Name: dried blood and serum spots as a useful tool for sample storage to evaluate cancer biomarkers
Uploaded: 2018-06-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers at JoVE.com

نود أن نشكر تيرني Gráinne للمساعدة التحريرية.

الدم والمصل تم جمعها وتخزينها من المانحين صحي والمرضى الذين أعطوا الموافقة الخطية على المشاركة في الدراسة. وأقر البروتوكول دراسة "لجنة الأخلاقيات" المحلية وفقا للمعايير الأخلاقية المنصوص عليها في "إعلان هلسنكي" عام 1964.
1-الدم مخزن في DBS
<ol><li>
جمع عينات الدم
	<ol>
<li>جم?...

<ol>
	<li>Bertagnolio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+drug+resistance+surveillance+using+dried+whole+blood+spots.">HIV-1 drug resistance surveillance using dried whole blood spots.</a> Antivir Ther. 12 (1), 107-113 (2007).</li><li>Mei, J. V., Alexander, J. R., Adam, B. W., Hannon, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+filter+paper+for+the+collection+and+analysis+of+human+whole+blood+specimens.">Use of filter paper for the collection and analysis of human whole blood specimens.</a> J Nutr. 131 (5), 1631S-1636S (2001).</li><li>Garrido, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtype+variability,+virological+response+and+drug+resistance+assessed+on+dried+blood+spots+collected+from+HIV+patients+on+antiretroviral+therapy+in+Angola.">Subtype variability, virological response and drug resistance assessed on dried blood spots collected from HIV patients on antiretroviral therapy in Angola.</a> J Antimicrob Chemoth. 61 (3), 694-698 (2008).</li><li>Steegen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feasibility+of+detecting+human+immunodeficiency+virus+type+1+drug+resistance+in+DNA+extracted+from+whole+blood+or+dried+blood+spots.">Feasibility of detecting human immunodeficiency virus type 1 drug resistance in DNA extracted from whole blood or dried blood spots.</a> J Clin Microbiol. 45 (10), 3342-3351 (2007).</li><li>Costenaro, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+load+detection+using+dried+blood+spots+in+a+cohort+of+HIV-1-infected+children+in+Uganda:+correlations+with+clinical+and+immunological+criteria+for+treatment+failure.">Viral load detection using dried blood spots in a cohort of HIV-1-infected children in Uganda: correlations with clinical and immunological criteria for treatment failure.</a> J Clin Microbiol. 52 (7), 2665-2667 (2014).</li><li>Gong, Z. H., Tian, G. L., Huang, Q. W., Wang, Y. M., Xu, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+glutathione+and+glutathione+disulfide+in+the+blood+of+glucose-6-phosphate+dehydrogenase-deficient+newborns.">Reduced glutathione and glutathione disulfide in the blood of glucose-6-phosphate dehydrogenase-deficient newborns.</a> BMC Pediatr. 20 (17), 172 (2017).</li><li>Lukacs, Z., Barr, M., Hamilton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practice+in+the+measurement+and+interpretation+of+lysosomal+acid+lipase+in+dried+blood+spots+using+the+inhibitor+Lalistat+2.">Best practice in the measurement and interpretation of lysosomal acid lipase in dried blood spots using the inhibitor Lalistat 2.</a> Clin Chim Acta. 471, 201-205 (2017).</li><li>Skogstrand, P. T., Bent, N. P., Schendel, D. E., S&#248;rensen, L. C., Hougaard, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+measurement+of+25+inflammatory+markers+and+neurotrophins+in+neonatal+dried+blood+spots+by+immunoassay+with+xMAP+technology.">Simultaneous measurement of 25 inflammatory markers and neurotrophins in neonatal dried blood spots by immunoassay with xMAP technology.</a> Clin Chem. 51 (10), 1854-1866 (2005).</li><li>Amadori, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+D+receptor+polymorphisms+or+serum+levels+as+key+drivers+of+breast+cancer+development?+The+question+of+the+vitamin+D+pathway.">Vitamin D receptor polymorphisms or serum levels as key drivers of breast cancer development? The question of the vitamin D pathway.</a> Oncotarget. 8 (8), 13142-13156 (2017).</li><li>Gupta, B. P., Jayasuryan, N., Jameel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+detection+of+hepatitis+B+virus+from+dried+blood+spots+by+polymerase+chain+reaction+amplification.">Direct detection of hepatitis B virus from dried blood spots by polymerase chain reaction amplification.</a> J Clin Microbiol. 30 (8), 1913-1916 (1992).</li><li>Colson, K. E., Potter, A., Conde-Glez, C., Hernandez, B., R&#237;osZertuche, D., Z&#250;&#241;iga-Brenes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+commercial+ELISA+for+the+detection+of+measles-specific+immunoglobulin+G+(IgG)+in+dried+blood+spots+collected+from+children+living+in+low-resource+settings.">Use of a commercial ELISA for the detection of measles-specific immunoglobulin G (IgG) in dried blood spots collected from children living in low-resource settings.</a> J Med Virol. 87 (9), 1491-1499 (2015).</li><li>Drabe, C. H., Blauenfeldt, T., Ruhwald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISA-based+assay+for+IP-10+detection+from+filter+paper+samples.">ELISA-based assay for IP-10 detection from filter paper samples.</a> Methods Mol Biol. 1172, 27-37 (2014).</li><li>St Julien, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+quality+genome-wide+genotyping+from+archived+dried+blood+spots+without+DNA+amplification.">High quality genome-wide genotyping from archived dried blood spots without DNA amplification.</a> PLoS One. 8 (5), e64710 (2013).</li><li>Shaner, R. L., Schulze, N. D., Seymour, C., Hamelin, E. I., Thomas, J. D., Johnson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+fentanyl+analogs+in+dried+blood+spots+by+flow-through+desorption+coupled+to+online+solid+phase+extraction+tandem+mass+spectrometry.">Quantitation of fentanyl analogs in dried blood spots by flow-through desorption coupled to online solid phase extraction tandem mass spectrometry.</a> Anal Methods. 9, 3876-3883 (2017).</li></ol>

ويحقق هذا البروتوكول إمكانية تخزين الدم والمصل على ورق الترشيح عندما لا يكون المعامل على الموظفين أو الهياكل الأساسية اللازمة للتعامل الصحيح مع عينات الدم. على وجه الخصوص، كل الدم أو مصل الدم التي تم جمعها في أنابيب القياسية أو بوخز الإصبع يمكن تخزينها باستخدام هذا الأسلوب، وليس هناك حاج...

والهدف الرئيسي للبحث في السرطان المؤشرات الحيوية هو تحديد البارامترات البيولوجية الجديدة التي يمكن استخدامها لتشخيص لتشخيص المريض التنبؤ لتحديد ما إذا كان مريض سوف تستجيب لعلاج محدد. هذا المجال البحوث الأساسية لاكتشاف علاجات السرطان مبتكرة ويلعب دوراً رئيسيا في العلاج مصممة خصيصا.
يجب أن تكون الإجراءات التي نفذت خلال كل خطوة وتحديد العلامات البيولوجية والتحقق من صحة موثوقة واستنساخه. هو حجر زاوية في نجاح البحوث متعدية التخزين الصحيح للعينات البيولوجية مثل الدم والمصل. هذه هي الخطوة الأولى نحو الحصول على جودة عالية من المواد البيولوجية التي يمكن استخدامها لإجراء تجارب البيولوجيا الجزيئية أو فحوصات البروتين.
دراسات متعددة المراكز غالباً ما يلزم لتجنيد ما يكفي من المرضى للحصول على بيانات قوية. ليست كل المعاهد قادرة على تخزين العينات في-80 درجة مئوية أو إرسال عينات إلى المراكز الدولية الأخرى في الثلج الجاف. استخدام ورق الترشيح لجمع الدم هو طريقة بسيطة لتخزين الدم والمصل ولا تتطلب التجميد الفوري لعينات1،2. يمكن رصدها قطره من الدم أو المصل على الورق، غادر إلى الجافة بين عشية وضحاها، وثم تخزينها لمدة تصل إلى 14 يوما في درجة حرارة الغرفة1،2. وهذا يعطي الباحثين الوقت لإرسال العينات إلى مختبرات أخرى. استخدام الدم المجفف البقع (DBS) والبقع المصل المجففة (DSS) وبالتالي يمكن تبسيط التعاون بين المعاهد في البلدان المتقدمة والنامية.
نظراً لسهولة استخدامه، أخذ العينات DBS يستخدم على نطاق واسع في عدة أنواع من الاختبارات المصلية أو الوراثية بتحليل المتلقين للمعلومات. على سبيل المثال، في الماضي، كثيرا ما كانت المستخدمة DBS لفيروس نقص المناعة البشرية الفرز في البلدان النامية1،2،3،،من45. وهناك ميزة أخرى لهذا الأسلوب التخزين أنه يمكن جمع عينات دم من يحرك الإصبع، مما يمكن استعماله للأطفال حديثي الولادة فحص الاختبارات 6،،من78. العينة سهلة المناولة والنقل زيادة مزايا DBS، خاصة بالنسبة للعينات التي تم جمعها في المواقع النائية حيث لا يوجد أي معدات المختبرات. في منشور سابق، استخدمنا DBS والترصد لاختبار فيتامين (د) وفيتامين (د) البروتين (دبة) في سلسلة من المرضى والقوقاز وأفريقيا9. زملائنا الأفارقة لم تكن قادرة على الحصول على الثلج الجاف. لمقارنة العلامات البيولوجية لفهم الاختلافات في مسار فيتامين (د) بين اثنين من السكان العرقية، علينا مواصلة تحسين الإجراء باستخدام عينات المطابقة المخزنة تحت الظروف القياسية وعلى ورق الترشيح. بعد تحسين الإجراء DBS/DSS، كنا قادرين على تحليل دبة وفيتامين D في مصل المريض في كل الأفواج. ونحن أيضا تقييم عدد من النوكليوتيدات واحدة مجمع الأشكال المتعددة (بطانات) بعد استخراج الحمض النووي من الدم كله للقوقازيين ومن DBS للأفارقة9. ويسمح هذا البروتوكول عينات الدم عالية الجودة ليتم تخزينها في درجة حرارة الغرفة دون التأثير على أنواع مختلفة من تحليلات المصب تتراوح بين البيولوجيا الجزيئية لفحوصات أليسا. من المستحسن استخدام إدارة المواد البيولوجية في دراسات متعددة المراكز أو المراكز التي لا تملك تسهيلات لظروف التخزين القياسية. ويمثل البروتوكول التالي تتويجا لهذه الإجراءات المحسنة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Whatman protein saver cards 903 Protein saver card, 100/pk&#8206;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z761575</td>
			<td>Useful to store samples at room temperature for downstream analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Serological Pipettes, 5 mL</td>
			<td>Stem cell</td>
			<td>#38003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-200 &#181;L tips</td>
			<td>Star-Lab</td>
			<td>S1120-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4036-3204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp DNA microkit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>56304</td>
			<td>This is a DNA extraction kit designed to isolate small quantities of DNA&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer ATL (included in QIAamp DNA microkit)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td></td>
			<td>This is reported as Lysis Buffer 1 in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer AL (included in QIAamp DNA microkit)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td></td>
			<td>This is reported as Lysis Buffer 2 in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp mini elute column</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td></td>
			<td>This is reported as column in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AW1&#160; (included in QIAamp DNA microkit)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td></td>
			<td>This is reported as Wash Buffer 1 IN THE TEXT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AW2&#160; (included in QIAamp DNA microkit)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td></td>
			<td>This is reported as Wash Buffer 2 in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Vitamin D BP Quantikine ELISA Kit</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>DVDBP0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dried blood and serum spots as a useful tool for sample storage to evaluate cancer biomarkers

جودة عينة الدم أمر حاسم لضمان دقة التحاليل المصب مثل PCR الوقت الحقيقي أو أليسا. التخزين الصحيح للمواد البيولوجية هو نقطة الانطلاق لتحقيق النتائج استنساخه وموثوق بها. ينبغي أن يعامل جميع العينات بنفس الطريقة من جمع الدم للتخزين. اعتماداً على التحليلات التي يتعين القيام بها، يجب تخزين الدم كله وعينات المصل في-20 درجة مئوية أو-80 درجة مئوية حتى الاستخدام. وينبغي أيضا عينات مصل الدم/الكوتيد لتجنب ذوبان التجميد متعددة. مسألة هامة أخرى هي شروط عينة أثناء الشحن من معمل واحد إلى آخر. إذا لم يتوفر الثلج الجاف أو الشحنة وقتاً أطول من بضعة أيام، هناك حاجة النهج البديلة. خيار واحد استخدام ورق الترشيح لجمع الدم. هنا، فإننا نقترح أسلوب للدم وجمع عينة المصل الذي يستفيد من المجففة بقع الدم (DBS) والمجفف البقع المصل (DSS). قمنا بتطوير الإجراءات استخراج الحمض النووي من DBS لتقييم بعض النوكليوتيدات واحدة مجمع الأشكال المتعددة (بطانات) المتلقين للمعلومات بالوقت الحقيقي PCR. ونحن أيضا الأمثل مقايسة أليسا بدءاً من البروتينات التيد من مفاجآت. يمكن استخدام هذا الأسلوب مع أليسا فحوصات أو إجراءات تقييم البروتينات الأخرى.

ونحن استغل الإجراءات DBS والترصد لتخزين الدم والمصل في درجة حرارة الغرفة دون التأثير على نوعية المواد البيولوجية. ويبين الشكل 1 مثال التوقف بطاقة البروتين دون الدم وبعد جمع الدم. للتأكد من أن التخزين على ورق الترشيح والإجراءات الوتي الدم لا تتداخل مع نوعية...

Watch this Scientific Journal Video about Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers at JoVE.com

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

ويصف هذا البروتوكول طريقة بسيطة ومفيدة لتخزين الدم المحيطي والمصل/بلازما لتحليلات المصب مثل النوكليوتيدات واحدة تعدد الأشكال (SNP) تقييم وفحص إليزا.

تجفف الدم والبقع المصل كأداة مفيدة لتخزين نموذج لتقييم المؤشرات الحيوية السرطان

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

كولون-26 سرطان الفأر نموذجا لدراسة سرطان دنف الحاملة للورم

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

إجراء شامل لتقييم<em&gt; في فيفو</em&gt; الأداء من السرطان طب النانو

Inspired by the success of previous cancer nanomedicines in the clinic, researchers have generated a large number of novel formulations in the past ...

Conditional Knockdown of Gene Expression in Cancer Cell Lines to Study the Recruitment of Monocytes/Macrophages to the Tumor Microenvironment

الشرطي ضربة قاضية للتعبير الجيني في خطوط خلايا السرطان لدراسة توظيف حيدات/الضامة إلى ورم المكروية

siRNA and shRNA-mediated knock down (KD) methods of regulating gene expression are invaluable tools for understanding gene and protein function. However, ...

Comprehensive Protocol to Sample and Process Bone Marrow for Measuring Measurable Residual Disease and Leukemic Stem Cells in Acute Myeloid Leukemia

بروتوكول شامل للعينة ونخاع العظام عملية قياس الأمراض المتبقية قابلة للقياس والخلايا الجذعية ليوكيميك في سرطان الدم النقوي الحاد

Response criteria in acute myeloid leukemia (AML) has recently been re-established, with morphologic examination utilized to determine whether patients ...

Methods for Evaluating the Role of c-Fos and Dusp1 in Oncogene Dependence

أساليب لتقييم دور ج-المنحدر و Dusp1 في الاعتماد على السرطاني

The demonstration of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in treating chronic myeloid leukemia (CML) has heralded a new era in cancer therapeutics. However, ...

Yeast As a Chassis for Developing Functional Assays to Study Human P53

الخميرة كهيكل لتطوير الاختبارات الوظيفية لدراسة P53 الإنسان

The finding that the well-known mammalian P53 protein can act as a transcription factor (TF) in the yeast S. cerevisiae has allowed for the development of ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

تحليل مقياس التدفق لأنواع الأكسجين التفاعلي الميتوكوندريا في الجذعية المكونة للدم وخلايا البروجينوتريو وابيضاض الدم المدفوع MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

رسم خرائط للعلاقات بين الهيكل والوظيفة لعوامل النسخ غير المنضبطة باستخدام التحليل النسخي

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Using the E1A Minigene Tool to Study mRNA Splicing Changes

استخدام أداة E1A Minigene لدراسة تغييرات الربط مرنا

mRNA processing involves multiple simultaneous steps to prepare mRNA for translation, such as 5&#180;capping, poly-A addition and splicing. Besides ...