Name: formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling
Uploaded: 2018-03-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Denna studie stöddes av tjeckiska vetenskapsstiftelsen (GACR, grant 17-12816S).

Alla djurförsök har utförts enligt föreskrifter för skötsel och användning av försöksdjur (311/1997, ministeriet för jordbruk, Tjeckien), vilket är i enlighet med Helsingforsdeklarationen.
1. isolering av hepatisk mikrosomal och cytosoliska fraktioner
<ol><li>Förbereda levern subcellulär fraktioner (mikrosomer rik på P450-enzymer eller cytosols rik på reductases eller lösliga peroxidaser) från råttor genom enkel differentiella centrifugering (105 000 x g). Obs: ...

I detta papper, är det visat en lättillgänglig metod att studera styrkan av kemikalier för att vara bioaktiverade till metabola intermediärer, vilket resulterar i generation av kovalent DNA addukter. Detta är en avgörande fråga, eftersom utvärderingen av styrkan av miljömässiga kemikalier eller droger av sin enzymatisk aktivering metaboliter genererar kovalent DNA addukter är ett viktigt område i utvecklingen av cancer och dess behandling. Modifiering av DNA av cancerframkallande ämnen anses vara orsaken ti...

Metabolismen av xenobiotika (miljö kemikalier eller droger) sker i två faser1. Faserna I och II syftar till att återge de ursprungligen hydrofoba (inte vattenlösliga) föreningarna mer hydrofil (vattenlösligt), vilket gör dem lätt excretable via urin, avföring eller svett. Fas I (funktionalisering) reaktioner inkluderar oxidation, reduktion, och hydroxylering katalyseras av enzymer såsom cytokrom P450s (P450s, CYP), peroxidaser (dvs., cyklooxygenas, COX), aldo-keto reductases (AKRs), och mikrosomalt flavin-innehållande monooxygenases (ram av ömsesidiga åtaganden). Fas jag även reduktion reaktioner, medieras av en mängd reductases dvs, mikrosomalt NADPH: cytokrom P450-reduktas (POR) och cytosoliska NAD (P) H:quinone mitokondriskt (NQO1), xantin oxidas (XO) och aldehyd oxidas (AO)1 . I den andra fasen (Konjugation), de funktionella grupperna som fästes i fas är jag brukade konjugat små polära molekyler för att ytterligare öka polariteten. Exempel på enzymer anses delta i reaktionen av fas II inkluderar sulfotransferaser (resultat), N, O- acetyltransferaser (NAT), metyltransferaser såsom katekol -O- metyltransferas (COMT), glutation S- transferaser (GSTs) och uridin diphosphate difosfoglukuronosyltransferaser (UGT)1. Klassificering av enzymer i fas I eller II är, dock, inte strikt, och vissa enzymer kan utan tvekan grupperas i antingen kategori.
P450-enzymer (EG 1.14.14.1) är den heme innehållande proteiner närvarande i olika organismer, som deltar i metabolismen av många kemikalier, katalysera deras konvertering3,4. P450 enzymerna katalyserar hydroxylering av många substrat, med en reaktion där en atom av dioxygen införs i molekyl av xenobiotika, medan den andra Atomen av syre reduceras till formuläret vatten genom en reaktion som kräver två elektroner [ekvationen (1 )]3,4:
RH + O2 + NADPH + H+ → ROH + H2O + NADP+ (1)
P450-enzymer lokaliserade i endoplasmatiska retikulet membranet i däggdjursceller (mikrosomala P450-system) är medlemmar i multienzymkomplex monooxygenas systemet, som innehåller ytterligare NADPH: cytokrom P450-reduktas (POR) och cytokrom b5 , substraten av enzymet betecknas som NADH: cytokrom b5 reduktas. En allmänt accepterad teori hypothesizes att givare av de två elektroner som behövs för P450 är NADPH/POR systemet. Dock kan cytokrom b5 också agera som givare av elektroner för P450, nämligen som givare av elektronen att minska P450 under andra minskning av dess reaktion cykel, där den fungerar tillsammans med NADH: cytokrom b5 reduktas2,3,4.
Däggdjur utnyttja olika P450-enzymer (t.ex. familjer 5, 8, 11, 17, 19, 21, 24, 26 och 27-enzymer) för syntesen av värdefulla endogena föreningar, såsom steroider, och använda dem för katabolismen av naturliga produkter2,3 . De andra CYP däggdjur enzymerna, såsom mänskliga CYP1A2, 2 c 9, 2 c 19, 2 d 6 och 3A4, metabolisera exogena kemikalier som används som droger. 5 , 6 de viktigaste enzymer som katalysera metabolism av läkemedel är CYP 3A och, speciellt CYP3A4. Omvandlingarna av xenobiotika, såsom pro-cancerframkallande ämnen och pro-gifter, medieras av mänskliga CYP1A1, 1A2, 1B1, 2A6, 2E1 och 3A42,5. De flesta av dessa CYP finns i levern (förutom CYP1A1 och 1B1). Dock uttrycks CYP också i flera extrahepatiska organ. Sådana P450s kan vara av stor betydelse, huvudsakligen när deltar de i bioaktivering metabolismen av kemikalier (droger) till reaktiva intermediärer i dessa organ7. Olika P450s induceras av flera föreningar som är deras substrat, men detta inte är nödvändigtvis fallet.
Många P450 enzymer spelar en roll i kemiska (drog) toxicitet. De kan omvandla xenobiotika inte bara till deras avgiftning metaboliter, men också aktivera dem reaktiva arter, som ändrar endogena makromolekyler som dessutom uppvisar olika biologiska egenskaper, oftast orsakar deras giftighet. DNA, lipider och proteiner kan vara mål för sin modifiering av reaktiv elektrofil och radikaler som genereras från aktiverade kemikalier. När det gäller DNA, lösa flera viktiga genen svaren och deras mekanismer är redan kända2,3,4,5.
Förändringar i DNA kan resultera i en minskning av värdcellens tillväxtkontroll, och detta fenomen anses vara den dominerande faktorn som leder till utveckling av cancerframkallande processer. Generering av kovalent DNA addukter med kemikalier att ha cancerframkallande potential bedöms som en av de viktigaste stegen i den inledande fasen av cancerframkallande bearbetar8,9,10,11. Det visades att relationer mellan bildandet av DNA addukter och tumourigenesis inträffa, medan en minskning av mängden DNA addukter ansvarar för chemoprevention8,9,10, 11 , 12 , 13 , 14. bildandet av cancerframkallande/drog-derived DNA addukter beror på individuella grunder av DNA, och påverkas av sekvenserna av dessa baser i DNA. Reparationer av DNA addukter är beroende av deras läge (på de transkriberade eller icke-transkriberas DNA-strängen) och typer av modifierade nukleotid sekvenser8,11,12,15, 16.
I den här artikeln beskriver vi förfaranden utnyttja enzymkatalyserade omvandlingen av kemikalier (narkotika) för att undersöka deras styrka aktiveras till metaboliter som modifierad DNA (generera DNA addukter). För kovalent DNA-bindning, test föreningen bör vanligtvis aktiveras antingen genom oxidativ eller reduktiv reaktioner, beroende på enskilda läkemedel. Oxidativa eller reduktiv aktivering av testade kemikalier medieras av ett P450-beroende enzymatiska system finns i den mikrosomala subcellulära fraktionen eller genom reduktion med reductases presentera båda i mikrosomer (POR, NADH: cytokrom b5 reduktas, P450-enzymer) och cellulära cytosoliska subcellulär fraktioner (NQO1 XO, AO, peroxidas). Reaktiva metaboliter därefter binda till DNA bildar DNA addukter. Eftersom både oxidativ och reduktiv reaktioner är viktigt att aktivera flera läkemedel till dessa reaktiva arter, de experimentella anställa oxidation/reduktion enzymatisk systemet beskrivs närmare. Dessutom lämpliga metoder kan detektera och kvantifiera dessa DNA addukter beskrivs i detalj.
Två oberoende förfaranden för att avgöra om testkemikalien, aktiveras av enzymatiska system, är bunden till DNA rekommenderas: 32P-postlabeling teknik och utnyttja radioaktivt märkt substans (t.ex., 3H eller 14 C). För först rekommenderas pilot, screening 32P-postlabeling analysen. Bestämning av DNA innehållet i lösningar, exakt utvärderas, måste föregå båda metoderna.
32P-postlabeling teknik använder tredjeparts enzymatisk hydrolys av DNA genom icke-radioaktiva kemikalier (cancerframkallande/läkemedel) till 3´-phosphodeoxynucleosides, ytterligare fosforylering med radioaktivt fosfor (32P) vid den 5´- Åh addukter position och separation av kemisk-deoxynucleotide från normal (oförändrad) deoxinukleotider av kromatografi17 (figur 1). DNA som ändras av en kemisk förening hydrolyseras av en blandning av Amiiiiin, micrococcal nuclease och exonuclease, känd som mjälte fosfodiesteras. Blandningen av hydrolyserat DNA som innehåller både normal (oförändrad) och modifierade deoxyribonucleoside 3´-monophosphates är reagerade med [γ -32P] ATP i närvaro av transportören (icke-radioaktiva) ATP och T4-polynucleotide kinase vid pH 9,5 till formuläret 5´- 32P-märkt 3´, 5´-bisphosphates (”standard” förfarande i figur 1). Används alkaliska pH kan minimera enzymaktiviteten T4-polynucleotide-Kinas till dephosphorylate deoxyribonucleoside 3´-monophosphates på position 3´. Separation och upplösning av 32P-märkt addukter från märkt deoxinukleotider som inte ändras av kemikalier utförs av mångfacetterat anjon-exchange tunnskiktskromatografi (TK) på polyethyleneimine (PEI) cellulosa (figur 2 ). I första och andra eluering steg (i D1 och D2 riktning) elueras märkt normal (oförändrad) deoxinukleotider samt [32P] fosfat från början av TLC-PEI-cellulosa plattan med vattenlösningar av elektrolyt på en kort bit kromatografiska papper tillämpas på toppen av TLC plattan, medan de deoxinukleotider som innehåller bundna kemikalier uppvisar hydrofoba egenskaper (cancerframkallande/drog-addukter) bibehålls i början av PEI-cellulosa plattan dessutom lösas med flera olika lösningsmedel system i D3 och D4 riktningar (figur 2). Lokalisering av addukter utförs med hjälp av skärmen enhanced autoradiografi; de separerade addukter upptäcks som mörka igenkännliga fläckar på X-ray filmer. Områdena av fläckar är censurerade från plattan och används för att kvantifiera radioaktiviteten av liquid scintillation eller Cerenkov räknar. En lagring fosfor imaging metod som har anpassats för att kartlägga och kvantifiera DNA addukter på kromatogram som upptäckts av de 32P-postlabeling assay nu används också. 18 the Instant Imager maskin utnyttjas ofta för sådan detektion och kvantifiering av DNA addukter. Denna metod ger mer än 10 gånger högre känslighet för att upptäcka 32P än tekniken med skärmen enhanced autoradiografi19.
Mängder av DNA addukter bestäms som värden på relativ addukt märkning (RAL), beräknas med hjälp av ekvation (2) enligt följande:
CPM. i addukt deoxinukleotider RAL =---(2) specifik aktivitet i 32P-ATP (i cpm. / pmol) x pmol deoxinukleotider
Värden i RAL är förhållandet mellan räkna andelen adducerad deoxinukleotider över räkna andelen totalt [adducerad och normal (oförändrad) deoxinukleotider] deoxinukleotider20,21. Dock beräkningen är baserad på lika märkning effektivitetsvinsterna av addukter och normala deoxinukleotider22. Klassisk (”standard”) förfarandet för 32P-postlabeling teknik är lämplig för olika DNA addukter (skrymmande eller icke-skrymmande addukter), dess känslighet är dock inte tillfredsställande att upptäcka addukter finns i låga mängder i DNA. Med den här proceduren, detekteras mängden en addukt i 107 oförändrad deoxinukleotider i DNA (0.3 fmol addukt/µg DNA).
En mängd olika modifieringar av denna klassiska 32P-postlabeling förfarande har använts för att höja känsligheten av tekniken. Upp till 10 - till 100 gånger högre känslighet för bestämning av addukter av 32P-märkning har uppnåtts med hjälp av begränsande nivåer av [γ -32P] ATP (intensifiering förfarandet). 23 , 24 ett ytterligare förfarande som ger en ökad känslighet för 32P-postlabeling metoden använder tredjeparts en inkubation av smält DNA innehållande addukter med nuclease P1 (från Penicillium citrinum)21 (figur 1). Detta enzym föredrar att dephosphorylate oförändrad deoxyribonucleoside 3´-monophosphates, medan deoxinukleotider med bundna kemikalier (adducerad nukleotider) är i huvudsak inte substratesna för detta enzym. Därför defosforyleras deoxyribonucleoside 3´-monophosphates (dvs., deoxyribonucleosides) är inte fosforyleras av T4-polynucleotide kinase av [32P] fosfat från γ -32P] ATP. Men några av nukleotider där kemikalier är bunden (adducerad deoxinukleotider), såsom arylamine addukter ersätts på C8 av deoxyguanosine, kan bedephosphorylated av detta enzym. Däremot de flesta andra addukter (t.ex., addukter ersätts på N2 av deoxyguanosine) är inte defosforyleras av nuclease P1. Denna ändring av 32P-postlabeling gör denna metod betydligt känsligare, ökar dess känslighet med mer än tre tiopotenser. Dessutom, denna version av 32P-postlabeling ger en metod där högre mängder DNA (5-10 µg) och ett överskott av carrier-fri [γ - 32P] ATP kan utnyttjas.
En annan metod att berika den addukter, beskrivs av Gupta25, utnyttjar de fysikalisk-kemiska egenskaperna för skrymmande deoxynucleotide addukter, som kan utvinnas i n-butanol i närvaro av en fas överföring agent tetrabutylammonium klorid (TBA) (figur 1) före [32P] fosfat märkning, medan oförändrad deoxinukleotider extraheras dåligt av detta organiska lösningsmedel. Dock mindre hydrofoba addukter, bestående för exempel på deoxinukleotider modifierade med icke-aromatiska skrymmande beståndsdelarna eller små alkyl rester, inte effektivt extraheras med n-butanol. De är därför i huvudsak omätbara när analyseras av denna ändring av den 32P-postlabeling metod.
Både tidigare nämnda versioner av 32P-postlabeling ökar känsligheten och kvantifiering av DNA addukter enormt (upp till tre tiopotenser), att kunna upptäcka en addukt per 109,10 normala nukleotider (0.3 - 3 amol/µg DNA). Dessa två metoder rekommenderas för testning av kemikalier för deras effektivitet kovalent binda till DNA och, därför, de beskrivs i detta arbete i detaljer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0032.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamylalcohol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A156.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Penta</td>
			<td>70390-11000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf thymus DNA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADP+</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADPH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate dehydrogenase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supersomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>456211, 456203, 456220, 456204, 456210, 456222, 456219, 456212, 456206, 456207, 456202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human liver microsomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>452172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>77662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Hydroxypyrimidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H56800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>179272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micrococcal nuclease from Staphylococcus aureus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spleen phosphodiesterase from calf spleen, Type II</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease P1 from Penicillium citrinum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N8630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>163791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiotreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spermidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrabutylammonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-Butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4-polynucleotide kinase</td>
			<td>USB Corp</td>
			<td>70031Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[&#947;-32P]ATP</td>
			<td>Hartman Analytic GmbH</td>
			<td>FP-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEI-impregnated cellulose TLC plates</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>801053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Packard Instant Imager A202400</td>
			<td>Packard</td>
			<td>G120337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ellipticine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>285730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Nitrobenzanthrone</td>
			<td colspan="2">prepared (synthesized) as shown in ref. 40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling

Kovalent DNA addukter bildas av kemikalier eller läkemedel med cancerframkallande potential bedöms som en av de viktigaste faktorerna i den inledande fasen av cancerframkallande processer. Denna kovalent bindning, vilket anses vara orsaken till tumourigenesis, bedöms nu som en centraldogm av kemisk carcinogenes. Här metoder beskrivs sysselsätter de reaktioner som katalyseras av cytokrom P450 och ytterligare biotransformationsenzymer att undersöka styrkan av kemikalier eller mediciner för sin aktivering metaboliter utgör dessa DNA addukter. Förfaranden presenteras som beskriver isolering av cellulära fraktioner som har biotransformationsenzymer (mikrosomala och cytosoliska prover med cytokrom P450 eller andra biotransformationsenzymer, dvsperoxidaser, NADPH: cytokrom P450 mitokondriskt, NAD (P) H:quinone mitokondriskt eller xantin oxidas). Dessutom beskrivs metoder som kan användas för metabolisk aktivering av analyserade kemikalier av dessa enzymer samt för isolering av DNA. Ytterligare, lämpliga metoder kan detektera och kvantifiera kemiska/drog-derived DNA addukter, dvsolika modifieringar av 32P-postlabeling teknik och sysselsättning av radioaktivt märkt analyseras kemikalier, är visas i detalj.

Med de protokoll som beskrivs här för utilizationen av enzymkatalyserade aktivering (dvs P450, peroxidas, reduktas) för att undersöka styrkan av kemikalier (cancerframkallande ämnen/droger) för att vara metaboliseras till intermediärer vilket resulterar i deras kovalent bindning till DNA (generering av DNA addukter), vi skulle kunna lösa en ny mekanism av den farmakologiska verkan av den mot cancer agent ellipticine (för en granskning se29,</...

Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Bildandet av kovalent DNA addukter av enzymatiskt aktiverade carcinogener och droger In Vitro och deras beslutsamhet av 32P-postlabeling

Utvärdera styrkan av miljömässiga kemikalier och läkemedel, vara enzymatiskt bioaktiverade till intermediärer genererar kovalent DNA addukter, är ett viktigt område i utvecklingen av cancer och dess behandling. Metoderna beskrivs för sammansatta aktivering att bilda DNA addukter, samt tekniker för deras upptäckt och kvantifiering.

Covalent DNA adducts formed by chemicals or drugs with carcinogenic potency are judged as one of the most important factors in the initiation phase of ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Covalent Binding of Antibodies to Cellulose Paper Discs and Their Applications in Naked-eye Colorimetric Immunoassays

Kovalent bindning av antikroppar till cellulosapapper skivor och deras tillämpningar inom blotta ögat Kolorimetriska Immun

This report presents two methods for the covalent immobilization of capture antibodies on cellulose filter paper grade No. 1 (medium-flow filter paper) ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

En G-quadruplex DNA-affinitet metoden för rening av enzymatiskt aktiva G4 Resolvase1

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

Spårning i realtid av DNA-fragment separering av smartphone

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Mycket känslig och kvantitativa påvisande av proteiner och deras isoformer av kapillär isoelektrisk fokusering metod

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Anrikning av Native Lipoproteinpartiklar med mikroRNA och efterföljande bestämning av deras absoluta/relativa mikroRNA innehåll och deras cellulära överföringshastigheten

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

DNA-sekvens erkännande av DNA-Primase med hög genomströmning Primase profilering

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interaktioner med och membran permeabilisering av hjärnans Mitokona av amyloid fibriller

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Snabb bestämning av antikropp-antigen affinitet genom Mass Photometry

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

Kristallisering och strukturell bestämning av ett enzym:Substratkomplex genom seriell kristallografi i ett mångsidigt mikrofluidiskt chip

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Uracil-DNA Glykosylasanalys av Matrix-assisterad laserdesorption/joniseringStid för flygning Masspektrometrianalys

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...