Name: a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice
Uploaded: 2019-08-30T12:30:00
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우리는 회로도의 그녀의 예술적 그림에 대한 제니퍼 Munguia 씨에게 매우 감사드립니다. 휴스턴의 지역 공영 라디오 방송국 KPFT의 마이클 R. 호니그(Michael R. Honig) 씨에게 편집 지원을 부탁드립니다. 이 연구는 미국 당뇨병 협회 #1-15-BS-177 (YS) 및 NIH R56DK118334/R01DK118334 (YS)에 의해 지원되었습니다. 이 작품은 또한 USDA 국립 식량 농업 연구소, 해치 프로젝트 1010840 (YS) 및 R01 DK095118 (SG)에 의해 지원되었다.

여기에 설명된 모든 방법은 텍사스 A&M 대학의 동물 관리 및 사용 위원회(ACUC)에 의해 승인되었습니다. 수술 도구 의 필요성은 도 1에 나타내고 절차의 회로도 도면은 그림2에 도시되어 있습니다.
1. 솔루션
<ol><li>1L HBSS(1X)를 만들기 위해 증류수 900mL에 100mL(재고)의 100mL를 추가하여 행크의 균형 잡힌 염분 용액(HBSS)을 준비합니다.</li>
...

<ol>
	<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>O'Dowd, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+purification+of+rodent+pancreatic+islets+of+Langerhans.">The isolation and purification of rodent pancreatic islets of Langerhans.</a> Methods in Molecular Biology. 560, 37-42 (2009).</li><li>Do, O. H., Low, J. T., Thorn, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lepr(db)+mouse+model+of+type+2+diabetes:+pancreatic+islet+isolation+and+live-cell+2-photon+imaging+of+intact+islets.">Lepr(db) mouse model of type 2 diabetes: pancreatic islet isolation and live-cell 2-photon imaging of intact islets.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (99), e52632 (2015).</li><li>Stull, N. D., Breite, A., McCarthy, R., Tersey, S. A., Mirmira, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+islet+of+Langerhans+isolation+using+a+combination+of+purified+collagenase+and+neutral+protease.">Mouse islet of Langerhans isolation using a combination of purified collagenase and neutral protease.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (67), (2012).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Differences+in+Islet+Distribution+in+the+Human+Pancreas+-+Preferential+Beta-Cell+Loss+in+the+Head+Region+in+Patients+with+Type+2+Diabetes.">Regional Differences in Islet Distribution in the Human Pancreas - Preferential Beta-Cell Loss in the Head Region in Patients with Type 2 Diabetes.</a> PLOS ONE. 8, (2013).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (88), e50374 (2014).</li><li>Scharp, D. W., Lacy, P. E., Finke, E., Olack, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+culture+of+human+islets+isolated+by+the+distention+method+and+purified+with+Ficoll+or+Percoll+gradients.">Low-temperature culture of human islets isolated by the distention method and purified with Ficoll or Percoll gradients.</a> Surgery. 107 (5), e50374 (1987).</li><li>Salvalaggio, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+filtration:+a+simple+and+rapid+new+purification+procedure+that+avoids+ficoll+and+improves+islet+mass+and+function.">Islet filtration: a simple and rapid new purification procedure that avoids ficoll and improves islet mass and function.</a> Transplantation. 74 (66), 877-879 (2002).</li><li>Saliba, Y., Bakhos, J. J., Itani, T., Fares, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+for+purification+of+functional+islets+of+Langerhans.">An optimized protocol for purification of functional islets of Langerhans.</a> Laboratory Investigation. 97 (1), 70-83 (2017).</li><li>Pradhan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+stimulates+glucose-induced+insulin+secretion+through+ghrelin+receptor+GHS-R.">Obestatin stimulates glucose-induced insulin secretion through ghrelin receptor GHS-R.</a> Scientific Reports. 7 (1), 979 (2017).</li><li>Shapiro, A. M. J., Hao, E., Rajotte, R. V., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+and+stationary+digestion--a+comparison+with+standard+technique.">High yield of rodent islets with intraductal collagenase and stationary digestion--a comparison with standard technique.</a> Cell Transplantation. 5 (6), 631-638 (1996).</li></ol>

이 프로토콜에는 콜라게나아제 관류와 소화가 포함되며, 그 다음에는 섬의 정화가 뒤따릅니다. 이 프로토콜의 가장 중요한 단계는 췌장 1,4,7의효과적인 주입 및 완전한 관류입니다. 이 프로토콜의 전달 방법은 효소가 아일렛 1을 둘러싼 외분비 조직을 더잘 소화하기 위해 해부학 적 경로를 통과하는 것을 허?...

췌도 격리에 대한 문헌에는 두 가지 일반적인 방법이 있습니다. 하나는 췌장을 절제하고 수술 가위를 사용하여 작은 조각으로 다이싱 한 다음 콜라게 나아제 용액1,2,3으로소화해야합니다. 또 다른 더 정확한 방법은 소화 효소를 소개하기 위하여 췌장에 존재하는 덕트의 네트워크를 이용하는 것입니다. 다음 사이트는 소화 효소 주입에 사용되었습니다 : 담즙 과 낭포 덕트의 접합, 일반적인 담관으로 담낭,또는 일반적인 담관 자체 1,4,5. 작은 섬이 췌장에 고르게 분포되지 않은 것으로 알려져 있습니다. 비장 영역은 가장 작은섬 6을 포함합니다. 소화 효소를 전달하기 위해 해부학 경로를 사용하는 두 번째 방법은 비장 영역을 포함하여 췌장의 보다 완전한 관류를 허용하지만,이 절차는 종종 기술적으로 Vater의 암풀라의 클램핑 또는 봉합이 필요합니다. 도전. 섬 정화의 관점에서, 다중 밀도 그라데이션뿐만 아니라 세포 스트레이너 및 자기 후퇴는 섬을정화하기 위해 사용되어 왔다 3,7. 이러한 그라데이션의 활용은 시간이 많이 소요될 수 있으며 Ficoll 그라데이션은 섬8의독성 손상을 초래할 수 있습니다.
현재 프로토콜은 Li et al. 7에의해 설명된 방법에 기초하여 구축되며, 우리 자신과 다른 사람의 경험을 기반으로 추가 된 수정사항1,4. 우리의 프로토콜의 가장 중요한 단계는 간 끝 의 가까이에 일반적인 담관의 클램핑, 외분비 조직을 소화하기 위하여 Vater의 ampulla를 통해 콜라게나제 P를 주입하고, 그 때 기계적으로 소화를 가속화하기 위하여 동요하는 근해를 사용하여1, 4,7. 이어서, 'STOP' 용액이 인가되어 작은 섬들의 추가 소화를 억제한다; HBSS는 나머지 콜라게나제 P 및 STOP 용액을 세척하는 데 사용됩니다. 피콜 방법이 인간 섬을 정화하는 데 사용되었을 때, 수율은 Percoll 그라데이션 9의 사용에 비해 더 큰 기능적 능력(예를 들어,인슐린 분비)을 가진 섬보다 두 배 인 것으로 보고되었다. 그러나, 연구는섬1,10에그것의 독성 효과 때문에 Ficoll 그라데이션의 사용에 의문을 제기 했다 . 히스타크 그라데이션은 마우스 섬 격리를 위한 최적의 정제 역학을 제공하는 것으로 보고되었으며, 이는 더 간단한 단계와 낮은비용으로 고품질 의 섬들의 좋은 수율을 생성한다 1. 우리의 프로토콜에서, Histopaque-1077다른 잔류 조직에서 섬을 정화하는 데사용된다 8,11. 수확된 섬은 완전한 RPMI-1640 배지에서 배양되거나 RNA/단백질 정량에 직접 활용될 수 있다.
콜라게나아제 P 소화와 단일 그라데이션 정제 단계의 조합을 사용하는 당사의 프로토콜은 다른 출판된 프로토콜보다 간단합니다. 우리의 방법은 까다로운 외과 적 수술을 필요로하지 않으며 몇 가지 간단한 단계가 있습니다. 더 중요한 것은, 이 프로토콜은 지속적으로 우리가보고 한바와 같이 고품질 기능 섬 (250-350 / 마우스)의 좋은 수율을 생산하고 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Hoding collagenase P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-396</td>
			<td>Holding skin of mouse to aid incision procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Holding tissues during pancreas removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>B13B16A</td>
			<td>To anaesthetize mice prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30-2041</td>
			<td>Used for islet culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G. &#189; inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>For penetration of Ampulla of vater to deliver Collagenase P - this guage is used as it fits well in most CBDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>Holding digested pancreatic tissue, collagenase P, and purified islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent pads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82020-845</td>
			<td>To absorb blood from syurgical procesdudes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R with swing bucket and deceleration capability</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5811FJ478114</td>
			<td>Use for pelleting tissues, pellet is formed at bottom of conical tube - swing bucket centrifuge is needed. Also the decelaration feature is important to form the gradient layers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P- 1g</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>11249002001</td>
			<td>For digestion of exocrine pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved surgical scissors</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>13-804-21</td>
			<td>For cutting open mouse abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>Used for identification of key anatomical structures to accurately deliver collagenase into pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td>Washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBF5100</td>
			<td>For gradient formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Leeds</td>
			<td>LR92240</td>
			<td>Enhancing visibility of microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>For removing RNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Media w/o L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-040-CV</td>
			<td>Culturing Islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz micro serrefines (Microvascular clamp)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18052-01</td>
			<td>Clamping common bile duct and hepatic artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking waterbath</td>
			<td>Boekel/Grant</td>
			<td>8R0534008</td>
			<td>Important for mechanical digestion of exocrine tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td>Cuttitng tissue that atached to pancreas</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice

Langerhans의 섬이라고도 하는 췌장 섬은 포도당 조절 및 기타 중요한 생물학적 기능에 대한 호르몬을 생산하는 내분비 세포의 클러스터입니다. 이 섬은 주로 5가지 유형의 호르몬 분비 세포로 구성됩니다: α 세포는 글루카곤을 분비하고, β 세포는 인슐린을 분비하고, δ 세포는 소마토스타틴을 분비하며, δ 세포는 그렐린을 분비하고, PP 세포는 췌장 폴리펩티드를 분비합니다. 작은 섬에 있는 세포의 60-80%는 인슐린 분비를 공부하는 가장 중요한 세포 인구인 β 세포입니다. 췌도는 생체 내 인슐린 분비를 연구하는 중요한 모델 시스템입니다. 고품질 섬을 확보하는 것은 당뇨병 연구에 매우 중요합니다. 대부분의 아일렛 격리 절차는 콜라게나아제 주입, 가혹하고 복잡한 소화 절차 및 다중 밀도 구배 정제 단계의 부위에 기술적으로 접근하기 어렵습니다. 이 논문은 상세한 설명과 현실적인 데모와 간단한 고수율 마우스 섬 격리 방법을 갖추고 있습니다, 다음과 같은 특정 단계를 보여주는: 1) Vater의 암풀라에서 콜라게나제 P의 주입, 췌장 덕트를 결합하는 작은 영역과 일반적인 담관, 2) 효소 소화 및 외분비 췌장의 기계적 분리, 및 3) 단일 그라데이션 정제 단계. 이 방법의 장점은 Vater의 접근성이 좋은 암풀라를 사용하여 소화 효소를 주입하고 효소 및 기계적 접근법을 사용하여 보다 완전한 소화를 하고, 더 간단한 단일 그라데이션 정제 단계입니다. 이 프로토콜은 마우스당 약 250-350개의 섬을 생성합니다. 및 섬은 다양한 생체 내 연구에 적합하다. 이 절차의 가능한 주의 사항은 효소 소화 및 / 또는 장기간 그라데이션 배양으로 인해 잠재적으로 손상된 섬이며, 이 모든 것은 인큐베이션 시간의 신중한 광고 정당화에 의해 크게 피할 수 있습니다.

이 절차의 적절한 완료는 복강에서 마우스 해부학의 일부 이해가 필요합니다. 이것은 Vater의 암풀라의 적절한 식별과 일반적인 담관의 클램핑을 허용합니다. 전체 절차는 일반적으로 1-2 시간이 걸립니다. 4-6 마우스에서 동시에 작은 섬을 분리하는 것이 더 효율적이므로 여러 샘플을 함께 원심 분리 할 수 있습니다. 섬 따기의 시간은 작은 섬의 수와 소화의 효율성에 따라 다릅니다. 1개의 마우스에...

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A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

이 섬 격리 프로토콜은 외분비 조직을 소화하기 위해 콜라게나아제 주사의 새로운 경로를 설명하고 마우스로부터 섬을 정화하기 위한 단순화된 그라데이션 절차를 설명했다. 효소 소화, 그라데이션 분리/정제, 그리고 아일렛 수작업 피킹이 포함됩니다. 성공적인 절연은 마우스당 250~350개의 고품질 및 완전한 기능을 갖춘 아일렛을 생성할 수 있습니다.

마우스에서 췌장 췌도 격리를 위한 간단한 고효율 프로토콜

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

이 프로토콜은 단일 밀도 그라데이션을 사용해야 하므로 보다 복잡한 기존 islet 격리 방법에 비해 노동 집약적이고 비용 효율이 훨씬 낮습니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 효소가 췌장에 직접 전달되어 조직 소화가 향상되고 배회 수율이 증가한다는 것입니다. 먼저 마우스의 팔다리를 supine 위치에 테이핑하고 70%에탄올로 바디를 분사합니다.커버글래스 집게와 구부러진 수술 용 가위를 사용하여 약 3센티미터의 수평 복부 피부 절개를 하고 피부를 열어 복부 벽을 노출시합니다. 췌장을 완전히 노출시키고 해부 현미경 아래에 마우스를 배치하기 위해 복부 복막에 3 ~ 4 센티미터 수직 절개를합니다. 간 엽을 우월하게 밀어 창백한 분홍색 튜브로 나타나는 담관을 노출시키고 내장을 오른쪽 요추와 장강 부위에서 복강 오른쪽으로 부드럽게 이동하여 담관과 간 동맥을 노출시합니다.Schwartz 마이크로 세정제를 사용하여 가능한 한 간과 가까운 일반적인 담관을 조심스럽게 고정하고 십이지장 유두에 위치하고 췌장 덕트와 일반적인 담관의 조합에 의해 형성된 바터의 암풀라를 식별합니다. 마이크로 Adson 집게를 사용하여 일반적인 담관을 당기려면, 갓 준비된 콜라게나아제 P 용액 3밀리리터를 포함하는 3밀리리터 주사기에 부착된 30 게이지 반인치 바늘을 배의 길이의 약 1/4동안 용기에 평행하게 밀어넣는 바터의 암풀라에 삽입한다. 바늘이 제자리에 있으면 마이크로 Adson 집게로 바늘을 안정시키고 천천히 꾸준히 콜라게나아제 P 용액 3 밀리리터를 덕트에 주입하십시오.주사는 췌장의 머리, 목, 바디 및 꼬리 영역이 완전히 팽창되는 경우에 성공한 것으로 간주됩니다. 암풀라에 적절한 입력과 일반적인 담관의 캐누레이션은 성공적인 소화 수확에 매우 중요합니다. 덕트 벽을 관통하면 격리의 효능이 줄어듭니다.곡선 및 마이크로 Adson 집게를 사용하여 비장에서 시작하여 위장과 십이지장을 따라 계속 팽창 된 췌장을 조심스럽게 꺼냅니다. 그런 다음 3 밀리리터의 얼음 차가운 콜라게나아제 P 용액을 포함하는 50 밀리리터 소화 튜브에 췌장을 놓습니다. 섬을 수확하려면 먼저 미세 수술 가위를 사용하여 췌장을 3~5초 간 자른 후 12~13분 동안 분당 100~120회전에서 37도의 수수욕조에 튜브를 배치합니다.인큐베이션의 끝에서, 부드럽게 미세 모래 와 같은 췌장 조직 입자에 의해 확인된 바와 같이 용액이 균질 될 때까지 조직을 중단하기 위해 약 30 초 동안 튜브를 흔들어. 조직이 소화되는 즉시 튜브를 얼음 위에 놓고 40 밀리리터의 얼음 콜드 스톱 용액을 추가하여 효소 반응을 종료합니다. 펠릿을 부드럽게 방해한 후, 스윙 버킷 원심분리기에서 소화된 조직을 스핀다운한 다음, 세척당 20밀리리터의 신선한 스톱 용액을 가진 2개의 원심분리기가 있습니다.마지막 세척 후, 마지막 세척 후, 3 개의 추가 세척에 대 한 얼음 차가운 HBSS의 40 밀리 리터에 펠 릿을 다시 중단, 마지막 세척 후 실온 밀도 그라데이션 솔루션의 5 밀리 리터에 펠 릿을 다시. 용액이 균질화 될 때까지 튜브를 저속으로 잠시 소용돌이로 간결하게 한 후 실내 온도 밀도 그라데이션의 5 밀리리터를 튜브에 추가합니다. 이제 10 밀리리터 파이펫을 사용하여 10 밀리리터의 실온 HBSS를 드롭 와이즈 방식으로 튜브에 부드럽게 천천히 추가하여 그라데이션의 형성을 허용하고 스윙 버킷 원심분리기를 사용하여 밀도 그라데이션 분리에 의해 세포 집단을 격리시킵니다.원심분리의 끝에서, 10 밀리리터 파이펫을 사용하여 차가운 HBSS를 사용하여 밀도 그라데이션과 HBSS 사이의 섬 층의 5~10 밀리리터를 수집합니다. 섬들을 신선한 얼음 차가운 HBSS 20 밀리리터를 포함하는 새로운 50 밀리리터 튜브로 옮기고 스윙 버킷 원심분리기에서 원심분리로 세포를 수집합니다. 펠릿을 방해하지 않고 슈퍼나탄의 마지막 3밀리리터를 제외한 모든 것을 조심스럽게 흡인시키고 세척당 20 밀리리터의 신선한 HBSS로 적어도 세 번 이상 섬을 씻으십시오.마지막 세척 후, 37섭씨 RMPI 1640 배지의 4밀리리터로 상퍼를 교체하고 튜브를 부드럽게 소용돌이어 펠릿을 빼냅니다. 즉시 100mm 페트리 접시에 섬을 붓고 다른 섬과 함께 세척을 풀링 남아있는 섬을 수집하기 위해 신선한 RPMI 1640 매체의 다섯 밀리리터로 튜브를 씻어. 그런 다음 해부 현미경과 20 마이크로 리터 파이펫 팁을 사용하여 페트리 접시의 매끄러운 표면이있는 건강한 구형 또는 직사각형 황금 갈색 섬을 선택하여 완전한 RPMI 1640 배지 10 밀리리터를 포함하는 새로운 페트리 접시로 옮깁니다.모든 섬이 수집되면 섬섬을 멸균 인큐베이터에 섭씨 37도, 이산화탄소5%를 밤새 가습공기에 넣습니다. 좋은 건강한 섬은 매끄러운 둥근 모양을 가지고 있는 것처럼 보이며 손상된 섬은 거친 가장자리를 나타낸다. 소화되지 않은 외분 조직은 외관에 반투명하고 불규칙한 모양을 보여줍니다.콜라게나아제 P 효소의 적절한 수분 및 분포는 췌장의 비장 부분의 인플레이션에 의해 확인될 수 있다. 낮은 포도당 매체에서 하룻밤 잠복은 섬의 인슐린 분비 용량에 대한 통찰력을 허용하는 다음 날에 포도당 자극 인슐린 분비 분석섬을 프라임 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine 췌장 아일릿 격리

연구

생물학

Neutrophil Isolation Protocol

호중구 격리 프로토콜

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

인간 췌장 아일릿 격리 : 부품 I : 소화 및 췌장 조직의 수집

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

인간 췌장 아일릿 절연 : 2 부 : 인간 아일 레츠의 정화와 문화

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

인간 췌장암의 Xenografts에서 줄기 세포의 분리

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

야생 유충에서 Hemocytes을 추출하기위한 간단한 프로토콜

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

마우스 췌장 섬의 분리 및 세포 내 cAMP를 결정하는 방법

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

췌 장 섬 파라핀 섹션에 대 한 포함

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

마우스 췌도 세포의 하위 집단에 있는 화상 진찰 칼슘 역학

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...