Name: a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice
Uploaded: 2019-08-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

Vi er svært takknemlige for fru Jennifer Munguia for hennes kunstneriske illustrasjon av skjematisk diagram. Vi takker Mr. Michael R. Honig på Houston ' s Community Public Radio Station KPFT for hans redaksjonelle assistanse. Denne studien ble støttet av American Diabetes Association #1 -15-BS-177 (andre), og NIH R56DK118334/R01DK118334 (andre). Dette arbeidet ble også støttet av USDA National Institute of Food and Agriculture, Hatch prosjekt 1010840 (/) og R01 DK095118 (SG).

Alle metoder beskrevet her over ha blitt anerkjent av det dyr bekymre og bruk komité (ACUC) av Texas en & M universitet. Den kirurgiske verktøy trenger er vist i figur 1 og skjematisk diagram av prosedyren er vist i figur 2.
1. løsninger
<ol><li>Forbered Hank ' s balansert salt Solution (HBSS) ved å legge 100 mL på 10X HBSS (fra lager) til 900 mL destillert vann for å lage 1 L HBSS (1X).</li>
	<li>Forbered STOP-løsning (må g...

<ol>
	<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>O'Dowd, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+purification+of+rodent+pancreatic+islets+of+Langerhans.">The isolation and purification of rodent pancreatic islets of Langerhans.</a> Methods in Molecular Biology. 560, 37-42 (2009).</li><li>Do, O. H., Low, J. T., Thorn, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lepr(db)+mouse+model+of+type+2+diabetes:+pancreatic+islet+isolation+and+live-cell+2-photon+imaging+of+intact+islets.">Lepr(db) mouse model of type 2 diabetes: pancreatic islet isolation and live-cell 2-photon imaging of intact islets.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (99), e52632 (2015).</li><li>Stull, N. D., Breite, A., McCarthy, R., Tersey, S. A., Mirmira, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+islet+of+Langerhans+isolation+using+a+combination+of+purified+collagenase+and+neutral+protease.">Mouse islet of Langerhans isolation using a combination of purified collagenase and neutral protease.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (67), (2012).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Differences+in+Islet+Distribution+in+the+Human+Pancreas+-+Preferential+Beta-Cell+Loss+in+the+Head+Region+in+Patients+with+Type+2+Diabetes.">Regional Differences in Islet Distribution in the Human Pancreas - Preferential Beta-Cell Loss in the Head Region in Patients with Type 2 Diabetes.</a> PLOS ONE. 8, (2013).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (88), e50374 (2014).</li><li>Scharp, D. W., Lacy, P. E., Finke, E., Olack, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+culture+of+human+islets+isolated+by+the+distention+method+and+purified+with+Ficoll+or+Percoll+gradients.">Low-temperature culture of human islets isolated by the distention method and purified with Ficoll or Percoll gradients.</a> Surgery. 107 (5), e50374 (1987).</li><li>Salvalaggio, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+filtration:+a+simple+and+rapid+new+purification+procedure+that+avoids+ficoll+and+improves+islet+mass+and+function.">Islet filtration: a simple and rapid new purification procedure that avoids ficoll and improves islet mass and function.</a> Transplantation. 74 (66), 877-879 (2002).</li><li>Saliba, Y., Bakhos, J. J., Itani, T., Fares, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+for+purification+of+functional+islets+of+Langerhans.">An optimized protocol for purification of functional islets of Langerhans.</a> Laboratory Investigation. 97 (1), 70-83 (2017).</li><li>Pradhan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+stimulates+glucose-induced+insulin+secretion+through+ghrelin+receptor+GHS-R.">Obestatin stimulates glucose-induced insulin secretion through ghrelin receptor GHS-R.</a> Scientific Reports. 7 (1), 979 (2017).</li><li>Shapiro, A. M. J., Hao, E., Rajotte, R. V., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+and+stationary+digestion--a+comparison+with+standard+technique.">High yield of rodent islets with intraductal collagenase and stationary digestion--a comparison with standard technique.</a> Cell Transplantation. 5 (6), 631-638 (1996).</li></ol>

Denne protokollen inkluderer kollagenase og fordøyelse, etterfulgt av rensing av holmer. De mest kritiske trinnene i denne protokollen er effektiv injeksjon og fullstendig mengde av bukspyttkjertelen1,4,7. Leveringsmetoden for denne protokollen gjør at enzymet å krysse anatomiske ruter for å bedre fordøye eksokrin vevet rundt holmer1. I tillegg er denne teknikken velegnet for fullstendig fordøyelse ...

Det er to vanlige metoder i litteraturen for bukspyttkjertel-Holmen isolasjon. Man krever excising bukspyttkjertelen og dicing den i små biter ved hjelp av kirurgisk saks, og deretter fordøye det i en kollagenase løsning1,2,3. En annen mer presis metode er å bruke nettverket av kanaler til stede i bukspyttkjertelen for å innføre fordøyelsesenzymer. Følgende områder har blitt brukt for fordøyelsesenzymer injeksjon: krysset av galle og cystisk duct, galleblæren til felles galle duct, eller vanlig galle duct seg1,4,5. Det er kjent at holmer ikke fordeles jevnt i bukspyttkjertelen; den milt regionen inneholder de fleste holmer6. Mens den andre metoden ved hjelp av anatomiske ruter for å levere fordøyelsesenzymer gir en mer fullstendig behandling av bukspyttkjertelen, inkludert milt regionen, krever denne prosedyren ofte klemmer eller suturing av ampulle av Vater som er teknisk Utfordrende. I form av Holme rensing, flere tetthet graderinger, samt celle siler og magnetisk tilbaketrekking har blitt brukt til å rense holmer3,7. Utnyttelsen av disse gradienter kan være tidkrevende og Ficoll graderinger kan føre til giftige skader av holmer8.
Den gjeldende protokollen er bygget på metoden beskrevet av Li et al.7, med ytterligere modifikasjoner lagt til basert på erfaringene fra oss selv og andre1,4. De mest kritiske trinnene i vår protokoll er klemmer av felles galle duct nær leveren slutten, sprøytebruk kollagenase P via ampulle av Vater å fordøye eksokrin vev, og deretter bruke en risting vannbad å fremskynde fordøyelsen mekanisk1, 4,7. Deretter brukes en "STOP"-løsning for å hemme ytterligere fordøyelse av holmer; HBSS brukes til å vaske av gjenværende kollagenase P og STOP-løsning. Da Ficoll-metoden ble brukt til å rense menneske holmer, ble det rapportert at det var dobbelt så mange holmer med større funksjonell kapasitet (f.eks. insulin sekresjon) sammenlignet med bruken av Percoll graderinger9. Men studier har stilt spørsmål ved bruk av Ficoll gradient på grunn av sin giftige effekt på holmer1,10. Det har blitt rapportert at Histopaque gradient gir optimal rensing Kinetics for mus Holmen isolasjon, noe som gir god avkastning av høy kvalitet holmer med enklere trinn og lavere kostnad1. I vår protokoll, Histopaque-1077 brukes til å rense holmer fra andre rester av vev8,11. De høstes holmer kan være kultivert i komplett RPMI-1640 Media, eller direkte benyttet i RNA/protein kvantifisering.
Vår protokoll, ved hjelp av en kombinasjon av kollagenase P fordøyelsen og en enkelt gradient rensing trinn, er enklere enn andre publiserte protokoller. Vår metode krever ikke krevende kirurgiske prosedyrer og har bare noen få enkle trinn. Enda viktigere, gir denne protokollen konsekvent en god avkastning av høy kvalitet funksjonelle holmer (250-350/mus) som vi rapporterte12.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Hoding collagenase P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-396</td>
			<td>Holding skin of mouse to aid incision procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Holding tissues during pancreas removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>B13B16A</td>
			<td>To anaesthetize mice prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30-2041</td>
			<td>Used for islet culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G. &#189; inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>For penetration of Ampulla of vater to deliver Collagenase P - this guage is used as it fits well in most CBDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>Holding digested pancreatic tissue, collagenase P, and purified islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent pads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82020-845</td>
			<td>To absorb blood from syurgical procesdudes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R with swing bucket and deceleration capability</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5811FJ478114</td>
			<td>Use for pelleting tissues, pellet is formed at bottom of conical tube - swing bucket centrifuge is needed. Also the decelaration feature is important to form the gradient layers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P- 1g</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>11249002001</td>
			<td>For digestion of exocrine pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved surgical scissors</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>13-804-21</td>
			<td>For cutting open mouse abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>Used for identification of key anatomical structures to accurately deliver collagenase into pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td>Washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBF5100</td>
			<td>For gradient formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Leeds</td>
			<td>LR92240</td>
			<td>Enhancing visibility of microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>For removing RNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Media w/o L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-040-CV</td>
			<td>Culturing Islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz micro serrefines (Microvascular clamp)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18052-01</td>
			<td>Clamping common bile duct and hepatic artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking waterbath</td>
			<td>Boekel/Grant</td>
			<td>8R0534008</td>
			<td>Important for mechanical digestion of exocrine tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td>Cuttitng tissue that atached to pancreas</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice

Bukspyttkjertelen holmer, også kalt holmer Langerhans, er en klynge av endokrine celler som produserer hormoner for glukose regulering og andre viktige biologiske funksjoner. Holmer består hovedsakelig av fem typer hormon-sekresjon celler: α celler skiller glukagon, β celler skiller ut insulin, δ celler skiller somatostatin, ε celler skiller ghrelin, og PP celler skiller bukspyttkjertelen polypeptid. 60 til 80% av cellene i holmer er β-celler, som er den viktigste cellen befolkning å studere insulin sekresjon. Bukspyttkjertelen holmer er et avgjørende modell system for å studere ex vivo insulin sekresjon. Anskaffe høy kvalitet holmer er av stor betydning for diabetes forskning. De fleste Holme isolasjon prosedyrer krever teknisk vanskelig å få tilgang til stedet for kollagenase injeksjon, harde og komplekse fordøyelsen prosedyrer, og flere tetthet gradient rensing trinn. Dette papiret har en enkel High Yield Mouse Holme isolasjon metode med detaljerte beskrivelser og realistiske demonstrasjoner, som viser følgende konkrete skritt: 1) injeksjon av kollagenase P ved ampulle av Vater, et lite område som ble med i bukspyttkjertelen duct og den vanlige galle duct, 2) enzymatisk fordøyelse og mekanisk separasjon av eksokrin bukspyttkjertel, og 3) en enkelt gradient rensing trinn. Fordelene med denne metoden er injeksjon av fordøyelsesenzymer ved hjelp av mer tilgjengelig ampulle av Vater, mer komplett fordøyelse ved hjelp av kombinasjon av enzymatisk og mekaniske tilnærminger, og en enklere enkelt gradient rensing trinn. Denne protokollen produserer ca. 250 – 350 holmer per mus. og holmer er egnet for ulike ex vivo-studier. Mulige begrensninger i denne prosedyren er potensielt skadede holmer på grunn av enzymatisk fordøyelse og/eller forlenget gradient inkubasjons, som alle kan i stor grad unngås ved forsiktig annonse begrunnelse av inkubasjonstid.

Riktig gjennomføring av denne prosedyren krever en viss forståelse av musen anatomi i bukhulen. Dette gjør det mulig for riktig identifisering av ampulle av vater og klemme av felles galle duct. Hele prosedyren tar normalt 1 – 2 timer. Det er mer effektivt å isolere holmer fra 4 – 6 mus samtidig, så flere prøver kan sentrifugert sammen. Tiden for Holme-plukking varierer, avhengig av antall holmer og effektiviteten av fordøyelsen; Det kan ta omtrent en time å velge 250 – 350 holmer fra 1 mus.
<p class="j...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Dette Holme isolasjons protokollen beskrev en roman rute av kollagenase injeksjon å fordøye eksokrin vev og en forenklet gradient prosedyre for å rense holmer fra mus. Det innebærer enzymatisk fordøyelse, gradient separasjon/rensing, og Holme hånd-plukking. Vellykket isolering kan gi 250 – 350 høy kvalitet og fullt funksjonelle holmer per mus.

En enkel High Efficiency Protocol for bukspyttkjertelen Islet Isolation fra mus

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Denne protokollen krever bruk av en enkelt tetthet gradient gjør det betydelig mindre arbeidskrevende og mer kostnadseffektivt sammenlignet med mer komplekse konvensjonelle holme isolasjonsmetoder. Den største fordelen med denne protokollen er at enzymet leveres direkte til bukspyttkjertelen, noe som resulterer i en forbedret vevsfordøyelse og økt holmeutbytte. Begynn med å teipe musens lemmer i liggende stilling og sprøyte kroppen med 70% etanol.Ved hjelp av dekkglass tang og buet kirurgisk saks, gjør en ca tre centimeter horisontal abdominal hud snitt og trekke åpne huden for å avsløre bukveggen. Lag et tre til fire centimeter vertikalt snitt på bukmeteritoneumet for å fullstendig eksponere bukspyttkjertelen og plassere musen under et dissekerende mikroskop. Skyv leveren lobe overlegent å utsette gallekanalen som vises som en blek rosa tube og forsiktig flytte tarmene fra høyre lumbal og iliac regionen til høyre for bukhulen for å utsette gallekanalen og leverarterien.Bruk Schwartz mikro serrefines å forsiktig klemme den vanlige gallekanalen så nær leveren som mulig og identifisere ampulla av Vater som ligger på duodenal papilla og dannet av foreningen av bukspyttkjertelkanalen og den vanlige gallekanalen. Ved hjelp av mikro Adson pinsett for å trekke den vanlige gallekanalen undervist, sett inn en 30 gauge halv tomme nål festet til en tre milliliter sprøyte som inneholder tre milliliter nylaget collagenase P løsning i ampulla av Vater skyve nålen inn i kanalen parallelt med fartøyet i omtrent en fjerdedel av lengden på fartøyet. Når nålen er på plass, stabilisere nålen med mikro Adson pinsett og sakte og jevnt injisere tre milliliter collagenase P løsning i kanalen.Injeksjonen anses vellykket hvis hode-, nakke-, kropps- og haleområdene i bukspyttkjertelen er helt oppblåste. Riktig inntreden i ampulla og kanyling av den vanlige gallekanalen er avgjørende for en vellykket fordøyelseshøsting. Piercing ductal veggene reduserer effekten av isolasjonen.Ved hjelp av buede og mikro Adson-tang trekker du forsiktig ut den oppblåste bukspyttkjertelen som starter ved milten og fortsetter mot magen og langs tolvfingertarmen. Legg deretter bukspyttkjertelen i et 50 milliliter fordøyelsesrør som inneholder tre milliliter iskald collagenase P-løsning. For å høste holmene, bruk først fin kirurgisk saks for å hogge bukspyttkjertelen i tre til fem sekunder før du plasserer røret i et 37 graders Celsius vannbad ved 100 til 120 rotasjoner per minutt i 12 til 13 minutter.På slutten av inkubasjonen rister du forsiktig røret i ca 30 sekunder for å forstyrre vevet til løsningen er homogen som bekreftet av fine sandlignende bukspyttkjertelvevspartikler. Så snart vevet fordøyes, legg røret på is og tilsett 40 milliliter iskald stoppløsning for å avslutte den enzymatiske reaksjonen. Etter å ha forsiktig forstyrret pelleten, spinn ned det fordøyde vevet i en svingende bøtte sentrifuge etterfulgt av to sentrifugasjoner med 20 milliliter frisk stoppløsning per vask.Etter siste vask, resuspend pellet i 40 milliliter iskald HBSS for tre ekstra vasker, resuspending pellet i fem milliliter romtemperatur tetthet gradient løsning etter siste vask. Vortex røret kort ved lav hastighet til løsningen er homogenisert før du legger til ytterligere fem milliliter romtemperatur tetthet gradient til røret. Bruk nå en 10 milliliter pipette til å forsiktig og sakte legge til 10 milliliter romtemperatur HBSS til røret på en dråpemessig måte for å tillate dannelsen av en gradient og bruke en svingende bøtte sentrifuge for å isolere cellepopulasjonene ved tetthet gradient separasjon.På slutten av sentrifugeringen, bruk en 10 milliliter pipette pre-våt med kald HBSS for å samle fem til 10 milliliter av holmelaget mellom tetthetsgradienten og HBSS. Overfør holmene til et nytt 50 milliliter rør som inneholder 20 milliliter frisk iskald HBSS og samle cellene ved sentrifugering i en svingende bøtte sentrifuge. Aspirer forsiktig alle unntatt de siste tre milliliter av supernatant uten å forstyrre pellet og vaske holmene minst tre ganger med 20 milliliter frisk HBSS per vask.Etter siste vask, erstatt supernatant med fire milliliter på 37 grader Celsius RMPI 1640 medium og forsiktig virvler røret for å løsne pellet. Hell umiddelbart holmene i en 100 millimeter petriskål og vask røret med fem milliliter friskt RPMI 1640-medium for å samle eventuelle gjenværende holmer som samler vasken med de andre holmene. Bruk deretter et disseksjonsmikroskop og en 20 mikroliterpipettespiss for å plukke sunne sfæriske eller avlange gyllenbrune holmer med en jevn overflate fra petriskålen for overføring til en ny petriskål som inneholder 10 milliliter komplett RPMI 1640 medium.Når alle holmene er samlet, plasser holmene i en steril inkubator ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i fuktet luft over natten. Gode sunne holmer ser ut til å ha en jevn rund form, mens skadede holmer viser grove kanter. Ufordøyd eksokrinvev er gjennomskinnelig i utseende og viser en uregelmessig form.En riktig hermetikk og distribusjon av kollagenase P enzymet kan bekreftes ved en inflasjon av miltdelen av bukspyttkjertelen. Over natten inkubasjon i lav glukose media kan prime holmene for en glukosestimulert insulin sekresjon analyse på følgende dag slik at innsikt i insulin sekretorisk kapasitet av holmene.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Neutrophil Isolation Protocol

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

En enkel protokoll for å trekke Hemocytes fra Wild Caterpillars

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

En metode for mus bukspyttkjertelens Isolering og Intracellulær cAMP Bestemmelse

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Bukspyttkjertelen Holme innebygging parafinsnitt

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imaging kalsium Dynamics i subpopulasjoner av mus bukspyttkjertelen Holme celler

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...