Name: a method for islet transplantation to the omentum in mouse
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse at JoVE.com

חלק מחברי העבודה נתמכו באופן חלקי על ידי מענקים הלאומית מקש R & D התוכנית של סין (2017YFC1103704), Sanming Project לרפואה בעיר שנדז'ן (SZSM201412020), קרן גבוהה ברמה רפואית משמעת הבנייה של שנג'ן (2016031638), שנג'ן קרן המדע והטכנולוגיה (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), שנג'ן יסודות הבריאות והוועדה לתכנון המשפחה (SZXJ2017021).

כל העכברים השתמשו במחקר זה, התקבלו את רפואי חיה מרכז של גואנג-דונג. השימוש בבעלי חיים אושרה על ידי החולים אתיקה סקירה הוועדה של שנג'ן השני לאנשים בבית, בהתאם לעקרונות של רווחת בעלי חיים.
1. השתלת איון כדי Omentum
הערה: פרוטוקול זה דורש 2 אנשים להשיג.
<ol><li>מצרף את החו?...

<ol>
	<li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035.">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes.">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction+to+improve+islets+of+Langerhans+engraftment.">Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients,+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants.">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li><li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211 (2014).</li><li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pancreatic+islet+transplantation.">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li><li>Cantarelli, E., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+transplantation+sites+for+pancreatic+islet+grafts.">Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts.</a> Current diabetes reports. 11 (5), 364 (2011).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+for+preclinical+islet+transplantation:+no+model+fits+all+(research+purposes).">Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes).</a> Islets. 5 (2), 79-86 (2013).</li><li>Beli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erratum+to:+CX3CR1+deficiency+accelerates+the+development+of+retinopathy+in+a+rodent+model+of+type+1+diabetes.">Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes.</a> J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).</li><li>Hafner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Patterns+of+Retinal+Oxygen+Saturation+and+Microvascular+Hemodynamic+Parameters+Preceding+Retinopathy+in+Patients+With+Type+II+Diabetes.">Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).</li><li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum.">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nature Biotechnology. 35 (1), 82017 (2017).</li><li>Voigt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+Progression+Rate+of+Diabetic+Retinopathy+in+Type+2+Diabetes+Patients+in+Correlation+with+the+Duration+of+Diabetes.">Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).</li><li>Baidal, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+of+an+Intraabdominal+Endocrine+Pancreas.">Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas.</a> New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).</li><li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets.">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li><li>Berman, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+the+endocrine+pancreas:+intraomental+islet+transplantation+within+a+biologic+resorbable+scaffold.">Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).</li><li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+islet+transplantation:+the+impact+of+the+liver+micro-environment.">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li><li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets.">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li><li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes.">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li></ol>

השתלת איון אל הכבד דרך וריד שער הכבד הוא הכי נפוץ בשיטה של השתלת איון בבני אדם, אבל עדיין ישנם חששות בטיחות ויעילות כמו וריד שער הכבד פקקת והכבד steatosis17. מחקרים שנעשו לאחרונה מראים כי omentum עשוי להיות אלטרנטיבה מתאימה הכבד, אבל יותר מחקר צריך להתבצע לפני תרגום קלינית12</sup...

על-פי הבינלאומי לסוכרת הפדרציה (צה ל), סוכרת כיום משפיע 382 מיליון איש, עם עלייה המוקרנת 592 מיליון אנשים על-ידי מלאך1. שניהם השתלת איון allogeneic, xenogeneic, טיפול לדיכוי המערכת החיסונית מערכתית הכרחי. ללא החיסוני, הדחייה החיסונית הוא הגורם העיקרי לאובדן שתל2. יש גם בעיה משמעותית של איון המושתלים אובדן עקב דם מיידית מתווכת תגובה דלקתית (IBMIR)3,4. עם זאת, אפילו בהיעדר תגובה חיסונית כמו syngeneic או אוטומטי-השתלת מודלים, תאי איון מושתלים לתוך הכבד דרך וריד שער הכבד אובדות עקב דלקת ו/או תנאים סביבתיים שלילי, כגון דם לקויה לספק חמצון מופחתת ו/או חומרים מזינים5,6. כתוצאה מכך, על מנת להבטיח תפקוד מטבולי לטווח ארוך, מספרי איון גבוהים יותר נחוצים לפצות על אובדן התא הראשוני אשר מפחית את engraftment7.
בניסיון לייעל את איון engraftment, מספר אתרים אנטומי חלופי נחקרו ניסיוניים וכן קלינית, עם מבטיח, אך לא מוחלטת תוצאות8. ואילו חלק מהאתרים אלטרנטיבית מציעים גישה קלה ובטוחה (למשל. עור, כליות כמוסה, submucosa קיבה, החדר הקדמי של העין) או משטח רחב יותר עבור ההמונים איון גדול יותר (למשל., חלל הצפק), הישרדות, הפיזיולוגיות ביצועי מטבולית איים המושתלים הם עדיין מוגבל ולהישאר הדאגה9. החיפוש אחר אתר מתאים יותר עבור איון engraftment עודנו מתנהל.
Omentum היה בין האתרים אנטומיות רבות היו נחקרים בהתפתחות המוקדמת של השתלת איון, הוכיח סביבה מוצלחת איונים10,11,12,13, 14. אולם, איון intraportal אינפוזיה הפך תאריך היעד ברירה קליניים באופן חלקי הפשטות היחסית של ההליך, מוקדם הצלחה של בעל חיים מודלים6. גם, בין השאר, התשלילים קשורה עם זה באתר, לאבדן מסיבי במיוחד איון מוקדם, היו פחות מובנים ופחות המגביל בימים הראשונים של השתלת איון ניסיוני כשדה התבגר. עדכנית יותר ראיות משכנעות המציינת כי איון קרישה תוך-כלית אינפוזיה רחוק אידיאלי, omentum יש מחדש המתעוררים כאתר ערך פוטנציאלי עבור השתלת תא.
Omentum (בדמות נרתיק עם פגיעה) מציע יתרונות יחסיים כבד15,ה-16. זה vascularized היטב וניתן להגיע אליו בקלות. זה מאפשר אחזור שתל (במקרה הצורך) ו/או ביופסיה. תקופת איסכמי שחוו את איונים מופחתת בהשוואה הכבד, omentum יכולה לקבל יחסית. גושים גדולים איון אשר אינו אפשרי intraportally, שם עלייה בלחץ פורטל יכול לגרום לסיבוכים.
דגם העכבר syngeneic של השתלת שימש את הפרוטוקול נבדק במחקר, העסקת עכברים זכרים C57BL/6 בין 6-8 שבועות עם משקל הגוף של 20 – 25 ג'י איון נמענים היו שניתנו סוכרת עם זריקה אחת של streptozotocin עם מנה של 250 ip מ"ג/ק"ג. תנאי הגיוס של סוכרת יכול להיחשב מוצלח אם רמת הסוכר בדם של העכבר גדול מ- 24 mmol/L 48 שעות לאחר ההזרקה ונותרה שמעל רמה זו למשך תקופה מינימלית של 5 ימים.
Syngeneic איים קטנים היו מבודדים מן הלבלב של תורמים מתאימים-גיל בעקבות שיטות שפורסמו בעבר עם מספר שינויים. בקצרה, collagenase היה מוזרק לתוך כיס המרה במקום המרה. זה נעשה כמו שיפור כדי להקל על הקלות של הזרקה. Collagenase אינפוזיה היה ואחריו דגירה, הפרעה רקמות, ההפרדה הדרגתיות צפיפות יד קטיף כדי לקבל איונים טהור. איונים היו תרבותי בין לילה בינוני CMRL-1066 בתוספת 10% לא פעיל חום העובר שור סרום (FBS) ב- T175 מבחנות ב 37 מעלות צלזיוס, מתחת לגיל 95% אוויר - 5% CO2 לפני ההשתלה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1233">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Equipment</td>
			<td style="width:385px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:237px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">5 inch (12-13 cm) Scissors</td>
			<td>RWD Life Science&#160;</td>
			<td>S12030-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Fine Forceps</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>F11010-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Small wound clips</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>R33003-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Acutenaculum</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>F31044-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">2 pair tissue forceps</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>&#160;F13023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">4-0 Suture with needle</td>
			<td style="width:385px;">Chenghe, China</td>
			<td>17094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">200&#956;l Pipette and tips</td>
			<td style="width:385px;">Gilson</td>
			<td>PN11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:385px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">razor blade</td>
			<td style="width:385px;">Philips</td>
			<td>HC1099/15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Material and animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Pentobarbital Sodium</td>
			<td style="width:385px;">Sigmaaldrich.com</td>
			<td>P3761</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Hydrogel&#160;</td>
			<td style="width:385px;">bdbiosciences.com</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Fibrin-Thrombin Hydrogel&#160;</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>1501250</td>
			<td>Components clot when mixed</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:385px;">Yingniu medical, Anhui, China</td>
			<td>23170608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Iodophor</td>
			<td style="width:385px;">Lierkang medical technology, Shangdong, China</td>
			<td>170521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Normal saline</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>2B1324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Cephalosporin</td>
			<td style="width:385px;">Lukang medical, Shangdong, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Cefazolin</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>2G3508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">lubricant eye ointment</td>
			<td>Major Pharmaceuticals</td>
			<td>203964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">streptozotocin</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">collagenase Type V</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">CMRL-1066 media</td>
			<td>celltrans, Wenzhou, China</td>
			<td>X018D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">histopaque</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>10771</td>
			<td style="width:237px;">density gradient</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">PE50 tubing</td>
			<td>Braintreesci.com</td>
			<td>PE50 100 FT</td>
			<td>Polyethylene .023&#34; x .038</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Calcein AM</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>C1359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Propidium iodide</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">optimal cutting temperature compound (OCT)</td>
			<td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td>
			<td>4583</td>
			<td>embedding medium</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td>
			<td>8138S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.&#160;</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">C57Bl/6 Mice</td>
			<td style="width:385px;">Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">T175 flasks</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">1.5mL Snap-top tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for islet transplantation to the omentum in mouse

השתלת איון הוצע להיות טיפול פוטנציאלי עבור סוכרת מסוג 1. ראיות משכנעות האחרונות מצביע על כך איון קרישה תוך-כלית אינפוזיה הוא רחוק מלהיות אידיאלי, ולכן, omentum הוא מחדש המתעוררים כאתר ערך פוטנציאלי עבור השתלת איון. הניסוי הזה דורש את ניתוקה של איים קטנים באיכות גבוהה ההשתלה של איונים לנמענים סוכרתית. השתלת כדי omentum דורש צעדים כירורגי ניתן כדאי להדגים באופן חזותי. . הנה, השלבים המפורטים עבור הליך זה מוצגים. שתי שיטות של ערבוב של איים מבודדים עם הידרוג לפני הצבת את התערובת לתוך המשקה עם פגיעה בעכברים סוכרתיים מתוארים כאן. Hydrogels שונים משמשים את התנאים שונים. רמות הגלוקוז בדם של העכבר סוכרתיים מקבלי syngeneic איים קטנים ב- omentum נוטרו עד 35 ימים. כמה חיות הוקרבו לאחר 14 ימים לבצע ניתוח חיסונית-פתולוגיה. גישה זו השתלת קליניים יכול לשמש הראשוניים שהובילו תרגום השתלת קליניים.

המדינה post-digestive של הלבלב מוצג איור 1A. איונים מטוהרים מוצגים איור 1B. Dithizone מכתים ובדיקות הכדאיות של איים מוצגים באיור2. הצעדים העיקריים של השתלת איון כדי omentum מוצגים באיור3. רמות הגלוקוז בדם של הנמענים לאחר ההש...

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse at JoVE.com

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

שיטת השתלת איון כדי Omentum העכבר

שיטה השתלת עם פגיעה של איים ב עכבר הוא הציג. איים מבודדים מעורבבים עם הידרוג, התערובת ימוקם לתיק עם פגיעה של עכבר סוכרתית. לאחר מכן, הסוכר מנוטר, מבוצע ניתוח חיסונית-פתולוגיה.

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום השתלת איון כגון השתלת איון לאומנטום. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות לכיוון טיפול בסוכרת מסוג I מכיוון שהומנטום מתגלה מחדש כאתר ערך פוטנציאלי להשתלת איון. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי איים מבודדים מעורבבים עם הידרוג'ל ואת התערובת ממוקמת לתוך כיס omentum של עכבר סוכרתי.התחל בהכנת שדה אספטי באזור הניתוחי עם חומר סטרילי כגון וילונות וכלים חד פעמיים. מניחים את המכשירים הכירורגיים הסטריליים בשדה האסטרטיק. בחר את איי התורם תחת הסטריאו-מיקרוסקופ באמצעות קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר.עבור כל בעל חיים, לאסוף 450 כדי 500 איונים ולהעביר צינור סטרילי 1.5 מיליליטר הצמד העליון עם 100 microlitres של CMRL 10 66 בינוני. מניחים את הצינור על קרח עד מוכן להשתלה. ברגע שהאיונים נקצרו, הפשיר מטריצת קרום מרתף הידרוג'ל על קרח.שקל ותייג את כל עכברי הנמען הסוכרתי. לאחר הרדמה של העכבר הראשון על פי פרוטוקול שאושר על ידי המוסד, לבדוק את עומק ההרדמה על ידי מתן קמצוץ בוהן. אם אין רפלקס נסיגה, רמת ההרדמה נכונה לניתוח.לנהל משחה וטרינר לעיניים כדי למנוע יובש בזמן בהרדמה. ספוגית הבטן עם 70% אתנול. ואז לגלח את השיער מאתר הניתוח.מכסים את החיה עם וילון סטרילי, ולחטא את האזור עם קרצוף יוד. לאחר שימוש במספריים עיניים כדי ליצור חתך של 4 עד 5 ס"מ לאורך קו האמצע של הבטן, להזיז את המעיים לצד שמאל לכסות עם גזה ספוגה מלוחים כדי למנוע התייבשות במהלך הליך הניתוח. לאחר מכן השתמש במטליות כותנה כדי לחשוף את הקיבה באופן מלא ולאתר את האומנטום מתחת לקיבה.בשלב זה, הידרוג'ל צריך להיות מופשר לחלוטין. לסובב את הצינור המכיל את איונים ב 200 פעמים g במשך 30 שניות. לאחר הספין, הסר את העל-טבעי.לאחר מכן שאפו 50 מיקרוליטרים של ההידרוגל הוסיפו אותו לצינור המכיל את האיים ומערבבים בעדינות הימנעות מהיווצרות בועות. לאחר מכן השתמש בשני זוגות מדפים כדי להרים את הקצוות של omentum בעדינות להעלות אותו כדי ליצור חריץ בין קיר הקיבה לבין המעיים. בשלב זה של הניתוח, אדם שני יש צורך לשוכך את תערובת הידרוג'ל איון resuspended עם קצה פיפטה 200 מיקרוליטר ולספק אותו לתוך החריץ.ודא כי התערובת ממוקמת היטב החריץ על ידי בעדינות להעלות או להוריד את הקצוות של omentum. משלימים את מיקום התערובת תוך שלוש דקות לפני שההידרוגל מתגבש. לאחר ערכות הידרוג'ל, מקפלים את האומנטום כדי לכסות את השתל.האומנטום ידבק בקיר הקיבה שמסביב כשההידרוגל יתגבש. כאשר הידרוג'ל הוא מוצק לחלוטין, להשתמש במטליות כותנה כדי למקם מחדש את המעיים בחלל הבטן דואג לא לגעת באתר של השתלה. הבא לוותר על 200 microliters של אנטיביוטיקה מתאימה לתוך חלל הבטן כדי למנוע זיהום.ואז להשתמש 4 O תפר כדי לסגור את הבטן. בדרך כלל אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו כי האתרים של omentum בעכברים הוא קטן ומעייף להעריך. מניחים את העכבר לתוך כלוב התאוששות מחומם עד שהוא חוזר באופן מלא שיקום חיצוני.למחרת וכל יום לאחר מכן במשך שבוע אחד, להזריק אנטיביוטיקה כמו טיפול מונע לאחר הניתוח. כמו כן, למדוד את רמת הגלוקוז בדם שאינו בצום מדגם דם וריד הזנב באמצעות מד גלוקוז בדם פעם ביום לאחר ההשתלה. בעת השתלה לאומנטום, השתלת איון עשויה להיות פונקציה מאוחרת ולא להגיע לרמת גלוקוז נורמלית לחלוטין בדם במשך שבועיים עד שלושה שבועות.הרקמה המושתלת אוחזרה מהעכבר המתת דם 14 יום לאחר ההשתלה. כאן השתל נראה כאשכול של גרעינים לאחר הכתמת DAPI. הפונקציונליות של הרקמה המושתלת מתגלה על ידי כתמי שפעת חיסונית בנוגדנים נגד אינסולין.כתמי H&E מראים את הרקמות המושתלות מוקפות באדיפוזיטים של האומנטום. לאחר השליטה, טכניקה זו יכולה להיעשות בשעה אחת אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור גם את אומנטום העכבר הוא שביר.בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו בשימוש בתיכון שונים, ביצועי MB בכל זה יענה על שאלות מסוימות כמו התפשטות של איון vascuolization ואת הביצועים. לאחר התפתחות זו, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בהשתלה שלהם לחקור את הטיפול בסוכרת מסוג I ביותר מקטע אחד. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך להשתיל את איונים כדי omentum בעכבר.

Research

JoVE Journal

Biology

Tracheotomy: A Method for Transplantation of Stem Cells to the Lung

הקנה: שיטה להשתלת בתאי גזע כדי ריאות

Lung disease is a leading cause of death and likely to become an epidemic given increases in pollution and smoking worldwide. Advances in stem cell ...

Murine Pancreatic Islet Isolation

הלבלב Murine איילט בידוד

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Murine נוהל השתלת כליה

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Mouse Islet of Langerhans Isolation using a Combination of Purified Collagenase and Neutral Protease

העכבר איילט בידוד נגרהנס באמצעות שילוב של collagenase המטוהר ופרוטאז הניטראלי

The interrogation of beta cell gene expression and function in vitro has squarely shifted over the years from the study of rodent tumorigenic cell lines ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

רומן<em&gt; Ex vivo</em&gt; שיטת תרבות ללב העכבר העוברית

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

שיטה לבידוד עכבר הלבלב איילט וקביעת תאית cAMP

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

בזמן אמת המבוסס על הבדיקה PCR גישות למדידת כמותית של מיקרו-רנ&quot;א

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

בידוד סינון של חומצות גרעין: שיטת הפקת DNA פשוטה ומהירה

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...