोने।अंतिम धोने के बाद, सुपरनिटर को 37 डिग्री सेल्सियस आरएमपीआई 1640 माध्यम के चार मिलीलीटर के साथ बदलें और धीरे से गोली को उखाड़ फेंकने के लिए ट्यूब को भंवर करें। तुरंत आइलेट्स को 100 मिलीमीटर पेट्री डिश में डालें और ट्यूब को ताजा आरपीएमआई 1640 माध्यम के पांच मिलीलीटर के साथ धोएं ताकि अन्य आइलेट्स के साथ धोने वाले किसी भी शेष आइलेट्स को इकट्ठा किया जा सके। फिर एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप और एक 20 माइक्रोलिटर पिपेट टिप का उपयोग करने के लिए स्वस्थ गोलाकार या आयताकार सुनहरे भूरे रंग के आइलेट्स को पेट्री डिश से एक चिकनी सतह के साथ एक नई पेट्री डिश में स्थानांतरित करने के लिए लेने के लिए, जिसमें 10 मिलीलीटर पूर्ण आरपीएमआई 1640 माध्यम होते हैं।जब सभी आइलेट्स एकत्र किए गए हैं, तो आइलेट्स को एक बाँझ इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस और आर्द्रीकृत हवा में 5% कार्बन डाइऑक्साइड को रात भर रखें। अच्छे स्वस्थ आइलेट्स में एक चिकनी गोल आकार दिखाई देता है जबकि खराब क्षतिग्रस्त आइलेट्स किसी न किसी किनारों को प्रदर्शित करते हैं। अपाच्य एक्सोक्राइन ऊतक दिखने में पारदर्शी होता है और एक अनियमित आकार को दर्शाता है।कोलेजनेस पी एंजाइम के एक उचित कैनुलेशन और वितरण की पुष्टि अग्न्याशय के प्लीहा हिस्से की मुद्रास्फीति से की जा सकती है। रातोंरात कम ग्लूकोज मीडिया में इनक्यूबेशन अगले दिन एक ग्लूकोज उत्तेजित इंसुलिन स्राव परख के लिए आइलेट्स प्राइम कर सकते है आइलेट्स की इंसुलिन गुप्त क्षमता में अंतर्दृष्टि की अनुमति ।

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine अग्नाशय आइलेट अलगाव

Neutrophil Isolation Protocol

न्युट्रोफिल अलगाव प्रोटोकॉल

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतक का संग्रह

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग द्वितीय: और मानव islets के शोधन और संस्कृति

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

मानव अग्नाशय के कैंसर xenografts से स्टेम सेल के अलगाव

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

वन्य कैटरपिलर से Hemocytes निकालने के लिए एक साधारण प्रोटोकॉल

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

माउस अग्नाशय आइलेट अलगाव और intracellular शिविर निर्धारण के लिए एक विधि

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

आयल सेक्शन के लिए अग्नाशय टाप एंबेडिंग

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

माउस अग्नाशय आइलेट कोशिकाओं की उपआबादी में इमेजिंग कैल्शियम गतिशीलता

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...