Name: a method for islet transplantation to the omentum in mouse
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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いくつかのこの作品の作家は一部国立キー R & D 中国プログラム (2017YFC1103704)、三明プロジェクト深圳 (SZSM201412020)、高レベル医療分野建設の深セン (2016031638) のための基金で医学部からの補助金によってサポートされていた深セン科学技術 (JCJY20160229204849975、GJHZ20170314171357556、JCYJ20160425110110658)、健康と家族計画委員会 (SZXJ2017021) の深圳財団の基金。

本研究で使用されるすべてのマウスは、医療動物センターの広東省から得られました。動物の使用は、倫理審査委員会の深セン第二人民病院、動物福祉の原則によって承認されました。
1 大綱膵島移植
注: このプロトコルには、達成するために 2 人が必要です。
<ol><li>表 1に記載されている手術の材料を組み立てます。カーテンなど使?...

<ol>
	<li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035.">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li><li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes.">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Nilsson, B., Ekdahl, K. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes:+recent+advances+and+future+challenges.">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211 (2014).</li><li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pancreatic+islet+transplantation.">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li><li>Cantarelli, E., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+transplantation+sites+for+pancreatic+islet+grafts.">Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts.</a> Current diabetes reports. 11 (5), 364 (2011).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+for+preclinical+islet+transplantation:+no+model+fits+all+(research+purposes).">Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes).</a> Islets. 5 (2), 79-86 (2013).</li><li>Beli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erratum+to:+CX3CR1+deficiency+accelerates+the+development+of+retinopathy+in+a+rodent+model+of+type+1+diabetes.">Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes.</a> J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).</li><li>Hafner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Patterns+of+Retinal+Oxygen+Saturation+and+Microvascular+Hemodynamic+Parameters+Preceding+Retinopathy+in+Patients+With+Type+II+Diabetes.">Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).</li><li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum.">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nature Biotechnology. 35 (1), 82017 (2017).</li><li>Voigt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+Progression+Rate+of+Diabetic+Retinopathy+in+Type+2+Diabetes+Patients+in+Correlation+with+the+Duration+of+Diabetes.">Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).</li><li>Baidal, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+of+an+Intraabdominal+Endocrine+Pancreas.">Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas.</a> New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).</li><li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets.">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li><li>Berman, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+the+endocrine+pancreas:+intraomental+islet+transplantation+within+a+biologic+resorbable+scaffold.">Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).</li><li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+islet+transplantation:+the+impact+of+the+liver+micro-environment.">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li><li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets.">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li><li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes.">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li></ol>

門脈を介して肝膵島移植はヒトでは、最もよく使われる膵島移植の方法がまだ門脈血栓症と肝脂肪変性17など効率と安全性の懸念があります。最近の研究では、大網肝臓臨床翻訳12,14,18,19の前に実施するより多くの研究ニーズに適切な代わりであるかもしれないことを示します。...

国際糖尿病連合 (IDF) によると、糖尿病は現在、203515 億 9200 万人に投影された増加との 3 億 8200 万人を影響します。両方の同種および異種膵島移植、全身性の免疫抑制療法が必要です。免疫のない免疫拒絶反応は移植の損失の2の主要な原因です。インスタントの血液を介した炎症反応 (IBMIR)3,4による移植膵島の損失の重大な問題もあります。ただし、同系のような免疫応答の不在でもまたは自動移植モデル、門脈経由で肝臓に移植する膵島細胞が炎症のためおよび/または貧しい人々 の血液などの好ましくない環境条件に失われました。減らされた酸素や栄養素5,6を供給します。その結果、長期的な代謝機能を確保するために小島が多いほど生着7を減らす最初のセル損失を補うために必要です。
膵島の生着を最適化しようとして、いくつかの代替解剖学的サイト実験を行った結果のよう臨床的に有望なまだ決定的でない8。簡単かつ安全なアクセスを提供するいくつかの代替サイトに対し (e.g皮膚、腎被膜、胃粘膜、眼の前房内) またはより大きい島の大衆のためのより広い面 (e.g。、腹腔内)、生存および生理。移植膵島の代謝のパフォーマンスはまだ限られている、懸念9を維持します。膵島の生着のためのより適切なサイトの検索が進行中です。
大網は膵島移植の早い開発の調査を行い, 島10、11,12,13、成功の環境を証明する多くの解剖学的サイト 14。ただし、膵島の門脈内注入になった臨床選択期限一部プロシージャの相対的なシンプルさと動物の初期の成功モデル6。また、一部では、ネガは、これに関連するサイト、特に大規模な早期膵島の損失、フィールドとして実験的膵島移植の初期の頃に以下の理解なり拘束された成熟します。膵島の血管内注入がから遠いことを示す最近の説得力のある証拠と理想的な大網は細胞移植の可能性がある貴重なサイトとして再浮上。
(大網ポーチの形) で大網肝15,16上の相対的な利点を提供しています。血管に富んだ、簡単にアクセス可能です。(必要に応じて) 移植や生検の検索をことができます。小島によって経験される虚血期間は肝臓に比べて減り、大網が不可能である門脈的、門脈圧の上昇、大きなアイレット大衆は合併症を引き起こすことができる比較的受け入れることができます。
20-25 g. 小島受信者がレンダリングされた 250 の線量とストレプトゾトシンの単回投与で糖尿病の体重と生後 6-8 週間の間 c57bl/6 男性マウスを用いた研究でテストされたプロトコルに使用された移植の同系マウス モデルmg/kg の ip。糖尿病の誘導は成功とマウスの血糖値は注射後 24 ミリ モル/L 48 h を超えています、上位 5 日の最低レベルのまま。
同系の小島は、以下のいくつかの変更以前に発行された方法年齢一致ドナーの膵臓から分離しました。簡単に言えば、コラゲナーゼは胆管ではなく胆嚢に注入されました。これは、注入の容易さへの改善として行われていた。コラゲナーゼ注入された培養、組織破壊、密度勾配分離に続いて、純粋な島を取得する手摘み。小島未満 10% 熱不活化の牛胎児血清 (FBS) T175 37 ° C でフラスコを添加した CMRL 1066 培地で一晩培養移植前に 95% の空気-5% CO2 。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1233">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Equipment</td>
			<td style="width:385px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:237px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">5 inch (12-13 cm) Scissors</td>
			<td>RWD Life Science&#160;</td>
			<td>S12030-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Fine Forceps</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>F11010-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Small wound clips</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>R33003-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Acutenaculum</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>F31044-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">2 pair tissue forceps</td>
			<td style="width:385px;">RWD Life Science</td>
			<td>&#160;F13023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">4-0 Suture with needle</td>
			<td style="width:385px;">Chenghe, China</td>
			<td>17094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">200&#956;l Pipette and tips</td>
			<td style="width:385px;">Gilson</td>
			<td>PN11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:385px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>33391713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">razor blade</td>
			<td style="width:385px;">Philips</td>
			<td>HC1099/15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Material and animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Pentobarbital Sodium</td>
			<td style="width:385px;">Sigmaaldrich.com</td>
			<td>P3761</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Hydrogel&#160;</td>
			<td style="width:385px;">bdbiosciences.com</td>
			<td>356234</td>
			<td>Basement Membrane Matrix</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Fibrin-Thrombin Hydrogel&#160;</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>1501250</td>
			<td>Components clot when mixed</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:385px;">Yingniu medical, Anhui, China</td>
			<td>23170608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Iodophor</td>
			<td style="width:385px;">Lierkang medical technology, Shangdong, China</td>
			<td>170521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Normal saline</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>2B1324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Cephalosporin</td>
			<td style="width:385px;">Lukang medical, Shangdong, China</td>
			<td>150303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Cefazolin</td>
			<td style="width:385px;">Baxter.com</td>
			<td>2G3508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">lubricant eye ointment</td>
			<td>Major Pharmaceuticals</td>
			<td>203964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">streptozotocin</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">collagenase Type V</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>C9262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">CMRL-1066 media</td>
			<td>celltrans, Wenzhou, China</td>
			<td>X018D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">histopaque</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>10771</td>
			<td style="width:237px;">density gradient</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">PE50 tubing</td>
			<td>Braintreesci.com</td>
			<td>PE50 100 FT</td>
			<td>Polyethylene .023&#34; x .038</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Calcein AM</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>C1359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">Propidium iodide</td>
			<td>Sigmaaldrich.com</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">optimal cutting temperature compound (OCT)</td>
			<td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td>
			<td>4583</td>
			<td>embedding medium</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">insulin antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td>
			<td>8138S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">hematoxylin staining media</td>
			<td>Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923</td>
			<td>14166S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">eosin staining media</td>
			<td>Beyotime Biotech, China</td>
			<td>C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.&#160;</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:476px;">C57Bl/6 Mice</td>
			<td style="width:385px;">Medical Animal Center of Guangdong Province</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>SH30084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">T175 flasks</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">1.5mL Snap-top tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for islet transplantation to the omentum in mouse

膵島移植は、1 型糖尿病の潜在的な治療であると提案されています。最近の説得力のある証拠は、理想的な膵島の血管内注入を示しますので、大網は膵島移植の可能性がある貴重なサイトとして再浮上。この実験では、高品質の膵島の分離と糖尿病の受信者に膵島移植を必要があります。大網への移植には、視覚的によりよく示すことができる手術の手順が必要です。ここでは、このプロシージャの詳細な手順が掲載されています。糖尿病マウスの大網のポーチに混合物を配置する前にゲルと膵島の混合の 2 つのメソッドは以下のとおりです。別のゲルは、さまざまな条件に使用されます。大網の同系の島の受信者を糖尿病マウスの血糖値は 35 日間の監視されました。免疫組織化学的解析を実行する 14 日後は、いくつかの動物が犠牲になった。この前臨床移植アプローチは、臨床移植への翻訳に至るまで予備のデータとして使用できます。

膵臓の post-digestive の状態は、図 1 aに表示されます。精製小島は図 1 bに示します。ジチゾン染色と小島の生存率試験は、図 2のとおりです。大網に膵島移植の主な手順は、図 3のとおりです。大網移植後受信者の血糖値は、図 4のとおりです。移植後の組織?...

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A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

マウスで大網に膵島移植法

大網移植マウスの島のための方法を紹介します。膵島は、ハイドロゲルと混合され、混合物は糖尿病マウスの大網のポーチに配置されます。血糖値を監視し、免疫組織化学的解析を行っています。

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

この方法は、大腸への小海口移植などの小地移植分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の意味は、大腸が小地移植の潜在的価値部位として再出現するため、I型糖尿病の治療に及ぶ。この技術の主な利点は、単離された小島がヒドロゲルと混合され、混合物が糖尿病マウスの大腸パウチに入れられるということです。まず、カーテンや使い捨て物などの無菌材料を含む外科領域で無菌場を準備します。無菌の分野で殺菌された外科器具を置く。200マイクロリットルのピペットチップを使用して、ステレオ顕微鏡の下でドナー小島を選びます。動物ごとに、450~500個の小島を回収し、100マイクロリットルのCMRL 10 66培地を含む無菌1.5ミリリットルスナップトップチューブに移します。移植の準備ができるまでチューブを氷の上に置きます。小島が収穫されたら、氷の上に基体膜マトリックスヒドロゲルを解凍します。すべての糖尿病レシピエントマウスの重量を量り、タグ付けします。最初のマウスを制度的に承認されたプロトコルに従って麻酔した後、つま先ピンチを投与して麻酔の深さをテストする。離脱反射がない場合、麻酔のレベルは手術に適しています。麻酔下で乾燥を防ぐために、目に獣医軟膏を投与します。腹部を70%エタノールでスワブする。その後、手術部位から髪を剃ります。動物を滅菌ドレープで覆い、ヨウ素スクラブで地域を消毒します。眼科用はさみを使用して腹部の正中線に沿って4〜5センチメートルの切開を作成した後、腸を左側に移動し、手術中の脱水を防ぐために生理食前の浸漬ガーゼで覆います。その後、綿棒を使用して胃を完全に露出させ、胃の下の大腸を見つけます。この時点で、ヒドロゲルは完全に解凍する必要があります。200回gで30秒間、小島を含むチューブを回転させます。スピン後、上清を取り除く。その後、50マイクロリットルのヒドロゲルを吸引し、小島を含むチューブに加え、気泡の形成を避けて軽く混ぜます。次に、2組の鉗子を使用して大腸の縁を拾い、それを穏やかに上げて胃壁と腸の間に溝を形成する。手術のこの時点で、200マイクロリットルピペットチップで再懸濁されたイレットヒドロゲル混合物を吸引し、溝に送達するために2人目が必要です。大腸の端を穏やかに上げたり下げたりして、混合物が溝に十分に配置されていることを確認します。ヒドロゲルが固化する前に、混合物の位置を3分以内に完了します。ヒドロゲルセットの後、大腸を折り畳んで移植片を覆う。ヒドロゲルが固化するにつれて、大腸は周囲の胃壁に付着する。ヒドロゲルが完全に固まったら、綿棒を使って腹腔内の腸を再配置し、移植部位に触れないように注意してください。次に、感染を防ぐために適切な抗生物質を200マイクロリットルの適切な抗生物質を腹腔に分配する。その後、4つの縫合糸を使用して腹部を閉じます。一般的に、この方法に新しい個人は、マウスの大腸の部位が小さく、評価するのが疲れているため、苦労します。マウスを温めた回復ケージに入れ、外部の債務を完全に取り戻します。翌日とその後の毎日1週間、手術後の予防として抗生物質を注射する。また、移植後1日1回、血糖値計を用いて尾静脈血液検体から非空腹時血糖値を測定する。大腸に移植する場合、小海門は機能が遅れ、2~3週間は完全に正常な血糖値に達しないことがある。移植した組織を移植後14日後に安楽死させたマウスから取り出した。ここで移植片は、DAPI染色後の核のクラスターとして見える。移植組織の機能は、抗インスリン抗体による免疫蛍光染色によって明らかにされる。H&E染色は、大腸の染色体に囲まれた移植組織を示す。一度習得すると、このテクニックは、それが正常に実行されている場合、1時間で行うことができます。この手順を試みる間、マウスの大腸が壊れやすいのも覚えておくことが重要です。この手順に従って、異なる高校で使用されるような他の方法は、すべての中でMBのパフォーマンスは、血管化中の小石の広がりや性能のような特定の質問に答えるでしょう。この開発の後、この技術は、彼らの研究者と移植の研究者が複数の抜粋でI型糖尿病の治療を探求する道を開きました。このビデオを見た後、あなたはマウスで大嚢に小島を移植する方法をよく理解している必要があります。

Research

JoVE Journal

Biology

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