Name: two-step approach to explore early- and late-stages of organ formation in the avian model: the thymus and parathyroid glands organogenesis paradigm
Uploaded: 2018-06-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-step Approach to Explore Early- and Late-stages of Organ Formation in the Avian Model: The Thymus and Parathyroid Glands Organogenesis Paradigm at JoVE.co

लेखक António Cidadão, इसाबेल Alcobia, और लियोन Parreira पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए, वीडियो कथा के लिए पद्म Akkapeddi के लिए आभारी हैं, और वीटर Proa प्रोटोकॉल de Instituto ई Histologia की सेवा से Desenvolvimento, Faculdade de Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa, तकनीकी सहायता के लिए । हम विशेष रूप से पाउलो Caeiro और ह्यूगो सिल्वा Unidade de audiovisuais (Audiovisual इकाई), Faculdade de Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa के लिए उनके इस वीडियो के उत्पादन के लिए उत्कृष्ट प्रतिबद्धता के लिए ऋणी हैं । हम Leica माइक्रोसिस्टंस स्वीकार करने के लिए कृपया एक वीडियो प्रणाली के साथ सुसज्जित stereoscope प्रदान करने के लिए और Interaves-Sociedade एग्रो Pecuária के लिए, एस. ए बटेर निषेचित अंडे के साथ योगदान के लिए । यह काम Faculdade de Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa (FMUL) द्वारा समर्थित किया गया था ।

इन सभी प्रयोगों Centro Académico de Medicina de Lisboa के पशु देखभाल और नैतिक दिशा निर्देशों का पालन करें ।
1. निषेचित बटेर और चिकन अंडे की मशीन
<ol><li>जापानी बटेर (Coturnix Coturnix बिही) और चिकन (गैलस गैलस) की मशीन, क्रमशः 3 औ?...

<ol>
	<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nogent+Institute-50+years+of+embryology.">The Nogent Institute-50 years of embryology.</a> Int J Dev Biol. 49 (2-3), 85-103 (2005).</li><li>Chuong, C. M., Wu, P., Plikus, M., Jiang, T. X., Bruce Widelitz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+stem+cells+into+organs:+topobiological+transformations+demonstrated+by+beak,+feather,+and+other+ectodermal+organ+morphogenesis.">Engineering stem cells into organs: topobiological transformations demonstrated by beak, feather, and other ectodermal organ morphogenesis.</a> Curr Top Dev Biol. 72, 237-274 (2006).</li><li>Davey, M. G., Tickle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+as+a+model+for+embryonic+development.">The chicken as a model for embryonic development.</a> Cytogenet Genome Res. 117 (1-4), 231-239 (2007).</li><li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology,+medicine+and+bioengineering.">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li><li>Figueiredo, M., Silva, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+and+Hedgehog+in+the+thymus/parathyroid+common+primordium:+Crosstalk+in+organ+formation.">Notch and Hedgehog in the thymus/parathyroid common primordium: Crosstalk in organ formation.</a> Dev Biol. 418 (2), 268-282 (2016).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+6+-+Recent+Advances+in+Developmental+Biology.">Chapter 6 - Recent Advances in Developmental Biology.</a> Scientific Frontiers in Developmental Toxicology and Risk Assessment. , (2000).</li><li>Moura, R. S., Coutinho-Borges, J. P., Pacheco, A. P., Damota, P. O., Correia-Pinto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF+signalling+pathway+in+the+developing+chick+lung:+expression+and+inhibition+studies.">FGF signalling pathway in the developing chick lung: expression and inhibition studies.</a> PLoS One. 6 (3), e17660 (2011).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Takahashi, Y., Bontoux, M., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelio-mesenchymal+interactions+are+critical+for+Quox+7+expression+and+membrane+bone+differentiation+in+the+neural+crest+derived+mandibular+mesenchyme.">Epithelio-mesenchymal interactions are critical for Quox 7 expression and membrane bone differentiation in the neural crest derived mandibular mesenchyme.</a> EMBO J. 10 (9), 2387-2393 (1991).</li><li>Maeda, Y., Noda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+development+of+embryonic+long+bone+on+chorioallantoic+membrane+in+ovo+prevents+perichondrium-derived+suppressive+signals+against+cartilage+growth.">Coordinated development of embryonic long bone on chorioallantoic membrane in ovo prevents perichondrium-derived suppressive signals against cartilage growth.</a> Bone. 32 (1), 27-34 (2003).</li><li>Ishida, K., Mitsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+bioengineered+feather+buds+on+a+reconstructed+chick+skin+from+dissociated+epithelial+and+mesenchymal+cells.">Generation of bioengineered feather buds on a reconstructed chick skin from dissociated epithelial and mesenchymal cells.</a> Dev Growth Differ. 58 (3), 303-314 (2016).</li><li>Le Douarin, N. M., Jotereau, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+of+cells+of+the+avian+thymus+trough+embryonic+life+in+interspecific+chimeras.">Tracing of cells of the avian thymus trough embryonic life in interspecific chimeras.</a> J. Exp. Med. 142, 17-40 (1975).</li><li>Farley, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+thymus+organogenesis+and+colonization+in+early+human+development.">Dynamics of thymus organogenesis and colonization in early human development.</a> Development. 140, 2015-2026 (2013).</li><li>Gordon, J., Bennett, A. R., Blackburn, C. C., Manley, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gcm2+and+Foxn1+mark+early+parathyroid-+and+thymus-specific+domains+in+the+developing+third+pharyngeal+pouch.">Gcm2 and Foxn1 mark early parathyroid- and thymus-specific domains in the developing third pharyngeal pouch.</a> Mech Dev. 103, 141-143 (2001).</li><li>Neves, H., Dupin, E., Parreira, L., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Bmp4+signalling+in+the+epithelial-mesenchymal+interactions+that+take+place+in+early+thymus+and+parathyroid+development+in+avian+embryos.">Modulation of Bmp4 signalling in the epithelial-mesenchymal interactions that take place in early thymus and parathyroid development in avian embryos.</a> Dev Biol. 361 (2), 208-219 (2012).</li><li>Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DiGeorge+syndrome+phenotype+in+mice+mutant+for+the+T-box+gene,+Tbx1.">DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1.</a> Nat Genet. 27 (3), 286-291 (2001).</li><li>Nie, X., Brown, C. B., Wang, Q., Jiao, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Bmp4+from+the+Tbx1+expression+domain+causes+abnormal+pharyngeal+arch+artery+and+cardiac+outflow+tract+remodeling.">Inactivation of Bmp4 from the Tbx1 expression domain causes abnormal pharyngeal arch artery and cardiac outflow tract remodeling.</a> Cells Tissues Organs. 193 (6), 393-403 (2011).</li><li>Zou, D., Silvius, D., Davenport, J., Grifone, R., Maire, P., Xu, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+of+the+third+pharyngeal+pouch+into+thymus/parathyroid+by+Six+and+Eya1.">Patterning of the third pharyngeal pouch into thymus/parathyroid by Six and Eya1.</a> Dev Biol. 293 (2), 499-512 (2006).</li><li>Uematsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+in+ovo.+chorioallantoic+membrane+engraftment+to+culture+testes+from+neonatal+mice.">Use of in ovo. chorioallantoic membrane engraftment to culture testes from neonatal mice.</a> Comp Med. 64 (4), 264-269 (2014).</li></ol>

इस विधि की सफलता के लिए एक महत्वपूर्ण पहलू दोनों चिकन और बटेर अंडे की गुणवत्ता है । विशेष रूप से ovo परख, चिकन अंडे की एक अच्छी गुणवत्ता के दौरान लंबी गर्मी की अवधि को ध्यान में रखते हुए व्यवहार्यता दर (९०%) ?...

एवियन भ्रूण गया है व्यापक रूप से लाभदायक विकास जीव विज्ञान के अध्ययन में इस्तेमाल किया । एवियन मॉडल का मुख्य लाभ संभावना अंडा, भ्रूण के लिए अपेक्षाकृत आसान पहुंच, और micromanipulation प्रदर्शन करने की क्षमता को खोलने के लिए शामिल हैं । कुछ उदाहरण सेल भाग्य1, भ्रूण2के लिए विशिष्ट विकास कारकों के आवेदन, और1,3में अस्थानिक सेलुलर संरचनाओं के विकास के अध्ययन के लिए क्लासिक बटेर-चिकन कल्पना प्रणाली शामिल 4.
अंग गठन के विभिन्न चरणों में नई अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए, हमने हाल ही में एक विधि विकसित की है जो इन विट्रो में भ्रूण के ऊतकों में हेरफेर के साथ तकनीक को जोड़ती है5. दो कदम दृष्टिकोण भेदभाव और organogenesis, जो अक्सर अत्यधिक गतिशील और जटिल ऊतक बातचीत2के कारण सीमित कर रहे है के दोनों जल्दी और देर से चरणों की खोज में सक्षम बनाता है । इसके अलावा, उपयुक्त ऊतक की कमी-विशिष्ट मार्करों अक्सर आनुवंशिक रूप से संशोधित पशु मॉडल के उपयोग की सीमा6. दो कदम दृष्टिकोण की यह उपन्यास विधि मुख्यतः ऐसी सीमाओं पर काबू पाती है.
पहले चरण में, अंग गठन के प्रारंभिक चरणों का अध्ययन करने के लिए, बटेर भ्रूण भावी अंग रुडी शामिल क्षेत्र अलग है और एक इन विट्रो organotypic प्रणाली में हो ४८ ज के लिए । इस अवधि के दौरान, विशिष्ट संकेतन रास्ते के औषधीय मॉडुलन संस्कृति मध्यम5,7के लिए दवाओं को जोड़कर किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, प्रसंस्कृत ऊतकों के किसी भी चरण में एकत्र किया जा सकता है इन विट्रो विकास और जीन के लिए जांच-अभिव्यक्ति (जैसे तरीकों का उपयोग कर qPCR, microarrays, आदि) ।
दूसरे चरण में, ४८ ज-संस्कृति वाले ऊतकों तो एक चिकन (सी) भ्रूण भ्रूण दिवस (ई) 8 (cE8) (हैमबर्गर और हैमिल्टन (एच. टी.) के कैम पर भ्रष्टाचार कर रहे है-33-35 चरणों)8। कैम पोषक तत्वों की एक संवहनी आपूर्तिकर्ता के रूप में व्यवहार करता है और गैस एक्सचेंजों1,3,4 के लिए ovo में समय की लंबी अवधि के लिए अपने विकास को सक्षम करने की अनुमति देता है । इस प्रायोगिक कदम विशेष रूप से अच्छी तरह से organogenesis के देर चरणों का अध्ययन करने के लिए अनुकूल है, के रूप में पूरी तरह से गठन अंगों ovo विकास में 10 दिनों के बाद प्राप्त किया जा सकता है5,9,10,11 . रूपात्मक विश्लेषण आसानी से पारंपरिक प्रोटोकॉल द्वारा किया जाता है उचित अंग गठन और कोशिकाओं के दाता मूल की पुष्टि करने के लिए प्रजातियों का उपयोग कर immunohistochemistry द्वारा पहचाना जा सकता है विशिष्ट एंटीबॉडी (यानी, मॉब बटेर PeriNuclear (QCPN)) । कैम मशीन अवधि के दौरान, भ्रष्टाचार भी औषधीय एजेंटों की उपस्थिति में उगाया जा सकता है और विकास के किसी भी स्तर पर एकत्र करने के लिए organogenesis की प्रगति का मूल्यांकन ।
दो कदम दृष्टिकोण, गहराई में यहां वर्णित है, पहले से ही Figueiredo एट अल में कार्यरत किया गया है । 5 एवियन parathyroid/थाइमस आम primordium विकास का पता लगाने के लिए । तदनुसार, भ्रूण प्रदेशों और थाइमस और parathyroid ग्रंथियों के organogenesis में शामिल विकास के चरणों के निहित विशेषताओं के नीचे प्रस्तुत किया जाएगा ।
थाइमस और parathyroid ग्रंथियों epithelia, हालांकि कार्यात्मक अलग, ग्रसनी पाउच (पीपी)12के अन्तः से निकला । एवियन में, इन अंगों के epithelia तीसरे और चौथे पीपी अन्तः (3/4PP)12से शुरू होता है, जबकि स्तनधारियों में thymic उपकला 3PP से निकला और parathyroid ग्रंथियों की उपकला 3PP से निकला और माउस और मानव में 3/4PP, क्रमशः१३,१४.
इन अंगों के गठन में प्रारंभिक चरणों में से एक आम primordium में असतत थाइमस और parathyroid डोमेन के उद्भव है । चिकन में, इन डोमेन द्वारा की पहचान की जा सकती है सीटू संकरण में , विशिष्ट आणविक मार्करों के साथ, ई में 4.515. विकास आय के रूप में, इन अंगों individualize और ग्रसनी से अलग है, जबकि एक पतली mesenchymal कैप्सूल, तंत्रिका शिखा व्युत्पंन कोशिकाओं द्वारा गठित, उन चारों ओर से घेरे (E5 पर; एचएच-स्टेज 27) । बाद में, thymic उपकला टेम जनक कोशिकाओं द्वारा बृहदांत्र है (ई 6.5 पर; एचएच-स्टेज 30)12.
के रूप में शास्त्रीय बटेर-चिकन1,12अध्ययन, दो कदम दृष्टिकोण विशेष रूप से टेम/लसीकावत् अंगों, अर्थात् थाइमस5के गठन का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है । अंग रुडी के साथ बटेर explant के रूप में, टेम जनक सेल औपनिवेशीकरण से पहले चिकन भ्रूण में भ्रष्टाचार, एक chimeric थाइमस चिकन रक्त जनित जनक उपकला समकक्ष thymic एक बटेर घुसपैठ कोशिकाओं के साथ गठन किया है । इस विधि है, इसलिए, एक उपयोगी उपकरण एवियन hemato/लसीकावत् प्रणाली के विकास में टेम कोशिकाओं के योगदान का पता लगाने के लिए ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chicken fertilized eggs (Gallus gallus)</td>
			<td>Pintobar, Portugal</td>
			<td></td>
			<td>Poultry farm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quail fertilized eggs (Coturnix coturnix)</td>
			<td>Interaves, Portugal</td>
			<td></td>
			<td>Bird farm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL PP centrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL PP centrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 x 20 mm pyrex dishes</td>
			<td>Duran group</td>
			<td>21 755 41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 20 mm pyrex dishes</td>
			<td>Duran group</td>
			<td>21 755 48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Membrane Insert&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3412</td>
			<td>24 mm transwell with 0.4 mm Pore Polycarbonate Membrane Insert&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>DTTP01300</td>
			<td>0.6 mm Isopore membrane filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture plates</td>
			<td>Nunc, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>140675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, 35 x 10 mm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5112&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex bowls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>from supermarket&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Samco Scientific, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>2041S</td>
			<td>2 mL plastic pipet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pasteur pipette</td>
			<td>normax</td>
			<td>5426015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman&#160;qualitative filter paper</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA1001090</td>
			<td>Filter paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear plastic tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>from supermarket&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin (pan; acidic and basic, type I and II cytokeratins), clone Lu-5</td>
			<td>BMA Biomedicals</td>
			<td>T-1302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclopamine hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4116</td>
			<td>Pharmacological inhibitor of Hh signalling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Standart FBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>GIBCO, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QCPN antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>QCPN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement&#160;</td>
			<td>GIBCO, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>61870010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluesil RTV141A/B Silicone Elastomer 1.1Kg Kit</td>
			<td>ELKEM/Silmid</td>
			<td>RH141001KG</td>
			<td>To prepare the back base for petri dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stemolecule LY411575</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0054</td>
			<td>Pharmacological inhibitor of Notch signalling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15596026</td>
			<td>Reagent for total RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-30&#160;</td>
			<td>Thin forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Bonn scissors, curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14085-08</td>
			<td>Curved scissors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect pins&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro spatula&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10087-12</td>
			<td>Transplantation spoon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td>Microscalpel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Nickel Plated Pin Holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26016-12</td>
			<td>Holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Perforated Spoon</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10370-17</td>
			<td>Skimmer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wecker Eye Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15010-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Leica Microsystems&#160;</td>
			<td>MC170 HD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Leica Microsystems&#160;</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems&#160;</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-step approach to explore early- and late-stages of organ formation in the avian model: the thymus and parathyroid glands organogenesis paradigm

एवियन भ्रूण, एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में, विकास जीव विज्ञान में लाभदायक खोजों के लिए अत्यंत महत्व का किया गया है । कई तरीकों के अलावा, बटेर के गठन-चिकन chimeras और chorioallantoic झिल्ली का उपयोग (सांचा) अस्थानिक ऊतकों के विकास को बनाए रखने के लिए पिछली सदी के लिए वापस तिथि । आजकल, इन विट्रो के तरीके में हाल के साथ इन शास्त्रीय तकनीकों का संयोजन उपंयास की संभावनाओं को आगे अंग गठन का पता लगाने प्रदान करता है ।
यहां हम एक दो कदम दृष्टिकोण का वर्णन जल्दी अध्ययन और देर से organogenesis के चरणों । संक्षेप में, भ्रूण शरीर के प्रकल्पित क्षेत्र युक्त क्षेत्र बटेर भ्रूण से अलग है और एक organotypic प्रणाली में इन विट्रो में उगाया जाता है (४८ ज तक) । संस्कृति के ऊतकों को बाद में एक चिकन भ्रूण के सांचा पर भ्रष्टाचार कर रहे हैं । ovo विकास के 10 दिनों के बाद, पूरी तरह से गठित अंगों भ्रष्टाचारी ऊतकों से प्राप्त कर रहे हैं । इस विधि भी औषधीय एजेंटों और ऊतक आनुवंशिक में हेरफेर के नियमित प्रशासन द्वारा मार्ग संकेत की अनुमति देता है इन विट्रो में भर में और ovo विकासात्मक चरणों में । इसके अतिरिक्त, ऊतकों के विकास के किसी भी समय-खिड़की पर एकत्र किया जा सकता है उनके जीन-अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल का विश्लेषण (मात्रात्मक पीसीआर (qPCR), microarrays, आदि) और आकृति विज्ञान (पारंपरिक प्रोटोकॉल और immunochemistry के साथ मूल्यांकन का उपयोग करके) ।
वर्णित प्रयोगात्मक प्रक्रिया एक उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है एवियन भ्रूण के बाहर अंग गठन का पालन करें, organogenesis के प्रारंभिक दौर से पूरी तरह से गठन और कार्यात्मक अंगों के लिए ।

ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल विवरण एक विधि है कि दोनों जल्दी और देर से organogenesis के चरणों की जांच की अनुमति देता है, अक्सर जटिल सेलुलर और आणविक बातचीत द्वारा सीमित है ।
यह पद्धति प...

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Two-step Approach to Explore Early- and Late-stages of Organ Formation in the Avian Model: The Thymus and Parathyroid Glands Organogenesis Paradigm

दो कदम दृष्टिकोण का पता लगाने के लिए जल्दी और देर से एवियन मॉडल में अंग निर्माण के चरणों: थाइमस और Parathyroid ग्रंथियों Organogenesis प्रतिमान

इस लेख शास्त्रीय बटेर के लिए एक अद्यतन दृष्टिकोण-चिकन कल्पना प्रणाली के लिए अंग निर्माण का अध्ययन प्रदान करता है, इन विट्रो में उपंयास के संयोजन और ovo प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं में ।

The avian embryo, as an experimental model, has been of utmost importance for seminal discoveries in developmental biology. Among several approaches, the ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

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समझना एक सरलीकृत का प्रयोग अर्ली जीवोत्पत्ति<em&gt; बगल में</emमें&gt; संकरण प्रोटोकॉल<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Protocols for Obtaining Zygotic and Somatic Embryos for Studying the Regulation of Early Embryo Development in the Model Legume Medicago truncatula

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मॉडल फली में जल्दी भ्रूण के विकास के नियमन के अध्ययन के लिए युग्मज और दैहिक भ्रूणों प्राप्त करने के लिए प्रोटोकॉल<em&gt; Medicago truncatula</em

Early embryogenesis starting from a single cell zygote goes through rapid cell division and morphogenesis, and is morphologically characterized by ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

नुकसान और लाभ के समारोह दृष्टिकोण Preimplantation माउस भ्रूण के प्रारंभिक दिनों में सेल भाग्य अवधारक जांच

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

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चिकन श्रवण अंग में जीन स्थानांतरण द्वारा<em&gt; Ovo में</em&gt; माइक्रो-electroporation

Chicken embryos are ideal model systems for studying embryonic development as manipulations of gene function can be conducted with relative ease in ovo. ...

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

तरीके लसीका ग्रंथि और hemocytes में जांच<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लार्वा

Many parallels exist between the Drosophila and mammalian hematopoietic systems, even though Drosophila lack the lymphoid lineage that characterize ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

वयस्क Drosophila melanogaster दिमाग में मशरूम शरीर और Photoreceptor न्यूरॉन्स के विच्छेदन और Immunofluorescent धुंधला

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

RNAi और हीट शॉक-प्रेरित प्रतिलेखन कारक अभिव्यक्ति के आवेदन के लिए सी. एलिगेंस में न्यूरॉन्स के लिए रोगाणु कोशिकाओं reprogram

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Isolation of Embryonic Tissues and Formation of Quail-Chicken Chimeric Organs Using The Thymus Example

भ्रूण के ऊतकों का अलगाव और बटेर के गठन-चिकन Chimeric थाइमस उदाहरण का उपयोग अंगों

The capacity to isolate embryonic tissues was an essential step for establishing the quail-chicken chimera system, which in turn has provided undisputed ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Microinjection-आधारित प्रणाली के लिए Vivo में भ्रूण Cardiomyocytes के प्रत्यारोपण में एवियन भ्रूण

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

पूरे माउंट में सीटू संकरण में जेब्राफिश भ्रूण और ट्यूब गठन परख में iPSC-ECs में परख संवहनी विकास में एंडोग्लिन की भूमिका का अध्ययन करने के लिए

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...