Name: spinal cord lateral hemisection and asymmetric behavioral assessments in adult rats
Uploaded: 2020-03-24T13:00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spinal Cord Lateral Hemisection and Asymmetric Behavioral Assessments in Adult Rats at JoVE.com

ونشكر السيد جيفري ريتشيا - رايف على مساعدته التقنية الممتازة. وقد تم دعم هذا العمل جزئياً من قبل مؤسسة مدير المستشفى العام في منطقة جينان العسكرية في شينز PLA 2016ZD03 و 2014ZX01 (XJL و TBZ). يتم دعم الأبحاث في مختبر Xu من قبل NIH 1R01 100531، 1R01 NS103481، وجائزة مراجعة الجدارة I01 BX002356، I01 BX003705، I01 RX002687 من وزارة شؤون المحاربين القدامى في الولايات المتحدة.

تم تنفيذ جميع إجراءات المناولة الجراحية والحيوانية على النحو المعتمد بموجب دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (المجلس الوطني للبحوث) والمبادئ التوجيهية لكلية الطب المؤسسية في جامعة إنديانا لرعاية الحيوانات واستخدامها اللجنه.
1- النظر العام
<ol><li>استخدام أنثى الكبار سبراغ-داولي (SD) الفئران (وزنها 200 غرام, ن = 12) لهذه الدراسة. الحيوانات المنتعود على جميع بيئات الاختبار وجمع بيانات خط الأساس لجميع اختبارات السلوك قبل أسبوع واحد من العملية الجراحية.</li>
	<li>إجراء التقييمات السلوكية من قبل اثنين من المراقبين الذين أعمى للمجموعات التجريبية.</li>
</ol>2. إعداد الحيوان
<ol><li>تنظيف الجدول الجراحي مع الإيثانول 70٪. ضع وسادة تدفئة مُدفئة مسبقًا على الطاولة الجراحية. تغطية المنطقة الجراحية مع الستائر الجراحية المعقمة. ضع الشاش المعقم ومسحات القطن والأدوات الجراحية الأوتوكلاف على سطح الستائر الجراحية.</li>
	<li>قم بتشغيل معقم بالميكروب لتعقيم الأدوات الجراحية بين الجراحة. ملاحظة: يظهر مثال على الأدوات المستخدمة في هذه التجربة في الشكل 1.</li>
	<li>تُسخّس الجرذ انحز بحقن داخل البيريتانية (i.p.) من الكيتامين (87.7 ملغم/كغ) وxylazine (12.3 ملغم/كغ). تأكد من أن يتم الوصول إلى المستوى المناسب من التخدير عن طريق عدم الاستجابة لحافز قرصة إصبع القدم. تطبيق مرهم الطبيب البيطري على عيون الحيوان لمنع تجفيف القرنية أثناء الجراحة.</li>
	<li>إزالة الشعر المنقلب على الفقرات الصدرية عن طريق الحلاقة(الشكل 2A). إزالة الفراء المعقم مع فراغ مجهز ة مرشح HEPA.</li>
	<li>تنظيف المنطقة الجراحية مع ثلاثة الدعك بالتناوب من فرك القائم على اليود والإيثانول.</li>
	<li>تغطية الحيوان مع نقمة معقمة مع fenestration على موقع شق المقترحة(الشكل 2B). ملاحظة: في الفيديو، تم حذف الستائر الجراحية لأغراض العرض التوضيحي.</li>
</ol>3. قسم الهيميفي الشوكي
<ol><li>لمسضلع 13 th الذي هو أقل ضلع في الفئران والضلع العائمة التي لا تتصل القص. اتبع 13th الضلع dorsally لتحديد صلتها مع فقرة T13 ومن ثم عد ما يصل إلى تحديد الفقرة T10.</li>
	<li>استخدام شفرة مشرط (#15، الشكل 1)لتنفيذ شق الجلد خط الوسط 3- 4 سم على الظهر فوق العملياتالشوكية الفقرية 8-11.</li>
	<li>تحت المجهر الجراحي، تشريح بصراحة وفصل العضلات شبه الشوكية في وقت لاحق من العمليات الشوكية نحو جوانب فقرات T9 و T10 على كلا الجانبين باستخدام نفس شفرة مشرط. ملاحظة: هذا النهج سوف ندف لطيف الأنسجة وبصرف النظر دون التسبب في نزيف.</li>
	<li>استقرار العمود الفقري باستخدام حامل استقرار معدل. جعل شق على جانبي العظام العمود الفقري الجانبي. الشريحة الأسلحة الفولاذ المقاوم للصدأ تحت جوانب العملية العرضية المكشوفة وتشديد مسامير لتأمين الاستقرار.</li>
	<li>استخدام الساطور لسحب العضلات من المنطقة الجراحية(الشكل 2B)وفضح T8-11 لاميلا الفقرية والعمليات الشوكية(الشكل 2C). ملاحظة: هناك فجوة كبيرة بين العمليات الدوارة T8 و T9، والتي هي معالم لتحديد T9(الشكل 2C،عرض الظهر). من وجهة النظر الجانبية، وعملية شائكة من النقاط فقرة T9 caudally، وT10 نقاط عملية شائكة بالدوار، وT11 نقاط عملية شائكة rostrally؛ لذلك ، تشكل العمليات الشوكية 3 هرم ًا وتشكل عملية الدوران T10 الذروة(الشكل 2D، العرض الجانبي).</li>
	<li>إجراء استئصال اللامنق الظهري على فقرة T9 باستخدام رونغيور. قص بعيدا عملية مغزل T9 وإزالة جزء صغير من lamina اليسار إلى خط الوسط(الشكل 3A، خط متقطعة) ، والجزء الأيمن بأكمله من lamina laterally ممكن(الشكل 3A، خط متقطع). لاستئصال اللامينكوت، أدخل رونغيور بلطف تحت لافينا وقص قطعة صغيرة من العظام في وقت واحد حتى يتم الانتهاء من المنطقة المطلوبة من استئصال اللامينكوت(الشكل 3B والشكل 3C).</li>
	<li>تحت المجهر الجراحي، حدد خط الوسط الظهري للنخاع الشوكي(الشكل 3C). أدخل إبرة (30 G) رأسيًا عبر خط الوسط في الحبل الشوكي مع الجانب المشوش الذي يواجه الجانب الأيمن(الشكل 4A). ملاحظة: يجب أن تخترق الإبرة الحبل الشوكي بأكمله للوصول إلى الجدار البطني للقناة الفقرية.</li>
	<li>وقف أي نزيف مع قطعة صغيرة من الجيلاوي المعقم.</li>
	<li>أدخل طرفًا واحدًا من مقص القزحية / المقص الجراحي المجهري من خلال مسار إبرة الخط الأوسط ، والطرف الآخر على طول السطح الجانبي للحبل الأيمن ، ثم قم بقص كامل على الحبل الأيمن من hemi مع المقص(الشكل 4B). ملاحظة: استخدم مقصًا دقيقًا حادًا لقطع الحبل الشوكي لتقليل آفة الضغط إلى الحبل الشوكي أثناء القطع.</li>
	<li>استخدام الحافة الجانبية لنفس الإبرة كسكين لقطع من خلال فجوة الآفة لتأكيد تشريح الهيمي الأيمن الكامل. التحقق من اكتمال قسم الهيمي الأيمن عن طريق تصور الجزء السفلي من القناة الفقرية بالمجهر الجراحي(الشكل 4C، عرض مقطعي عرضي؛ الشكل 4D، عرض جانبي ؛ الشكل 4E، عرض دورسال).</li>
	<li>وضع قطعة صغيرة من إسفنج الجيلاتين على موقع الآفة(الشكل 4F). استخدام خليط الاسمنت وبناء جسر ضيق على الاسفنج والعمليات الشوكية من T8 و T10(الشكل 4G، H). ملاحظة: الغرض من استخدام جسر أسمنتي هو مزدوج: 1) يفصل الندبة التي تم تطويرها في موقع الإصابة من بقية الأنسجة، و 2) أنه يجعل من الأسهل تشريح الجزء الحبل الشوكي بعد التضحية بالحيوان.</li>
	<li>خياطة طبقات العضلات والجلد بشكل منفصل مع خيط الحرير 4-0.</li>
	<li>حقن 0.9٪ محلول معقم تحت الجلد للحفاظ على الترطيب. حقن عامل مسكن Buprenorphine (0.05-2.0mg/kg S) 8-12 ساعة / يوم تحت الجلد لمدة 2 أيام. اضغط على المثانة البولية 2-3 مرات يوميا للأسبوع الأول و 1-2 مرات في الأسابيع التالية حتى عودة المثانة التلقائية إلغاء.</li>
</ol>4. رعاية الحيوانات بعد الجراحة
<ol><li>أعد الحيوان إلى قفصه المنزلي الذي يضم هُنا. توفير تشاو القوارض الرطبة أو هلام على الجزء السفلي من القفص للمساعدة في قدرة الحيوان على تناول الطعام / الهيدرات. ضع وسادة تدفئة أسفل القفص أثناء التعافي بعد الجراحة. تأكد من أن لوحة التدفئة تغطي فقط نصف قاع القفص لتجنب ارتفاع درجة الحرارة.</li>
	<li>حقن 0.9٪ محلول معقم تحت الجلد للحفاظ على الترطيب. حقن عامل مسكن Buprenorphine (0.05-2.0mg/kg S) 8-12 ساعة / يوم تحت الجلد لمدة 2 أيام. اضغط على المثانة البولية 2-3 مرات يوميا للأسبوع الأول و 1-2 مرات في الأسابيع التالية حتى عودة المثانة التلقائية إلغاء.</li>
</ol>5. تقييم خطوة القسم الهيمي الأحادي الجانب (UHS)
ملاحظة: اختبار خطوة القسم الهيمي الأحادي الجانب (UHS) هو مقياس مباشر لقدرة الحيوانات SCI على الاستفادة من طرفها الخلفي ipsilesional في الحقل المفتوح. كما ذكر في 1.1 ، كانت الحيوانات تتكيف مع بيئة حقل مفتوح (قطرها 42 بوصة) 15 مرتين في اليوم لمدة 7 أيام. اثنين من المراقبين أعمى لمجموعات الحيوانات أداء الاختبار. درجة UHS في كل من خط الأساس (7 أيام قبل T9 HX) وسيتم جمع النقاط الزمنية بعد الإصابة. ويرد وصف لخطوات التقييم على النحو المتبع.
<ol><li>وضع الحيوان في بيئة حقل مفتوح وفحص حركة الحيوان لمدة 4 دقيقة. ملاحظة: أثناء الاختبار، يمكن إعطاء التشجيع للالحيوان للتحرك بنشاط.</li>
	<li>مع النموذج الوارد في الجدول 1، تعيين قيمة 1 لنعم و 0 لكل فئة سلوك ومن ثم جمع القيمة الإجمالية لإعطاء درجة UHS النهائي من 0 إلى 8. ملاحظة: وفقا للجدول 1 0: لا توجد حركة ملحوظة من الطرف الخلفي؛ 1 – 4: حركات معزولة من 3 مفاصل في الطرف الخلفي (الورك والركبة والكاحل)؛ 5: تجتاح مع عدم وجود دعم الوزن؛ 6: وضع مع عدم وجود دعم الوزن؛ 7: وضع مع دعم الوزن؛ و 8: يخطو مع دعم الوزن.</li>
	<li>جمع درجات UHS في كل من خط الأساس (7 أيام قبل T9 HX) ونقاط الوقت بعد الإصابة. ملاحظة: سيتم تقييم الدرجات في نقاط زمنية مختلفة بعد T9 HX.</li>
</ol>6- الاقتران
<ol><li>تحليل CPL (المشية اقتران) مع شريط فيديو تسجيل الحيوان المشي على جهاز مدرج ضيق أو حقل مفتوح بسيط.</li>
	<li>في قسم الاقتران من الجدول 1، تعيين درجة 0 ل "لا" ، 1 ل "غير النظامية / الخرقاء" ، و 2 ل "عادي" لكل فئة CPL. ملاحظة: اختبار الاقتران (CPL) هو تقييم تنسيق الحركات المتناوبة للأطراف ، بما في ذلك CPL متجانسة (الجبهة الأمامية / الخلفية الخلفية الأطراف ، الشكل 5A)، CPL قطري (الجبهة اليسرى الخلفية أو الأمامية الطرفالأيمن الخلفي ، الشكل 5B)، وCPL المتجانسة (الأطراف الأمامية الخلفية على نفس الجانب ، الشكل 5C). بعد T9 HX ، والعجز في الجانب الخلفي على الجانب ipsilesional تصبح مرئية مما أدى إلى تناوب CPL متجانسة(الشكل 5D)، CPL قطري(الشكل 5E)، وCPL homolateral(الشكل 5F).</li>
</ol>7. الاتصال وضع
ملاحظة: يتم استخدام اختبار وضع الاتصال الخلفي لتقييم التكامل الحركي لاستجابات الأطراف الخلفية للمحفزات الثاقبة 16. تعتبر الببروبريولاب سليمة إذا كان الحيوان يصعد بطرفه الخلفي على السطح بعد سحب الطرف الخلفي أسفل السطح.
<ol><li>عقد الحيوان في وضع عمودي بحيث تتوفر كل من الأطراف الخلفية للاستجابة وضع.</li>
	<li>فرشاة السطح الظهري من المؤخرة إلى الأمام طفيفة نحو حافة سطح (على سبيل المثال، الحيوان مقاعد البدلاء العمل).</li>
	<li>مراقبة وضع القدم على السطح وتعيين نقطة الاتصال وضع الخلفية. 0: لا وضع؛ 1: وضع. ملاحظة: يتلقى السطح الظهري التحفيز وستمتد القدم لاحقًا وتوضع القدم على السطح إذا كان المنعكس سليمًا. نموذج التقييم موجود أيضاً في الجدول 1.</li>
</ol>8. شبكة المشي
ملاحظة: يقيّم اختبار المشي الشبكي حالات العجز التلقائي في المحركات وحركات الأطراف التي تنطوي عليها عمليات الدوس الدقيقة والتنسيق ووضع الكفوبدقة.
<ol><li>ضع فأرًا على شبكة شبكة سلكية مغطاة بالبلاستيك مرتفعة (36 × 38 سم مع فتحات 3 سم2) واسمح لها بالمشي بحرية عبر المنصة لمدة 30 خطوة.</li>
	<li>عد العدد الإجمالي للخطوات وعدد أخطاء القدم لكل طرف. يتم إجراء تسجيلات الفيديو لتأكيد العد. ملاحظة: اثنين من المراقبين التعمية تقييم وضع مخلب من الأطراف الأمامية والخلفية كما الحيوانات المشي.</li>
	<li>تعيين عشرات المشي الشبكة لكل طرف خلفي على النحو التالي – 0: أخطاء أكبر من 15; 1: أخطاء أقل من أو يساوي 15؛ 2: أخطاء أقل من أو يساوي 10؛ و 3: أخطاء أقل من أو يساوي 5. ملاحظة: يستند تقييم التسجيل إلى الجدول 1. وتستخدم درجات القطع كمقاييس لشدة العجز في المحركات.</li>
</ol>9. التبرّر ومعالجة الأنسجة
<ol><li>بعد التخدير المناسب مماثلة في الخطوة 2.3، perfuse الحيوانات بعناية اتباع بروتوكول التروية عبر التروية 17.</li>
	<li>تشريح وجمع عينات الحبل الشوكي وبعد إصلاحها في 4٪ PFA بين عشية وضحاها.</li>
	<li>ويمكن بعد ذلك نقل العينات إلى محلول السكروز بنسبة 30٪.</li>
	<li>قطع الحبل الشوكي في المقاطع العرضية ووصمة عار المقاطع المختارة مع علامة محور عصبي SMI-31 وعلامة الفلكية البروتين الحمضي الفيبريلي (GFAP) وفقا للإجراءات القياسية18.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Center, N. S. C. I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+Cord+Injury+Facts+and+Figures+at+a+Glance.">Spinal Cord Injury Facts and Figures at a Glance.</a> SCI Data Sheet. , (2018).</li><li>Zhang, X. Y., Yang, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scissors+stab+wound+to+the+cervical+spinal+cord+at+the+craniocervical+junction.">Scissors stab wound to the cervical spinal cord at the craniocervical junction.</a> Spine Journal. 16 (6), e403-e406 (2016).</li><li>Enicker, B., Gonya, S., Hardcastle, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+stab+injury+with+retained+knife+blades:+51+Consecutive+patients+managed+at+a+regional+referral+unit.">Spinal stab injury with retained knife blades: 51 Consecutive patients managed at a regional referral unit.</a> Injury. 46 (9), 1726-1733 (2015).</li><li>Witiw, C. D., Shamji, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown-Sequard+syndrome+from+herniation+of+a+thoracic+disc.">Brown-Sequard syndrome from herniation of a thoracic disc.</a> Canadian Medical Association Journal. 186 (18), 1395 (2014).</li><li>Webb, A. A., Muir, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+locomotor+adjustments+of+rats+with+cervical+or+thoracic+spinal+cord+hemisections.">Compensatory locomotor adjustments of rats with cervical or thoracic spinal cord hemisections.</a> Journal of Neurotrauma. 19 (2), 239-256 (2002).</li><li>Filli, L., Zorner, B., Weinmann, O., Schwab, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+deficits+and+recovery+in+rats+with+unilateral+spinal+cord+hemisection+mimic+the+Brown-Sequard+syndrome.">Motor deficits and recovery in rats with unilateral spinal cord hemisection mimic the Brown-Sequard syndrome.</a> Brain. 134 (Pt 8), 2261-2273 (2011).</li><li>Friedli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pronounced+species+divergence+in+corticospinal+tract+reorganization+and+functional+recovery+after+lateralized+spinal+cord+injury+favors+primates.">Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates.</a> Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).</li><li>Xu, X. M., Zhang, S. X., Li, H., Aebischer, P., Bunge, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regrowth+of+axons+into+the+distal+spinal+cord+through+a+Schwann-cell-seeded+mini-channel+implanted+into+hemisected+adult+rat+spinal+cord.">Regrowth of axons into the distal spinal cord through a Schwann-cell-seeded mini-channel implanted into hemisected adult rat spinal cord.</a> European Journal of Neuroscience. 11, 1723-1740 (1999).</li><li>Gulino, R., Dimartino, M., Casabona, A., Lombardo, S. A., Perciavalle, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+modulates+the+spontaneous+recovery+of+locomotion+after+spinal+cord+hemisection.">Synaptic plasticity modulates the spontaneous recovery of locomotion after spinal cord hemisection.</a> Neuroscience Research. 57 (1), 148-156 (2007).</li><li>Xu, X. M., Martin, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response+of+rubrospinal+neurons+to+axotomy+in+the+adult+opossum,+Didelphis+virginiana.">The response of rubrospinal neurons to axotomy in the adult opossum, Didelphis virginiana.</a> Experimental Neurology. , 46-54 (1990).</li><li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+and+Glial+Responses+to+a+Mid-Thoracic+Spinal+Cord+Hemisection+in+the+Macaca+fascicularis+Monkey.">Axonal and Glial Responses to a Mid-Thoracic Spinal Cord Hemisection in the Macaca fascicularis Monkey.</a> Journal of Neurotrauma. , (2013).</li><li>Shi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+response+and+myelin+clearance+in+areas+of+wallerian+degeneration+after+spinal+cord+hemisection+in+the+monkey+Macaca+fascicularis.">Glial response and myelin clearance in areas of wallerian degeneration after spinal cord hemisection in the monkey Macaca fascicularis.</a> Journal of Neurotrauma. 26 (11), 2083-2096 (2009).</li><li>Nout, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+functional+assessment+after+C7+spinal+cord+hemisection+in+the+rhesus+monkey.">Methods for functional assessment after C7 spinal cord hemisection in the rhesus monkey.</a> Neurorehabililation and Neural Repair. 26 (6), 556-569 (2012).</li><li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+reliable+locomotor+rating+scale+for+open+field+testing+in+rats.">A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats.</a> Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).</li><li>Liu, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosolic+phospholipase+A2+protein+as+a+novel+therapeutic+target+for+spinal+cord+injury.">Cytosolic phospholipase A2 protein as a novel therapeutic target for spinal cord injury.</a> Annals of Neurology. 75 (5), 644-658 (2014).</li><li>Kunkel-Bagden, E., Dai, H. N., Bregman, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+function+after+spinal+cord+hemisection+in+newborn+and+adult+rats:+differential+effects+on+reflex+and+locomotor+function.">Recovery of function after spinal cord hemisection in newborn and adult rats: differential effects on reflex and locomotor function.</a> Experimental Neurology. 116, 40-51 (1992).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiment. (65), (2012).</li><li>Deng, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+growth-promoting+pathway+formed+by+GDNF-overexpressing+Schwann+cells+promotes+propriospinal+axonal+regeneration,+synapse+formation,+and+partial+recovery+of+function+after+spinal+cord+injury.">A novel growth-promoting pathway formed by GDNF-overexpressing Schwann cells promotes propriospinal axonal regeneration, synapse formation, and partial recovery of function after spinal cord injury.</a> Journal of Neuroscience. 33 (13), 5655-5667 (2013).</li><li>Liu, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methotrexate+combined+with+methylprednisolone+for+the+recovery+of+motor+function+and+differential+gene+expression+in+rats+with+spinal+cord+injury.">Methotrexate combined with methylprednisolone for the recovery of motor function and differential gene expression in rats with spinal cord injury.</a> Neural Regeneration Research. 12 (9), 1507-1518 (2017).</li><li>Schnell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+delivery+of+Nogo-A+antibody,+neurotrophin-3+and+the+NMDA-NR2d+subunit+establishes+a+functional+'detour'+in+the+hemisected+spinal+cord.">Combined delivery of Nogo-A antibody, neurotrophin-3 and the NMDA-NR2d subunit establishes a functional 'detour' in the hemisected spinal cord.</a> European Journal of Neurosciences. 34 (8), 1256-1267 (2011).</li><li>Arvanian, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+spinal+hemisection+in+rats+induces+a+progressive+decline+in+transmission+in+uninjured+fibers+to+motoneurons.">Chronic spinal hemisection in rats induces a progressive decline in transmission in uninjured fibers to motoneurons.</a> Experimental Neurology. 216 (2), 471-480 (2009).</li><li>Hunanyan, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+of+action+potentials+and+the+localization+of+Nav1.6+sodium+channels+in+spared+axons+after+hemisection+injury+of+the+spinal+cord+in+adult+rats.">Alterations of action potentials and the localization of Nav1.6 sodium channels in spared axons after hemisection injury of the spinal cord in adult rats.</a> Journal of Neurophysiology. 105 (3), 1033-1044 (2011).</li><li>Garcia-Alias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondroitinase+ABC+combined+with+neurotrophin+NT-3+secretion+and+NR2D+expression+promotes+axonal+plasticity+and+functional+recovery+in+rats+with+lateral+hemisection+of+the+spinal+cord.">Chondroitinase ABC combined with neurotrophin NT-3 secretion and NR2D expression promotes axonal plasticity and functional recovery in rats with lateral hemisection of the spinal cord.</a> Journal of Neuroscience. 31 (49), 17788-17799 (2011).</li><li>Petrosyan, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+inhibitory+molecule+NG2+improves+synaptic+transmission,+retrograde+transport,+and+locomotor+function+after+spinal+cord+injury+in+adult+rats.">Neutralization of inhibitory molecule NG2 improves synaptic transmission, retrograde transport, and locomotor function after spinal cord injury in adult rats.</a> Journal of Neuroscience. 33 (9), 4032-4043 (2013).</li><li>Yu, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+commonly+used+retrograde+tracers+in+rat+spinal+motor+neurons.">Comparison of commonly used retrograde tracers in rat spinal motor neurons.</a> Neural Regeneration Research. 10 (10), 1700-1705 (2015).</li><li>Lu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-distance+axonal+growth+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+after+spinal+cord+injury.">Long-distance axonal growth from human induced pluripotent stem cells after spinal cord injury.</a> Neuron. 83 (4), 789-796 (2014).</li><li>Teng, Y. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+mediated+by+a+unique+polymer+scaffold+seeded+with+neural+stem+cells.">Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells.</a> PNAS. 99, 3024-3029 (2002).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treadmill+training+induced+lumbar+motoneuron+dendritic+plasticity+and+behavior+recovery+in+adult+rats+after+a+thoracic+contusive+spinal+cord+injury.">Treadmill training induced lumbar motoneuron dendritic plasticity and behavior recovery in adult rats after a thoracic contusive spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 271, 368-378 (2015).</li><li>Courtine, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+locomotion+and+foot+grasping+following+a+unilateral+thoracic+corticospinal+tract+lesion+in+monkeys+(Macaca+mulatta).">Performance of locomotion and foot grasping following a unilateral thoracic corticospinal tract lesion in monkeys (Macaca mulatta).</a> Brain. 128 (Pt 10), 2338-2358 (2005).</li><li>Ichiyama, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Step+training+reinforces+specific+spinal+locomotor+circuitry+in+adult+spinal+rats.">Step training reinforces specific spinal locomotor circuitry in adult spinal rats.</a> Journal of Neuroscience. 28 (29), 7370-7375 (2008).</li><li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+histological+and+locomotor+outcomes+after+spinal+cord+contusion+using+the+NYU+weight-drop+device+versus+transection.">Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection.</a> Experimental Neurology. 139, 244-256 (1996).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+gait+impairment+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats+using+an+automated+computer-aided+control+system.">Assessing gait impairment after permanent middle cerebral artery occlusion in rats using an automated computer-aided control system.</a> Behavioural Brain Research. 250, 174-191 (2013).</li><li>Bonito-Oliva, A., Masini, D., Fisone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+non-motor+symptoms+in+Parkinson's+disease:+focus+on+pharmacological+interventions+targeting+affective+dysfunctions.">A mouse model of non-motor symptoms in Parkinson's disease: focus on pharmacological interventions targeting affective dysfunctions.</a> Frontiors in Behavioral Neuroscience. 8, 290 (2014).</li></ol>

ليس لدينا ما نكشف عنه

في هذه الدراسة، نبلغ عن إجراءات خطوة بخطوة لإنتاج بسيطة ومتسقة وقابلة للاستنساخ T9 العمود الفقري HX في الفئران الكبار التي تحاكي متلازمة براون-سيكوند في البشر. كما نقدم نظام نقاط السلوك المشترك لقسم الهيمي (CBS-HX) وهو حساس لتقييم ضعف عصبي غير متماثل وتطور الانتعاش ، يقاس بمزيج من يخطو من جانب واحد في الطرف الخلفي (UHS) ، اقتران (CPL) ، وضع الاتصال ، والشبكة المشي. على الرغم من أننا نظهر الإصابة على مستوى T9، يمكن تطبيق هذا الإجراء على مناطق أخرى من الحبل الشوكي بما في ذلك الحبل العنقي والقطني بطريقة بسيطة وغير متطلبة. نأمل أن يكون هذا النموذج ، إلى جانب التقييمات السلوكية أحادية الجانب ، مفيدًا لدراسة آليات الإصابة والفعالية العلاجية لمثل هذه الأنواع من SCI.
نظرًا لأن نموذج HX الجانبي لا يُشأ سوى النصف ipsilateral من الحبل ، يتم الحفاظ على الجانب المقابل للسلك إلى حد كبير ويمكن استخدامه كتحكم داخلي. يتم إسقاط العديد من المسارات التنازلية والتصاعدية من جانب واحد وينتج عن تشريح الهيمي الجانبي في كثير من الظروف ضرر ًا للمسار المحوري في جانب واحد ويحافظ على نفس المسار على الجانب الآخر ، مما يسمح بمقارنة إعادة التنظيم و عواقب وظيفية لهذه المسالك في نفس الحيوان. بالإضافة إلى ذلك ، قد يسمح إنتاج آفة أكثر محلية باستهداف مسارات محددة. على سبيل المثال، قد تؤثر الآفة البطنية والفيترية على المسارات الشبكية النخاعية والدهليزية. قد تؤثر الآفة الظهرية أو الظهرية على مسارات الكورتيكوستيالشوكي والرباالشوكي. ويمكن أيضا أن تستخدم في قسم الهيمي أو نموذج الإصابة الجزئية لدراسة التشريح وظيفة مسارات أخرى, مثل البروبيونفيل, noradrenergic أو مسارات السيروتونين. وهكذا، يمكن استخدام نموذج قسم الهيمي بشكل فريد لدراسة التعويض عن طريق afferents الحسية، من خلال مسارات تنازلية، والدوائر الشوكية الجوهرية. هذا النموذج هو أيضا مناسبة للتحقيق آليات الانتعاش الحركي بعد HX.
يؤدي HX الجانبي إلى عاهات سلوكية واضحة ، والتي يمكن تقييمها تحت المهام الحركية (على سبيل المثال ، Treadscan أو Treadmill) نموذج لتحليل المشي الآلي 19. أيضا ، يمكن قياس الموصلية للمساحات المحورية على الجانب المقابل للآفة باستخدام التسجيلات الكهروفيزيولوجية ، ويوفر هذا التقييم إمكانية إنشاء إعادة تنظيم وظيفية بعد علاجات مختلفة. وعلاوة على ذلك، الحقن من جانب واحد من التتبع التشريحي في الخلايا العصبية من مسار معين تسمح التصور من ألياف عبور خط الوسط المسمى anterogradely واتصالها مع الخلايا العصبية المسمى بأثر رجعي20،21،22،23،24،25.
على الرغم من أن جراحة HX النموذجية في العمود الفقري تستغرق أقل من 20 دقيقة للانتهاء، إلا أنها تتطلب بعض الممارسة لتحقيق HX دقيق ومتسق. أولاً، من المهم أن يكون مستوى HX الشوكي متسقًا من الحيوان إلى الحيوان. لذلك ، من الأهمية بمكان تحديد الجزء الفقري المناسب لاستئصال اللامينكوت. ثانياً، تأكد من اكتمال HX. لجعل HX كاملة، يمكن للمرء استخدام إبرة 30 قياس إدراجها عموديا من خلال خط الوسط لتوجيه القطع باستخدام microscissors. كما يتجنب إدخال الإبرة تلف الأوعية الشوكية الخلفية أو الحبل النخاعي بسبب التشوه. الوظيفة الثانية للإبرة 30 قياس هو أنه يمكن أن تكون بمثابة سكين لتتبع قطع للتأكد من أنه لا يوجد أي غموض في الآفة. ثالثا، وضع الجيلاتين على موقع الآفة يمكن أن تقلل من تسرب السائل النخاعي، ووضع الأسمنت على رأس الجيلاتين وسد الصفيحة الفقرية يمكن أن تعزز استقرار الفقرات الشوكية في موقع الآفة وتسهيل التئام الجروح. لتجنب تداخل الإشارة مع تطبيق التسجيلات الكهروفسية ، يجب خياطة العضلات واللفافة والجلد في طبقات مع خيط حرير 4-0. وأخيرا، ينبغي بذل كل جهد ممكن للحد من الأضرار التي لحقت الحبل الشوكي كونتربين. يجب إنشاء التحقق النسيجي لتأكيد قسم الهيميالجانبي الكامل على جانب واحد والحفاظ على النصف الآخر من الحبل على الجانب الآخر (كما هو موضح في الشكل 6E).
لتحسين الحركة بعد SCI ، استخدمت الدراسات السابقة مجموعة واسعة من الاستراتيجيات بما في ذلك زرع الخلايا ، وتجديد محور عصبي 8،18،26 ،27،27وإعادة التأهيل القائم على النشاط 28،29،30. وفي الوقت نفسه، تم إنشاء العديد من الاختبارات السلوكية للتقييم الوظيفي وفحص أفضل العلاجات بعد SCI. تم تصميم مقياس تصنيف اللوكورموتور BBB لتقييم locomotor للإصابات المتناظرة في العمود الفقري مثل كدمة خط الوسط أو إصابات استئصال الغيبوبة التي تؤثر على الأطراف الخلفية الثنائية 14،31. يتم تسجيل بعض معلمات BBB، مثل التنسيق وإزالة الأرجل، من خلال مراقبة كلا الطرفين الخلفيين. إذا كان أحد الأطراف الخلفية سليمًا ويظهر الآخر العجز كما رأينا في الإصابات غير المتماثلة ، فإن الطرف الخلفي السليم سيربك درجة الطرف الخلفي المصاب. وبما أن تسجيل BBB لا يستوعب درجة واحدة من الطرف الخلفي من الأخرى بعد الإصابة الأحادية الجانب ، فإنه ليس مثاليًا لتقييم إصابات الحبل الشوكي الأحادية الجانب. ومع ذلك ، إذا تم تقييم الحركة المشتركة ودعم الوزن على كل جانب بشكل منفصل ولا يتم حسابها كجزء من BBB ، فإن الطرف الخلفي السليم (على غرار عنصر التحكم الصوري) لن يحرف درجة الطرف الخلفي المصاب. وعلاوة على ذلك، فإن الجانب السليم لا التحيز النتيجة الإجمالية للالحيوان، لأن الجانب الخلفي سليمة لا يوجد لديه عجز كبير في حركة مشتركة، ودعم الوزن، أو يخطو.
تم تصميم درجة السلوك المجمعة لقسم الهيمي أن تكون تقييمًا حساسًا وسهل الأداء للانتعاش السلوكي في نموذج الفئران للتشريح الهيمي الجانبي. ويمكن استخدامه لتقييم السلوكيات في كل من المراحل المبكرة والمتأخرة من الانتعاش. المرحلة المبكرة في غضون 7-10 أيام بعد الإصابة. في الأيام 3-5 الأولى بعد HX، زاد نشاط الأطراف الخلفية ipsilateral باطراد وينبغي تقييمها بشكل أكثر تواترا لتسجيل عمليات استرداد حركة الأطراف الخلفية العفوية أو بوساطة العلاج. قبل 5-7 أيام بعد HX، بدأت الفئران لجعل الحركات الخلفية كاسحة دون دعم الوزن. بحلول 7-10 أيام، بدأت الفئران عادة في الوقوف والخطوة. وخلال هذه المرحلة، ينبغي إيلاء الاهتمام لنمط الانطلاق. في المرحلة المتأخرة (14-28 يومًا) ، كان نشاط الأطراف الخلفية ipsilateral مستقرًا وقريبًا من الوضع الطبيعي.
وينبغي أيضا إيلاء اهتمام وثيق لقدرة الاقتران. يمكن إجراء اختبار CPL (اقتران المشية) إما مع فيديو (على سبيل المثال، Treadscan /Catwalk) أو فيديو تصوير أثناء اختبار مفتوح المجال. الخيار الثاني يوفر المرونة إذا لم يكن لدى الباحثين إمكانية الوصول إلى نظام تحليل المشي. بالنسبة لجلسات تسجيل الفيديو، يلزم إجراء هبوطين متتاليين على الأقل لكل قدم لهذا الاختبار. للتحليل، هناك ثلاثة معلمات اقتران: اقتران متجانس ومتجانس وقطري (الخطوة 6.2). كل اقتران ينطوي على القدم المرجعية والقدم المعطى. اتخاذ اقتران متجانسة (الجبهة اليسرى الأمامية اليمين، أو اليمين الأيسر الخلفي الخلفي) على سبيل المثال، هو أول وقت هبوط من قدم معينة مقسومة على واحد وقت خطوة كاملة من القدم المرجعية. منذ القدم اليسرى واليمنى ينبغي أن يكون خارج المرحلة، وينبغي أن يكون اقتران الكمال 0.5. هذه هي الحالة نفسها في اقتران التماثلي (يمين اليسار الأيسر الخلفي، أو اليمين الأيمن الخلفي). ومع ذلك ، للاقتران القطري (يمين اليسار الخلفي ، أو اليمين الأمامي الأيسر الخلفي) ، يجب أن يكون الاقتران المثالي 0 أو 1 لأن القدمين يجب أن تكون في المرحلة. في الخطوة 6.4، نقوم بتعيين درجة لكل CPL من 0 إلى 2. في التفاصيل، يجب أن تمثل درجة 0 القدم المعطاة غير قادر على التحرك لإنهاء هبوط، وبالتالي لا CPL. درجة 1 يمثل أي CPL غير النظامية أو الخرقاء منذ القدم المعطاة ينتهي هبوط ولكن ليس في اقتران الكمال؛ درجة 2 يعني اقتران مثالي من 0.5. يتم وصف مفاهيم المعلمة الثلاثة في المنشورات السابقة32،33. يمكن الجمع بين CPL مع تقييمات وضع الاتصال والمشي عبر الشبكة. المكونات الفردية لنظام تسجيل السلوك مجتمعة ستكون أكثر أو أقل فعالية في نماذج الفئران المختلفة من SCI. بالنسبة لـ CPL ، أصبح العجز واضحًا في معدل التناوب واكتمال التسلسل. يمكن الكشف بوضوح عن العجز في وضع البوائد السفلي ة بعد HX من جانب واحد. في دراستنا، أظهرت جميع الفئران العجز وضع inlimb inlimb inlimb في حين أن وضع الجانب الخلفي كونترال يظهر أي عجز. يجب النظر في اختبار المشي الشبكة عند وضع الاتصال، الذي ينطوي على القناة القشرية، ويبدأ في التعافي. لاستبعاد أي مشاكل التعب المحتملة، يمكن أن يكون تسلسل الاختبارات السلوكية عشوائية في كل اختبار.
في الختام، ونحن تقرير الإجراءات خطوة بخطوة لخلق نموذج استنساخفي الفئران الحي من HX العمود الفقري T9 الذي يحاكي متلازمة براون-سيكوند في البشر. يوفر نظام تسجيل السلوك المشترك لقسم الهيمي القسم مقياسًا أكثر تمييزًا للنتائج السلوكية الفردية الخلفية لتقييم آليات الإصابات والعلاجات بعد SCI أحادي ة الجانب. على الرغم من أننا نقدم فقط وصفا بصريا للعمليات الجراحية والتقييمات السلوكية لHX الصدر، ويمكن تطبيق الأساليب الموصوفة هنا إلى SCIs أخرى غير مكتملة على مستويات مختلفة من الإصابة.

غالبًا ما تؤدي إصابات الحبل الشوكي غير المكتملة (SCI) إلى ضعف شديد ومستمر في الوظائف الحسية الحركية وهي سريريًا النوع الأكثر شيوعًا من SCI1. تسبب متلازمة براون-سيكوارد في البشر عن طريق آفة لنصف الحبل الشوكي مما يؤدي إلى الشلل وفقدان البروبيونعلى نفس الجانب (أو ipsilesional) مثل الإصابة ، وفقدان الألم والإحساس بالحرارة على الجانب الآخر (أو contralesional)2،3،4. وتستخدم نماذج الحيوانات العمود الفقري الهيمي مقطع ابهي على نطاق واسع لتقليد الإنسان براون-Séquard متلازمة وأنها قد ذكرت في الفئران5,,6,,7,,8,9,opossums10,والقرود87,,11,,12,,13 من قبل مختبرات مختلفة في مختلف مستويات العمود الفقري. ومع ذلك، لم يتم وصف الإجراءات التفصيلية التفصيلية التفصيلية لإنتاج قسم الهيمي الجانبي القياسي. ومن شأن توفير إجراءات تدريجية لقسم الهيمي الجانبي أن يحسن النموذج وييسر مقارنة النتائج التجريبية أو تكرارها في البحوث الأساسية والانتقالية.
وينتج عن نظام SCI الأحادي الجانب عجز سلوكي غير متماثل وغير متناسب يصعب قياسه باستخدام التقييمات التقليدية للإصابات المتماثلة. والمنهجية الملائمة لتقييم العاهات العصبية لاستراتيجية الكفاءة الاستراتيجية من جانب واحد عنصر أساسي في وضع نموذج انفرادي للتقييم الذاتي للأمراض. على الرغم من الدور المحوري لإصابة العمود الفقري من جانب واحد ، تفتقر إلى بروتوكولات موحدة لتقييم العجز الحسي الحركي في الحيوانات التي تعاني من مثل هذه الإصابة. كان مقياس تصنيف locomotor Basso-Beattie-Bresnahan (BBB) هو القياس الأكثر استخدامًا للوظيفة بعد SCI للفئران البالغة 14 مما ينتج وصفًا شبه كمي للحركة ككل. ومع ذلك، فإنه لا يقيس كل طرف خلفي بشكل مستقل.
في هذه الدراسة، نبلغ عن إجراءات خطوة بخطوة لإنتاج HX العمود الفقري القوارض في 9th الصدر (T9) مستوى الفقرية. كما نقدم مقياس سلوك مشترك لقسم الهيمي (CBS-HX) يتضمن خطوة من جانب واحد في الجانب الخلفي (UHS) ، والاقتران ، ووضع الاتصال ، وتقييمات المشي الشبكية لتقييم الإعاقات العصبية والانتعاش بعد SCI أحادية الجانب. نأمل أن يكون هذا النموذج نموذجا مفيدا لدراسة آليات الإصابة والفعالية العلاجية لSCIs من جانب واحد.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Baby-Mixter Hemostat</td>
			<td>FST</td>
			<td>13013-14</td>
			<td>Can be any brand of choice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elevated plastic coated wire mesh grid</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>36&#215;38 cm with 3 cm2 openings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel foam</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>2928</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grip cement kit, powder and solvent</td>
			<td>Dentsply</td>
			<td>675570</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbead Sterilizer</td>
			<td>FST</td>
			<td>NA</td>
			<td>Can be any brand of choice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pearson Rongeur</td>
			<td>FST</td>
			<td>16015-17</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Jinxie surgical tools</td>
			<td>6810</td>
			<td>Can be any brand of choice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>FST</td>
			<td>10003-12</td>
			<td>Can be any brand of choice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Simplex-P cement</td>
			<td>Stryker</td>
			<td></td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TreadScan automatic gait analysis</td>
			<td>CleverSys Inc</td>
			<td>NA</td>
			<td>Can be any brand of choice</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spinal cord lateral hemisection and asymmetric behavioral assessments in adult rats

غالبًا ما تؤدي إصابة الحبل الشوكي غير المكتملة (SCI) إلى ضعف الوظائف الحسية الحركية وهي سريريًا النوع الأكثر شيوعًا من SCI. متلازمة براون-سكواريد البشرية هي نوع شائع من SCI غير المكتمل ة الناجمة عن آفة إلى نصف الحبل الشوكي مما يؤدي إلى الشلل وفقدان البروبيونية على نفس الجانب (أو ipsilesional) مثل الإصابة ، وفقدان الألم والإحساس بالحرارة على الجانب الآخر (أو العكس). المنهجيات الكافية لإنتاج تشريح الهيمي الجانبي للنخاع الشوكي (HX) وتقييم العاهات العصبية ضرورية لإنشاء نموذج الحيوان موثوق بها من متلازمة براون-سكوار. وعلى الرغم من أن نموذج قسم الهيميالجانبي يلعب دوراً محورياً في البحوث الأساسية والانتقالية، إلا أنه لا توجد بروتوكولات موحدة لإنشاء مثل هذا القسم الهيمي وتقييم الوظيفة الأحادية الجانب. الهدف من هذه الدراسة هو وصف الإجراءات خطوة بخطوة لإنتاج HX العمود الفقري الفئران في 9 thالصدر (T9) مستوى الفقرية. نحن ، ثم ، وصف مقياس السلوك المشترك لHX (CBS-HX) الذي يوفر تقييمًا بسيطًا وحساسًا للأداء العصبي غير المتماثل لـ SCI أحادي ة الجانب. وCBS-HX، التي تتراوح بين 0 إلى 18، ويتكون من 4 تقييمات الفردية التي تشمل يخطو الجانب الخلفي (UHS)، اقتران، وضع الاتصال، والمشي الشبكة. بالنسبة لـ CBS-HX ، يتم تقييم الأطراف الخلفية الأضلاع والجانبية بشكل منفصل. وجدنا أنه بعد T9 HX ، أظهر الطرف الخلفي ipsilateral ضعف وظيفة السلوك في حين أن الجانب الخلفي المقابل أظهر انتعاشًا كبيرًا. وCBS-HX تميز بشكل فعال الوظائف السلوكية بين الأطراف الخلفية ipsilateral وكونتابية وكشف التقدم الزمني للانتعاش من الجانب الخلفي ipsilateral. يمكن تحليل مكونات CBS-HX بشكل منفصل أو بالاشتراك مع تدابير أخرى عند الحاجة. على الرغم من أننا قدمنا فقط أوصافًا بصرية للإجراءات الجراحية والتقييمات السلوكية لـ HX الصدري ، إلا أنه يمكن تطبيق المبدأ على SCIs غير مكتملة أخرى وعلى مستويات أخرى من الإصابة.

تسمح العمليات الجراحية المذكورة أعلاه بإنتاج HX أفقي ثابت وقابل للاستنساخ عند T9. بعد التبرّق وإزالة الجلد، يمكن تحديد الموقع الجراحي في T9 بسهولة بواسطة خياطة متبقية(الشكل 6A). يسمح المزيد من التشريح بالتعرض لجسر الأسمنت(الشكل 6B)، وإسفنج الجيلاتين(الشكل 6C)في الطبقات. ثم يتعرض الحبل الشوكي إلى القناة الفقرية المفتوحة ويتم تأكيد تشريح الهيمي الجانبي على الجانب الأيمن(الشكل 4D). يمكن تأكيد مستوى الإصابة من خلال ارتباطه بالأجسام والأضلاع الفقرية المكشوفة(الشكل 6D). يظهر تلطيخ الفلور المناعي للمقطع العرضي في مركز الإصابة فقدانًا كاملًا للهيميكور الأيمن والحفاظ على الهيميكور الأيسر المقابل للإصابة. القسم ملطخة علامة محور عصبي SMI-31 وعلامة astrocytic البروتين الحمضي الببريلي (GFAP)(الشكل 6E).
عصبيا السلوكية ، ونظام CBS - HX قادرة على الكشف عن العجز غير المتماثل مع مرور الوقت بعد T9 HX. بعد HX ، فقد الطرف الخلفي ipsilateral قدرته على الخطوة في حين احتفظ الطرف الخلفي المقابل القدرة على المشي. لكل مقياس سلوكي، قمنا بإجراء 3 تجارب واستخدمنا متوسط التجارب 3 للقياس الكمي والتحليل. استخدمنا قياس ما قبل الجراحة كخط أساس نعتبره التحكم الأكثر دقة بالمقارنة مع استخدام الفئران الأخرى. يمكن تحليل عشرات من التدابير الفردية الأربعة ، أي UHS ، CPL ، وضع الاتصال ، والمشي عبر الشبكة بشكل منفصل(الشكل 7A-D)أو يمكن دمجها في CBS-HX مركب(الشكل 7E). وأظهرت تحليلات ANOVA ذات الاتجاهين اختلافات كبيرة في UHS (F = 23.199, p & lt; 0.001)، اقتران (F = 8.376، p < 0.01)، وضع الاتصال (F = 17.672، p < 0.001)، المشي الشبكة (F = 19.261، p < 0.001)، CBS-HX (F = 20.897، p < 0.001) بين الجانبين ipsilateral وcontralateral. يوضح الشكل 7A نتائج UHS بعد HX T9. في الأيام ال 3 الأولى بعد الإصابة ، فقدت الفئران القدرة على الخطوة وحصلت على درجة 0-2 للطرف الخلفي ipsilesional. بدأت الحركات الشبيهة بالخطوة في الظهور على الجانب الإيفيبفيل في 7-10 أيام بعد الإصابة مع معظم الخطوات كونها خطوات الظهرية. قبل 28 يوما بعد T9 HX، يمكن للفئران اتخاذ خطوات البلطار مع التنسيق العادي تقريبا مع درجة UHS المخصصة من 8. على سبيل المقارنة ، كان الطرف الخلفي للآفات اللابية أقل توقفًا وانخفضت درجة UHS في غضون الأيام الـ 5 الأولى بعد T9 HX وعادت إلى مستوى خط الأساس بعد اليوم 10 بعد الإصابة. بالنسبة لاختبار CPL الكلي (بما في ذلك الاقتران المتماثل والمتماثل والقطري) ، تم تقليل الاستقرار والقدرة على التكيف مع التنسيق بعد أن تم تقليل T9 HX بشكل ملحوظ(الشكل 7B). في 1-5 أيام بعد الإصابة، لم تظهر الحيوانات HX أي علامة على CPL. مع مرور الوقت، ظهرت CPL من الجانب الخلفي ipsilateral، في كثير من الأحيان أخرق، غير مستقر، وتختلف بشكل غير لائق في سرعتها، والقوة، والاتجاه. وقد تأثرت أيضا وضع الاتصال(الشكل 7C)والشبكة المشي(الشكل 7D)من الجانب الخلفي ipsilateral من قبل HX T9 خاصة خلال الأيام ال 5 الأولى بعد الإصابة، وعادة ما تعافى عندما بدأ الحيوان في اتخاذ خطوات البلتار. يتضمن نظام CBS-HX المركب اختبارات UHS وCPL وحالة الاتصال واختبارات المشي الشبكية للحصول على أقصى درجة ممكنة من 18(الشكل 7E). أظهرت الوظيفة الحركية للأطراف الخلفية ipsilateral انخفاضًا في درجات CBS-HX بعد HX الجانبي T9 ، وهو ما يتفق مع العجز الذي شوهد في متلازمة براون-سكواريد البشرية. أظهرت الوظيفة الحركية للأطراف الخلفية ipsilateral انخفاضًا في درجات CBS-HX من يوم واحد إلى 4 أسابيع بعد HX الجانبي T9 مقارنة ً بالأطراف الخلفية الخفية الأضلاع(الشكل 7E).
وهكذا، يمكن استخدام نظام CBS-HX المركب الذي يجمع بين UHS وCPL ووضع الاتصال والمشي عبر الشبكة لتقييم الوظيفة السلوكية للفئران بعد الإصابة الجانبية للنخاع الشوكي الصدري للحصول على أقصى درجة ممكنة من 18.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig1.jpg"> الشكل 1 - ما إذا كانت هناك نسبة الأدوات الجراحية المستخدمة لإنتاج قسم الهيمي زة من الجانب الأيمن T9. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig1large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig2.jpg"> الشكل 2 - ما إذا كانت هناك نسبة الجراحية السابقينposure. أ) حلاقة الشعر على ظهره مما فوق المنطقة الجراحية. ب) سحب العضلات من المنطقة الجراحية باستخدام مسحب. C) كشف t8-11 لاميلا الفقرية وتحديد العمليات المغزل الفردية (الأسهم). لاحظ أن هناك فجوة كبيرة بين العمليات المغزل T8 و T9، وهو معلم لتحديد T9. د) الرسم التخطيطي يظهر العرض الجانبي للعمليات الشوكية. تشكل العمليات المغزلية T9-11 هرمًا مع كون عملية T10 مغزلية هي الذروة. مرة أخرى، يُنظر بوضوح إلى فجوة كبيرة بين العمليات الشوكية T8 وT9 على أنها معلم بارز لتحديد T9 حيث يتم إجراء استئصال اللامينكوت. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig2large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig3.jpg"> الشكل 3 - ما إذا كانت هناك نسبة استئصال اللامنكة والتعرض للهيميكور الأيمن. أ) الرسم التخطيطي يظهر المقطع العرضي من الحبل الشوكي داخل الفقرة T9. يشير الخط المتقطع إلى مدى استئصال الأمينعلى كل جانب. ب) الرسم التخطيطي يظهر إزالة جزء صغير من الصفيحة على الجانب الأيسر وقوس الفقر بأكمله على الجانب الأيمن. يشير السهم إلى خط الوسط الظهري للسلك. ج) عرض دورسال للنخاع الشوكي المكشوف. لاحظ أن الوريد الظهري كان يقع في منتصف الحبل الشوكي الذي يقسم الهيميكورات اليسرى واليمنى. الهيميكور الأيمن كان مكشوفاً تماماً <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig3large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig4.jpg"> الشكل 4 - ما إذا كانت هناك نسبة قسم الهيمي الجانبي. A-D) تُظهر الرسومات التخطيطية إدخال إبرة الخط الوسطي في الحبل الشوكي (A)، وقسم الهيمي (B)، وغطاء إسفنج الجيلاتين والأسمنت (C)، والمنظر الجانبي لقسم الهيمي الجانبي T9 (D). خطوط متقطعة في C الخطوط العريضة لإزالة T9 الفقرية لافينا وhemicord الحق. E) عرض دورسال من تشريح الهيمي في الحبل الشوكي الأيمن. و) وضع قطعة صغيرة من إسفنج الجيلاتين فوق موقع قسم الهيمي. G-H) جسر أسمنت Simplex-P مبني على الإسفنج والعمليات الشوكية من T8 و T10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig4large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig5.jpg"> الشكل 5 - ما إذا كانت هناك نسبة الرسم التخطيطي لاختبار الاقتران (CPL). test. اختبار CPL هو تقييم تنسيق الحركات المتناوبة للأطراف, بما في ذلك A) CPL متجانسة (الجبهة الأمامية الأمامية / الخلفية الخلفية الأطراف), B) CPL قطري (الجبهة اليسرى الخلفية اليمنى/ الأمامية الخلفية الأطراف اليسرى اليمنى), وC) هوموLateral CPL (الأطراف الأمامية الخلفية على نفس الجانب). بعد T9 HX (المربع الأحمر، D-F)، أصبح العجز في الأطراف الخلفية مرئية على الجانب ipsilesional والحيوانات تظهر عدم التنسيق في homolog (D)، قطري (E)، وhomolateral (F) CPL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig5large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig6.jpg"> الشكل 6 - ما إذا كانت هناك نسبة تشريح الأنسجة وعلم الأنسجة. بعد التبرّق، تم تشريح الأنسجة لكشف الحبل الشوكي. تمت معالجة المقاطع العرضية للتلطيخ المناعي المزدوج للبروتين الحمضي الببريلي (GFAP ، علامة للخلايا الفلكية) وSMI31 (علامة لمحاور عصبية). أ) التعرض للخياطة كمعلم لموقع الإصابة (السهم الأصفر). ب) التعرض لأسمنت الأسنان (السهم الأصفر). ج) التعرض للإسفنج الجيلاتين (السهم الأصفر). د) تحديد قسم الهيمي الشوكي على الجانب الأيمن (السهم الأصفر). E) مقطع عرضي الحبل الشوكي في مركز الإصابة المناعي ة مع GFAP (الأخضر) وSMI 31 (أحمر). وهذا يدل على أن هيميكور العمود الفقري الأيمن تم قطع تماما وhemicord اليسار كان محفوظا بشكل جيد. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig6large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57126/57126fig7.jpg"> الشكل 7 - ما إذا كانت هناك نسبة نتائج الدرجات السلوكية العصبية. تُظهر الرسوم البيانية عشرات المقاييس الخمسة: أ، درجة قسم الهيميمن من جانب واحد (UHS)؛ ب، اقتران (CPL) ؛ C،وضع الاتصال؛ D، والشبكة المشي ، وهاء، الجمع بين نقاط السلوك (CBS) على الأطراف الخلفية ipsilateral وcontralateral بعد HX T9. البيانات تمثل المتوسط ± s.e.m. *: p < 0.05, **: p < 0.01, ***: p < 0.001 بين الأطراف الخلفية ipsilateral وcontralateral (ANOVA في اتجاهين, اختبار المقارنات المتعددة لتوكي, ن = 12 فئران/ مجموعات). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57126/57126fig7large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>اسم/نطاق النقاط الفرعية</td>
			<td>وصف</td>
			<td colspan="2">نقاط</td>
		</tr>
<tr>
<td>يخطو الجانب الخلفي من جانب واحد</td>
			<td rowspan="2">حركة طفيفة ملحوظة في الأطراف الخلفية</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>(UHS)</td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>(0-8)</td>
			<td rowspan="2">حركة الكاحل</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="2">حركة الركبة</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="2">حركة الورك</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="2">كاسحة (لا دعم الوزن)</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="2">وضع (لا دعم الوزن)</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>وضع (مع دعم الوزن)</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="2">يخطو</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>اقتران</td>
			<td rowspan="3">الأضلاع المتجانسة</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>(0-6)</td>
			<td>غير منتظم / أخرق</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>العاديه</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="3">مثلي</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>غير منتظم / أخرق</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>العاديه</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td rowspan="3">قطري</td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>غير منتظم / أخرق</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>العاديه</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>وضع الاتصال</td>
			<td rowspan="2"></td>
			<td>لا</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>(0-1)</td>
			<td>نعم</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>شبكة المشي</td>
			<td rowspan="4">خطوات الضياع</td>
			<td>> 15</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>(0-3)</td>
			<td>≤ 15</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>≤ 10</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>≤ 5</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>مجموع CBS-HX</td>
			<td rowspan="2"></td>
			<td rowspan="2"></td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td>(0-18)</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: درجات السلوك المجمعة لقسم الهيمي (CBS-HX)

Watch this Scientific Journal Video about Spinal Cord Lateral Hemisection and Asymmetric Behavioral Assessments in Adult Rats at JoVE.com

Spinal Cord Lateral Hemisection and Asymmetric Behavioral Assessments in Adult Rats

هنا نحن وصف العمليات الجراحية لإنتاج الهيميمقطع الجانبي للنخاع الشوكي (HX) موثوق بها على مستوىالصدر 9 في الفئران البالغة والتقييمات العصبية السلوكية المصممة للكشف عن العجز غير المتماثل بعد مثل هذه الإصابة من جانب واحد.

تشريح الهيمي الجانبي الحبل الشوكي والتقييمات السلوكية غير المتماثلة في الفئران البالغة

Incomplete spinal cord injury (SCI) often leads to impairments of sensorimotor functions and is clinically the most frequent type of SCI. Human ...

يوفر هذا البروتوكول نموذجًا حيوانيًا موثوقًا به لحبب العمود الفقري الجانبي الذي يحاكي متلازمة براون-سياركارد في البشر، ونطاق سلوكي مشترك جديد لتقييم العجز السلوكي غير المتماثل. يمكن لهذا النموذج الماوس hemisection زيادة فهمنا للإعاقات العصبية التي تحدث في متلازمة براون Sequard في البشر. على عكس تقييماتك المذكورة، يمكن تطبيق مقياس السلوك الجديد المشترك على أي قالب يتطلب تقييمًا غير متماثل وعجز قاطرات وفي المختبر.باستخدام هذا، يمكن أن يسهل نموذج القسم الهيمي الطبيعي المتسق مقارنة النتيجة التجريبية بين البحوث الأساسية والبحث في الترجمة. يمكن أن يكون استخدام نتيجة متسقة مع هذا النموذج من الصعب للمبتدئين. الخطوة الحاسمة هي وضع الإبرة عموديا في خط الوسط، وذلك لتوجيهات لحفز الإصابة.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء كل من العمليات الجراحية والسلوكية. في يوم الإجراء، تنظيف الجدول الجراحي مع 70٪ الإيثانول، ووضع وسادة التدفئة قبل تدفئة على الطاولة. بعد تغطية المنطقة الجراحية مع ستائر الجراحية العقيمة، تأكيد عدم وجود استجابة ل toe-pinch في الفئران المُخَذَّن.ضع مرهم على عيون الحيوان لمنع تجفيف القرنية، وحلق الشعر فوق الفقرات الصدرية. ثم، تنظيف الجلد المكشوف مع ثلاثة بالتناوب على أساس اليود والأيثانول الدعك. عندما يكون الحيوان جاهزاً، حدد موقع الضلع الثالث عشر واتبع الضلع dorsally لتحديد صلته مع فقرة T-13.عد لتحديد الفقرات T-9، واستخدام شفرة مشرط رقم خمسة عشر لجعل شق الجلد في منتصف الخط من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات على العمليات الثمانية الدوارة الثامنة إلى الحادية عشرة. تحريك الفئران تحت مجهر جراحي، وتشريح بصراحة وفصل العضلات الطفيلية جانبية من العمليات العرضية نحو جوانب T-9 و T-10 فقرات على كلا الجانبين. تعطيل العمود الفقري مع حامل استقرار معدلة، وجعل شق على جانبي عظم العمود الفقري الجانبي، والانزلاق الأسلحة الفولاذ المقاوم للصدأ من حامل تحت جوانب عملية عرضية المكشوفة.شد البراغي لتأمين حامل، واستخدام المنقلة لفضح T-8 إلى 11 الصفيحة الفقرية والعمليات العرضية. باستخدام rongeur، قص بعيدا عملية T-9 ثاتوري، وإزالة جزء صغير من الصفيحة، اليسار إلى خط الوسط والجزء الأيمن بأكمله من الصفيحة، كما في الجانب الجانبي ممكن. ثم أدخل رونغير بلطف تحت lamina ، وقص قطعة صغيرة واحدة من العظام في وقت واحد ، حتى يتم الانتهاء من المنطقة المطلوبة من استئصال لامينك.بعد ذلك، تحديد خط الوسط الظهري من وتر العمود الفقري، وإدراج إبرة 30 قياس عموديا من خلال خط الوسط، في وتر العمود الفقري، على طول الطريق إلى الجدار البطني للقناة الفقرية، مع شطبة تواجه إلى اليمين. وقف أي نزيف مع قطعة صغيرة من رغوة هلام العقيمة، وإدراج طرف واحد من زوج من مقص الجراحة الدقيقة استئصال iriddecty من خلال خط الوسط من المسار إبرة، والتلميح الآخر على طول السطح الجانبي للhemichord اليمنى، لجعل قطع كاملة على hemichord الحق. استخدام الحافة الجانبيّة من ال نفسه إبرة كسكين, أن يقطع من خلال الآفة فجوة أن يؤكّد كاملة يصحّ قذف.وتصور الجزء السفلي من القناة الفقري، للتحقق من اكتمال ال hemisection الحق. استخدم خليط الأسمنت لبناء الجسر الضيق فوق الإسفنج، وعمليات T-8 و T-10 العرضية. ثم، خياطة العضلات والجلد طبقات منفصلة مع 4/0 خيط الحرير، وحقن 0.9٪ العقيمة تحت الجلد المالحة للحفاظ على الترطيب.الضغط على المثانة البولية مرتين إلى ثلاث مرات يوميا للأسبوع الأول، ومرات واحدة إلى مرتين في الأسابيع التالية، حتى عودة تبطل المثانة العفوية. عند نقطة الوقت التجريبية المناسبة بعد الإجراء ، ضع الجرذ البالغ في تجربة حقل مفتوح ، وتفحص الحركة الحيوانية لمدة أربع دقائق. باستخدام الجدول، قم بتعيين قيمة 1 لـ yes'و0 لـ no'لكل فئة سلوك، و جمع القيمة الإجمالية لإعطاء درجة انطلاق هتكيونية أحادية الجانب نهائية من 0-8.لتحليل اقتران البوابة، تسجيل المشي الحيوان التجريبي على جهاز مدرج ضيق، وتعيين درجة 0 لـ no'1 لـ regular'و/أو clumsy'و2 لـ normal'for كل فئة اقتران. للحصول على تقييم وضع الاتصال، عقد الحيوان في وضع عمودي، بحيث كلا من الأطراف الخلفية المتاحة للاستجابة وضع، وفرشاة السطح الظهري من طرف واحد خلفي إلى الأمام طفيفة نحو حافة سطح. مراقبة موضع القدم على السطح، وتعيين اتصال طرف خلفي وضع درجة 0 لعدم وضع'و 1 لتقييم التنسيب'للشبكة المشي، وضع الفئران على ارتفاع ستة وثلاثين في ثمانية وثلاثين شبكة الأسلاك المغلفة بالبلاستيك مع فتحات مربعة 3 سم، وتسجيل الفيديو الفئران المشي بحرية عبر المنصة لمدة 30 خطوة للسماح quantification من عدد الأخطاء القدم لكل طرف لتحديد شدة محرك العجز.يظهر تلطيخ الفلورسنت الأمينية من المقطع العرضي في مركز الزلزال إصابة خسارة كاملة من hemichord الحق. والحفاظ على اليسار hemichord contralateral إلى الإصابة. يمكن تحليل عشرات من تدابير تقييم البوابة الفردية بشكل منفصل ، أو يمكن دمجها في سلوك مركب مركب بعد درجة hemisection.في الأيام الثلاثة الأولى بعد الإصابة، تفقد الفئران القدرة على الخطوة، مع حركات تشبه خطوة بداية للظهور مرة أخرى على الجانب ipsilesional في 7 10 أيام بعد الإصابة. ومع معظم الخطوات يجري الخطوات الظهرية. بعد 28 يوما من التهوي T-9، يمكن للفئران اتخاذ خطوات ألواحية مع التنسيق الطبيعي تقريبا.وعلى سبيل المقارنة، فإن الطرف الخلفي contralesional أقل توقف مع درجة ال hemisection من جانب واحد إسقاط خلال الأيام الخمسة الأولى بعد الإصابة، والعودة إلى خط الأساس بحلول اليوم 10، بعد الإصابة. بالنسبة لاختبار اقتران البوابة الكلي ، يتم تقليل استقرار التنسيق وقدرته على التكيف بعد hemisection بشكل ملحوظ خلال الأيام الخمسة الأولى بعد الإصابة. كما يتأثر وضع الاتصال والمشي الشبكي للأطراف الخلفية إيبسجيرال، وعادة ما يتعافى عندما يبدأ الحيوان في اتخاذ خطوات ألواحية.قد يكون من الصعب إنتاج إصابة نظيفة. وضع إبرة في الوسط يمكن أن يكون المبدأ التوجيهي مفيدة لضمان الفصل الكامل للأنسجة.

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

داخل النخاع زرع الخلايا لاستهداف القرن بطني عنق الرحم في التصلب الجانبي وصدمة إصابة النخاع الشوكي

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) ...

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

الحادة والمزمنة الاختبارات الحسية اللمس بعد إصابة الحبل الشوكي في الجرذان

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

تسيطر الاصابات تهتك عنق في الفئران

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

نموذج كدمة شديدة اصابات الحبل الشوكي في الجرذان

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Evaluation of Respiratory Muscle Activation Using Respiratory Motor Control Assessment (RMCA) in Individuals with Chronic Spinal Cord Injury

Evaluation of Respiratory Muscle Activation Using Respiratory Motor Control Assessment RMCA in Individuals with Chronic Spinal Cord Injury

تقييم تنشيط العضلات التنفسية عن طريق الجهاز التنفسي التحكم في المحركات تقييم (RMCA) في الأشخاص الذين يعانون المزمنة اصابات الحبل الشوكي

During breathing, activation of respiratory muscles is coordinated by integrated input from the brain, brainstem, and spinal cord. When this coordination ...

Implanting Glass Spinal Cord Windows in Adult Mice with Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

زرع النخاع الشوكي زجاج نوافذ في الفئران الكبار مع التهاب الدماغ التجريبية المناعة الذاتية

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in adult rodents is the standard experimental model for studying autonomic demyelinating diseases such as ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

تسيطر الموديل أثر القشرية لإصابات الدماغ الرضية

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

ونظام القياس عن بعد راديو لمراقبة وظيفة القلب والأوعية الدموية في الحبل الشوكي مع الفئران Transection والعصبية الجذعية الجنينية الطعوم خلية

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Calibrated Forceps Model of Spinal Cord Compression Injury

معايرة الملقط نموذج من الحبل الشوكي ضغط الإصابات

Compression injuries of the murine spinal cord are valuable animal models for the study of spinal cord injury (SCI) and spinal regenerative therapy. The ...