Name: generation of monoclonal antibodies against natural products
Uploaded: 2019-04-06T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products at JoVE.com

इस काम के लिए चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या ८१५७३५७३, ८१४७३३३८, और ८१५०३३४४) और चीनी चिकित्सा के बीजिंग विश्वविद्यालय में शास्त्रीय पर्चे बुनियादी अनुसंधान टीम द्वारा समर्थित किया गया था ।

इस अध्ययन में प्रदर्शन पशु प्रक्रियाओं के सभी चीनी चिकित्सा के बीजिंग विश्वविद्यालय में एथिकल रिव्यू कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया है (अनुमोदन संख्या 2016BZYYL00109) ।
नोट: मादा BALB/c चूहों (8 सप्ताह पु...

<ol>
	<li>Kohler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity.">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256, 495-497 (1975).</li><li>De Smet, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbal+remedies.">Herbal remedies.</a> The New England journal of medicine. 347, 2046-2056 (2002).</li><li>Rowinsky, E. K., Donehower, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+pharmacology+of+paclitaxel+(Taxol).">The clinical pharmacology of paclitaxel (Taxol).</a> Seminars in oncology. 20, 16-25 (1993).</li><li>Yan, X., Zhao, Y., Zhang, Y., Qu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+Antibodies+and+Immunoassay+for+Medical+Plant-Derived+Natural+Products:+A+Review.">Monoclonal Antibodies and Immunoassay for Medical Plant-Derived Natural Products: A Review.</a> Molecules. 22, (2017).</li><li>Loungratana, P., Tanaka, H., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+monoclonal+antibody+against+ginkgolic+acids+in+Ginkgo+biloba+Linn.">Production of monoclonal antibody against ginkgolic acids in Ginkgo biloba Linn.</a> The American journal of Chinese medicine. 32, 33-48 (2004).</li><li>Fujii, S., Morinaga, O., Uto, T., Nomura, S., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+monoclonal+antibody-based+immunochemical+assay+for+liquiritin+and+its+application+to+the+quality+control+of+licorice+products.">Development of a monoclonal antibody-based immunochemical assay for liquiritin and its application to the quality control of licorice products.</a> Journal of agricultural and food chemistry. 62, 3377-3383 (2014).</li><li>Ishiyama, M., Shoyama, Y., Murakami, H., Shinohara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+monoclonal+antibodies+and+development+of+an+ELISA+for+solamargine.">Production of monoclonal antibodies and development of an ELISA for solamargine.</a> Cytotechnology. 18, 153-158 (1995).</li><li>Xuan, L., Tanaka, H., Xu, Y., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+monoclonal+antibody+against+crocin+and+its+characterization.">Preparation of monoclonal antibody against crocin and its characterization.</a> Cytotechnology. 29, 65-70 (1999).</li><li>Leu, J. G., Chen, B. X., Schiff, P. B., Erlanger, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polyclonal+and+monoclonal+anti-taxol+antibodies+and+measurement+of+taxol+in+serum.">Characterization of polyclonal and monoclonal anti-taxol antibodies and measurement of taxol in serum.</a> Cancer research. 53, 1388-1391 (1993).</li><li>Zhu, S., Shimokawa, S., Shoyama, Y., Tanaka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+analytical+ELISA-based+methodology+for+pharmacologically+active+saikosaponins.">A novel analytical ELISA-based methodology for pharmacologically active saikosaponins.</a> Fitoterapia. 77, 100-108 (2005).</li><li>Phrompittayarat, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+pseudojujubogenin+glycosides+from+Brahmi+based+on+immunoassay+using+a+monoclonal+antibody+against+bacopaside+I.">Determination of pseudojujubogenin glycosides from Brahmi based on immunoassay using a monoclonal antibody against bacopaside I.</a> Phytochemical analysis. 18, 411-418 (2007).</li><li>Limsuwanchote, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+a+monoclonal+antibody+against+notoginsenoside+R1,+a+distinctive+saponin+from+Panax+notoginseng,+and+its+application+to+indirect+competitive+ELISA.">Preparation of a monoclonal antibody against notoginsenoside R1, a distinctive saponin from Panax notoginseng, and its application to indirect competitive ELISA.</a> Planta medica. 80, 337-342 (2014).</li><li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+ginsenoside+Rb1+from+Kalopanax+pictus+by+eastern+blotting+using+anti-ginsenoside+Rb1+monoclonal+antibody.">Isolation of ginsenoside Rb1 from Kalopanax pictus by eastern blotting using anti-ginsenoside Rb1 monoclonal antibody.</a> Phytotherapy research. 19, 255-258 (2005).</li><li>Morinaga, O., Nakajima, S., Tanaka, H., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+monoclonal+antibodies+against+a+major+purgative+component,+sennoside+B,+their+characterization+and+use+in+ELISA.">Production of monoclonal antibodies against a major purgative component, sennoside B, their characterization and use in ELISA.</a> The Analyst. 126, 1372-1376 (2001).</li><li>Sakamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+soy+isoflavone+glycosides,+daidzin+and+genistin+by+monoclonal+antibody-based+highly+sensitive+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay.">Simultaneous determination of soy isoflavone glycosides, daidzin and genistin by monoclonal antibody-based highly sensitive indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay.</a> Food chemistry. 169, 127-133 (2015).</li><li>Shan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Fluorescence-Linked+Immunosorbent+Assay+for+Baicalin.">Development of a Fluorescence-Linked Immunosorbent Assay for Baicalin.</a> Journal of fluorescence. 25, 1371-1376 (2015).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+based+on+anti-puerarin+monoclonal+antibody+and+its+applications.">Development of an enzyme-linked immunosorbent assay based on anti-puerarin monoclonal antibody and its applications.</a> Journal of chromatography B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences. 953-954, 120-125 (2014).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+immunoaffinity+chromatography+for+glycyrrhizic+acid+using+an+anti-glycyrrhizic+acid+monoclonal+antibody.">Development of an enzyme-linked immunosorbent assay and immunoaffinity chromatography for glycyrrhizic acid using an anti-glycyrrhizic acid monoclonal antibody.</a> Journal of separation science. 38, 2363-2370 (2015).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Fluorescence-Linked+Immunosorbent+Assay+for+Paeoniflorin.">Development of Fluorescence-Linked Immunosorbent Assay for Paeoniflorin.</a> Journal of fluorescence. 25, 885-890 (2015).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+application+on+determination+of+ginsenoside+Re+in+human+saliva.">Establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay and application on determination of ginsenoside Re in human saliva.</a> Planta medica. 80, 1143-1150 (2014).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ELISA+for+detection+of+Rh1+and+Rg2+and+potential+method+of+immunoaffinity+chromatography+for+separation+of+epimers.">Development of ELISA for detection of Rh1 and Rg2 and potential method of immunoaffinity chromatography for separation of epimers.</a> Journal of chromatography B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences. 985, 197-205 (2015).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+immunoassay+and+rapid+immunoaffinity+chromatography+method+for+the+detection+and+selective+extraction+of+naringin+in+Citrus+aurantium.">Novel immunoassay and rapid immunoaffinity chromatography method for the detection and selective extraction of naringin in Citrus aurantium.</a> Journal of separation science. 39, 1389-1398 (2016).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lateral-flow+immunoassay+for+the+quantum+dot-based+detection+of+puerarin.">Rapid lateral-flow immunoassay for the quantum dot-based detection of puerarin.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 81, 358-362 (2016).</li></ol>

यहां, हम प्राकृतिक उत्पाद के खिलाफ mAbs के सफल उत्पादन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत-छोटे अणुओं व्युत्पंन । प्रक्रिया में आवश्यक कदम को रेखांकित किया गया है, और हम एक उदाहरण छोटे अणु के रूप में नार का उपयोग ...

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAbs), भी मोनो विशिष्ट एंटीबॉडी के रूप में जाना जाता है, एक एकल बी-लिम्फोसाइट क्लोन से उत्पादित कर रहे हैं और एक ही epitope1के लिए सभी बाँध कि मोनोवेलेंट एंटीबॉडी से बना रहे हैं. हाल के वर्षों में कई औषधीय पादप व्युत्पन्न प्राकृतिक उत्पादों का उपयोग विभिन्न रोगों के उपचार में किया गया है2. वास्तव में, कई छोटे आणविक यौगिकों मूल रूप से प्राकृतिक उत्पादों से व्युत्पंन अब पहली लाइन दवाओं के रूप में लागू कर रहे हैं, इस तरह के रूप में मलेरिया और paciltaxel के लिए आर्टेमिसिलिन (taxol) के लिए कैंसर2,3। प्राकृतिक उत्पादों के अध्ययन तेजी से प्रगति की है, मोटे तौर पर जबरदस्त विकास और उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफी (HPLC) और मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) सहित पारंपरिक विश्लेषण तकनीकों के अनुकूलन के कारण । हालांकि, अभी भी कुछ इन विधियों, जैसे उनके जटिल pretreatment प्रोटोकॉल और संबंधित लागत के साथ जुड़े सीमाओं के साथ समय का संबंध है, श्रम/
हाल ही में, mAb-आधारित एंजाइम-लिंक्ड इमयूनोसोमोंट असयों (एलिसस) को गुणात्मक और मात्रात्मक रूप से खाद्य और प्राकृतिक उत्पादों का विश्लेषण करने के लिए लागू किया गया है । वास्तव में, इस विधि दोनों जैविक नमूनों विश्लेषण और नैदानिक परीक्षण के लिए लागू किया गया है और सही, संवेदनशील होना दिखाया गया है, और अत्यधिक कुशल जबकि भी थकाऊ pretreatment अंय विश्लेषण5के साथ जुड़े कदम से परहेज, 6.
जटिल प्राकृतिक उत्पादों का अध्ययन करने के लिए एमएबी आधारित एलिसस का उपयोग करते समय, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की तैयारी मुख्य चरणों में से एक है । दुर्भाग्य से, छोटे bioactive पदार्थ के इन प्रकार में मौजूद घटकों के लिए विशेष mabs6,7,8,9,10,11,12 ,13,14,15 अक्सर प्रोटीन एंटीजन की तुलना में सीमित हैं । इस मुद्दे को दरकिनार करने के लिए, हम विशेष रूप से छोटे यौगिकों के खिलाफ mAbs उत्पंन करने के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित किया है । यहां प्रस्तुत प्रोटोकाल में कृत्रिम प्रतिजन संश्लेषण, माउस प्रतिरक्षण, कोशिका संलयन, अप्रत्यक्ष प्रतियोगी एलिसा, और मोनोक्लोनल हाइडोमा तैयार करना शामिल है ।
विशेष रूप से, हमारे अनुसंधान समूह के पारंपरिक चीनी दवाओं से छोटे bioactive यौगिकों के खिलाफ mAbs के गठन का अध्ययन किया गया है और वर्षों के लिए उनके अनुप्रयोगों के विकास । हमारे पर चल रहे अध्ययन में, हम बैकालीन16, puerarin17के खिलाफ mabs विकसित किया है, glycyrrhizic एसिड18, paeoniflorin19, जिनसेनोसाइड पुन:20, जिनसेनोसाइड Rh121, और कई अन्य छोटे अणुओं. इन mAbs पर आधारित हमारे ELISA प्रोटोकॉल का उपयोग किया गया है कई अध्ययनों में इन छोटे अणुओं के फार्माकोकोनेटिक्स का मूल्यांकन करने के साथ ही अन्य bioactive यौगिकों के साथ उनकी बातचीत. इसके अलावा, इन mAbs का उपयोग कर, हम भी epimers सहित संरचनात्मक analogues के पृथक्करण के लिए immunoaffinity क्रोमैटोग्राफी विधियों का विकास किया है । हाल ही में, हम तैयार एक पार्श्व प्रवाह immunoassay हमारे विरोधी का उपयोग कर-puerarin mAb है कि बाद में तेजी के लिए इस्तेमाल किया गया था, इस परिसर का पता लगाने पर साइट । हमारे परिणामों से संकेत मिलता है कि हमारे mAb आधारित assays जीव विज्ञान और प्राकृतिक उत्पाद व्युत्पन्न यौगिकों की गुणवत्ता का अध्ययन करने के लिए अपरिहार्य और सुविधाजनक उपकरण हैं, विशेष रूप से पारंपरिक चीनी दवाओं में इस्तेमाल किया उन ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:619px;" width="617">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">800 mesh (40 &#956;m nylon) filter&#160;</td>
			<td style="width:101px;">FALCON</td>
			<td style="width:123px;">352340</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">24 well culture plate</td>
			<td style="width:101px;">NUNC</td>
			<td style="width:123px;">119567</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">25 cm2 Flask</td>
			<td style="width:101px;">Labserv</td>
			<td style="width:123px;">310109016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">3,3&#8217;,5,5&#8217;-Tetramethylbenzidine(TMB)</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">860336 1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">75 cm2 Flask</td>
			<td style="width:101px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">96 well culture plate</td>
			<td style="width:101px;">NUNC</td>
			<td style="width:123px;">117246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">bovine serum albumin</td>
			<td style="width:101px;">AMRESCO</td>
			<td style="width:123px;">332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">cell strainer</td>
			<td style="width:101px;">FALCON</td>
			<td style="width:123px;">352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">centrifuge tube 15 mL</td>
			<td style="width:101px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">centrifuge tube 50 mL</td>
			<td style="width:101px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">cryotubes, 1 mL&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">V7384-1CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">cultivator</td>
			<td style="width:101px;">DRP-9082&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Samsung</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">dialysis membrane (10kDa)</td>
			<td style="width:101px;">Heng Hui</td>
			<td style="width:123px;">45-10000D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">dimethylsulfoxide</td>
			<td style="width:101px;">Sinopharm Chemical</td>
			<td style="width:123px;">DH105-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">electronic balance&#160;</td>
			<td style="width:101px;">BS124-S&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Sartorius</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">ELISA plates, 96 well</td>
			<td style="width:101px;">NUNC</td>
			<td style="width:123px;">655101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">ethanol, 96%</td>
			<td style="width:101px;">Sinopharm Chemical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:101px;">Gibco</td>
			<td style="width:123px;">16000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">fetal calf serum</td>
			<td style="width:101px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Freund&#180;s adjuvant, complete</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">SLBM2183V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Freund&#180;s adjuvant, incomplete</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">SLBL0210V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Gelatin</td>
			<td style="width:101px;">AMRESCO</td>
			<td style="width:123px;">9764-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Gradient cooler container</td>
			<td style="width:101px;">Nalgene</td>
			<td style="width:123px;">5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">HAT media supplement</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">H0262-10VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">HRP-conjugated goat-anti-mouse IgG antibody</td>
			<td style="width:101px;">applygen</td>
			<td style="width:123px;">C1308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">HT media supplement</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">H0137-10VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Inverted Microscope</td>
			<td style="width:101px;">IX73</td>
			<td style="width:123px;">Olympus&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">keyhole limpet hemocyanin</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">H8283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">MALDI-TOF-MS&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Axima-CFR&#160; plus&#160;&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Axima&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Microplate Reader</td>
			<td style="width:101px;">BioTex</td>
			<td style="width:123px;">ELX-800&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">mouse</td>
			<td style="width:101px;">Vital River&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BALB/c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">ovalbumin</td>
			<td style="width:101px;">Beijing BIODEE</td>
			<td style="width:123px;">5008-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">PEG</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">RNBC6325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Penicillin&#38;Streptomycin solution</td>
			<td style="width:101px;">Hyclone</td>
			<td style="width:123px;">SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Pipette 10 mL</td>
			<td style="width:101px;">COSTAR</td>
			<td style="width:123px;">4488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">Pipette 25 mL</td>
			<td style="width:101px;">FALCON</td>
			<td style="width:123px;">357525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:101px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">10-040-CVR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">skim milk</td>
			<td style="width:101px;">applygen</td>
			<td style="width:123px;">P1622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:223px;">sodium periodate</td>
			<td style="width:101px;">Sinopharm Chemical</td>
			<td style="width:123px;">BW-G0008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;width:223px;">Sulfo-GMBS</td>
			<td style="width:101px;">Perbio Science Germany</td>
			<td style="width:123px;">22324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:223px;">TipOne Tips 1,000 &#181;L</td>
			<td style="width:101px;">Starlab</td>
			<td style="width:123px;">S1111-2021</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of monoclonal antibodies against natural products

खाद्य पदार्थों और प्राकृतिक उत्पादों में मौजूद जैव सक्रिय घटकों का विश्लेषण कई क्षेत्रों में अध्ययन का एक लोकप्रिय क्षेत्र बन गया है, जिसमें पारंपरिक चीनी चिकित्सा और खाद्य सुरक्षा/ शास्त्रीय विश्लेषण तकनीकों के कई महंगे उपकरण और/ विशेष रूप से, एन्जाइम-लिंक्ड इमयूनोसोमोंट असेस (एलिसस) खाद्य पदार्थों और प्राकृतिक उत्पादों के विश्लेषण के लिए एक उभरती हुई पद्धति बन गए हैं । इस विधि को लक्षित घटकों के एंटीबॉडी-mediated पता लगाने पर आधारित है । हालांकि, के रूप में प्राकृतिक उत्पादों में bioactive घटकों के कई छोटे है (< 1000 डीए) और एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पैदा नहीं, उनके खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAbs) बनाने अक्सर मुश्किल है । इस प्रोटोकॉल में, हम लक्ष्य अणुओं के खिलाफ mAbs उत्पंन करने के लिए आवश्यक चरणों का एक विस्तृत विवरण प्रदान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से उन से जुड़े अप्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी (आईसी) ELISA कई नमूनों में यौगिक के तेजी से विश्लेषण के लिए बनाने की जरूरत है । प्रक्रिया कृत्रिम प्रतिजन के संश्लेषण का वर्णन (यानी, hapten वाहक संयुग्मी), प्रतिरक्षण, सेल फ्यूजन, मोनोक्लोनल संकर डोमा तैयारी, mab के लक्षण वर्णन, और elisa आधारित आवेदन mab. Hapten वाहक संयुग्मी सोडियम periodate विधि द्वारा संश्लेषित किया गया था और मालदी-TOF-MS द्वारा मूल्यांकन । प्रतिरक्षण के बाद, splenocytes एक पॉलीथीन ग्लाइकोल (खूंटी) आधारित विधि का उपयोग करते हुए उच्चतम एंटीबॉडी अनुमापांक और hypoxanthine-aminopterin-थायमिडीन (HAT)-संवेदनशील माउस मायलोमा सेल लाइन Sp2/0-Ag14 के साथ संगलित के साथ प्रतिरक्षित माउस से अलग किए गए थे । लक्ष्य प्रतिजन के लिए अभिक्रियाशील mAbs रिएक्टिव संकरण को विशिष्टता और क्रॉस-जेट के लिए icELISA द्वारा प्रदर्शित किया गया था । इसके अलावा, सीमित तनुकरण विधि मोनोक्लोनल हाइब्रिड तैयार करने के लिए लागू किया गया था । अंतिम mAbs आगे icELISA द्वारा विशेषता और फिर एक ELISA आधारित आवेदन में उदाहरण hapten के तेजी से और सुविधाजनक पता लगाने के लिए उपयोग किया गया (naringin (नार)) प्राकृतिक उत्पादों में ।

मोनोक्लोनल हाइडोमोस का उत्पादन
Hapten वाहक संयुग्मी के आणविक वजन की पुष्टि मालदी-TOF-MS विश्लेषण द्वारा की गई थी । BSA और नार दोनों के आणविक भार के रूप में जाना जाता है, BSA...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products at JoVE.com

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

यह लेख विभिंन immunoassays में उपयोग के लिए प्राकृतिक उत्पादों के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की तैयारी और मूल्यांकन के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है । इस प्रक्रिया में प्रतिरक्षण, सेल फ्यूजन, सकारात्मक क्लोन स्क्रीनिंग के लिए अप्रत्यक्ष प्रतियोगी एलिसा, और मोनोक्लोनल हाइपरडोमा तैयार करना शामिल है । मालदी-TOF-MS और ELISA विश्लेषण का उपयोग कर एंटीबॉडी लक्षण वर्णन के लिए विनिर्देशों भी प्रदान किए जाते हैं ।

प्राकृतिक उत्पादों के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उत्पादन

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के निष्क्रिय खिलाफ प्रशासन एच. capsulatum और फफूंद रोगज़नक़ों दूसरों

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

सभी इन्फ्लुएंजा के मात्रात्मक विश्लेषण सरल स्लॉट ब्लाट Assays में एक वायरल Hemagglutinins और यूनिवर्सल एंटीबॉडी का उपयोग कर Neuraminidases प्रकार

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

Intracellular खिलाफ एक परजीवी Antileishmanial स्क्रीनिंग के लिए बचाव और परिवर्तन परख<em&gt; लीशमैनिया डोनोवनी</em&gt; THP1 मानव तीव्र Monocytic लेकिमिया सेल लाइन में Amastigotes

Leishmaniasis is  one of the world's most neglected diseases, largely affecting the  poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million ...

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

राइबोफ्लेविन साथ प्लेटलेट उत्पाद और पराबैंगनी प्रकाश का उपचार: उच्च अनुमापांक जीवाणु संक्रमण के खिलाफ प्रभावशीलता

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

अमर छाँटे बी कोशिकाओं से पुनः संयोजक मानव आईजीजी मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का सृजन

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

मापने एंजाइम से जुड़ी Lectin परख द्वारा इन्फ्लुएंजा neuraminidase निषेध एंटीबॉडी titers

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

हाइब्रिडोमा प्रौद्योगिकी द्वारा Murine मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की पीढ़ी

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

बचने इंफ्लूएंजा वायरस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के भागने के वेरिएंट की पीढ़ी

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

दुर्लभ प्रतिजन-विशिष्ट बी कोशिकाओं से रक्त में परिचालित में भेदभावपूर्ण मानव मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की पीढ़ी

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies

प्रतिजनी रोग-विशिष्ट एंटीबॉडी के उत्पादन के लिए Liposomes

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for ...