Name: three-dimensional rendering and analysis of immunolabeled, clarified human placental villous vascular networks
Uploaded: 2018-03-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af New York State kontor for mennesker med udviklingsforstyrrelser og placenta Analytics LLC, New Rochelle, NY.

Denne protokol følger retningslinjerne i New York State Institute for grundforskning i udviklingsforstyrrelser menneskelige videnskabsetisk Komité.
1. villøs træ dissektion
<ol><li>Skyl formalin fast moderkagen væv med fosfat buffed saltvand (PBS)14 til at fjerne formalin og placere i en petriskål på scenen i en dissektion mikroskop. Bruge skalpel og fine pincet til at drille moderkagen væv fra hinanden for at finde villøs træer (hvid threadlike forgrening s...

<ol>
	<li>Thornburg, K. L., Kolahi, K., Pierce, M., Valent, A., Drake, R., Louey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+features+of+placental+programming.">Biological features of placental programming.</a> Placenta. 48, 47-53 (2016).</li><li>Misra, D. P., Salafia, C. M., Charles, A. K., Miller, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+weights+smaller+or+larger+than+the+placenta+predict+BMI+and+blood+pressure+at+age+7+years.">Birth weights smaller or larger than the placenta predict BMI and blood pressure at age 7 years.</a> J Dev Orig Health Dis. 1 (2), 123-130 (2010).</li><li>Burton, G. J., Fowden, A. L., Thornburg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+Origins+of+Chronic+Disease.">Placental Origins of Chronic Disease.</a> Physiol Rev. 96 (4), 1509-1565 (2016).</li><li>Srinivasan, A. P., Omprakash, B. O. P., Lavanya, K., Subbulakshmi Murugesan, P., Kandaswamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+study+of+villous+capillary+lesions+in+complicated+pregnancies.">A prospective study of villous capillary lesions in complicated pregnancies.</a> J Pregnancy. 2014, 193925 (2014).</li><li>Jones, C. J. P., Desoye, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+possible+function+for+placental+pericytes.">A new possible function for placental pericytes.</a> Cells Tissues Organs. 194 (1), 76-84 (2011).</li><li>Maly, A., Goshen, G., Sela, J., Pinelis, A., Stark, M., Maly, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histomorphometric+study+of+placental+villi+vascular+volume+in+toxemia+and+diabetes.">Histomorphometric study of placental villi vascular volume in toxemia and diabetes.</a> Hum Pathol. 36 (10), 1074-1079 (2005).</li><li>Ellery, P. M., Cindrova-Davies, T., Jauniaux, E., Ferguson-Smith, A. C., Burton, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+transcriptional+activity+in+the+syncytiotrophoblast+of+the+human+placenta.">Evidence for transcriptional activity in the syncytiotrophoblast of the human placenta.</a> Placenta. 30 (4), 329-334 (2009).</li><li>Jirkovsk&#225;, M., Kub&#237;nov&#225;, L., Jan&#225;&#269;ek, J., Kal&#225;b, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-D+study+of+vessels+in+peripheral+placental+villi.">3-D study of vessels in peripheral placental villi.</a> Image Anal Stereol. 26 (3), 165-168 (2011).</li><li>Pearce, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-Based+Modeling+of+Blood+Flow+and+Oxygen+Transfer+in+Feto-Placental+Capillaries.">Image-Based Modeling of Blood Flow and Oxygen Transfer in Feto-Placental Capillaries.</a> PLOS ONE. 11 (10), 0165369 (2016).</li><li>Plitman Mayo, R., Olsthoorn, J., Charnock-Jones, D. S., Burton, G. J., Oyen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+modeling+of+the+structure-function+relationship+in+human+placental+terminal+villi.">Computational modeling of the structure-function relationship in human placental terminal villi.</a> J Biomech. 49 (16), 3780-3787 (2016).</li><li>Mayhew, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stereological+perspective+on+placental+morphology+in+normal+and+complicated+pregnancies.">A stereological perspective on placental morphology in normal and complicated pregnancies.</a> J Anat. 215 (1), 77-90 (2009).</li><li>Teasdale, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gestational+changes+in+the+functional+structure+of+the+human+placenta+in+relation+to+fetal+growth:+a+morphometric+study.">Gestational changes in the functional structure of the human placenta in relation to fetal growth: a morphometric study.</a> Am J Obstet Gynecol. 137 (5), 560-568 (1980).</li><li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+Tissue+Clearing.">Clarifying Tissue Clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li><li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plaque+formation+and+isolation+of+pure+lines+with+poliomyelitis+viruses.">Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses.</a> J Exp Med. 99 (2), 167-182 (1954).</li><li>Gill, J. S., Salafia, C. M., Grebenkov, D., Vvedensky, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+oxygen+transport+in+human+placental+terminal+villi.">Modeling oxygen transport in human placental terminal villi.</a> J Theor Biol. 291, 33-41 (2011).</li><li>Plitman Mayo, R., Charnock-Jones, D. S., Burton, G. J., Oyen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+modeling+of+human+placental+terminal+villi.">Three-dimensional modeling of human placental terminal villi.</a> Placenta. 43, 54-60 (2016).</li></ol>

Den institutionelle revision bestyrelse godkendte samling af placenta villøs væv til formalin fiksation fra electively afsluttede graviditeter. Før procedurerne, der blev udført, en kort gennemgang af den medicinske post bemærkes moderens alder, paritet, og bekræftet manglen af underliggende medicinske (fx, hypertension, diabetes, og lupus) eller føtal (strukturelle eller Kromosomale anomalier, unormal vækst) blev udført. Datablad og eventuelle indsamlede prøver var mærket kun med en undersøgelse-ID....

Vores forståelse af udvikling moderkagen og dens patologier er, i vid udstrækning begrænset til udledes rumlige relationer mellem tilstødende villi og indesluttede kapillærer afledt af histologiske sektioner. I denne undersøgelse, har vi behandlet dette spørgsmål ved at udvikle midler til at generere tredimensionelle (3D) gengivelser af menneskelig placenta kapillære netværk, som er velegnede til analyser af kapillar netværksfunktioner (fx forgrening, soliditet). For at gøre dette har vi kombineret immunfluorescent farvning med to kommercielle væv clearing produkter, Visikol-1 og Visikol-2 (nævnt nedenfor som løsning-1 og løsning-2).
Det menneskelige placenta er et stort kompleks af blodkar placeret på grænsefladen mellem moderens intervillous blod og det udviklende foster. Strækker sig ud fra sin indsættelse i chorion pladen, filialer navlestrengen i et netværk af arterier og vener, der forgrene for at dække chorion overfladen med en omfattende vaskulære netværk. Deres ender derefter trænge ned i interiøret eller dybde af placenta disken hvor de gennemgår flere mere forgrenet generationer og slutter i de terminal villi og deres indesluttede kapillære netværk, stedet for udvekslingen af gasser, næringsstoffer, og metabolisk affald mellem føtal og maternel blod.
Fornærmelser til placenta kapillær netværket under udvikling har varige følger for sundheden hos fosteret, nyfødte spædbarn og emergent voksen 1,2,3. På grund af graviditetsbetinget patologier såsom abort, intrauterin vækst begrænsning, præeklampsi og maternel diabetes 4,5,6 der er en høj værdi placeret på at udvikle metoder til måling og karakterisering af placenta villøs kapillære netværk. En stor vejspærring er at placenta vaskulære netværk omfatter en bred skala. De overflade vaskulære netværk kan være så stor som 4-5 mm i diameter. Terminal villøs kapillærerne er på rækkefølgen af 10 -20 µm i diameter; moderkagen indeholder mere end 300 km af blodkar 7. I øjeblikket er der par let at bruge og hurtig teknikker, som kan opfange disse yderpunkter af fartøjet skala. Til dato er kan kun et lille antal villi gengives ved mikroskopi. For eksempel, Jirkovska et al. fokuseret på den placenta villus på sigt, kombinere konfokalmikroskopi med seriel optisk sektioner på 1 µm intervaller fra 120 µm tykt sektioner; ingen data om antallet af prøver undersøgt eller statistikker blev leveret 8. Kapillar strukturer blev identificeret, og konturerne af villi og kapillærer var håndtegnede, med tracings eksporteres til billedanalyse. Mens forfatterne diskutere konsekvenserne af deres resultater for "voksende villøs vaskulære netværk", er sådanne konklusioner problematisk, når kun "udtrykket" (36 + uge gestationsalder) væv er studeret. På samme måde, Mayo et enl. og Pearce et al. påberåbt væv af samme alder, for deres simuleringer af blod flow og ilt overførsel, men deres analyser blev begrænset til kun et par sigt, terminal villi 9,10 . Stereologi er også blevet anvendt til undersøgelse af strukturen af villøs fartøjer. Men igen, fokus har generelt været på senere graviditeter levere liveborn spædbørn med en eller flere graviditet komplikationer 11,12.
Indtil for nylig, var konfokalmikroskopi begrænset til billeddannelse til væv dybder af 100-200 µm absorption af excitation og emission af fluorescens af de overliggende væv 13 . Selvom væv clearing og 3D histologi er blevet bredt beskrevet i litteraturen og der er er mange metoder til væv clearing mange uegnet til brug med væv i almindelighed, som de uoprettelige skader på cellulære morfologi gennem hyperhydration af proteiner eller fjernelse af lipider. Det er derfor ikke muligt at kontrollere, at disse resultater er vejledende væv sig selv og ikke artefakter fra behandling af vores væv clearing proces er en reversibel teknik, der er i stand til at validere mod traditionelle histologi. Væv clearing generelt indebærer en af tre store tilgange: 1) ensartet matching af brydningsindeks (RI) af væv komponenter ved neddykning i RI matchende løsninger, som fjerner den kumulative lysspredning forårsaget fra lensing på grund af løbende udsving af lav RI (cytosol) og høj RI (protein/lipider) bestanddele; 2) fjernelse af lipid komponenter ved hjælp af indkapslet i hydrogel og udnytte elektroforese/diffusion for at fjerne lipid komponenter; 3) udvidelse/denaturering af protein struktur at tillade øget penetration af opløsningsmidler til at fremme ensartethed af RI 13. Mens disse tilgange kan gengive væv transparent og lader 3D repræsentationer af biomarkører skal genereres, er disse 3D repræsentationer af tvivlsom klinisk værdi, som det er udfordrende at afgøre, om disse billeder er vejledende af væv egenskaber eller af væv clearing proces. På den anden side, da vores væv clearing er reversibel kan standard histologiske og/eller Immunhistokemi anvendes til det samme væv til at vurdere, om ændringerne er klinisk signifikant.
Denne undersøgelse præsenterer en analyse af 47 distale villøs prøver Ialt 23 klinisk normale og electively afsluttede graviditeter mellem 9-23 afsluttet ugers drægtighed og to fuldbårne normale leverancer. Immunfluorescens mærkning af trofoblast og endothelia har aktiveret en kvantitativ og automatiserede analyse af ændringer i de villøs vaskulære netværk og deres kompleksitet.
Med denne protokol, vi isoleret og analyseret terminal villi og deres kapillære netværk på en skala ikke muligt tidligere. Denne fremgangsmåde, når den anvendes til udvikling af villøs og kapillær net på tværs af drægtighedsperioden vil identificere de egenskaber, der er grundlaget for fødsel af et sundt barn. Når de anvendes til undersøgelser af komplicerede graviditeter, vil det også afklare når og hvordan de placenta patologier ændre villøs træerne og de kapillære netværk de jakke, og hvordan disse kollidere fosterets velbefindende.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1277px;" width="1277">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:435px;">10% Formaldehyde solution (w/v) in aqueous phosphate buffer</td>
			<td style="width:199px;">Macron Fine Chemicals</td>
			<td style="width:127px;">H-121-08</td>
			<td style="width:517px;">General fixation agent, ready to use formula, use caution as vapors are toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel blades</td>
			<td style="width:199px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">08-916-5B No. 11</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel</td>
			<td style="width:199px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">08-913-5</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine forceps</td>
			<td style="width:199px;">Electron Microscopy Services</td>
			<td style="width:127px;">78354-119</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Tube (1.7 mL)</td>
			<td style="width:199px;">PGC Scientifics</td>
			<td style="width:127px;">505-201</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:199px;">Sigma</td>
			<td style="width:127px;">D8537</td>
			<td style="width:517px;">PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipette</td>
			<td style="width:199px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">52947-948</td>
			<td style="width:517px;">disposable, 3ml transfer pipette</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:199px;">Boehriner Mannheim</td>
			<td style="width:127px;">789 704</td>
			<td style="width:517px;">Dilute to 0.1% from stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:199px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">16210-064</td>
			<td style="width:517px;">Dilute to 2% in PBS solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse monoclonial anti-ck7 Keratin 7 Ab-2 (Clone OV-TL 12/30)</td>
			<td style="width:199px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">MS-1352-RQ</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit Anti-CD31 antibody</td>
			<td style="width:199px;">Abcam</td>
			<td style="width:127px;">ab28364</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">green emitting (520 nm) fluorochrome&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:127px;">A11017</td>
			<td style="width:517px;">Alexa-Fluor 488</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">infrared emitting (652 nm) fluorochrome</td>
			<td style="width:199px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:127px;">A21072</td>
			<td style="width:517px;">Alexa Fluor 633</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Ethanol alcohol 200 proof</td>
			<td style="width:199px;">Pharmco-Aaper</td>
			<td style="width:127px;">111000200</td>
			<td style="width:517px;">Dilute down to lower concentrations using PBS as needed</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Solution-1</td>
			<td style="width:199px;">Visikol Inc.</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:517px;">Visikol Histo-1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Solution-2</td>
			<td style="width:199px;">Visikol Inc.</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:517px;">Visikol Histo-2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Skyes-Moore chambers</td>
			<td style="width:199px;">BellCo Glass Inc.</td>
			<td style="width:127px;">P/N 1943-11111</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:199px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">14-826AA</td>
			<td style="width:517px;">BD Precision Glide Needes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 mL syringe</td>
			<td style="width:199px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">14-823-40</td>
			<td style="width:517px;">BD disposable syringe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDMS silicon sheets</td>
			<td style="width:199px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:127px;">P/N 578T31</td>
			<td style="width:517px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">confocal microscope</td>
			<td style="width:199px;">Nikon Inc.</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:517px;">Nikon C1 Confocal Microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Deconvolution software</td>
			<td style="width:199px;">Media Cybernetics</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:517px;">AutoQuant X22</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fiji image processing software</td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:517px;">free, Open source&#160; software available at https://fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:199px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:127px;">3801570</td>
			<td style="width:517px;">Component 1 of SelecTech H&#38;E staining system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alcoholic Eosin</td>
			<td style="width:199px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:127px;">3801615</td>
			<td style="width:517px;">Component 2 of SelecTech H&#38;E staining system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blue Buffer</td>
			<td style="width:199px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:127px;">3802918</td>
			<td style="width:517px;">Component 3 of SelecTech H&#38;E staining system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aqua Define MCX</td>
			<td style="width:199px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:127px;">3803598</td>
			<td style="width:517px;">Component 4 of SelecTech H&#38;E staining system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Immunohistochemistry detection system</td>
			<td style="width:199px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">TL-125-QHD</td>
			<td>UltraVision Quanto Detection System HRP DAB</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional rendering and analysis of immunolabeled, clarified human placental villous vascular networks

Næringsstof og gas udveksling mellem mor og Foster opstår på grænsefladen af mødres intervillous blodet og den enorme villøs kapillær netværk, der gør meget af parenkym af det menneskelige placenta. Den distale villøs kapillære netværk er endestation for fostrets blod levering efter flere generationer af forgrening af fartøjer, der strækker sig ud fra navlestrengen. Dette netværk har en sammenhængende cellulære havfrue, laget syncytial trofoblast barriere, som forhindrer blanding af fostrets blod og den maternelle blod i som er det løbende badet. Fornærmelser mod integriteten af placenta kapillær netværket, forekommer i lidelser som mødres diabetes, forhøjet blodtryk og fedme, har konsekvenser de nuværende alvorlige sundhedsmæssige risici for fosteret, spædbarn og voksen. For at bedre definere de strukturelle virkninger af disse fornærmelser, var en protokol udviklet for denne undersøgelse, der fanger kapillær netværksstruktur om 1-2 mm3 hvori man kan undersøge dens topologiske egenskaber i dets fulde kompleksitet. For at opnå dette, klynger af terminal villi fra moderkagen er dissekeret, og laget trofoblast og kapillær endothelia er immunolabeled. Disse prøver er derefter afklaret med et nyt væv clearing proces, som gør det muligt at erhverve Konfokal billedstakke til z-dybet af ~ 1 mm. De tre-dimensionelle gengivelser af disse stakke er derefter behandles og analyseres for at generere grundlæggende kapillære netværk foranstaltninger såsom volumen, antallet af kapillar grene og kapillær gren slutpunkter, som validering af denne tilgang til egnethed kapillære netværk karakterisering.

De genererede 3D puds af kapillærer i klynger af terminal villi i menneskelige placenta fra 8 uger gestationsalder sigt levering var tælles som enkelte klynger og skeletteret for netværksanalyse. De funktionelle enheder af moderkagen (fig. 1A) er villus træer, der er en forlængelse af skibe hvor de er trængt ind i moderkagen parenkym (figur 1B, og udvidet i 1 C). Stykker af...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks at JoVE.com

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

Denne undersøgelse præsenterer en protokol for den reversible væv clearing, immunfarvning, 3D-rendering og analyse af vaskulære netværk i menneskelige placenta villi prøver om 1-2 mm3.

Tre-dimensionelle gengivelse og analyse af Immunolabeled, klarere menneskelige placenta villøs vaskulære netværk

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Differentiation of a Human Neural Stem Cell Line on Three Dimensional Cultures, Analysis of MicroRNA and Putative Target Genes

Differentiering af en human neural stamcelle Line på tredimensionelle kulturer, Analyse af MicroRNA og formodede målgener

Neural stem cells (NSCs) are capable of self-renewal and differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes under specific local ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse af zebrafisk Larver Skeletmuskel Integritet med Evans blå farvestof

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Tre-dimensionel Kvantificering af dendritiske Spines fra pyramideneuroner Afledt af menneskeskabte pluripotente stamceller

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Analysis of Retinoic Acid-induced Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Two and Three-dimensional Embryoid Bodies

Analyse af retinoidsyre-induceret Neural Differentiation af muse embryonale stamceller i to og tre-dimensionelle embryoide legemer

Mouse embryonic stem cells (ESCs) isolated from the inner mass of the blastocyst (typically at day E3.5), can be used as in vitro model system for ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horisontal Hel Mount: En Novel Processing and Imaging Protocol for Tykke, Tredimensionale Tissue Tværsnit af Skin

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

En roman brug af tre-dimensionelle høj frekvens ultralyd for tidlig graviditet karakterisering i mus

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Three-dimensional Inflammatory Human Tissue Equivalents of Gingiva

Tre-dimensionelle inflammatoriske humant væv ækvivalenter af Gingiva

Periodontal diseases (such as gingivitis and periodontitis) are the leading causes of tooth loss in adults. Inflammation in gingiva is the fundamental ...

Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs

Tre-dimensionelle Organotypic kulturer af vestibulære og auditive sanseorganer

The sensory organs of the inner ear are challenging to study in mammals due to their inaccessibility to experimental manipulation and optical observation. ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation af stillads-fri, tre-dimensionelle Insulin udtrykker Pancreatoids fra mus i bugspytkirtlen stamfaderen In Vitro

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Høj frekvens ultralyd til analyse af føtal og placenta udvikling In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...