Name: formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling
Uploaded: 2018-03-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Denne studien ble støttet av tsjekkiske Science Foundation (GACR, gi 17-12816S).

Alle dyreforsøk ble utført i henhold til og bruk av forsøksdyr (311/1997, Landbruksdepartementet, Tsjekkia), som er i samsvar med erklæringen i Helsinki.
1. isolering av Hepatic mikrosomale og Cytosolic fraksjoner
<ol><li>Forberede leveren subcellular brøker (microsomes rik på P450 enzymer og cytosols rik på reductases eller løselig peroxidases) fra rotter ved enkel differensial sentrifugering (105 000 x g). Merk: Det pellets og nedbryting tas som microsomes og cytosols, ...

I denne utredningen er det demonstrert en allment tilgjengelig metode for å studere styrken av kjemikalier skal bioactivated til metabolske mellomprodukter, som resulterer i generasjon av kovalente DNA-addukter. Dette er et viktig spørsmål, fordi evaluering av styrken på miljømessige kjemikalier eller medisiner av enzymatisk aktivisering å metabolitter generere kovalente DNA-addukter er et viktig felt i utviklingen av kreft og dens behandling. Endring av DNA av kreftfremkallende vurdert årsaken til tumor utvikling...

Metabolismen av xenobiotics (miljømessige kjemikalier eller medisiner) oppstår i to faser1. Faser I og II mål å gjengi den opprinnelig hydrofobe (ikke vannløselige) forbindelser mer hydrofile (vannløselige), dermed gjør dem lett excretable via urin, avføring eller svette. Fase I (functionalization) reaksjoner inkluderer oksidasjon, reduksjon, og hydroksylering katalysert av enzymer som cytochrome P450s (P450s, CYPs), peroxidases (dvs., cyclooxygenase, COX), aldo-keto reductases (AKRs), og mikrosomale Flavin inneholder monooxygenases (FMOs). Fase I omfatter også reduksjon reaksjoner, formidlet av en rekke reductases dvs mikrosomale NADPH: cytochrome P450 reduktase (POR) og cytosolic NAD (P) H:quinone oxidoreductase (NQO1), xantin oxidase (XO) og aldehyd oxidase (AO)1 . I den andre fasen (bøyning), de funksjonelle gruppene som fulgte i fase er jeg pleide å bøy små polare molekyler å ytterligere øke polaritet. Eksempler på enzymer anses å delta i reaksjonen av fase II inkluderer sulfotransferases (SULTs), N, O- acetyltransferases (NAT), methyltransferases som catechol -O- methyltransferase (COMT), glutation S- transferases (GSTs) og uridine diphosphate glucuronosyltransferases (UGTs)1. Klassifisering av enzymer i fase I eller II er, ikke rigid, og noen enzymer kan kanskje grupperes i hver kategori.
P450 enzymer (EC 1.14.14.1) er måltema inneholder proteiner i ulike organismer, som deltar i biotransformation av mange kjemikalier, utløse deres konvertering3,4. P450 enzymer katalysere hydroksylering av mange underlag, med en reaksjon der en atom av dioxygen føres inn molekyl av xenobiotics, mens andre atom oksygen er redusert til skjemaet vann reaksjon som krever to elektroner [ligningen (1 )]3,4:
RH + O2 + NADPH + H+ → ROH + H2O + NADP+ (1)
P450 enzymer lokalisert i endoplasmatiske retikulum membranen av pattedyrceller (mikrosomale P450 systemer) er medlemmer av multienzyme monooxygenase system, som inneholder ytterligere NADPH: cytochrome P450 reduktase (POR) og cytochrome b5 , underlaget av enzymet betegnet som NADH: cytochrome b5 reduktase. En allment aksepterte teori hypothesizes at giveren av to elektroner trengs for P450 er NADPH/POR systemet. Likevel kan cytochrome b5 også fungere som en donor av elektroner for P450, nemlig som giver av elektron å redusere P450 under andre reduksjon av syklusen reaksjon der den fungerer sammen med NADH: cytochrome b5 reduktase2,3,4.
Pattedyr utnytte ulike P450 enzymer (f.eks enzymer familier 5, 8, 11, 17, 19, 21, 24, 26 og 27) for syntese av verdifulle endogene forbindelser, som steroider, og bruke dem til katabolisme naturprodukter2,3 . Andre CYP pattedyr enzymer, som menneskelige CYP1A2, 2C 9, 2C 19, 2D 6 og 3A4, metabolismer eksogene kjemikalier som brukes som narkotika. 5 , 6 viktigste enzymer utløse metabolismen av narkotika er CYPs av 3A og, spesielt CYP3A4. Konverteringer av xenobiotics, for eksempel pro-kreftfremkallende og pro-giftstoffer, er formidlet av menneskelige CYP1A1, 1A2, 1B1, 2A6, 2E1 og 3A42,5. De fleste CYPS disse finnes i leveren (unntatt CYP1A1 og 1B1). Likevel, CYPs er også uttrykt i flere extrahepatic organer. Slike P450s kan være av stor betydning, hovedsakelig når delta de i bioactivation metabolismen av kjemikalier (narkotika) til reaktive mellomprodukter i disse organene7. Ulike P450s er indusert av flere stoffer som er deres underlag, men dette ikke er nødvendigvis tilfelle.
Mange P450 enzymer spiller en rolle i kjemikalier (legemiddel) toksisitet. De kan konvertere xenobiotics ikke bare til sine avrusning metabolitter, men også aktivere dem til reaktive arter, som endre endogene makromolekyler som i tillegg viser ulike biologiske egenskaper, vanligvis forårsaker giftigheten. DNA, lipider og proteiner kan være mål for endringen av reaktive elektrofiler og radikale generert fra aktivert kjemikalier. I tilfelle av DNA, å løse flere viktige genet svar og deres mekanismer er allerede kjent2,3,4,5.
Endringene i DNA kan føre til en nedgang i veksten cellekontroll, og dette fenomenet anses å være den dominerende faktoren som fører til utvikling av kreftfremkallende prosesser. Generering av kovalente DNA-addukter kjemikalier har kreftfremkallende styrke er vurdert som en av de viktigste trinnene i Release fase av kreftfremkallende prosesser8,9,10,11. Det ble demonstrert at relasjoner mellom dannelsen av DNA-addukter og tumorigenesis oppstår, mens en nedgang i DNA-addukter er ansvarlig for chemoprevention8,9,10, 11 , 12 , 13 , 14. dannelsen av kreftfremkallende/narkotika-avledet DNA-addukter avhenger av individuelle baser av DNA og påvirkes av sekvenser av disse baser i DNA. Reparasjonen av DNA-addukter er avhengige av deres plassering (på den transkribere eller ikke-transkribert DNA stranden) og typer endret nukleotid sekvenser8,11,12,15, 16.
I denne artikkelen beskriver vi prosedyrer utnytte konvertering enzym-katalysert av kjemikalier (narkotika) å undersøke deres styrke aktiveres i metabolitter som endret DNA (generere DNA-addukter). Kovalente DNA bindende, test sammensatte bør vanligvis være aktivert ved oksidativt eller reductive reaksjoner, avhengig av enkelte stoffer. Oksidativt eller reductive aktivisering testet kjemikalier er formidlet av en P450-avhengige enzymatisk system i mikrosomale subcellular brøken eller ved reduksjon med reductases presentere både i microsomes (POR, NADH: cytochrome b5 reduktase, P450 enzymer) og i mobilnettet cytosolic subcellular brøker (NQO1, XO, AO, peroxidase). Reaktiv metabolitter deretter binde til DNA danner DNA-addukter. Fordi både oksidativt og reductive reaksjoner er viktige for å aktivere flere legemidler til disse reaktive arter, er eksperimentelle prosedyrene ansette oksidasjon/reduksjon enzymatisk systemet beskrevet. Videre riktig metodene kan oppdage og kvantifisere disse DNA-addukter er beskrevet i detalj.
To uavhengige prosedyrer for å avgjøre om testen kjemisk, aktivert av enzymatiske systemer, er bundet til DNA anbefales: 32P-postlabeling teknikk og utnytte radioaktivt-merket sammensatte (f.eks., 3H eller 14 C). For første anbefales pilot, screening 32P-postlabeling analysen. Fastsettelse av DNA innholdet i løsninger, nettopp evalueres, må komme foran begge metodene.
De 32P-postlabeling teknikk benytter enzymatisk hydrolyse av DNA endret av ikke-radioaktivt kjemikalier (karsinogen/stoff) til 3´-phosphodeoxynucleosides, ekstra fosforylering med radioaktive fosfor (32P) på 5´- OH addukter posisjon og separasjon av kjemiske-deoxynucleotide fra normal (uendret) deoxynucleotides av kromatografi17 (figur 1). DNA endret av kjemisk forbindelse er hydrolyzed av en blanding av endonuclease, micrococcal nuclease og exonuclease, kjent som milt fosfodiesterase. Blandingen av hydrolyzed DNA som inneholder både normale (uendret) og endret deoxyribonucleoside 3´-monophosphates er reagert med [γ -32P] ATP i nærvær av carrier (ikke-radioaktive) ATP og T4-polynucleotide kinase ved pH 9,5 til skjemaet 5´- 32P-merket 3´, 5´-bisphosphates ("standard" prosedyre i figur 1). Brukte alkaliske pH er i stand til å minimere enzymaktiviteten av T4-polynucleotide kinase til dephosphorylate deoxyribonucleoside 3´-monophosphates på posisjon 3´. Separasjon og oppløsning av 32P-merket addukter fra merket deoxynucleotides som ikke endres av kjemikalier er utført av retninger anion exchange tynt lag kromatografi (TLC) på polyethyleneimine (PEI) cellulose (figur 2 ). I første og andre elueringsrør trinnene (i D1 og D2 retninger) er merket normal (uendret) deoxynucleotides samt [32P] fosfat elut fra starten av TLC-PEI-cellulose platen med vann løsninger av elektrolytt på et kort stykke brukt kromatografiske papir brukes på TLC platen, mens deoxynucleotides som inneholder bundne kjemikalier viser hydrofobe egenskaper (karsinogen/narkotika-addukter) er opprettholdt på starten av PEI innen platen løses på i tillegg med flere ulike løsemiddel systemer i D3 og D4 retninger (figur 2). Lokalisering av addukter ved hjelp av skjermen forbedret autoradiography; den separerte addukter registreres som mørke gjenkjennelig flekker på X-ray filmer. Flekker er forbrukeravgift fra platen og brukt om å kvantifisere radioaktivitet av flytende scintillation eller Cerenkov teller. En lagring fosfor imaging metode som er tilpasset til kart og kvantifisere DNA-addukter på chromatograms oppdaget av den 32P-postlabeling analysen er nå også brukt. 18 the Instant Imager maskin er ofte brukt for slike deteksjon og kvantifisering av DNA-addukter. Denne metoden gir mer enn 10 ganger høyere følsomhet for å oppdage 32P enn teknikken av skjermen forbedret autoradiography19.
Mengder DNA-addukter er bestemt som verdier av relativ adduct merking (RAL), beregnet ved hjelp av formelen (2) som følger:
CPM. i adduct deoxynucleotides RAL =---(2) aktiviteten av 32P-ATP (cpm. / pmol) x pmol deoxynucleotides
Verdiene for RALs er forholdet mellom antall priser adducted deoxynucleotides over antall utbredelsen av totalt [adducted og normal (uendret) deoxynucleotides] deoxynucleotides20,21. Men denne beregningen er basert på like merking effektiviteten av addukter og normal deoxynucleotides22. Klassisk ("standard") prosedyren av 32P-postlabeling teknikk er passende for ulike DNA-addukter (omfangsrik og/eller ikke-klumpete addukter), men sin følsomhet er ikke tilfredsstillende å oppdage addukter finnes i små mengder i DNA. Bruker denne fremgangsmåten, er mengden av en adduct i 107 uendret deoxynucleotides i DNA (0,3 fmol adduct/µg DNA) synlig.
En rekke modifikasjoner av klassisk 32P-postlabeling prosedyren har vært benyttet for å heve sensitiviteten av teknikken. Opptil 10 - til 100-ganger høyere følsomhet til fastsettelse av addukter av 32P-merking er oppnådd begrensende nivåene [γ -32P] ATP (intensivering prosedyren). 23 , 24 en ytterligere prosedyren gir en økning i følsomhet av 32P-postlabeling metoden benytter en inkubering av fordøyd DNA inneholder addukter med nuclease P1 (fra penicillin citrinum)21 (figur 1). Dette enzymet foretrekker å dephosphorylate uforandret deoxyribonucleoside 3´-monophosphates, mens deoxynucleotides bundet kjemikalier (adducted nukleotider) er egentlig ikke underlag av dette enzymet. Derfor dephosphorylated deoxyribonucleoside 3´-monophosphates (dvs., deoxyribonucleosides) er ikke fosforylert av T4-polynucleotide kinase av [32P] fosfat fra γ -32P] ATP. Men noen av nukleotider hvor kjemikalier er bundet (adducted deoxynucleotides), som arylamine addukter erstattet på C8 av deoxyguanosine, kan bedephosphorylated av dette enzymet. I kontrast, de fleste andre addukter (f.eksaddukter erstattet N2 av deoxyguanosine) er ikke dephosphorylated av nuclease P1. Denne endringen av 32P-postlabeling gjør denne metoden betydelig mer følsomme, øke sensitiviteten av mer enn tre størrelsesordener. Dessuten, denne versjonen av 32P-postlabeling gir en metode der høyere mengder DNA (5-10 µg) og et overskudd av transportør-fri [γ - 32P] ATP kan benyttes.
En annen metoden å berike den addukter, beskrevet av Gupta25, utnytter den mekanisk-egenskapene for store deoxynucleotide addukter, som kan trekkes inn n-butanol i nærvær av en fase overføring agent tetrabutylammonium klor (TBA) (figur 1) før [32P] fosfat merking, mens uforandret deoxynucleotides pakkes dårlig av denne organiske løsemidler. Men mindre hydrofobe addukter, består for eksempel av deoxynucleotides endret med ikke-aromatiske store moieties eller liten alkyl rester, ikke effektivt er utvunnet med n-butanol. Derfor er de i hovedsak undetectable når analyseres av denne endringen av 32P-postlabeling metoden.
Begge de nevnte versjonene av 32P-postlabeling øker følsomheten og måling av DNA-addukter enormt (opptil tre størrelsesordener), å kunne oppdage en adduct per 109,10 vanlige nukleotider (0,3 - 3 amol/µg DNA). Disse to metodene anbefales for testing kjemikalier for deres effektivitet covalently binde til DNA, og derfor de er beskrevet i dette arbeidet i detaljer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0032.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamylalcohol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A156.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Penta</td>
			<td>70390-11000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf thymus DNA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADP+</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADPH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate dehydrogenase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supersomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>456211, 456203, 456220, 456204, 456210, 456222, 456219, 456212, 456206, 456207, 456202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human liver microsomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>452172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>77662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Hydroxypyrimidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H56800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>179272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micrococcal nuclease from Staphylococcus aureus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spleen phosphodiesterase from calf spleen, Type II</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease P1 from Penicillium citrinum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N8630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>163791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiotreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spermidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrabutylammonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-Butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4-polynucleotide kinase</td>
			<td>USB Corp</td>
			<td>70031Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[&#947;-32P]ATP</td>
			<td>Hartman Analytic GmbH</td>
			<td>FP-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEI-impregnated cellulose TLC plates</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>801053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Packard Instant Imager A202400</td>
			<td>Packard</td>
			<td>G120337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ellipticine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>285730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Nitrobenzanthrone</td>
			<td colspan="2">prepared (synthesized) as shown in ref. 40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling

Kovalente DNA-addukter dannet av kjemikalier eller stoffer med kreftfremkallende styrke vurderes som en av de viktigste faktorene i Release fase av kreftfremkallende prosesser. Denne kovalente bindingen, som er årsaken til tumorigenesis, evalueres nå som en sentral dogme av kjemiske kreft. Her metodene er beskrevet ansette reaksjonene katalysert av cytochrome P450 og ekstra biotransformation enzymer å undersøke styrken av kjemikalier eller medisiner for aktivisering å metabolitter danner disse DNA-addukter. Prosedyrer blir presentert som beskriver isolering av mobilnettet fraksjoner besitter biotransformation enzymer (mikrosomale og cytosolic prøver med cytochromes P450 eller andre biotransformation enzymer, dvs., peroxidases, NADPH: cytochrome P450 oxidoreductase, NAD (P) H:quinone oxidoreductase eller xantin oksidase). Videre metodene er beskrevet som kan brukes for metabolske aktivering av analysert kjemikalier av disse enzymene samt for isolering av DNA. Videre riktig metodene kan oppdage og kvantifisere kjemiske/narkotika-avledet DNA-addukter, dvs.forskjellige modifikasjoner av 32P-postlabeling teknikk og ansettelse av radioaktivt-merket analysert kjemikalier, er vist i detalj.

Ved hjelp av protokoller beskrevet her for utnyttelse av enzym-katalysert aktivering (dvs. P450, peroxidase, reduktase) for å undersøke styrken av kjemikalier (kreftfremkallende/narkotika) for å være metaboliseres til mellomprodukter som resulterer i deres kovalente binding til DNA (generasjon av DNA-addukter), vi kunne løse (i) en roman mekanisme av farmakologiske handlingen av anticancer agent-ellipticine (for gjennomgang se,29,<sup class...

Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Dannelsen av kovalente DNA-addukter av enzymatisk aktivert kreftfremkallende og narkotika In Vitro og deres vilje av 32P-postlabeling

Vurderer styrken på miljømessige kjemikalier og farmakologiske, være enzymatisk bioactivated til mellomprodukter generere kovalente DNA-addukter, er et viktig felt i utviklingen av kreft og dens behandling. Metodene er beskrevet for sammensatte aktivisering skjemaet DNA-addukter, samt deres oppdagelse og kvantifisering.

Covalent DNA adducts formed by chemicals or drugs with carcinogenic potency are judged as one of the most important factors in the initiation phase of ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Covalent Binding of Antibodies to Cellulose Paper Discs and Their Applications in Naked-eye Colorimetric Immunoassays

Kovalent Binding av antistoffer til cellulosepapir plater og deres applikasjoner i Naked-eye Kolorimetriske Immunoassays

This report presents two methods for the covalent immobilization of capture antibodies on cellulose filter paper grade No. 1 (medium-flow filter paper) ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

En G-quadruplex DNA-affinitet tilnærming for rensing av enzymatisk aktivt G4 Resolvase1

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

Sporing av DNA-fragmenter i sanntid etter Smartphone

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Svært Sensitive og kvantitative påvisning av proteiner og deres isoformene av kapillær Isoelectric fokuserer metoden

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Berikelse av Native lipoprotein partikler med microRNA og påfølgende fastsettelse av deres Absolute/relative microRNA innhold og deres Cellular overføringshastighet

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

DNA Sequence anerkjennelse av DNA Primase ved hjelp av høy gjennomstrømming Primase profilering

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interaksjoner med og membran Permeabilization av Brain mitokondrier av amyloid fibrils

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Rask bestemmelse av antistoff-antigen affinitet av masse fotometri

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

Krystallisering og strukturell bestemmelse av et enzym:Substrat kompleks av seriell krystallografi i en allsidig mikrofluidisk chip

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glykosylaseanalyse ved matriseassistert laserdesorpsjon/ioniseringstid for massespektrometrianalyse

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...