Name: formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling
Uploaded: 2018-03-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Bu çalışmada çek Bilim Vakfı (GACR, grant 17-12816S) tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri için bakım ve kullanım, laboratuvar Helsinki Bildirgesi ile uyumlu olan hayvanlar (311/1997, Tarım Bakanlığı, Çek Cumhuriyeti), düzenlemelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. yalıtım hepatik mikrozomal ve sitozolik kesirler
<ol><li>Karaciğer hücre altı fraksiyonları (P450 enzimleri veya cytosols redüktaz veya çözünür peroxidases zengin zengin microsomes) sıçanlarından emir basit fark Santrifüjü (105.000 x g) hazırlayın. N...

Bu yazıda, yaygın olarak erişilebilir bir metodoloji bioactivated kovalent DNA'ın üretimi kaynaklanan metabolik ara ürün için olmak kimyasallar potens eğitim adducts gösterilmiştir. Bu çok önemli bir konudur, çevresel kimyasallar potens veya enzimatik onların harekete geçirmek için kovalent DNA üreten metabolitleri ilaçların değerlendirilmesi adducts çünkü kanser ve tedavisi, geliştirilmesinde önemli bir alandır. DNA'sı değişikliğe göre kanserojen tümör gelişiminin neden kabul şimdi ka...

Xenobiotics (çevresel kimyasallar veya ilaçlar) metabolizma iki aşama1' oluşur. Evre ı ve II amacı başlangıçta hidrofobik (suda çözünen) bileşikleri daha hidrofilik işlemek için (suda çözünen), böylece bunları kolayca yolu ile idrar, dışkı ya da ter excretable yapma. Aşama ı (functionalization) reaksiyonları içerir oksidasyon, Redüksiyon, ve prokollajen katalize enzimler tarafından sitokrom P450s gibi (P450s, CYPs), peroxidases (i.e., Siklooksijenaz, COX), aldo-keto redüktaz (AKRs) ve mikrozomal monooxygenases (FMOs) flavin içeren. Ayrıca çeşitli redüktaz Yani, mikrozomal NADPH: sitokrom P450 redüktaz (POR) ve sitozolik NAD (P) H:quinone oxidoreductase (NQO1), ksantin oksidaz (XO) ve aldehit oksidaz (AO)1 tarafından aracılı indirgeme reaksiyonu içerir faz . İkinci aşama (fiil), aşamasında bağlanmıştır Fonksiyonel grupların ben polarizasyonu daha da artırmak için küçük polar moleküller eşlenik için kullanılır. Faz II dahil sulfotransferases (SULTs), N, O- acetyltransferases (NAT), methyltransferases Katekol -O- Metiltransferaz (COMT), glutatyon Sgibi tepki katılmak için kabul enzim örnekleri- Transferazlar (GSTs) ve üridin nükleotittir glucuronosyltransferases (UGTs)1. Enzimler aşamasında sınıflandırılması ı ya da II olduğunu, ancak, değil katı ve bazı enzimler tartışmasız her iki kategoride gruplandırılabilir.
P450 enzimleri (AK 1.14.14.1) proteinler mevcut birçok kimyasallar, onların dönüşüm3,4katalizlerler Biyotransformasyon katılmak çeşitli organizmalarda içeren heme vardır. Oksijen ikinci atom formu su ile iki elektron [denklemi (1 gerektirir tepki azalır iken nerede dioxygen bir atom xenobiotics, molekül giriliyor bir tepki ile birçok yüzeylerde prokollajen P450 enzimleri katalizler )]3,4:
RH + O2 + NADPH + H+ → ROH + H2O + NADP+ (1)
Memeli hücreleri (mikrozomal P450 sistemleri) endoplazmik retikulum membran lokalize P450 enzimleri daha fazla NADPH: sitokrom P450 redüktaz (POR) ve sitokrom b5 içeren multienzyme monooxygenase sistem üyesi olan , NADH: sitokrom b5 alfa redüktaz enzim substrat olarak adlandırdığı. Genel kabul gören bir teori çelişkisiz P450 için gerekli iki elektron verici NADPH/POR sistemidir. Yine de, sitokrom b5 elektron bir donör P450 için yani olarak ikinci azalma, tepki döngüsü sırasında P450 azaltarak elektron bir donör NADH: sitokrom b5 ile birlikte hareket nereye hareket redüktaz2,3,4.
Memeliler çeşitli P450 enzimleri kullanmak (Örneğin, aileler 5, 8, 11, 17, 19, 21, 24, 26 ve 27 enzimler) gibi steroid, değerli endojen bileşiklerin sentezi için ve doğal ürünler2,3 katabolizma için kullanabilirsiniz . Diğer CYP memeli enzimler, gibi insan CYP1A2, 2C 9, 2C 19, 2D 6 ve 3A4, metabolize eksojen kimyasallar, ilaç olarak kullanılır. 5 , 6 ilaçların metabolizması katalizlerler en önemli 3A alt familya, özellikle CYP3A4 CYPs enzimlerdir. Xenobiotics pro-kanserojen ve pro-toxicants, gibi dönüşümleri insan CYP1A1, 1A2, 1B1, 2A6, 2E1 ve 3A42,5tarafından aracılık. Bu CYPs çoğu karaciğer (hariç, CYP1A1 ve 1B1) mevcut. Yine de, CYPs de birkaç extrahepatic organlarda ifade edilir. Böyle P450s büyük önemi, ağırlıklı olarak olabilir katıldığınız zaman onlar bioactivation kimyasallar (ilaçlar) metabolizmasında bu organları7reaktif ara ürün için. Bu durumda mutlaka olmamasına rağmen çeşitli P450s onların yüzeylerde vardır çeşitli bileşikler tarafından indüklenir.
Birçok P450 enzimleri kimyasal (ilaç) toksisite bir rol oynamaktadır. Onlar sadece onların detoksifikasyon metabolitleri xenobiotics dönüştürmek ama aynı zamanda onları Ayrıca genellikle onların toksisite neden farklı biyolojik özellikleri sergilemek endojen oluştururlar değiştirmek reaktif türler için harekete geçirmek. DNA, yağlar ve proteinler onların değişikliğe göre reaktif electrophiles ve aktif kimyasallardan üretilen radikaller için hedef olabilir. DNA söz konusu olduğunda, birkaç önemli gen yanıt ve mekanizmaları çözme zaten bilinen2,3,4,5.
Değişiklikler DNA hücre büyüme denetim azalmasına neden olabilir ve bu fenomen kanserojen süreçleri gelişimine lider baskın faktör olarak kabul edilir. Kimyasallar ile kovalent DNA nesil adducts kanserojen etki gücüne sahip kanserojen başlatma aşamasında en önemli adımlardan biri8,9,10,11işler gibi karar. Bu gösterilmiştir DNA oluşumu arasındaki ilişkileri adducts ve tumorigenesis oluşan, DNA miktarında azalma adducts ise chemoprevention8,9,10için, sorumludur 11 , 12 , 13 , 14. kanserojen/uyuşturucu-türetilmiş oluşumu DNA adducts DNA bireysel üsleri üzerinde bağlıdır ve bu üslerin DNA dizileri tarafından etkilenir. DNA onarım adducts kendi konumunda (kopya etmek veya sigara transkripsiyonu DNA dizisi) ve değiştirilmiş nükleotit dizileri8,11,12,15, türleri üzerinde bağlıdır 16.
Bu makalede, biz DNA değiştirilmiş metabolitleri aktif olması için onların potens araştırmak için (ilaçlar) kimyasal enzim katalize dönüştürme kullanan yordamlarda açıklanır (DNA üreten adducts). Kovalent DNA bağlama için genellikle test bileşik olmalıdır bağlı olarak bireysel uyuşturucu oksidatif veya indirgeyici reaksiyonlar tarafından aktive. Oksidatif veya indirgeyici harekete geçirmek test edilmiş kimyasal bir P450 bağımlı enzim sistemi mikrozomal hücre altı kesir mevcut tarafından aracılık ettiği ya da azaltma redüktaz ile tarafından microsomes (POR, NADH: sitokrom b5 hem de mevcut redüktaz, P450 enzimleri) ve hücresel sitozolik hücre altı fraksiyonları (NQO1, XO, AO, peroksidaz). Reaktif metabolitleri bundan sonra bağlamak DNA'yı oluşturan DNA adducts. İndirgeyici ve oksidatif reaksiyonlar Bu reaktif tür çeşitli ilaçlara etkinleştirmek önemli olduğundan, yükseltgeme-indirgeme enzimatik sistemi istihdam deneysel yordamlar açıklanmıştır. Ayrıca, adducts algılama ve bu DNA miktarının yeteneğine uygun yöntemleri ayrıntılı olarak açıklanmıştır.
Test kimyasal enzim sistemleri tarafından aktif olup olmadığını belirlemek için iki bağımsız yordam DNA'ya bağlı tavsiye edilir: 32P postlabeling tekniği ve radyoaktif etiketli kullanarak bileşik (e.g., 3H ya da 14 C). İlk pilot, 32P postlabeling tahlil eleme önerilir. DNA içeriği tam olarak değerlendirilir, çözümlerinde belirlenmesi her iki yöntem önce gelmesi gerekir.
Radyoaktif olmayan kimyasallar (kanserojen/ilaç) 3´-phosphodeoxynucleosides, 5´-radyoaktif fosfor (32P) ile ek fosforilasyon tarafından değiştirilmiş DNA'ın enzimatik hidroliz 32P postlabeling tekniği kullanır OH pozisyon ve kimyasal-deoxynucleotide ayrılması adducts normal (değiştirilmemiş) deoxynucleotides Kromatografi17 tarafından (şekil 1). Kimyasal bileşik tarafından değiştirilmiş DNA tarafından endonükleaz, micrococcal nükleaz ve dalak fosfodiesteraz bilinen eksonükleaz aktivitesi, hidrolize. Hem normal (değiştirilmemiş) içeren ve 3´-monophosphates [γ -32P] ATP pH 9,5 formu 5´- için taşıyıcı (radyoaktif olmayan) ATP ve T4-polinükleotit kinaz huzurunda ile tepki deoxyribonucleoside değiştiren hidrolize DNA karışımı 32P etiketli 3´, 5´-bisphosphates ( şekil 1' deki "Standart" bir prosedür). Kullanılan alkali pH deoxyribonucleoside 3´-monophosphates konumu 3´, dephosphorylate T4-polinükleotit kinaz enzim aktivitesinin en aza indirerek yeteneğine sahiptir. Ayrılık ve çözünürlük 32P olarak etiketlenmiş üzerinden adducts kimyasallar tarafından değiştirilmiyor etiketli deoxynucleotides gerçekleştirilir tarafından çok yönlü anyon-Satım ince tabaka Kromatografi (TLC) polyethyleneimine (PEI) Selüloz (Resim 2 ). (Yönde, D1 ve D2) birinci ve ikinci elüsyon adım etiketli normal (değiştirilmemiş) deoxynucleotides yanı sıra [32P] fosfat başlar, elektrolit kısa bir parçası üzerine su çözümleri kullanarak TLC-PEI-selüloz plaka eluted Kromatografik kağıt hidrofobik özellikleri (kanserojen/uyuşturucu-adducts) sergilenmesi ilişkili kimyasallar içeren deoxynucleotides Ayrıca çözülmesi için PEI-selüloz plaka başlangıcında korunur, ancak TLC plaka üstüne uygulanan birkaç farklı solvent sistemleri ile D3 ve D4 yönde (Şekil 2). Yerelleştirme adducts gelişmiş ekran autoradiography; kullanılarak yapılır ayrılmış adducts röntgen filmleri karanlık tanınabilir noktalar olarak algılanır. Noktalar alanlarında plaka eksize ve radyoaktivite ölçmek için sıvı mercek veya sayma Cerenkov tarafından kullanılır. Harita ve DNA ölçmek için adapte edilmiş yöntemi Imaging bir depolama fosfor tespit chromatograms adducts tarafından 32P postlabeling tahlil şimdi de kullanılır. 18 anlık görüntüleyici makine sık sık böyle algılaması için kullanılmaktadır ve miktar DNA'ın adducts. Bu yöntem daha autoradiography19ekran tekniği gelişmiş 32P algılamak için daha--dan 10 - kat daha yüksek hassasiyet sağlar.
DNA miktarda adducts göreli değerleri denklem (2) aşağıdaki gibi kullanarak hesaplanan (RAL), etiketleme adduct gibi belirlenir:
BGBM. Buna deoxynucleotides Sigara RAL =---(2) 32P-ATP belirli aktivite (BGBM. / pmol) x pmol deoxynucleotides
RALs adducted deoxynucleotides sayısı oranları oranı toplam [adducted ve normal (değiştirilmemiş) deoxynucleotides] saymak oranları değerleri deoxynucleotides20,21. Ancak, bu hesaplama eşittir üzerinde temel verimliliği etiketleme adducts ve normal deoxynucleotides22. Çeşitli DNA adducts için klasik ("Standart") 32P postlabeling tekniği uygun bir uygulamadır (hantal ve/veya hantal adducts), ancak, hassasiyeti tatmin edici değil algılamak için düşük miktarlarda bulunan DNA adducts. Bu yordamı kullanarak, bir adduct 10 değiştirilmemiş7 deoxynucleotides DNA (0.3 fmol adduct/µg DNA) içinde tespit miktarıdır.
Bu klasik 32P postlabeling yordam değişiklikleri çeşitli teknik duyarlılığını yükseltmek için kullanılan. En çok 10-100 kat daha yüksek hassasiyet belirlenmesi, adducts 32P etiketleme elde etti [γ -32P] ATP (yoğunlaşması yordam) sınırlayıcı Düzeyler'i kullanarak. 23 , 24 32P postlabeling yöntemi duyarlılık artışı sindirilir DNA içeren bir kuluçka kullanır sağlayan başka bir yordam nükleaz P1 (dan Penicillium citrinum)21 (şekil 1) ile adducts. Deoxynucleotides ile ilişkili kimyasallar (adducted nukleotid) aslında değil yüzeylerde Bu enzim ise bu enzim değiştirilmemiş deoxyribonucleoside 3´-monophosphates, dephosphorylate tercih ediyor. Bu nedenle, dephosphorylated deoxyribonucleoside 3´-monophosphates (örneğin, deoxyribonucleosides) T4-polinükleotit kinaz tarafından [32P] fosfat γ -32P tarafından fosforile değil] ATP. Ancak, bazı kimyasallar nerede nükleotit (adducted deoxynucleotides) bağlı, arylamine adducts gibi deoxyguanosine, can bedephosphorylated Bu enzim tarafından C8, yerine. Buna ek olarak, çoğu diğer adducts (örneğin, adducts N2 deoxyguanosine yerine) nükleaz P1 tarafından dephosphorylated değil. Bu değişiklik 32P postlabeling bu yöntem çok daha hassas, duyarlı üçten fazla büyüklük artan getirir. Ayrıca, 32P postlabeling bu sürümü için bir yöntem sağlar nerede daha yüksek miktarda DNA (5-10 µg) ve taşıyıcı-Alerjik bir fazlalığı [γ - 32P] ATP kullanılan.
Zenginleştirmek için başka bir yöntem adducts, Gupta25tarafından açıklanan, fizikokimyasal kullanır özelliklerinin hantal deoxynucleotide adducts, hangi-ebilmek var olmak hulâsa n-butanol faz transfer Ajan tetrabutylammonium varlığında değiştirilmemiş deoxynucleotides kötü bu organik çözücü tarafından ayıklanır ise [32P] fosfat, etiketleme önce klorür (TBA) (şekil 1). Ancak, daha az hidrofobik adducts, oluşan deoxynucleotides örneği ile aromatik olmayan hantal moieties ya da küçük alkil artıkları, değişiklik için değil etkili çıkarılan nile-butanol. Bu nedenle, onlar ne zaman 32P postlabeling yöntemi bu değişikliğe göre analiz edilir aslında belirlenemeyen vardır.
Hem daha önce bahsedilen sürümleri 32P postlabeling artış duyarlılık ve miktar DNA'ın adducts son derece (üç büyüklük kadar), 109,10 başına normal sigara bir tespit edememek nükleotit (0.3 - 3 Ekrem/µg DNA). Bu iki yöntem kimyasallar kovalent DNA'yı bağlamak onların verimlilik için test etmek için tavsiye edilir ve bu nedenle, bu iş ayrıntılarda açıklanmıştır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0032.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamylalcohol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A156.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Penta</td>
			<td>70390-11000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calf thymus DNA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADP+</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADPH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose 6-phosphate dehydrogenase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supersomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>456211, 456203, 456220, 456204, 456210, 456222, 456219, 456212, 456206, 456207, 456202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human liver microsomes</td>
			<td>Corning Gentest</td>
			<td>452172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>77662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Hydroxypyrimidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H56800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>179272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micrococcal nuclease from Staphylococcus aureus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spleen phosphodiesterase from calf spleen, Type II</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease P1 from Penicillium citrinum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N8630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>163791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiotreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spermidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrabutylammonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-Butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>437603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4-polynucleotide kinase</td>
			<td>USB Corp</td>
			<td>70031Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[&#947;-32P]ATP</td>
			<td>Hartman Analytic GmbH</td>
			<td>FP-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEI-impregnated cellulose TLC plates</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>801053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Packard Instant Imager A202400</td>
			<td>Packard</td>
			<td>G120337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ellipticine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>285730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Nitrobenzanthrone</td>
			<td colspan="2">prepared (synthesized) as shown in ref. 40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formation of covalent dna adducts by enzymatically activated carcinogens and drugs in vitro and their determination by 32p-postlabeling

Kovalent DNA adducts kimyasallar tarafından kurulan veya uyuşturucu kanserojen etki gücü ile kanserojen işlemleri başlatma aşamasında en önemli faktörlerden biri değerlendirilecektir. Tumorigenesis nedeni olarak kabul edilir, bu kovalent bağlama şimdi kimyasal karsinojenezis merkezi bir dogma olarak değerlendirilir. Burada, sitokrom P450 tarafından katalize reaksiyonlar istihdam yöntemleri açıklanmıştır ve ek Biyotransformasyon enzimler kimyasal madde veya ilaç metabolitleri bu DNA şekillendirme için onların harekete geçirmek için potens araştırmak için adducts. Hücresel kesirler Biyotransformasyon enzimler (mikrozomal ve sitozolik örnekleri ile cytochromes P450 ya da diğer Biyotransformasyon enzimler, Yani, peroxidases, NADPH: sitokrom P450 sahip yalıtım açıklayan yordamlar sunulmaktadır oxidoreductase, NAD (P) H:quinone oxidoreductase veya ksantin oksidaz). Ayrıca, yöntem açıklanmıştır kullanılabilir analiz kimyasallar metabolik aktivasyonu için bu enzimler DNA izolasyonu için hem de. Ayrıca, algılama ve kimya/ilaç-elde edilen DNA miktarının yeteneğine uygun yöntemleri adducts, Yani, 32P postlabeling tekniğinin farklı değişiklikler ve radyoaktif etiketli istihdam kimyasal analiz, vardır ayrıntılı olarak gösterilmiştir.

Kimyasal maddeler (kanserojen/ilaçlar) potens onların kovalent sonuçlanan ara ürün için metabolize araştırmak için harekete geçirmek enzim katalize (Yani, P450, peroksidaz, redüktaz) kullanımı için burada açıklanan protokolleri kullanarak DNA için bağlama (DNA nesil adducts), antikanser Ajan ellipticine farmakolojik eylem (için bir daha gözden geçirme gördüğünüz gibi29,30,<sup class="x...

Watch this Scientific Journal Video about Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling at JoVE.com

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Kovalent DNA oluşumu enzimatik aktif kanserojen ve uyuşturucu Vitro ve kararlılıklarını 32P-postlabeling tarafından Adducts

Çevresel kimyasallar ve ilaçlar enzimatik bioactivated kovalent DNA oluşturma ara ürün için adducts, olmak, potens değerlendirilmesi, kanser ve tedavisi geliştirilmesinde önemli bir alandır. Yöntemleri teknikleri onların algılama ve miktar yanı sıra DNA adducts forma bileşik harekete geçirmek için açıklanmıştır.

Covalent DNA adducts formed by chemicals or drugs with carcinogenic potency are judged as one of the most important factors in the initiation phase of ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Formation of Covalent DNA Adducts by Enzymatically Activated Carcinogens and Drugs In Vitro and Their Determination by 32P-postlabeling

Covalent Binding of Antibodies to Cellulose Paper Discs and Their Applications in Naked-eye Colorimetric Immunoassays

Selüloz Kağıt Diskler ve Çıplak göz Kolorimetrik İmmüno Onların Uygulamaları antikorların bağlama Kovalent

This report presents two methods for the covalent immobilization of capture antibodies on cellulose filter paper grade No. 1 (medium-flow filter paper) ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

Enzimatik olarak aktif G4 Resolvase1 saflaştırılması için bir G-dörtlüsü DNA eğilim yaklaşım

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

Akıllı Telefon ile DNA Parçalarının Ayırılmasının Gerçek Zamanlı İzlenmesi

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Proteinler ve onların izoformlarının kapiller Isoelectric odaklanarak yöntemi tarafından son derece hassas ve nicel tespiti

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

MicroRNA ile yerli lipoprotein parçacıkları zenginleştirme ve onların mutlak/bağıl microRNA Içerik ve onların hücresel transfer hızı sonraki belirlenmesi

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

Dna İlkase tarafından DNA Dizisi Tanıma Yüksek-Throughput Primase Profilleme kullanarak

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Amiloid Fibrils ile Beyin Mitokondrisi ile Etkileşimler ve Membran Permeabilizasyonu

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Kitle Fotometrisi ile Antikor-Antijen Affinitesinin Hızlı Tayini

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

Çok Yönlü Bir Mikroakışkan Çipte Seri Kristalografi ile Bir Enzim:Substrat Kompleksinin Kristalizasyonu ve Yapısal Belirlenmesi

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Matris Yardımlı Lazer Desorpsiyonu/İyonizasyon ile Urasil-DNA Glikozilaz Testi Uçuş Süresi Kütle Spektrometrisi Analizi

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...