Name: formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling
Uploaded: 2018-03-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

इस अध्ययन को चेक साइंस फाउंडेशन (GACR, ग्रांट 17-12816S) ने सपोर्ट किया था ।

सभी पशु प्रयोगों की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए विनियमों के अनुसार प्रदर्शन किया गया (311/1997, कृषि मंत्रालय, चेक गणराज्य), जो हेलसिंकी की घोषणा के अनुपालन में है.
1. यकृत माइक्रोसोमल ...

इस पत्र में, यह एक व्यापक रूप से सुलभ पद्धति का प्रदर्शन किया है रसायनों की शक्ति का अध्ययन करने के लिए चयापचय मध्यवर्ती के लिए सक्रिय हो, आबंध डीएनए adducts की पीढ़ी में जिसके परिणामस्वरूप । यह एक महत्वपूर्?...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0032.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamylalcohol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A156.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Penta</td>
			<td>70390-11000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf thymus DNA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADP+</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADPH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate dehydrogenase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supersomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>456211, 456203, 456220, 456204, 456210, 456222, 456219, 456212, 456206, 456207, 456202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human liver microsomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>452172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>77662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Hydroxypyrimidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H56800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>179272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micrococcal nuclease from Staphylococcus aureus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spleen phosphodiesterase from calf spleen, Type II</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease P1 from Penicillium citrinum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N8630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>163791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiotreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spermidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrabutylammonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-Butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4-polynucleotide kinase</td>
			<td>USB Corp</td>
			<td>70031Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[&#947;-32P]ATP</td>
			<td>Hartman Analytic GmbH</td>
			<td>FP-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEI-impregnated cellulose TLC plates</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>801053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Packard Instant Imager A202400</td>
			<td>Packard</td>
			<td>G120337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ellipticine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>285730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Nitrobenzanthrone</td>
			<td colspan="2">prepared (synthesized) as shown in ref. 40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling

आबंध डीएनए adducts कैंसर शक्ति के साथ रसायनों या दवाओं द्वारा गठित यलो प्रक्रियाओं के दीक्षा चरण में सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से एक के रूप में ंयाय कर रहे हैं । इस आबंध बाध्यकारी है, जो tumorigenesis का कारण माना जाता है, अब रासायनिक कैंसरजनन की एक केंद्रीय हठधर्मिता के रूप में मूल्यांकन किया है । यहां, तरीके cytochrome P450 द्वारा catalyzed प्रतिक्रियाओं और अतिरिक्त रूपांतरण एंजाइमों को अपने सक्रियण के लिए रसायनों या दवाओं की शक्ति की जांच करने के लिए चयापचयों इन डीएनए adducts बनाने को रोजगार वर्णित हैं । प्रक्रियाओं सेलुलर भागों के अलगाव का वर्णन प्रस्तुत कर रहे हैं (माइक्रोसोमल और cytochromes P450 या अन्य के साथ cytosolic नमूने रूपांतरण एंजाइमों, अन्य रूपांतरण एंजाइमों, अर्थात, peroxidases, NADPH: cytochrome P450 oxidoreductase, णड (पृ) H:quinone oxidoreductase, या xanthine oxidase) । इसके अलावा, तरीके वर्णित है कि इन एंजाइमों द्वारा विश्लेषण रसायनों के चयापचय सक्रियण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और साथ ही डीएनए के अलगाव के लिए उन । इसके अलावा, उपयुक्त का पता लगाने और रासायनिक/दवा-व्युत्पंन डीएनए adducts, यानी, 32पी-postlabeling तकनीक और रेडियोधर्मी-लेबल विश्लेषण रसायनों के रोजगार के विभिंन संशोधनों, विस्तार से दिखाया ।

रसायनों की शक्ति की जांच करने के लिए एंजाइम-catalyzed सक्रियण (जैसे, P450, peroxidase, रिडक्टेस) के उपयोग के लिए यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करना (यलो/ड्रग्स) उनके metabolized में जिसके परिणामस्वरूप मध्यवर्त...

Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

आबंध डीएनए Adducts के गठन से Enzymatically आपन यलो और ड्रग्स इन विट्रो में और उनके निर्धारण के द्वारा 32पी-postlabeling

पर्यावरणीय रसायनों और दवाओं की शक्ति का मूल्यांकन, enzymatically आबंध डीएनए adducts पैदा करने के लिए सक्रिय किया जा करने के लिए, कैंसर और उसके उपचार के विकास में एक महत्वपूर्ण क्षेत्र है । विधि यौगिक सक्रियण के लिए डीएनए adducts, साथ ही उनके पता लगाने और ठहराव के लिए तकनीक के रूप में वर्णित हैं ।

Covalent DNA adducts formed by chemicals or drugs with carcinogenic potency are judged as one of the most important factors in the initiation phase of ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Covalent Binding of Antibodies to Cellulose Paper Discs and Their Applications in Naked-eye Colorimetric Immunoassays

सहसंयोजक सेल्यूलोज कागज डिस्क और नग्न आंखों की Colorimetric Immunoassays में अपने आवेदन के लिए एंटीबॉडी का बंधन

This report presents two methods for the covalent immobilization of capture antibodies on cellulose filter paper grade No. 1 (medium-flow filter paper) ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

Enzymatically सक्रिय जी -4 Resolvase1 की शुद्धि के लिए एक जी quadruplex डीएनए आत्मीयता दृष्टिकोण

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

स्मार्टफ़ोन द्वारा डीएनए फ्रेगमेंट पृथक्करण का वास्तविक समय ट्रैकिंग

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

अत्यधिक संवेदनशील और मात्रात्मक पता लगाने के प्रोटीन और उनके Isoforms द्वारा केशिका Isoelectric ध्यान केंद्रित विधि

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

MicroRNA के साथ देशी Lipoprotein कणों का संवर्धन और उनके निरपेक्ष के बाद दृढ़ संकल्प/

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

डीएनए द्वारा डीएनए अनुक्रम मान्यता उच्च-Throughput प्राइमाज़ प्रोफ़ेशनल का उपयोग कर

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

एमीलॉयड फाइब्रिल्स द्वारा मस्तिष्क माइटोकोंड्रिया के साथ और झिल्ली permeabilization के साथ बातचीत

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

मास फोटोमेट्री द्वारा एंटीबॉडी-एंटीजन आत्मीयता का तेजी से निर्धारण

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

एक एंजाइम का क्रिस्टलीकरण और संरचनात्मक निर्धारण: एक बहुमुखी माइक्रोफ्लुइडिक चिप में सीरियल क्रिस्टलोग्राफी द्वारा सब्सट्रेट कॉम्प्लेक्स

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-डीएनए Glycosylase मैट्रिक्स द्वारा परख-सहायता प्राप्त लेजर Desorption / Ionization समय की उड़ान मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...