Name: fractionation for resolution of soluble and insoluble huntingtin species
Uploaded: 2018-02-27T14:30:00
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इस काम को NIH (RO1-NS090390) ने सपोर्ट किया था । हम भी डॉ Joan Steffanfor तकनीकी सहायता और इस परख के विकास के दौरान चर्चा का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।

पशु नैतिकता विवरण-प्रयोगों की देखभाल और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों और एक अनुमोदित पशु अनुसंधान प्रोटोकॉल के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए गाइड के ?...

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	<li>Ochaba, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIAS1+Regulates+Mutant+Huntingtin+Accumulation+and+Huntington's+Disease-Associated+Phenotypes+In+Vivo.">PIAS1 Regulates Mutant Huntingtin Accumulation and Huntington's Disease-Associated Phenotypes In Vivo.</a> Neuron. 90 (3), 507-520 (2016).</li><li>La Spada, A. R., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeat+expansion+disease:+progress+and+puzzles+in+disease+pathogenesis.">Repeat expansion disease: progress and puzzles in disease pathogenesis.</a> Nat Rev Genet. 11 (4), 247-258 (2010).</li><li>Reiner, A., Dragatsis, I., Dietrich, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+neuropathology+of+Huntington's+disease.">Genetics and neuropathology of Huntington's disease.</a> Int Rev Neurobiol. 98, 325-372 (2011).</li><li>The Huntington's Disease Collaborative Research Group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+gene+containing+a+trinucleotide+repeat+that+is+expanded+and+unstable+on+Huntington's+disease+chromosomes.">A novel gene containing a trinucleotide repeat that is expanded and unstable on Huntington's disease chromosomes.</a> Cell. 72 (6), 971-983 (1993).</li><li>Sassone, J., Colciago, C., Cislaghi, G., Silani, V., Ciammola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntington's+disease:+the+current+state+of+research+with+peripheral+tissues.">Huntington's disease: the current state of research with peripheral tissues.</a> Exp Neurol. 219 (2), 385-397 (2009).</li><li>Weydt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoregulatory+and+metabolic+defects+in+Huntington's+disease+transgenic+mice+implicate+PGC-1alpha+in+Huntington's+disease+neurodegeneration.">Thermoregulatory and metabolic defects in Huntington's disease transgenic mice implicate PGC-1alpha in Huntington's disease neurodegeneration.</a> Cell Metab. 4 (5), 349-362 (2006).</li><li>Schulte, J., Littleton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biological+function+of+the+Huntingtin+protein+and+its+relevance+to+Huntington's+Disease+pathology.">The biological function of the Huntingtin protein and its relevance to Huntington's Disease pathology.</a> Curr Trends Neurol. 5, 65-78 (2011).</li><li>Gipson, T. A., Neueder, A., Wexler, N. S., Bates, G. P., Housman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrantly+spliced+HTT,+a+new+player+in+Huntington's+disease+pathogenesis.">Aberrantly spliced HTT, a new player in Huntington's disease pathogenesis.</a> RNA Biol. 10 (11), 1647-1652 (2013).</li><li>Neueder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenic+exon+1+HTT+protein+is+produced+by+incomplete+splicing+in+Huntington's+disease+patients.">The pathogenic exon 1 HTT protein is produced by incomplete splicing in Huntington's disease patients.</a> Sci Rep. 7 (1), 1307 (2017).</li><li>Arndt, J. R., Chaibva, M., Legleiter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+the+first+17+amino+acids+of+huntingtin+in+Huntington's+disease.">The emerging role of the first 17 amino acids of huntingtin in Huntington's disease.</a> Biomol Concepts. 6 (1), 33-46 (2015).</li><li>Saudou, F., Finkbeiner, S., Devys, D., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntingtin+acts+in+the+nucleus+to+induce+apoptosis+but+death+does+not+correlate+with+the+formation+of+intranuclear+inclusions.">Huntingtin acts in the nucleus to induce apoptosis but death does not correlate with the formation of intranuclear inclusions.</a> Cell. 95 (1), 55-66 (1998).</li><li>Kim, S., Kim, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Approaches+for+Inhibition+of+Protein+Aggregation+in+Huntington's+Disease.">Therapeutic Approaches for Inhibition of Protein Aggregation in Huntington's Disease.</a> Exp Neurobiol. 23 (1), 36-44 (2014).</li><li>O'Rourke, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SUMO-2+and+PIAS1+modulate+insoluble+mutant+huntingtin+protein+accumulation.">SUMO-2 and PIAS1 modulate insoluble mutant huntingtin protein accumulation.</a> Cell Rep. 4 (2), 362-375 (2013).</li><li>Shibata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+intracellular+accumulation+of+mutant+Huntingtin+by+Beclin+1.">Regulation of intracellular accumulation of mutant Huntingtin by Beclin 1.</a> J Biol Chem. 281 (20), 14474-14485 (2006).</li><li>Apostol, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cell-based+assay+for+aggregation+inhibitors+as+therapeutics+of+polyglutamine-repeat+disease+and+validation+in+Drosophila.">A cell-based assay for aggregation inhibitors as therapeutics of polyglutamine-repeat disease and validation in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (10), 5950-5955 (2003).</li><li>Wanker, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+filter+assay+for+detection+of+amyloid-like+polyglutamine-containing+protein+aggregates.">Membrane filter assay for detection of amyloid-like polyglutamine-containing protein aggregates.</a> Methods Enzymol. 309, 375-386 (1999).</li><li>Sontag, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Mutant+Huntingtin+Aggregation+Conformers+and+Modulation+of+SDS-Soluble+Fibrillar+Oligomers+by+Small+Molecules.">Detection of Mutant Huntingtin Aggregation Conformers and Modulation of SDS-Soluble Fibrillar Oligomers by Small Molecules.</a> J Huntingtons Dis. 1 (1), 119-132 (2012).</li><li>Grima, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+Huntingtin+Disrupts+the+Nuclear+Pore+Complex.">Mutant Huntingtin Disrupts the Nuclear Pore Complex.</a> Neuron. 94 (1), 93-107 (2017).</li><li>Sontag, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylene+blue+modulates+huntingtin+aggregation+intermediates+and+is+protective+in+Huntington's+disease+models.">Methylene blue modulates huntingtin aggregation intermediates and is protective in Huntington's disease models.</a> J Neurosci. 32 (32), 11109-11119 (2012).</li><li>Trushina, E., Rana, S., McMurray, C. T., Hua, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricyclic+pyrone+compounds+prevent+aggregation+and+reverse+cellular+phenotypes+caused+by+expression+of+mutant+huntingtin+protein+in+striatal+neurons.">Tricyclic pyrone compounds prevent aggregation and reverse cellular phenotypes caused by expression of mutant huntingtin protein in striatal neurons.</a> BMC Neurosci. 10, 73 (2009).</li><li>Shahmoradian, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRiC's+tricks+inhibit+huntingtin+aggregation.">TRiC's tricks inhibit huntingtin aggregation.</a> Elife. 2, e00710 (2013).</li><li>Kim, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteasome+inhibition+induces+alpha-synuclein+SUMOylation+and+aggregate+formation.">Proteasome inhibition induces alpha-synuclein SUMOylation and aggregate formation.</a> J Neurol Sci. 307 (1-2), 157-161 (2011).</li><li>Goldberg, N. R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Neural+Progenitor+Transplantation+Rescues+Behavior+and+Reduces+alpha-Synuclein+in+a+Transgenic+Model+of+Dementia+with+Lewy+Bodies.">Human Neural Progenitor Transplantation Rescues Behavior and Reduces alpha-Synuclein in a Transgenic Model of Dementia with Lewy Bodies.</a> Stem Cells Transl Med. 6 (6), 1477-1490 (2017).</li></ol>

उपर्युक्त प्रोटोकॉल के लिए कुछ सावधानियों की जरूरत के लिए संगत और मात्रात्मक परिणाम सुनिश्चित कर रहे हैं । सबसे पहले, दोनों भागों में mHTT अनायास कई फ्रीज गल चक्र पर समय के साथ समुच्चय फार्म होगा, विशेष र?...

प्रोटीन गुणवत्ता नियंत्रण नेटवर्क है कि उचित तह और सेलुलर प्रोटीन की गिरावट सुनिश्चित करने के व्यवधान अल्जाइमर रोग (विज्ञापन), पार्किंसंस रोग (पीडी), Huntington के रोग (एच. डी.), और अंय "प्रोटीन का खुलासा में विकृति के लिए केंद्रीय संभावना है" विकारों2,3. proteostasis नेटवर्क घटकों की एक विस्तृत समझ और विकृति के लिए उनके योगदान इसलिए सुधार चिकित्सकीय हस्तक्षेप विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं । hd जीन के भीतर एक सीएजी दोहराने की असामांय विस्तार के कारण होता है polyglutamines (polyQ) huntingtin (HTT) प्रोटीन4में एक विस्तारित खिंचाव के परिणामस्वरूप । HD रोगजनन की एक सुसंगत रोग सुविधा जिसके परिणामस्वरूप, संचय, और मस्तिष्क के क्षेत्रों में और परिधीय ऊतकों में HTT के एकत्रीकरण, जो सामान्य कोशिका homeostasis और समारोह के साथ कई मायनों में हस्तक्षेप करने के लिए दिखाया गया है 5 , 6. जबकि HTT बैरे व्यक्त की है, striatum में मध्यम कंटीला ंयूरॉंस चुनिंदा कमजोर कर रहे है और सबसे खुलकर उल्लेखनीय cortical भी HD रोगजनन के साथ जुड़े शोष के साथ प्रभावित ।
HD रोगियों और जानवरों के मॉडलों के मस्तिष्क में HTT के समुच्चय के गठन आम तौर पर रोग प्रगति और mHTT के लिए समारोह के प्रमुख नकारात्मक लाभ के लिए एक प्रॉक्सी मार्कर के रूप में सेवा की है7. हालांकि सटीक तंत्र है जिसके द्वारा प्रोटीन का खुलासा और एकत्रीकरण mHTT-प्रेरित विषाक्तता में योगदान कर सकते हैं स्पष्ट नहीं रह, HD रोगियों और विभिन्न पशु मॉडलों के मस्तिष्क में इन समावेशियों के गठन एक अपरिवर्तनीय और अपरिहार्य विशेषता है. शामिल किए जाने के लिए मोटे तौर पर जमा HTT टुकड़े के शामिल एन टर्मिनल विस्तारित polyQ, संकेत है कि प्रोटियोलिसिस और पूर्ण लंबाई HTT के प्रसंस्करण के रूप में के रूप में अच्छी तरह से वैकल्पिक ब्याह8,9 खेल सकते हैं । HD. N-टर्मिनल HTT अंशों के रोगजनन में महत्वपूर्ण भूमिका HTT का एक रोग रूप का गठन कर सकती है जो एकत्रीकरण प्रक्रिया को तेजी से, nucleate, और तेज या प्रचारित कर सकते हैं10।
हालांकि, इन समावेशी की उपस्थिति जरूरी HTT-प्रेरित विषाक्तता या कोशिका मृत्यु11के साथ सहसंबंधी बनाना नहीं है । HTT घुलनशील oligomeric प्रजातियों और β-पत्रक तंतुओं के माध्यम से घुलनशील मोनोमर से एक एकत्रीकरण प्रक्रिया से गुजरना अघुलनशील समुच्चय और शामिल करने के लिए प्रस्तावित किया गया है12. मानक जैव रासायनिक परख के माध्यम से इन विभिंन प्रोटीन प्रजातियों को हल कम-डिटर्जेंट lysis बफर और मानक जैव रासायनिक परख का उपयोग visualizing में कठिनाई में उनके स्थायित्व के कारण क्षेत्र में एक चुनौती रही है । इस प्रकार, methodological विचार और संचित और एकत्रित mHTT की डिग्री और पैटर्न का पता लगाने में महत्वपूर्ण हैं ।
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल HTT के कई मध्यवर्ती कल्पना करने के लिए एक विधि प्रदान करता है, विशेष रूप से HD रोगजनन और रोग प्रगति के साथ बारीकी से ट्रैक करने के लिए प्रकट होता है कि एक अघुलनशील HMW HTT प्रजातियों के गठन1,13 ,14. को हल करने और mHTT के कई प्रजातियों को ट्रैक करने में सक्षम होने के नाते एक जैव रासायनिक उपकरण रोग रोगजनन अध्ययन और रोग रोगजनन पर उनके मॉडुलन और प्रभाव के माध्यम से संभावित चिकित्सीय हस्तक्षेप का मूल्यांकन करने के लिए प्रदान करता है.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sterile Filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP505RE</td>
			<td>Screw cap, sterile vaccum filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Tissue Grinder, Dounce</td>
			<td>Wheaton</td>
			<td>357538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator</td>
			<td>Qsonica</td>
			<td>Model Q125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Protein Assay</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>5000111</td>
			<td>Comparable to Lowry assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris 1M buffer solution</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J60636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP151-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 5M solution</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>S0251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP229-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% SDS solution</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>S0295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-ethylmaleimide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E1271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethylsulfony flouride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
			<td>create 100mM stock solution in 100%EtOH, store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium orthovanadate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6508</td>
			<td>Create 0.5M stock solution in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2884</td>
			<td>Create 10mg/ml stock solution in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aprotinin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1153</td>
			<td>Create 10mg/ml stock solution in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Fluoride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S4504</td>
			<td>Create 500mM stock solution in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HTT</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB5492</td>
			<td>Use 1:1000 for western blot, 1:500 for filter retardation assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GAPDH</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB100-56875</td>
			<td>Use 1:1000 for soluble western blot</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fractionation for resolution of soluble and insoluble huntingtin species

Huntington के रोग (एचडी) और कई अन्य neurodegenerative विकारों में विकृति के लिए केंद्रीय प्रोटीन के संचय का केंद्र है । विशेष रूप से, HD के एक प्रमुख रोग सुविधा उच्च आणविक भार परिसरों में उत्परिवर्ती HTT (mHTT) प्रोटीन का ंयायपालिका संचय और टुकड़े और अन्य प्रोटीन से बना intracellular समावेश निकायों है । पारंपरिक तरीकों को मापने के लिए और mHTT-युक्त समुच्चय के विभिंन रूपों के योगदान को समझने प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी, पश्चिमी दाग विश्लेषण, और फिल्टर जाल परख शामिल हैं ।
हालांकि, इन तरीकों की सबसे विशिष्ट अनुरूप हैं, और इसलिए समग्र घुलनशीलता और संकल्प के जटिल प्रकृति के कारण mHTT प्रोटीन प्रवाह का पूरा राज्य हल नहीं हो सकता है ।
एकत्रित mHTT और विभिन्न संशोधित रूपों और परिसरों की पहचान के लिए, सेलुलर समुच्चय और टुकड़ों के पृथक्करण और solubilization अनिवार्य है । यहां हम एक विधि का वर्णन करने के लिए अलग और घुलनशील mHTT, मोनोमर, oligomers, टुकड़े कल्पना, और एक अघुलनशील उच्च आणविक वजन (HMW) संचित mHTT प्रजातियों । HMW mHTT रोग प्रगति के साथ पटरियों, माउस व्यवहार readouts के साथ मेल खाती है, और लाभप्रद रूप से कुछ चिकित्सीय हस्तक्षेप द्वारा संग्राहक किया गया है1। इस दृष्टिकोण माउस मस्तिष्क, परिधीय ऊतकों, और कोशिका संस्कृति के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन अंय मॉडल प्रणालियों या रोग संदर्भों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।

घुलनशील और अघुलनशील कोशिका lysates के समाधान निम्न अंश पश्चिमी विश्लेषण और फ़िल्टर मंदता परख (चित्र 2) का उपयोग कर पता लगाया जा सकता है । उदाहरण के रूप में, HEK293T कक्ष अभिकर्मक रिएजेंट (?...

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Fractionation for Resolution of Soluble and Insoluble Huntingtin Species

एक विधि माउस मस्तिष्क और कोशिका संस्कृति से अघुलनशील और घुलनशील उत्परिवर्ती huntingtin प्रजातियों के अंश के लिए वर्णित है । वर्णित विधि लक्षण वर्णन और huntingtin प्रोटीन प्रवाह और एड्स रोग रोगजनन में प्रोटीन homeostasis का विश्लेषण करने में और perturbations की उपस्थिति में ठहराव के लिए उपयोगी है

घुलनशील और अघुलनशील Huntingtin प्रजातियों के समाधान के लिए भिन्नीकरण

The accumulation of misfolded proteins is central to pathology in Huntington's disease (HD) and many other neurodegenerative disorders. Specifically, a ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

कार्बोहाइड्रेट अपमानजनक एंजाइमों की उच्च throughput स्क्रीनिंग उपन्यास अघुलनशील chromogenic सब्सट्रेट परख किट का उपयोग

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

मस्तिष्क झिल्ली फलन: एक<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; सबसिनेप्टिक प्रोटीन स्थानीयकरण का आकलन करने के लिए दृष्टिकोण

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

मानव गुजाइश मस्तिष्क से डिटर्जेंट-अघुलनशील प्रोटीन समुच्चय का संवर्धन

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

Quantitative and Qualitative Method for Sphingomyelin by LC-MS Using Two Stable Isotopically Labeled Sphingomyelin Species

नियंत्रण रेखा से Sphingomyelin के लिए मात्रात्मक और गुणात्मक विधि-MS दो स्थिर Isotopically लेबल Sphingomyelin प्रजातियों का उपयोग

We present a method of analyzing sphingomyelin (SM) qualitatively and quantitatively by liquid chromatography-electrospray Ionization-tandem mass ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

देशी की पीढ़ी, untagged Huntingtin Exon1 मोनोमर और तंतुओं एक सूमो संलयन रणनीति का उपयोग

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

छोटे GTPase Prenylation और GTP झिल्ली अंश और GTPase से जुड़े Immunosorbent परख का उपयोग बाध्यकारी का पता लगाने

The Rho GTPase family belongs to the Ras superfamily and includes approximately 20 members in humans. Rho GTPases are important in the regulation of ...

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

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In this protocol we detail a method to obtain subcellular fractions of U937 cells without the use of ultracentrifugation or indiscriminate detergents. ...

Measuring Interactions between Fluorescent Probes and Lignin in Plant Sections by sFLIM Based on Native Autofluorescence

देशी ऑटोफ्लोरेसेंस के आधार पर एसएफआईएम द्वारा संयंत्र अनुभागों में फ्लोरोसेंट जांच और लिग्निन के बीच बातचीत को मापना

In lignocellulosic biomass (LB), the activity of enzymes is limited by the appearance of non-specific interactions with lignin during the hydrolysis ...

Conventional BODIPY Conjugates for Live-Cell Super-Resolution Microscopy and Single-Molecule Tracking

लाइव-सेल सुपर-रेजोल्यूशन माइक्रोस्कोपी और एकल-अणु ट्रैकिंग के लिए पारंपरिक बॉडीपी कंजूगेट्स

Single molecule localization microscopy (SMLM) techniques overcome the optical diffraction limit of conventional fluorescence microscopy and can resolve ...