Name: a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice
Uploaded: 2019-08-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

Siamo estremamente grati alla signora Jennifer Munguia per la sua illustrazione artistica del diagramma schematico. Ringraziamo il signor Michael R. Honig alla Community Public Radio Station KPFT di Houston per la sua assistenza editoriale. Questo studio è stato supportato dall'American Diabetes Association #1-15-BS-177 (YS) e NIH R56DK118334/R01DK118334 (YS). Questo lavoro è stato sostenuto anche dall'USDA National Institute of Food and Agriculture, progetto Hatch 1010840 (YS) e R01 DK095118 (SG).

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Animal Care and Use Committee (ACUC) della Texas A&M University. Gli strumenti chirurgici necessari sono illustrati nella Figura 1 e il diagramma schematico della procedura è illustrato nella Figura 2.
1. Soluzioni
<ol><li>Preparare Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) aggiungendo 100 mL di 10X HBSS (dal magazzino) a 900 mL di acqua distillata per fare 1 L HBSS (1X).</li>
	<li>...

<ol>
	<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>O'Dowd, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+purification+of+rodent+pancreatic+islets+of+Langerhans.">The isolation and purification of rodent pancreatic islets of Langerhans.</a> Methods in Molecular Biology. 560, 37-42 (2009).</li><li>Do, O. H., Low, J. T., Thorn, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lepr(db)+mouse+model+of+type+2+diabetes:+pancreatic+islet+isolation+and+live-cell+2-photon+imaging+of+intact+islets.">Lepr(db) mouse model of type 2 diabetes: pancreatic islet isolation and live-cell 2-photon imaging of intact islets.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (99), e52632 (2015).</li><li>Stull, N. D., Breite, A., McCarthy, R., Tersey, S. A., Mirmira, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+islet+of+Langerhans+isolation+using+a+combination+of+purified+collagenase+and+neutral+protease.">Mouse islet of Langerhans isolation using a combination of purified collagenase and neutral protease.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (67), (2012).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Differences+in+Islet+Distribution+in+the+Human+Pancreas+-+Preferential+Beta-Cell+Loss+in+the+Head+Region+in+Patients+with+Type+2+Diabetes.">Regional Differences in Islet Distribution in the Human Pancreas - Preferential Beta-Cell Loss in the Head Region in Patients with Type 2 Diabetes.</a> PLOS ONE. 8, (2013).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (88), e50374 (2014).</li><li>Scharp, D. W., Lacy, P. E., Finke, E., Olack, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+culture+of+human+islets+isolated+by+the+distention+method+and+purified+with+Ficoll+or+Percoll+gradients.">Low-temperature culture of human islets isolated by the distention method and purified with Ficoll or Percoll gradients.</a> Surgery. 107 (5), e50374 (1987).</li><li>Salvalaggio, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+filtration:+a+simple+and+rapid+new+purification+procedure+that+avoids+ficoll+and+improves+islet+mass+and+function.">Islet filtration: a simple and rapid new purification procedure that avoids ficoll and improves islet mass and function.</a> Transplantation. 74 (66), 877-879 (2002).</li><li>Saliba, Y., Bakhos, J. J., Itani, T., Fares, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+for+purification+of+functional+islets+of+Langerhans.">An optimized protocol for purification of functional islets of Langerhans.</a> Laboratory Investigation. 97 (1), 70-83 (2017).</li><li>Pradhan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+stimulates+glucose-induced+insulin+secretion+through+ghrelin+receptor+GHS-R.">Obestatin stimulates glucose-induced insulin secretion through ghrelin receptor GHS-R.</a> Scientific Reports. 7 (1), 979 (2017).</li><li>Shapiro, A. M. J., Hao, E., Rajotte, R. V., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+and+stationary+digestion--a+comparison+with+standard+technique.">High yield of rodent islets with intraductal collagenase and stationary digestion--a comparison with standard technique.</a> Cell Transplantation. 5 (6), 631-638 (1996).</li></ol>

Questo protocollo include la perfusione di collagenae e la digestione, seguita dalla purificazione delle isole. I passaggi più critici di questo protocollo sono l'iniezione efficace e la perfusione completa del pancreas1,4,7. Il metodo di consegna di questo protocollo permette all'enzima di attraversare le vie anatomiche per digerire meglio il tessuto esocrino che circonda le isole1. Inoltre, questa tecn...

Ci sono due metodi comuni nella letteratura per l'isolamento delle isolotzioni pancreatiche. Uno richiede di eccitare il pancreas e dividerlo in piccoli pezzi usando forbici chirurgiche, e poi digerirlo in una soluzione collagenae1,2,3. Un altro metodo più preciso è quello di utilizzare la rete di dotti presenti nel pancreas per introdurre l'enzima digestivo. I seguenti siti sono stati utilizzati per l'iniezione di enzimi digestivi: la giunzione della bile e del dotto cistico, la cistifellea nel dotto biliare comune, o il dotto biliare comune stesso1,4,5. È noto che le isole non sono distribuite uniformemente nel pancreas; la regione splenica contiene la maggior parte degli isolotti6. Mentre il secondo metodo che utilizza percorsi anatomici per fornire enzimi digestivi consente una perfusione più completa del pancreas, compresa la regione splenica, questa procedura spesso richiede la bloccallatura o la sutura dell'ampulla del Vater tecnicamente impegnativo. In termini di purificazione dell'isolotto, sono stati utilizzati ceppi di densità multipla, così come ceppi cellulari e retrazione magnetica per purificare le isole3,7. L'utilizzo di questi gradienti può richiedere molto tempo e le pendenze Ficoll possono causare danni tossici alle isole8.
Il protocollo attuale si basa sul metodo descritto da Li et al.7, con ulteriori modifiche aggiunte in base all'esperienza di noi stessi e degli altri1,4. I passaggi più critici del nostro protocollo sono il bloccaggio del dotto biliare comune vicino alla fine del fegato, l'iniezione di collagenasi P attraverso l'ampulla di Vater per digerire il tessuto esocrino, e quindi utilizzando un bagno d'acqua accomodante per accelerare la digestione meccanicamente1, 4,7. Successivamente, viene applicata una soluzione "STOP" per inibire un'ulteriore digestione delle isole; HBSS viene utilizzato per lavare via la restante soluzione collagenasi P e STOP. Quando il metodo Ficoll è stato utilizzato per purificare le isole umane, la resa è stata segnalata per essere due volte le isole con maggiore capacità funzionale (ad esempio, secrezione di insulina) rispetto all'uso di gradienti di Percoll9. Tuttavia, gli studi hanno messo in discussione l'uso del gradiente di Ficoll a causa del suo effetto tossico sulle isole1,10. È stato riferito che il gradiente Histopaque fornisce una cinetica di purificazione ottimale per l'isolamento dell'isolotto del mouse, che produce una buona resa di isolotti di alta qualità con passaggi più semplici e costi inferiori1. Nel nostro protocollo, Histopaque-1077 viene utilizzato per purificare le isole da altri tessuti residui8,11. Le isole raccolte possono essere coltivate in supporti RPMI-1640 completi, o utilizzati direttamente nella quantificazione RNA/proteina.
Il nostro protocollo, utilizzando una combinazione di digestione di collageneP e una singola fase di purificazione del gradiente, è più semplice rispetto ad altri protocolli pubblicati. Il nostro metodo non richiede procedure chirurgiche impegnative e ha pochi semplici passi. Ancora più importante, questo protocollo produce costantemente una buona resa di isolotti funzionali di alta qualità (250-350/mouse) come abbiamo riportato12.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Hoding collagenase P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-396</td>
			<td>Holding skin of mouse to aid incision procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Holding tissues during pancreas removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>B13B16A</td>
			<td>To anaesthetize mice prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30-2041</td>
			<td>Used for islet culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G. &#189; inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>For penetration of Ampulla of vater to deliver Collagenase P - this guage is used as it fits well in most CBDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>Holding digested pancreatic tissue, collagenase P, and purified islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent pads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82020-845</td>
			<td>To absorb blood from syurgical procesdudes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R with swing bucket and deceleration capability</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5811FJ478114</td>
			<td>Use for pelleting tissues, pellet is formed at bottom of conical tube - swing bucket centrifuge is needed. Also the decelaration feature is important to form the gradient layers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P- 1g</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>11249002001</td>
			<td>For digestion of exocrine pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved surgical scissors</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>13-804-21</td>
			<td>For cutting open mouse abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>Used for identification of key anatomical structures to accurately deliver collagenase into pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td>Washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBF5100</td>
			<td>For gradient formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Leeds</td>
			<td>LR92240</td>
			<td>Enhancing visibility of microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>For removing RNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Media w/o L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-040-CV</td>
			<td>Culturing Islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz micro serrefines (Microvascular clamp)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18052-01</td>
			<td>Clamping common bile duct and hepatic artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking waterbath</td>
			<td>Boekel/Grant</td>
			<td>8R0534008</td>
			<td>Important for mechanical digestion of exocrine tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td>Cuttitng tissue that atached to pancreas</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice

Le isole pancreatiche, chiamate anche isole di Langerhans, sono un gruppo di cellule endocrine che produce ormoni per la regolazione del glucosio e altre importanti funzioni biologiche. Le isole sono costituite principalmente da cinque tipi di cellule che secernono l'ormone: le cellule secernono glucagone, le cellule secernono insulina, cellule che sortostatine, le cellule secernono la grelina e le cellule PP secernono la polipeptide pancreatica. Il sessanta-80% delle cellule nelle isole sono cellule z, che sono la popolazione cellulare più importante per studiare la secrezione di insulina. Le isole pancreatiche sono un sistema modello cruciale per studiare la secrezione di insulina ex vivo. Acquisire isocchi di alta qualità è di grande importanza per la ricerca sul diabete. La maggior parte delle procedure di isolamento dell'isolotto richiedono tecnicamente difficile accedere al sito di iniezione di collagenase, procedure di digestione dure e complesse e più fasi di purificazione del gradiente di densità. Questo documento presenta un semplice metodo di isolamento dell'isolotto del mouse ad alto rendimento con descrizioni dettagliate e dimostrazioni realistiche, che mostra i seguenti passaggi specifici: 1) iniezione di collagene P all'ampulla di Vater, una piccola area che unisce il condotto pancreatico e il dotto biliare comune, 2) la digestione enzimatica e la separazione meccanica del pancreas esocrino, e 3) un singolo passo di purificazione del gradiente. I vantaggi di questo metodo sono l'iniezione di enzima digestivo utilizzando l'ampulla più accessibile di Vater, una digestione più completa utilizzando la combinazione di approcci enzimatici e meccanici e una fase di purificazione a singolo gradiente più semplice. Questo protocollo produce circa 250-350 isolotti per mouse; e isolotti sono adatti per vari studi ex vivo. Possibili avvertenze di questa procedura sono potenzialmente danneggiate isole a causa di digestione enzimatica e/o incubazione del gradiente prolungata, che possono essere evitati in gran parte con un'attenta giustificazione pubblicitaria del tempo di incubazione.

Il corretto completamento di questa procedura richiede una certa comprensione dell'anatomia del topo nella cavità addominale. Ciò consente una corretta identificazione dell'ampulla di Vater e il bloccaggio del dotto biliare comune. L'intera procedura normalmente richiede 1–2 h. È più efficiente isolare le isole da 4-6 topi contemporaneamente, quindi diversi campioni possono essere centrifugati insieme. Il tempo per la raccolta delle isole varia a seconda del numero di isolotti e dell'efficienza della digestione; po...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Questo protocollo di isolamento dell'isolotto ha descritto una nuova via di iniezione di collagenasi per digerire il tessuto esocrino e una procedura di gradiente semplificata per purificare le isole dai topi. Si tratta di digestione ezimatica, separazione/purificazione del gradiente e raccolta a mano dell'isolotto. Il successo dell'isolamento può produrre 250-350 isolotti di alta qualità e completamente funzionali per mouse.

Un semplice protocollo ad alta efficienza per l'isolamento delle isolozioni pancreatiche dai topi

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Questo protocollo richiede l'uso di un singolo gradiente di densità che lo rende significativamente meno laborioso e più conveniente rispetto ai metodi di isolamento degli isolotti convenzionali più complessi. Il principale vantaggio di questo protocollo è che l'enzima viene consegnato direttamente al pancreas con conseguente miglioramento della digestione dei tessuti e aumento della resa dell'isolotto. Iniziare toccando gli arti del topo in posizione supina e spruzzando il corpo con il 70% di etanolo.Utilizzando forcep in coverglass e forbici chirurgiche curve, fare un'incisione addominale orizzontale della pelle di circa tre centimetri e aprire la pelle per esporre la parete addominale. Fai un'incisione verticale da tre a quattro centimetri sul peritoneo addominale per esporre completamente il pancreas e posizionare il topo sotto un microscopio sezionante. Spingere il lobo epatico in modo superiore per esporre il condotto biliare che appare come un tubo rosa pallido e spostare delicatamente l'intestino dalla regione lombare destra e iliaca a destra della cavità addominale per esporre il condotto biliare e l'arteria epatica.Utilizzare le micro sirifine Schwartz per bloccare attentamente il condotto biliare comune il più vicino possibile al fegato e identificare l'ampolla di Vater che si trova nella papilla duodenale e formata dall'unione del condotto pancreatico e del condotto biliare comune. Utilizzando micro pinzetta Adson per tirare il comune condotto biliare insegnato, inserire un ago da 30 gauge da mezzo pollice attaccato a una siringa da tre millilitri contenente tre millilitri di soluzione di collagenasi P appena preparata nell'ampolla di Vater spingendo l'ago nel condotto parallelo al vaso per circa un quarto della lunghezza del vaso. Una volta che l'ago è in posizione, stabilizzare l'ago con micro pinzette Adson e iniettare lentamente e costantemente tre millilitri di soluzione di collagenasi P nel condotto.L'iniezione è considerata efficace se le regioni della testa, del collo, del corpo e della coda del pancreas sono completamente gonfiate. Il corretto ingresso nell'ampolla e la cannulazione del condotto biliare comune sono fondamentali per un raccolto di digestione di successo. Perforare le pareti duttali riduce l'efficacia dell'isolamento.Utilizzando forcep curve e micro Adson, estrarre con cura il pancreas gonfiato partendo dalla milza e proseguendo verso lo stomaco e lungo il duodeno. Quindi posizionare il pancreas in un tubo di digestione da 50 millilitri contenente tre millilitri di soluzione di collagenasi P ghiacciata. Per raccogliere gli isolotti, utilizzare prima le forbici chirurgiche fini per tagliare il pancreas per tre o cinque secondi prima di posizionare il tubo in un bagno d'acqua di 37 gradi Celsius a 100-120 rotazioni al minuto per 12-13 minuti.Al termine dell'incubazione, agitare delicatamente il tubo per circa 30 secondi per interrompere il tessuto fino a quando la soluzione non è omogenea come confermato da particelle di tessuto pancreatico fini simili alla sabbia. Non appena il tessuto viene digerito, posizionare il tubo sul ghiaccio e aggiungere 40 millilitri di soluzione di arresto freddo del ghiaccio per terminare la reazione enzimatica. Dopo aver delicatamente interrotto il pellet, far girare il tessuto digerito in una centrifuga a secchio oscillante seguita da due centrifugazioni con 20 millilitri di soluzione di arresto fresco per lavaggio.Dopo l'ultimo lavaggio, rimescolare il pellet in 40 millilitri di HBSS ghiacciato per tre lavaggi aggiuntivi, rimescolando il pellet in cinque millilitri di soluzione gradiente di densità di temperatura ambiente dopo l'ultimo lavaggio. Vortice il tubo brevemente a bassa velocità fino a quando la soluzione non viene omogeneizzata prima di aggiungere altri cinque millilitri di gradiente di densità di temperatura ambiente al tubo. Ora usa una pipetta da 10 millilitri per aggiungere delicatamente e lentamente 10 millilitri di HBSS a temperatura ambiente al tubo in modo drop-wise per consentire la formazione di un gradiente e utilizzare una centrifuga a secchio oscillante per isolare le popolazioni cellulari per separazione del gradiente di densità.Al termine della centrifugazione, utilizzare una pipetta da 10 millilitri pre-bagnata con HBSS freddo per raccogliere da cinque a 10 millilitri dello strato di isolotto tra il gradiente di densità e l'HBSS. Trasferire gli isolotti in un nuovo tubo da 50 millilitri contenente 20 millilitri di HBSS freddo ghiaccio fresco e raccogliere le cellule centrifugando in una centrifuga a secchio oscillante. Aspirare con cura tutti tranne gli ultimi tre millilitri del supernatante senza disturbare il pellet e lavare gli isolotti almeno altre tre volte con 20 millilitri di HBSS fresco per lavaggio.Dopo l'ultimo lavaggio, sostituire il supernatante con quattro millilitri di 37 gradi Celsius RMPI 1640 medio e ruotare delicatamente il tubo per rimuovere il pellet. Versare immediatamente gli isolotti in una piastra di Petri da 100 millimetri e lavare il tubo con cinque millilitri di mezzo RPMI 1640 fresco per raccogliere eventuali isolotti rimanenti che raggruppano il lavaggio con gli altri isolotti. Quindi utilizzare un microscopio a dissezione e una punta di pipetta da 20 microlitri per raccogliere isolotti dorati sferici o oblunghi sani con una superficie liscia dalla piastra di Petri per il trasferimento in una nuova piastra di Petri contenente 10 millilitri di mezzo RPMI 1640 completo.Una volta raccolti tutti gli isolotti, posizionare gli isolotti in un incubatore sterile a 37 gradi Celsius e il 5% di anidride carbonica nell'aria umidificata durante la notte. Buoni isolotti sani sembrano avere una forma rotonda liscia mentre gli isolotti danneggiati cattivi mostrano bordi ruvidi. Il tessuto esocrina non digerito è traslucido nell'aspetto e dimostra una forma irregolare.Una corretta cannulazione e distribuzione dell'enzima collagenasi P può essere confermata da un'inflazione della porzione splenica del pancreas. L'incubazione notturna in mezzi a basso contenuto di glucosio può innescare gli isolotti per un saggio di secrezione di insulina stimolato dal glucosio il giorno seguente consentendo di comprendere la capacità secretoria dell'insulina degli isolotti.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murino pancreatica isolamento Islet

Ricerca

Biologia

Neutrophil Isolation Protocol

Neutrofili isolamento Protocollo

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Isolamento delle isole pancreatiche umane: Parte I: Digestione e Collezione di tessuto pancreatico

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

Isolamento del pancreas umano Islet: Parte II: La purificazione e la cultura di isole umane

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Isolamento di cellule staminali da xenotrapianti di cancro pancreatico umano

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

Un protocollo semplice per Estrazione emociti da bruchi selvaggi

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Un metodo per l&#39;isolamento del mouse isole pancreatiche e intracellulare cAMP Determinazione

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Isole pancreatiche incorporamento per sezioni di paraffina

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imaging calcio Dynamics in sottopopolazioni di cellule di islet pancreatica del topo

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...