Name: 2d and 3d echocardiography in the axolotl (ambystoma mexicanum)
Uploaded: 2018-11-29T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 2D and 3D Echocardiography in the Axolotl Ambystoma Mexicanum at JoVE.com

Мы хотели бы признать Kasper Хансен, Институт бионауки, Орхусе университет для обеспечения доступа и помощи с электронной микроманипулятор для 3D эхокардиографические приобретения.

Процедуры, осуществляется в настоящем Протоколе, были в соответствии с законодательством Дании для ухода и использования лабораторных животных и эксперименты были одобрены датской национальной инспекции экспериментов животных (протокол # 2015-15-0201-00615).
1. Подготовка
<ol><li...

<ol>
	<li>Forouzanfar, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+Global+Burden+of+Ischemic+Heart+Disease.">Assessing the Global Burden of Ischemic Heart Disease.</a> Glob. Heart. 7, 331-342 (2012).</li><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics--2014+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics--2014 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 129, e28-e292 (2014).</li><li>Leferovich, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+regeneration+in+adult+MRL+mice.">Heart regeneration in adult MRL mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 9830-9835 (2001).</li><li>Leferovich, J. M., Heber-Katz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+scarless+heart.">The scarless heart.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 13, 327-333 (2002).</li><li>Nakada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+induces+heart+regeneration+in+adult+mice.">Hypoxia induces heart regeneration in adult mice.</a> Nature. 541, 222-227 (2017).</li><li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+regeneration+in+zebrafish.">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science. 298, 2188-2190 (2002).</li><li>Chablais, F., Veit, J., Rainer, G., Jazwinska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+heart+regenerates+after+cryoinjury+induced+myocardial+infarction.">The zebrafish heart regenerates after cryoinjury induced myocardial infarction.</a> BMC Dev. Biol. 11, 21 (2011).</li><li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration.">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends. Genet. 29, 611-620 (2013).</li><li>Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extensive+scar+formation+and+regression+during+heart+regeneration+after+cryoinjury+in+zebrafish.">Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish.</a> Development. 138, 1663-1674 (2011).</li><li>Schnabel, K., Wu, C. C., Kurth, T., Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+cryoinjury+induced+necrotic+heart+lesions+in+zebrafish+is+associated+with+epicardial+activation+and+cardiomyocyte+proliferation.">Regeneration of cryoinjury induced necrotic heart lesions in zebrafish is associated with epicardial activation and cardiomyocyte proliferation.</a> PLoS One. 6 (4), e18503 (2011).</li><li>Oberpriller, J. O., Oberpriller, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+the+adult+newt+ventricle+to+injury.">Response of the adult newt ventricle to injury.</a> J. Exp. Zool. 187, 249-260 (1974).</li><li>Witman, N., Murtuza, B., Davis, B., Arner, A., Morrison, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+developmental+cardiogenesis+governs+the+morphological+and+functional+regeneration+of+adult+newt+hearts+following+injury.">Recapitulation of developmental cardiogenesis governs the morphological and functional regeneration of adult newt hearts following injury.</a> Dev. Biol. 354, 67-76 (2011).</li><li>Gressens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+Mexican+axolotl+(Ambystoma+mexicanum).">An introduction to the Mexican axolotl (Ambystoma mexicanum).</a> Lab Animal. 33, 41-47 (2004).</li><li>Cano-Mart&#237;nez, A., Vargas-Gonz&#225;lez, A., Guarner-Lans, V., Prado-Zayago, E., Le&#243;n-Oleda, M., Nieto-Lima, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+structural+regeneration+in+the+axolotl+heart+(Ambystoma+mexicanum)+after+partial+ventricular+amputation.">Functional and structural regeneration in the axolotl heart (Ambystoma mexicanum) after partial ventricular amputation.</a> Arch. Cardiol. Mex. 80, 79-86 (2010).</li><li>McCusker, C., Gardiner, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+axolotl+model+for+regeneration+and+aging+research:+a+mini-review.">The axolotl model for regeneration and aging research: a mini-review.</a> Gerontology. 57, 565-571 (2011).</li><li>Khattak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+axolotl+(Ambystoma+mexicanum)+husbandry,+breeding,+metamorphosis,+transgenesis+and+tamoxifen-mediated+recombination.">Optimized axolotl (Ambystoma mexicanum) husbandry, breeding, metamorphosis, transgenesis and tamoxifen-mediated recombination.</a> Nat. Protoc. 9, 529-540 (2014).</li><li>Nakamura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+analysis+of+Baf60c+during+heart+regeneration+in+axolotls+and+neonatal+mice.">Expression analysis of Baf60c during heart regeneration in axolotls and neonatal mice.</a> Develop. Growth Differ. 58, 367-382 (2016).</li><li>Tan, G. X. Y., Jamil, M., Tee, N. G. Z., Zhong, L., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+Reconstruction+of+Chick+Embryo+Vascular+Geometry+Using+Non-Invasive+High-Frequency+Ultrasound+for+Computational+Fluid+Dynamics.">3D Reconstruction of Chick Embryo Vascular Geometry Using Non-Invasive High-Frequency Ultrasound for Computational Fluid Dynamics.</a> Ann. Biomed. Eng. 43, 2780-2793 (2015).</li><li>Ho, S., Tan, G. X. Y., Foo, T. J., Phan-Thien, N., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Dynamics+and+Fluid+Dynamics+of+the+HH25+Chick+Embryonic+Cardiac+Ventricle+as+Revealed+by+a+Novel+4D+High-Frequency+Ultrasound+Imaging+Technique+and+Computational+Flow+Simulations.">Organ Dynamics and Fluid Dynamics of the HH25 Chick Embryonic Cardiac Ventricle as Revealed by a Novel 4D High-Frequency Ultrasound Imaging Technique and Computational Flow Simulations.</a> Ann. Biomed. Eng. , (2017).</li><li>Wasmeier, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+transthoracic+echocardiography+in+small+animals+using+clinical+equipment.">Reproducibility of transthoracic echocardiography in small animals using clinical equipment.</a> Coron. Artery. Dis. 18, 283-291 (2007).</li><li>Thygesen, M. M., Rasmussen, M. M., Madsen, J. G., Pedersen, M., Lauridsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propofol+(2,6-diisopropylphenol)+is+an+applicable+immersion+anesthetic+in+the+axolotl+with+potential+uses+in+hemodynamic+and+neurophysiological+experiments.">Propofol (2,6-diisopropylphenol) is an applicable immersion anesthetic in the axolotl with potential uses in hemodynamic and neurophysiological experiments.</a> Regeneration. 4 (3), (2017).</li></ol>

Эхокардиография в Аксолотль и других не млекопитающих видов дает принципиально различных данных, чем у млекопитающих эхокардиография из-за ядерных характер красных кровяных клеток в всех позвоночных за исключением взрослых млекопитающих. Это приводит к выраженным крови сигнал и мен?...

Ишемическая болезнь сердца является ведущей причиной смерти во всем мире1,2. Хотя многие выжить инфаркт миокарда за счет быстрого и точного медицинского вмешательства, ишемическая инцидентов в организме человека часто приводят к фиброзных рубцов, связанные с гипертрофией, электрические неисправности и снижение функциональных возможностей сердца . Это отсутствие регенеративного потенциала сердечной ткани распределяется среди млекопитающих и хотя спорные претензии млекопитающих сердечной регенерации сообщалось, они были ограничены конкретным мышиных штаммов3,4 и лечение гипоксии мышей5. Таким образом области сердца регенеративной медицины и биологии обычно ограничивается не млекопитающих животных моделей для изучения внутренней сердце регенеративные явления. Данио рерио (Danio рерио) в последнее десятилетие создана как наиболее хорошо характеризуется модель для внутренней сердце регенерации6,,78,9,10 . Благодаря легко лабораторных обслуживания, время коротких поколения и широкий спектр молекулярных инструментов, доступных, данио рерио хорошо приспособлены как модель генетические и молекулярные механизмы, лежащие в основе развития сердечной и регенерации. Однако минута размеры сердца данио рерио сделать его менее подходящими для функциональной оценки, и сложных хирургических процедур и не четвероногие филогении данио рерио ограничивает разумным экстраполяцию выводов этого вида, таким образом обоснование использования других крупных тетрапод моделей. Одним из ранних моделей позвоночных сердце регенерации был хвостатого амфибий, Восточной Тритон (полосатый viridescens)11, виды, которые остается ценным модель12.
В последние годы еще хвостатого амфибий, мексиканский Аксолотля (A. mexicanum) вышла сцена как большой (тела до 100 г массы) и высоко Лаборатория адаптации животных модель для широкий спектр восстановительных дисциплин, охватывающих регенерации конечностей, травмы спинного мозга и сердечной регенерации13,14,15,16,17. Аксолотль очень поддаются функциональных измерений на сердце с помощью эхокардиографии высокой частоты и отсутствие Кальцифицированный структур на вентральной стороне сердца позволяет для ультразвуковой визуализации с гораздо более низким уровнем изображения артефактов (акустическая затенение и реверберации в частности), чем в другие модели животных Кальцифицированный грудины и ребрами.
Следующий протокол описывает несколько различных методов и препаратов (рис. 1, рис. 2) получить воспроизводимые эхокардиографические измерений на сердце Аксолотль в обоих под наркозом (применяя три различных анестетики: бензокаин, MS-222 и пропофол) и наркозу животных в двух (рис. 3, рис. 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Дополнительные файлы 1-12) и три (Рисунок 8, Рисунок 9, Дополнительные файлы 13-14) пространственных измерениях. Амфибия сердца 3 камерные (два предсердия и желудочка один). Предсердия поставляются с большой venosus пазухи и желудочка впадает в урочище отток артериальный конус (рис. 2). Поскольку большинство внимание традиционно уделяется желудочков регенерации и меньше на восстановление предсердия6,,78,9,10,11 , 12 , 14 , 17, этот протокол в основном сосредоточена на измерение вентрикулярной функции.
Амфибия эхокардиографии не хорошо описан в литературе, и разработка 2D методов, описанных в этом документе были изгнаны, необходимость лучший представляют функциональность бьющееся сердце Аксолотль на данный момент времени и экспериментальной установки. Таким образом описанные здесь методы применяются в сердце регенеративной экспериментов где неоднократно сердечной функции могут контролироваться, в течение процесса регенерации. Кроме того методы можно в целом применяется в cardiophysiological экспериментах на Аксолотль или слегка изменены, чтобы охватывать другие хвостатого или anuran амфибия модели (e.g.,Xenopus). Аксолотль существует в нескольких различных сортов и оттенков (например, wildtype, melanoid, белый, альбинос, трансгенных белый с зеленым флуоресценции белков), однако эти характеристики не влияют на совместимость Аксолотль с описанной протоколом. Метод, описанный здесь приобрести 3D эхокардиографические данных представляет собой модифицированную версию метода корреляции (ЦУТИ) пространственно-временных изображений, разработанных для клинических УЗИ и квадратичные, метод, описанный ранее в развивающихся курица для усреднения усилить сигнал пятен крови в мягких тканях, содержащих ядерных клеток красной крови18,19видов. Этот метод позволяет для продвинутых моделирование сердечного сокращения и вычисляемые гидродинамики в самом Аксолотль.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1230">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Axolotl (Ambystoma mexicanum)</td>
			<td style="width:147px;">Exoterra GmbH</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td style="width:765px;">All strains (wildtype, melanoid, white, albino, transgenic white with GFP) can be applied for echocardiography</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vevo 2100</td>
			<td style="width:147px;">Fujifilm, Visualsonics</td>
			<td style="width:103px;">Vevo 2100</td>
			<td>High frequency ultrasound system</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MS700</td>
			<td style="width:147px;">Fujifilm, Visualsonics</td>
			<td style="width:103px;">MS700</td>
			<td>50 MHz center frequency, transducer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MS550s</td>
			<td style="width:147px;">Fujifilm, Visualsonics</td>
			<td>MS550s</td>
			<td>40 MHz center frequency, transducer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:147px;">Zeiss</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Benzocain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>94-09-7</td>
			<td>ethyl 4-aminobenzoate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MS-222</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>886-86-2</td>
			<td>ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonic acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Propofol</td>
			<td>B. Braun Medical A/S</td>
			<td style="width:103px;">NA</td>
			<td>2,6-diisopropylphenol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">&#160;7647-14-5&#160;</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">10035-04-8</td>
			<td>CaCl2&#183;2H2O</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:216px;">Magnesium sulfate heptahydrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">&#160;10034-99-8&#160;</td>
			<td>MgSO4&#183;7H2O</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">&#160;7447-40-7</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acetone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">&#160;67-64-1&#160;</td>
			<td>Propanone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Soft cloth</td>
			<td style="width:147px;">N/A</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td>Any piece of soft cloth measuring appromixately 70 x 55 cm^2 e.g. a dish towel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Styrofoam block</td>
			<td style="width:147px;">N/A</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td>Any piece of Styrofoam block measuring approximately 33 x 27 x 5 cm^3 e.g. a medium sized Styrofoam cooler lid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic wrap</td>
			<td style="width:147px;">N/A</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td>Any piece of plastic wrap e.g. food wrap</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tape</td>
			<td style="width:147px;">BSN Medical</td>
			<td style="width:103px;">72359-02</td>
			<td>Leukoplast sleek</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kimwipes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">Z188956&#160;</td>
			<td>Kimwipes, disposable wipers&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Excel 2010</td>
			<td style="width:147px;">Microsoft</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td>Excel 2010 or newer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ImageJ</td>
			<td colspan="2">National Institutes of Health</td>
			<td>ImageJ 1.5e or newer. Rasband, W.S., ImageJ, U. S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2016.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

2d and 3d echocardiography in the axolotl (ambystoma mexicanum)

Сердца неисправности в результате ишемической болезни сердца является серьезной проблемой, и регенеративной терапии в сердце пользуются высоким спросом. Несколько видов модели как данио рерио и саламандры, которые способны внутренней сердце регенерации перспективны для будущих регенеративной терапии для человека пациентов. Чтобы оценить результаты экспериментов cardioregenerative важно, что функции сердца может контролироваться. Аксолотль саламандра (A. mexicanum) представляет устоявшихся моделей видов в регенеративных биологии, достижения размеров, что позволяет для оценки функции сердца. Целью настоящего Протокола является разработать методы измерения можно воспроизвести сердечной функции в Аксолотль, с помощью эхокардиографии. Применение различных анестетиков (бензокаин, MS-222 и пропофол) продемонстрировал, и приобретение двухмерных (2D) эхокардиографические данных в наркотизированных и наркозу axolotls описан. 2D эхокардиография сердца трехмерной (3D), могут страдать от неточностей и является субъективность измерений и для облегчения это явление сплошной метод, а именно intra/Межамери-операторами/наблюдателя анализа, измерения и свести к минимуму этот уклон продемонстрировал. Наконец описан метод для приобретения 3D эхокардиографические данных Аксолотль сердце с очень высоким разрешением пространственно-временных и с выраженным контраст крови в ткани. В целом этот протокол должен обеспечивать необходимые методы для оценки функции сердца и модель анатомии и потока динамика в Аксолотль, с помощью УЗИ с приложениями в регенеративных биологии и общие физиологических экспериментов.

Intrapericardial пространство в Аксолотль зависит от размера животного. Мелкие животные (2-20 г, 7-15 см) будет иметь избыток перикарда жидкости (появляются темные в эхокардиографии), окружающих сердечных камерах в то время как в более крупных половозрелых животных (> 20 g, > 15 см) кам?...

Watch this Scientific Journal Video about 2D and 3D Echocardiography in the Axolotl Ambystoma Mexicanum at JoVE.com

2D and 3D Echocardiography in the Axolotl Ambystoma Mexicanum

Здесь мы представляем эхокардиография протоколы для двухмерных и трëхмерных изображений приобретение бьющееся сердце Аксолотль саламандра (Ambystoma mexicanum), модель виды в регенерации сердца. Эти методы позволяют продольные оценки функции сердца с высоким разрешением пространственно-временных.

2D и 3D эхокардиография в Аксолотля (Ambystoma Mexicanum)

Cardiac malfunction as a result of ischemic heart disease is a major challenge, and regenerative therapies to the heart are in high demand. A few model ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в регенеративной области, такие как, как сердечная регенерация прогрессирует после травмы миокарда. Основным преимуществом этого метода является то, что он обеспечивает высокое разрешение, неинвазивную и повторяемую оценку сердечной функции в аксолотле. Кроме того, этот метод может быть применен и к другим организмам-амфибиям, таким как ньюты и ксенопу.Начните с позиционирования обезболивающего аксолотля на спине в кровати животного в форме губ. Когда среда добавляется, животное будет плавать, поэтому она должна быть обеспечена с рыхлыми резинками. Затем заполните кровать средой, содержащей анестетики, так что грудная клетка составляет от трех до пяти миллиметров в глубину.Если только с помощью B-режима, цвет-доплеровского режима и импульсно-волновых данных режима Доплера, то аксолотль может быть начеку для этой процедуры. В этой ситуации, положение животных, склонных в гамаке, и дайте ему оправиться от стресса в течение 30 до 60 минут, прежде чем продолжить. Для белых или альбиносов животных, имеют холодный источник света готовы помочь разместить предуцера.Для превлододелца используйте модель 40 или 50 герц в зависимости от массы животного. Затем приготовьте ультразвуковой гель преобразования и приступайте к сбору данных. Начните с позиционирования ультразвукового препонера над средней линией животного в грудной области и параллельно его длинной оси.Небольшая часть желудочка, расположенная справа в грудной полости, должна появиться в кадре у желудочковой диастолы. Большая часть обеих атрий также должны быть видны, как и синус венозы. Эти структуры должны быть идентифицированы в диастоле или систроле зрения.Затем переведимите превидуатора от одного до трех миллиметров вправо, чтобы получить желудочковый вид длинной оси. В конечном счете, правильное положение достигается, когда поперечная область желудочка конца сизола находится на максимуме. Правильные 2D ультразвуковые измерения в значительной степени зависят от правильного позиционирования препонера.Тщательно практикуй размещение предуцера и выполняй межоператорский анализ, чтобы свести к минимуму субъективность. Теперь, в B-режиме, приобрести по крайней мере три сердечных циклов, как минимум 50 кадров в секунду. Выберите между использованием общего режима визуализации или кардиологического режима.Затем перевемите предуц вдоль длинной оси животного до тех пор, пока центр желудочка не будет в середине экрана. Затем поверните трансдуцер на 90 градусов по часовой стрелке, чтобы получить вид на середину окантовой короткой оси. С этой позиции оцените круговую форму желудочка, перевезув предуц вдоль длинной оси сердца.Затем верните предуц в плоскость длинной оси и переввемите его обратно в середину, чтобы получить предсердие длинноосного двухкамерного вида. Правильное положение достигается, когда поперечные области конечной ситоловой атрии находятся на их максиме, и две атрии вместе взятые предполагают контур числа восемь, когда наклонен около 45 градусов влево. Затем соберите изображения B-режима.Чтобы продолжить, перевести предуц вправо, пока отток тракта появляется. Вид желудочкового конца сизола является правильным, когда диаметр оттока находится на самом большом, и когда, во время средней инъекции, два полулюминесцентных клапана, на входе оттока, видны. С этой точки зрения измерения скорости и потока могут быть сделаны с помощью доплеровского изображения.Нанесите режим цвета-доплера, чтобы сопоставить скорости кровотока в тракте оттока во время сердечной инъекции. Далее, применить цвет-Doppler изображений и власти доплеров изображения для визуализации кровотока в желудочковом представлении, и сделать то же самое в предсердии зрения. Далее используйте режим color-Doppler, направленный на расположение максимальной скорости крови в оттоке тракта, бегущего прямо к предукеру.Когда отток не полностью перпендикулярен трансдукеру, нанесите угол луча и угловую коррекцию, чтобы исправить изображение до 45 градусов. Затем соберите данные о скорости времени в режиме импульсной волны Доплера. Во время ни одной фазы сердечного цикла спиральный клапан не должен перекрывать вид оттока.Сбор данных по крайней мере из трех сердечных циклов. Затем, не перемещая предуцера, приобретайте данные в режиме В как минимум из трех сердечных циклов. Далее, только для обезболивания животных, поверните животное на 90 градусов так, чтобы правая часть животного обращена вверх, и переместите предук к косой пара-жабры зрения, просто параллельно и задней к выступающим жабры.Эта точка зрения предлагает альтернативное измерение скорости кровотока в трактах оттока. Отток участка должен работать вниз на уровне около 45 градусов, и предтечи должны появиться под оттока тракта во время инъекции. Наконец, переключитесь на импульсно-волновой режим Доплера и распоистите предуцера, чтобы просмотреть максимальную скорость крови, убегая от предуцера в оттоке тракта.При необходимости используйте до 45 градусов угла луча и угловую коррекцию, чтобы сделать отток перпендикулярным предуцанту. Затем собирайте данные в импульсно-волновом режиме Доплера и в B-режиме из того же положения, что и раньше. 3D приобретение занимает некоторое время, так что аксолотль должен быть анестезировал.Поместите его на спине в губы формы животного постели. Закрелите его резинками и погрузите его грудную поверхность в три-пять миллиметров ультразвуковой среды, содержащей анестезию. Движения во время 3D приобретения наносят ущерб последующей реконструкции.Если животное движется во время 3D ультразвукового приобретения, процедура должна быть повторена с самого начала. Далее, поместите преобразовайец над средней линией в грудной области, и поместите его параллельно длинной оси для sagittal 3D записи, или ортогонал к длинной оси для поперечной 3D записи. Затем переведимите претека, чтобы убедиться, что вся сердечная область покрывается последующим 3D захватом.Перемести его как в плоскость измерения, так и во вне плоскости измерения. Для режима визуализации, если пульс животного составляет от 20 до 60 ударов в минуту, выберите общий режим визуализации. В противном случае выберите кардиологический режим.Выключите свет. Теперь, на необработавном изображении B-режима, отрегулируйте 2D-выигрыш до уровня, при котором анатомические структуры едва узнаваемы. Это увеличит соотношение сигнала к шуму при финальных реконструкциях.Затем определите размер толщины шага или ломтика. Теперь переведимите предуцера по одному шагу за раз, записывая 1000 кадров на каждом этапе до тех пор, пока не будет покрыта вся сердечная область. С помощью описанной техники был проведен 2D эхокардиографический анализ 10-граммового 10-сантиметрового аксолотля.Представление длинной оси обеспечило хорошую отправную точку. В середине плоскости показали синус веноз, атрии, и части желудочка. Просмотр желудочковой плоскости показал желудочек, чтобы быть сферическим и высоко trabeculated.В предсердий плоскости, предсердий появились более нерегулярные и едва trabeculated. Центр оттокового тракта находится близко к центру желудочка. Измерения сердечного цикла с использованием импульсно-волнового доплера с длинной оси и от косой пара-жаберной плоскости имели некоторый фоновый шум.Этот шум был непреодолимым при измерении времени скорости интегральным. Цвет-Доплер и власть-Доплер изображения показали, что структура потока через сердечные камеры. Виды были возможны из желудочка, из атрии, и из оттока тракта.Также была выполнена 3D эхокардиография. Этот многопланарный вид сердца имеет много применений, таких как реконструкция поверхности и объема, или сегментация и генерация 3D-моделей. После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как выполнять 2D и 3D эхокардиографии в аксолотле.После освоения, 2D ультразвуковой техники может быть сделано менее чем за пять минут на животное, если она выполняется должным образом, в то время как 3D приобретение может занять до часа на животное. После этой процедуры, другие методы, такие как удаление сердца и гистология могут быть выполнены для того, чтобы ответить на дополнительные вопросы, связанные с сердечной структуры и анатомии.

Research

JoVE Journal

Medicine

2D and 3D Echocardiography in the Axolotl (Ambystoma Mexicanum)

Transthoracic Echocardiography in Mice

Трансторакальной эхокардиографии у мышей

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene ...

High-frequency High-resolution Echocardiography: First Evidence on Non-invasive Repeated Measure of Myocardial Strain, Contractility, and Mitral Regurgitation in the Ischemia-reperfused Murine Heart

Высокочастотные высокого разрешения Эхокардиография: первое свидетельство о Неинвазивная Повторные Мера Инфаркт Процедить, сократимости и митральной регургитации в ишемией сердца мышей reperfused

Ischemia-reperfusion (IR) was surgically performed in murine hearts which were then subjected to repeated imaging to monitor temporal changes in ...

Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging

Мышей эхокардиографии и ультразвукового изображения

Rodent models of cardiac pathophysiology represent a valuable research tool to investigate mechanism of disease as well as test new therapeutics.1  ...

Murine Fetal Echocardiography

Мышиные эхокардиография плода

Transgenic mice displaying abnormalities in  cardiac development and function represent a powerful tool for the understanding  the molecular mechanisms ...

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Эхокардиография плода и импульсной волны ультразвуковая допплерография в модели кролика внутриутробной задержки роста

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

Contusion Spinal Cord Injury via a Microsurgical Laminectomy in the Regenerative Axolotl

Ушиб спинного мозга травма с помощью микрохирургической ламинэктомии в регенеративной аксолотл

The purpose of this study is to establish a standardized and reproducible regenerative blunt spinal cord injury model in the axolotl (Ambystoma ...

A Whole Body Dosimetry Protocol for Peptide-Receptor Radionuclide Therapy (PRRT): 2D Planar Image and Hybrid 2D+3D SPECT/CT Image Methods

A Whole Body Dosimetry Protocol for Peptide-Receptor Radionuclide Therapy PRRT: 2D Planar Image and Hybrid 2D+3D SPECT/CT Image Methods

Протокол дозиметрии всего тела для пептидно-рецепторной радионуклидной терапии (PRRT): 2D планарное изображение и гибридные 2D-3D SPECT/CT методы изображения

Peptide-receptor-radionuclide-therapy (PPRT) is a targeted therapy that combines a short-range energy radionuclide with a substrate with high specificity ...

Morphological and Functional Assessment of the Right Ventricle Using 3D Echocardiography

Морфологическая и функциональная оценка правого желудочка с помощью 3D эхокардиографии

Traditionally, it was believed that the right side of the heart has a minor role in circulation; however, more and more data suggest that right ...

Time-Resolved, Dynamic Computed Tomography Angiography for Characterization of Aortic Endoleaks and Treatment Guidance via 2D-3D Fusion-Imaging

Time-Resolved, Dynamic Computed Tomography Angiography for Characterization of Aortic Endoleaks and Treatment Guidance via 2D-3D Fusion-Imaging

Динамическая компьютерная томографическая ангиография с временным разрешением для характеристики эндоутечек аорты и руководства по лечению с помощью 2D-3D Fusion-Imaging

In the United States, more than 80% of all abdominal aortic aneurysms are treated by endovascular aortic aneurysm repair (EVAR). The endovascular approach ...

Hemodynamic Precision in the Neonatal Intensive Care Unit using Targeted Neonatal Echocardiography

Targeted neonatal echocardiography (TnECHO) refers to the use of comprehensive echocardiographic evaluation and physiologic data to obtain accurate, ...