Name: a method for islet transplantation to the omentum in mouse
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse at JoVE.com

Nogle af forfatterne af dette arbejde blev støttet i en del af tilskud fra National nøglen R & D Program i Kina (2017YFC1103704), Sanming projekt af medicin i Shenzhen (SZSM201412020), fonden for højt niveau medicinsk disciplin konstruktion af Shenzhen (2016031638), Shenzhen grundlaget for videnskab og teknologi (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Shenzhen grundlaget for sundhed og familieplanlægning Kommissionen (SZXJ2017021).

Alle mus anvendes i denne undersøgelse blev indhentet fra medicinsk dyr Center i Guangdong-provinsen. Brugen af dyr blev godkendt af den etiske gennemgang Udvalget af Shenzhen anden People's Hospital, i overensstemmelse med principperne om dyrevelfærd.
1. Holmen Transplantation til Omentum
Bemærk: Denne protokol kræver 2 personer til at udføre.
<ol><li>Samle kirurgisk materialer, som er anført i tabel 1. Forberede aseptisk felt i kirurgisk o...

<ol>
	<li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035.">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes.">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction+to+improve+islets+of+Langerhans+engraftment.">Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients,+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants.">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li><li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211 (2014).</li><li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pancreatic+islet+transplantation.">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li><li>Cantarelli, E., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+transplantation+sites+for+pancreatic+islet+grafts.">Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts.</a> Current diabetes reports. 11 (5), 364 (2011).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+for+preclinical+islet+transplantation:+no+model+fits+all+(research+purposes).">Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes).</a> Islets. 5 (2), 79-86 (2013).</li><li>Beli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erratum+to:+CX3CR1+deficiency+accelerates+the+development+of+retinopathy+in+a+rodent+model+of+type+1+diabetes.">Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes.</a> J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).</li><li>Hafner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Patterns+of+Retinal+Oxygen+Saturation+and+Microvascular+Hemodynamic+Parameters+Preceding+Retinopathy+in+Patients+With+Type+II+Diabetes.">Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).</li><li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum.">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nature Biotechnology. 35 (1), 82017 (2017).</li><li>Voigt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+Progression+Rate+of+Diabetic+Retinopathy+in+Type+2+Diabetes+Patients+in+Correlation+with+the+Duration+of+Diabetes.">Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).</li><li>Baidal, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+of+an+Intraabdominal+Endocrine+Pancreas.">Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas.</a> New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).</li><li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets.">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li><li>Berman, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+the+endocrine+pancreas:+intraomental+islet+transplantation+within+a+biologic+resorbable+scaffold.">Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).</li><li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+islet+transplantation:+the+impact+of+the+liver+micro-environment.">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li><li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets.">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li><li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes.">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li></ol>

Holmen transplantation leveren via portalen vene er mest anvendte metode til Holmen transplantation hos mennesker, men der er stadig effektivitet og sikkerhed bekymringer som portal vene trombose og leveren steatose17. Nylige undersøgelser viser, at omentum kan være et egnet alternativ til leveren, men mere forskning skal udføres før kliniske oversættelse12,14,18,19...

Ifølge internationale Diabetes Føderation (IDF), påvirker diabetes mellitus i øjeblikket 382 millioner mennesker, med en forventet stigning til 592 millioner mennesker af 20351. I både allogene og xenogene islet transplantation er systemisk immunsupprimerende behandling nødvendig. Uden immunosuppression er immun afvisning en væsentlig årsag til graft tab2. Der er også et væsentligt problem af transplanterede islet tab på grund af instant blod medieret inflammatorisk reaktion (IBMIR)3,4. Men selv i mangel af en immunrespons, som i syngeneic eller auto-transplantation modeller, Holmen celler transplanteret ind i leveren via portalen vene er tabt på grund af betændelse og/eller ugunstige miljøforhold, som fattige blod forsyning med nedsat iltning og/eller næringsstoffer5,6. Som et resultat, for at sikre langsigtet metabolisk funktion, er højere islet numre nødvendige for at kompensere for den indledende celletab, der reducerer engraftment7.
I et forsøg på at optimere islet engraftment, flere alternative anatomiske steder har været undersøges eksperimentelt såvel som klinisk, med lovende, men ikke endelige resultater8. Der henviser til, at nogle af de alternative produktionssteder tilbyder nem og sikker adgang (fx., huden, nyrerne kapsel, gastrisk submucosa og forreste kammer i øjet) eller en større overflade for større islet masserne (fx., bughulen), overlevelse og fysiologisk metaboliske præstationer af transplanterede holmene er stadig begrænset og fortsat en bekymring9. Søgning efter et mere passende sted for Holmen engraftment er igangværende.
Omentum var blandt de mange anatomiske steder, der blev undersøgt i den tidlige udvikling af holmen transplantation, og viste sig at være et vellykket miljø for Holme10,11,12,13, 14. Dog intraportal Holmen infusion blev kliniske valg due delvis til den relative enkelhed af proceduren og tidlige succes i dyre modeller6. Også, en del negativer forbundet med dette site, især massive tidlig islet tab, var mindre forståelige og mindre begrænsning i de tidlige dage af eksperimentelle islet transplantation som feltet modnet. Med nyere overbevisende tegn på, at intravaskulær islet infusion er langt fra ideel, omentum er re fremvækst som en potentielt værdifulde site for celle transplantation.
Omentum (i form af en omental pose) tilbyder relative fordele over leveren15,16. Det er godt vaskulariserede og let tilgængeligt. Det giver mulighed for hentning af transplantat (hvis nødvendigt) og/eller biopsi. Den iskæmiske periode oplevet af holmene er reduceret i forhold til leveren, og omentum kan acceptere forholdsvis store islet masserne, der ikke er muligt intraportally, hvor en stigning i portalen pres kan forårsage komplikationer.
En syngeneic musemodel af transplantation blev brugt i den protokol, der er testet i undersøgelsen, beskæftiger C57BL/6 mandlige mus mellem 6 – 8 uger gamle med en vægt på 20-25 g. Islet modtagere blev gjort diabetisk med en enkelt injektion af streptozotocin med en dosis på 250 mg/kg ip. Induktion af diabetes kan betragtes som vellykket, hvis blod glukose niveau af musen er større end 24 mmol/L 48 timer efter injektion og forbliver finansieringsrammer for mindst 5 dage.
Syngeneic Holme blev isoleret fra bugspytkirtlen af alder-matchede donorer efter tidligere udgivne metoder med nogle ændringer. Kort sagt, var collagenase injiceres galdeblære i stedet for galdegang. Dette blev gjort som en forbedring til at lette lethed af injektion. Collagenase infusion blev efterfulgt af inkubation, væv forstyrrelser, tæthed gradient adskillelse og hånd-picking at få ren Holme. Holme var kulturperler natten over i CMRL-1066 medium suppleret med 10% varme-inaktiverede føtal bovint serum (FBS) i T175 kolber ved 37 ° C, under 95% luft - 5% CO2 før transplantation.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1233">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Equipment</td>
			<td style="width:385px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:237px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">5 inch (12-13 cm) Scissors</td>
			<td>RWD Life Science&#160;</td>
			<td>S12030-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Fine Forceps</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>F11010-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Small wound clips</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>R33003-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Acutenaculum</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>F31044-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">2 pair tissue forceps</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>&#160;F13023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">4-0 Suture with needle</td>
			<td style="width:385px;">Chenghe, China</td>
			<td>17094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">200&#956;l Pipette and tips</td>
			<td style="width:385px;">Gilson</td>
			<td>PN11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:385px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">razor blade</td>
			<td style="width:385px;">Philips</td>
			<td>HC1099/15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Material and animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Pentobarbital Sodium</td>
			<td style="width:385px;">Sigmaaldrich.com</td>
			<td>P3761</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Hydrogel&#160;</td>
			<td style="width:385px;">bdbiosciences.com</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Fibrin-Thrombin Hydrogel&#160;</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>1501250</td>
			<td>Components clot when mixed</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:385px;">Yingniu medical, Anhui, China</td>
			<td>23170608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Iodophor</td>
			<td style="width:385px;">Lierkang medical technology, Shangdong, China</td>
			<td>170521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Normal saline</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>2B1324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Cephalosporin</td>
			<td style="width:385px;">Lukang medical, Shangdong, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Cefazolin</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>2G3508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">lubricant eye ointment</td>
			<td>Major Pharmaceuticals</td>
			<td>203964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">streptozotocin</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">collagenase Type V</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">CMRL-1066 media</td>
			<td>celltrans, Wenzhou, China</td>
			<td>X018D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">histopaque</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>10771</td>
			<td style="width:237px;">density gradient</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">PE50 tubing</td>
			<td>Braintreesci.com</td>
			<td>PE50 100 FT</td>
			<td>Polyethylene .023&#34; x .038</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Calcein AM</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>C1359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Propidium iodide</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">optimal cutting temperature compound (OCT)</td>
			<td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td>
			<td>4583</td>
			<td>embedding medium</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td>
			<td>8138S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.&#160;</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">C57Bl/6 Mice</td>
			<td style="width:385px;">Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">T175 flasks</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">1.5mL Snap-top tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for islet transplantation to the omentum in mouse

Holmen transplantation er blevet foreslået til at være en potentiel behandling af type 1 diabetes. Seneste overbevisende beviser indikerer, intravaskulær islet infusion er langtfra ideel, og derfor, omentum er re fremvækst som en potentielt værdifulde site for Holmen transplantation. Dette eksperiment kræver isolering af høj kvalitet Holme og implantation af Holme til diabetisk modtagerne. Transplantation til omentum kræver kirurgisk trin, der bedre kan påvises visuelt. Her præsenteres de detaljerede trin til denne procedure. To metoder for at blande de isolerede øer med hydrogel før du placerer blandingen ind i diabetisk mus omental posen er beskrevet her. Forskellige hydrogels anvendes til de forskellige forhold. Blodsukkerniveauer for diabetisk mus modtagere af syngeneic Holme i omentum blev overvåget i op til 35 dage. Nogle dyr blev ofret efter 14 dage til at udføre immuno-histokemiske analyse. Denne præ-klinisk transplantation tilgang kan bruges som foreløbige data fører op til oversættelse af kliniske transplantation.

Post-Digestive tilstand af bugspytkirtlen er vist i figur 1A. Renset Holme er vist i figur 1B. Dithizone farvning og levedygtighed afprøvning af holmene er vist i figur 2. De vigtigste trin i Holmen transplantation til omentum er vist i figur 3. Blod glucose niveauer af modtagere efter omental transplantation er vist i figur 4. Histologiske...

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse at JoVE.com

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

En metode til Holmen Transplantation til Omentum i mus

En metode til omental transplantation af Holme i en mus er indført. De isolerede øer er blandet med hydrogel og blandingen er placeret i den omental pose af en diabetisk mus. Derefter blodglucose overvåges, og immuno-histokemiske analyse udføres.

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål inden for øtransplantation, såsom øtransplantation til omentum. Konsekvenserne af denne teknik strækker sig mod behandling af type I diabetes, fordi omentum er re-emergent som en potentiel værdi site for ø-transplantation. Den største fordel ved denne teknik er, at de isolerede øer blandes med hydrogel og blandingen er placeret i omentum pose diabetisk mus.Begynd med at forberede et aseptisk felt i det kirurgiske område med sterilt materiale som gardiner og engangsartikler. Placer de steriliserede kirurgiske instrumenter i det aseptiske felt. Vælg donor holmene under stereomikroskopet ved hjælp af en 200 mikroliterpipettespids.For hvert dyr indsamles 450 til 500 holme og overføres til et sterilt 1,5 milliliter snaptoprør med 100 mikroliter CMRL 10 66 medium. Placer røret på isen, indtil det er klar til transplantation. Når holmene er høstet, tø kælder membran matrix hydrogel på is.Vej og tag alle diabetisk modtager mus. Efter bedøvelse af den første mus i henhold til en institutionelt godkendt protokol, teste dybden af anæstesi ved at administrere en tå knivspids. Hvis der ikke er nogen tilbagetrækning refleks, niveauet af anæstesi er korrekt for kirurgi.Administrere dyrlæge salve til øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi. Podning maven med 70% ethanol. Derefter barbere håret fra kirurgi site.Dæk dyret med en steril drapere, og desinficere området med en jod krat. Efter brug oftalmologiske saks til at skabe en 4 til 5 centimeter snit langs midterlinjen af maven, flytte tarmene til venstre side og dække med saltvand gennemblødt gaze for at forhindre dehydrering under operationen procedure. Brug derefter vatpinde til fuldt ud at eksponere maven og finde omentum under maven.På dette tidspunkt bør hydrogel være helt optøet. Drej røret med holmene ved 200 gange g i 30 sekunder. Efter spin, fjerne supernatant.Derefter aspirere 50 mikroliter af hydrogel tilføje det til røret, der indeholder holmene og bland forsigtigt undgå dannelsen af bobler. Næste brug to par kraftaffæstet til at afhente kanterne af omentum og forsigtigt hæve den til at danne en rille mellem mavevæggen og tarmene. På dette tidspunkt i operationen, en anden person er nødvendig for at aspirere den resuspended ø hydrogel blanding med en 200 mikroliter pipette spids og levere det ind i rillen.Sørg for, at blandingen er godt placeret i rillen ved forsigtigt at hæve eller sænke kanterne af omentum. Blandingens placering skal fuldføres inden for tre minutter, før hydrogelen størkner. Efter hydrogel sæt, fold omentum til at dække transplantatet.Omentum vil holde sig til den omgivende gastrisk væg som hydrogel størkner. Når hydrogel er helt størknet, bruge vatpinde til at flytte tarmene i bughulen passe på ikke at røre ved transplantationsstedet. Næste dispensere 200 mikroliter af et passende antibiotikum i bughulen for at forhindre infektion.Brug derefter 4 O sutur til at lukke maven. Generelt enkeltpersoner nye til denne metode vil kæmpe, fordi de steder af omentum i mus er lille og trættende at vurdere. Placer musen i en opvarmet opsving bur, indtil det fuldt ud genvinder ekstern recumbency.Den næste dag og hver dag derefter i en uge, injicere antibiotika som post-kirurgi profylakse. Også, måle ikke-fastende blodsukkerniveau fra en hale vene blodprøve ved hjælp af et blodsukkermåler en gang dagligt efter transplantationen. Ved omplantning til omentum, kan øen graft have en forsinket funktion og ikke nå et helt normalt blodsukkerniveau i to til tre uger.Det podede væv blev hentet fra den aflivede mus 14 dage efter transplantationen. Her er transplantatet synligt som en klynge af kerner efter DAPI-farvning. Funktionaliteten af det transplanterede væv afsløres ved immunfluorescensfarvning med anti-insulin antistoffer.H & E farvning viser podet væv omgivet af adipocytter af omentum. Når mastered, kan denne teknik gøres i en time, hvis det udføres korrekt. Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske også musen omentum er skrøbelig.Efter denne procedure, andre metoder som anvendes i forskellige high school, MB ydeevne i alt, der vil besvare særlige spørgsmål som udbredelsen af øen i vascuolization og ydeevne. Efter denne udvikling banede denne teknik vejen for forskere i deres og transplantation til at udforske behandling for type I diabetes i mere end ét uddrag. Efter at have set denne video, bør du have en god forståelse af, hvordan man transplantere holmene til omentum i musen.

Research

JoVE Journal

Biology

Tracheotomy: A Method for Transplantation of Stem Cells to the Lung

Lung disease is a leading cause of death and likely to become an epidemic given increases in pollution and smoking worldwide. Advances in stem cell ...

Murine Pancreatic Islet Isolation

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Mouse Islet of Langerhans Isolation using a Combination of Purified Collagenase and Neutral Protease

Mus Islet af Langerhans Isolation ved hjælp af en kombination af renset collagenase og Neutral Protease

The interrogation of beta cell gene expression and function in vitro has squarely shifted over the years from the study of rodent tumorigenic cell lines ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Fremgangsmåde til Embryonale Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Metode til mus pancreasø Isolation og intracellulære cAMP Bestemmelse

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

Probe-baseret real-time PCR metoder til kvantitativ måling af microRNA

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

Filtrering Isolering af nukleinsyrer: en enkel og hurtig DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...