Name: isolation protocol of mouse monocyte-derived dendritic cells and their subsequent in vitro activation with tumor immune complexes
Uploaded: 2018-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes at JoVE.com

البروتوكولات أدناه تشير إلى عزل الماوس مودك، ولكن المبادئ العامة التي قد تنطبق على DC مجموعات فرعية الخلايا الأخرى، كذلك. 12-16-الأسبوع-القديم C57Bl/6j الفئران أبقى في "جمعية الأمريكية" لمرفق الحيوان "الاعتماد لرعاية الحيوانات المختبرية" – المعتمدة. بموافقة كافة البروتوكولات في جامعة ستانفورد ?...

<ol>
	<li>Steinman, R. M., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+dendritic+cells+into+medicine.">Taking dendritic cells into medicine.</a> Nature. 449 (7161), 419-426 (2007).</li><li>Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic-cell-based+therapeutic+cancer+vaccines.">Dendritic-cell-based therapeutic cancer vaccines.</a> Immunity. 39 (1), 38-48 (2013).</li><li>Mildner, A., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+dendritic+cell+subsets.">Development and function of dendritic cell subsets.</a> Immunity. 40 (5), 642-656 (2014).</li><li>Merad, M., Sathe, P., Helft, J., Miller, J., Mortha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dendritic+cell+lineage:+ontogeny+and+function+of+dendritic+cells+and+their+subsets+in+the+steady+state+and+the+inflamed+setting.">The dendritic cell lineage: ontogeny and function of dendritic cells and their subsets in the steady state and the inflamed setting.</a> Annual review of immunology. 31, 563-604 (2013).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells,+monocytes+and+macrophages:+a+unified+nomenclature+based+on+ontogeny.">Dendritic cells, monocytes and macrophages: a unified nomenclature based on ontogeny.</a> Nature reviews. Immunology. 14 (8), 571-578 (2014).</li><li>Spitzer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Immunity+Is+Required+for+Effective+Cancer+Immunotherapy.">Systemic Immunity Is Required for Effective Cancer Immunotherapy.</a> Cell. 168 (3), 487-502 (2017).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsupervised+High-Dimensional+Analysis+Aligns+Dendritic+Cells+across+Tissues+and+Species.">Unsupervised High-Dimensional Analysis Aligns Dendritic Cells across Tissues and Species.</a> Immunity. 45 (3), 669-684 (2016).</li><li>Anguille, S., Smits, E. L., Lion, E., van Tendeloo, V. F., Berneman, Z. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+use+of+dendritic+cells+for+cancer+therapy.">Clinical use of dendritic cells for cancer therapy.</a> Lancet Oncol. 15 (7), e257-e267 (2014).</li><li>Wimmers, F., Schreibelt, G., Skold, A. E., Figdor, C. G., De Vries, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paradigm+Shift+in+Dendritic+Cell-Based+Immunotherapy:+From+in+vitro+Generated+Monocyte-Derived+DCs+to+Naturally+Circulating+DC+Subsets.">Paradigm Shift in Dendritic Cell-Based Immunotherapy: From in vitro Generated Monocyte-Derived DCs to Naturally Circulating DC Subsets.</a> Front Immunol. 5, 165 (2014).</li><li>Banchereau, J., Palucka, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+as+therapeutic+vaccines+against+cancer.">Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer.</a> Nature reviews. Immunology. 5 (4), 296-306 (2005).</li><li>Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+dendritic+cells.">Isolation of dendritic cells.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li><li>Greter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+controls+nonlymphoid+tissue+dendritic+cell+homeostasis+but+is+dispensable+for+the+differentiation+of+inflammatory+dendritic+cells.">GM-CSF controls nonlymphoid tissue dendritic cell homeostasis but is dispensable for the differentiation of inflammatory dendritic cells.</a> Immunity. 36 (6), 1031-1046 (2012).</li><li>Vremec, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+granulocyte/macrophage+colony-stimulating+factor+on+dendritic+cell+levels+in+mouse+lymphoid+organs.">The influence of granulocyte/macrophage colony-stimulating factor on dendritic cell levels in mouse lymphoid organs.</a> Eur J Immunol. 27 (1), 40-44 (1997).</li><li>Helft, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+Mouse+Bone+Marrow+Cultures+Comprise+a+Heterogeneous+Population+of+CD11c(+)MHCII(+)+Macrophages+and+Dendritic+Cells.">GM-CSF Mouse Bone Marrow Cultures Comprise a Heterogeneous Population of CD11c(+)MHCII(+) Macrophages and Dendritic Cells.</a> Immunity. 42 (6), 1197-1211 (2015).</li><li>Dong, M. B., Rahman, M. J., Tarbell, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+gating+for+spleen+monocyte+and+DC+subsets:+differences+in+autoimmune+NOD+mice+and+with+acute+inflammation.">Flow cytometric gating for spleen monocyte and DC subsets: differences in autoimmune NOD mice and with acute inflammation.</a> J Immunol Methods. 432, 4-12 (2016).</li><li>Drutman, S. B., Kendall, J. C., Trombetta, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+spleen+monocytes+can+upregulate+CD11c+expression+without+converting+into+dendritic+cells.">Inflammatory spleen monocytes can upregulate CD11c expression without converting into dendritic cells.</a> J Immunol. 188 (8), 3603-3610 (2012).</li><li>Hanada, K., Tsunoda, R., Hamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF-induced+in+vivo+expansion+of+splenic+dendritic+cells+and+their+strong+costimulation+activity.">GM-CSF-induced in vivo expansion of splenic dendritic cells and their strong costimulation activity.</a> J Leukoc Biol. 60 (2), 181-190 (1996).</li><li>Gilboa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DC-based+cancer+vaccines.">DC-based cancer vaccines.</a> J Clin Invest. 117 (5), 1195-1203 (2007).</li><li>Melief, C. J., van der Burg, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotherapy+of+established+(pre)malignant+disease+by+synthetic+long+peptide+vaccines.">Immunotherapy of established (pre)malignant disease by synthetic long peptide vaccines.</a> Nat Rev Cancer. 8 (5), 351-360 (2008).</li><li>Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunotherapy+via+dendritic+cells.">Cancer immunotherapy via dendritic cells.</a> Nat Rev Cancer. 12 (4), 265-277 (2012).</li><li>Bol, K. F., Schreibelt, G., Gerritsen, W. R., de Vries, I. J., Figdor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cell-Based+Immunotherapy:+State+of+the+Art+and+Beyond.">Dendritic Cell-Based Immunotherapy: State of the Art and Beyond.</a> Clin Cancer Res. 22 (8), 1897-1906 (2016).</li><li>Rafiq, K., Bergtold, A., Clynes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+complex-mediated+antigen+presentation+induces+tumor+immunity.">Immune complex-mediated antigen presentation induces tumor immunity.</a> J Clin Invest. 110 (1), 71-79 (2002).</li><li>Schuurhuis, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+complex-loaded+dendritic+cells+are+superior+to+soluble+immune+complexes+as+antitumor+vaccine.">Immune complex-loaded dendritic cells are superior to soluble immune complexes as antitumor vaccine.</a> J Immunol. 176 (8), 4573-4580 (2006).</li><li>Carmi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+IgG+combined+with+dendritic+cell+stimuli+induce+antitumour+T-cell+immunity.">Allogeneic IgG combined with dendritic cell stimuli induce antitumour T-cell immunity.</a> Nature. 521 (7550), 99-104 (2015).</li><li>Carmi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Akt+and+SHP-1+are+DC-intrinsic+checkpoints+for+tumor+immunity.">Akt and SHP-1 are DC-intrinsic checkpoints for tumor immunity.</a> JCI Insight. 1 (18), e89020 (2016).</li><li>Kenkel, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Immunosuppressive+Dendritic+Cell+Subset+Accumulates+at+Secondary+Sites+and+Promotes+Metastasis+in+Pancreatic+Cancer.">An Immunosuppressive Dendritic Cell Subset Accumulates at Secondary Sites and Promotes Metastasis in Pancreatic Cancer.</a> Cancer Res. 77 (15), 4158-4170 (2017).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Activation+of+CD103(+)+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition.">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44 (4), 924-938 (2016).</li><li>Roslansky, P. F., Novitsky, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+Limulus+amebocyte+lysate+(LAL)+to+LAL-reactive+glucans.">Sensitivity of Limulus amebocyte lysate (LAL) to LAL-reactive glucans.</a> J Clin Microbiol. 29 (11), 2477-2483 (1991).</li><li>Jahr, H., Pfeiffer, G., Hering, B. J., Federlin, K., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin-mediated+activation+of+cytokine+production+in+human+PBMCs+by+collagenase+and+Ficoll.">Endotoxin-mediated activation of cytokine production in human PBMCs by collagenase and Ficoll.</a> J Mol Med (Berl). 77 (1), 118-120 (1999).</li><li>Zhang, X., Morrison, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+selective+priming+effects+on+tumor+necrosis+factor+alpha+and+nitric+oxide+production+in+mouse+peritoneal+macrophages.">Lipopolysaccharide-induced selective priming effects on tumor necrosis factor alpha and nitric oxide production in mouse peritoneal macrophages.</a> J Exp Med. 177 (2), 511-516 (1993).</li><li>Hirohashi, N., Morrison, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+lipopolysaccharide+(LPS)+pretreatment+of+mouse+macrophages+modulates+LPS-dependent+interleukin-6+production+in+vitro.">Low-dose lipopolysaccharide (LPS) pretreatment of mouse macrophages modulates LPS-dependent interleukin-6 production in vitro.</a> Infect Immun. 64 (3), 1011-1015 (1996).</li><li>Deng, H., Maitra, U., Morris, M., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+responsible+for+the+priming+of+macrophage+activation.">Molecular mechanism responsible for the priming of macrophage activation.</a> J Biol Chem. 288 (6), 3897-3906 (2013).</li><li>Cella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inhibitory+receptor+(ILT3)+expressed+on+monocytes,+macrophages,+and+dendritic+cells+involved+in+antigen+processing.">A novel inhibitory receptor (ILT3) expressed on monocytes, macrophages, and dendritic cells involved in antigen processing.</a> J Exp Med. 185 (10), 1743-1751 (1997).</li><li>Kramer, P. R., Winger, V., Reuben, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+limits+TNF-alpha+production+in+CD16-activated+monocytes.">PI3K limits TNF-alpha production in CD16-activated monocytes.</a> Eur J Immunol. 39 (2), 561-570 (2009).</li><li>Rose, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+gamma+receptor+cross-linking+activates+p42,+p38,+and+JNK/SAPK+mitogen-activated+protein+kinases+in+murine+macrophages:+role+for+p42MAPK+in+Fc+gamma+receptor-stimulated+TNF-alpha+synthesis.">Fc gamma receptor cross-linking activates p42, p38, and JNK/SAPK mitogen-activated protein kinases in murine macrophages: role for p42MAPK in Fc gamma receptor-stimulated TNF-alpha synthesis.</a> J Immunol. 158 (7), 3433-3438 (1997).</li><li>Rezzonico, R., Imbert, V., Chicheportiche, R., Dayer, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+CD11b+and+CD11c+beta(2)+integrins+by+antibodies+or+soluble+CD23+induces+macrophage+inflammatory+protein+1alpha+(MIP-1alpha)+and+MIP-1beta+production+in+primary+human+monocytes+through+a+pathway+dependent+on+nuclear+factor-kappaB.">Ligation of CD11b and CD11c beta(2) integrins by antibodies or soluble CD23 induces macrophage inflammatory protein 1alpha (MIP-1alpha) and MIP-1beta production in primary human monocytes through a pathway dependent on nuclear factor-kappaB.</a> Blood. 97 (10), 2932-2940 (2001).</li></ol>

نظراً للعدد الكبير من العاصمة اللازمة لتطعيم الفئران (حوالي 2-4 × 106 العاصمة الواحدة وماوس واحد)، ومعظم التلقيح تستند الاستراتيجيات في الفئران إلى عزل العاصمة من BM والطحال متبوعاً التنشيط السابقين فيفو . ومع ذلك، يحاول تنشيط الورم DC في فيفو، استخدام نفس الشروط لتنشيط الطحال ...

منذ اكتشافهم، كانت الخلايا الجذعية (DC) تركيز بحوث واسعة النطاق بسبب قدرتها الفريدة على الانحراف تمايز الخلية تي1. على مدى العقود العديدة الماضية، سعى مسعى بحوث مستفيضة لتحديد مجموعات فرعية العاصمة المختلفة ووظيفتها أثناء تطور الورم وحصانة 2. وحدات تحكم المجال Dc تتألف من السكان خلية غير المتجانسة التي تختلف عن بعضها البعض في تلك المستقبلات التعرف على الأنماط، توزيع الأنسجة، والمهاجرة ومستضد العرض التقديمي قدرات3،،من45. بالمقارنة مع سائر المجموعات الفرعية في العاصمة، العاصمة المشتقة من الوحيدات (مودك) هي الآن أكثر وفرة في الأورام ويمكن إنشاؤها بسهولة من تعميم أو التسلل إلى الورم وحيدات6،7. ولذلك، تستند العديد من التجارب السريرية التي تسعى إلى الاستفادة من انتشارها النسبي التلاعب في فيفو و السابقين فيفو من مودك الذاتي بغية الحصول على خلية T الحصانة 8،9.
وبالمثل، يتطلب التلقيح المستندة إلى العاصمة من النماذج التجريبية الورم حقن المسلسل 2-3، 5-7 أيام على حدة، من 1-2 × 106 DC المنشط نابض مع المستضدات الورم. ولذلك، ولتحقيق هذا العدد الكبير من العاصمة، معظم الدراسات الماوس أساسا استخدمت مودك مثقف من السلائف نخاع العظم (بي أم) في GM-CSF لمدة 7-9 أيام (إيل-4 غير مطلوبة في إعداد الماوس)10،11. على الرغم من ذلك، نظراً لخروج المغلوب GM-CSF أن الفئران قد حجرة DC عادي عموما 12،13، وإعطاء السكان المختلطة التي تم الحصول عليها من تلك الثقافة،14 الفسيولوجية أهمية هذه العاصمة قد تم التشكيك.
وبدلاً من ذلك، قد تكون معزولة بشكل روتيني DC من خلايا الطحال. ومع ذلك، تشمل العاصمة فقط حوالي 0.3-0.8 ٪ من مجموع الطحال الخلايا (أسفر عن حوالي 7 × 105 DC/الطحال)، وهذه الخلايا، إلا CD103+ العاصمة ومودك يمكن أن يهاجر مرة أخرى إلى الأجهزة اللمفاوية. منذ مودكس يشكلون حوالي 10-15% من سكان العاصمة الطحال15،16، تحقق معظم عزل البروتوكولات حوالي 1 × 105 مودك في الطحال. ويمكن تحقيق التوسع في مودك عن طريق حقن الخلايا B16 transfected التي تفرز GM-CSF، أدى إلى زيادة 100-fold في الطحال مودك17. استخدام مودك لتطوير لقاحات DC غير محدودة إذ لا يمكن أن يتم هذا الإجراء في البشر، وتم الحصول عليها فعلا عالية يتم تنشيط مودك.
بالإضافة إلى الحصول على عدد كاف من العاصمة، ينطوي على تحد آخر لتطوير لقاحات فعالة العاصمة ضد الخلايا السرطانية ذاتي عدم وجود إشارات الخطر كافية في تحديد الورم تنشيط العاصمة بالكامل. وعادة ما يتحقق الاستقراء إشارات كوستيمولاتوري من خلال تنشيط المستقبلات التعرف على الأنماط (بر)، أو يكتين ج-نوع الإشارات مسارات18،19،،من2021. نهج آخر لتنشيط العاصمة يستغل قدرتهم على تناول المضادات عن طريق التفاعل مع مستقبلات Fcγ السطحية (FcγR). وفي الواقع، قد أظهرت عددا من المخطوطات الهامة أن حقن مودك من السلائف BM المنشط مع الورم-مفتش IC يمكن أن تمنع نمو الأورام في إعدادات الاتقائية، ويمكن أن يؤدي إلى استئصال أورام ثابتة22،23 .
في ورقتي الأخيرة، اكتشف الكرمي وآخرون على النقيض من بمدك والطحال DC، مودك من الدم والأورام لا يمكن الاستجابة لمفتش IC دون منشطات إضافية. تم العثور على هذا أن تكون بسبب وجود ارتفاع مستويات تيروزين phosphatases تنظيم إشارات24،25FcγR داخل الخلايا. عن طريق تحديد نقطة حرجة في العاصمة، قدم هذا العمل نظرة ثاقبة هامة في متطلبات التطعيم الناجحة المستندة إلى العاصمة. الحاجة إلى حوافز إضافية لتمكين FcγR الإشارات، ويفترض أنه إشارة من مستقبلات يكتين الأخرى الاستفادة من سلسلة الفسفرة مماثلة، مما يؤكد الحاجة إلى تجنب فتيلة العاصمة خلال عزلتها.
ولذلك، هذا البروتوكول يصف عزلة مودك من الدم والأورام، والتي تختلف بشكل ملحوظ من BM والطحال DC، ويسلط الضوء على احتياطات جديرة بالنظر فيها أثناء العملية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque PREMIUM</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>17-5442-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>07820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-052-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Monocyte Isolation Kit</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>19861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9697-50MG</td>
			<td>Test each lot for endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DN25-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>16140071</td>
			<td>Test each lot for endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CD11c</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-CD11b</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 650 MHCII</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>107641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF48- CD86</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>105017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cy7-Ly-C6</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>108423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy7-CD15</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>135523</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation protocol of mouse monocyte-derived dendritic cells and their subsequent in vitro activation with tumor immune complexes

الخلايا الجذعية (DC) هم سكان الخلية غير المتجانسة التي تختلف في علامات غشاء الخلية وأنماط الهجرة والتوزيع، وفي عرض مستضد وخلية T تفعيل القدرات. منذ تلقيح معظم النماذج التجريبية الورم تتطلب ملايين العاصمة، معزولة على نطاق واسع من النخاع العظمى أو الطحال. بيد أن هذه العاصمة كثيرا تختلف من الدم وورم DC في ردودهم مجمعات محصنة (IC)، ويفترض أن مستقبلات يكتين Syk-إلى جانب الأخرى. الأهم من ذلك، نظراً لحساسية DC للجزيئات المرتبطة بالخطر، على وجود اندوتوكسينس أو الأجسام المضادة التي مستقبلات التنشيط التشعب في عزل الخطوات يمكن أن يؤدي فتيلة العاصمة وتؤثر بالتالي المعلمات، أو على الأقل الجرعة المطلوبة لتفعيلها. ولذلك، هنا يصف لنا بروتوكول مفصل لعزل مودك من الدم والأورام مع تجنب من تفعيل سابق لأوانه. وبالإضافة إلى ذلك، يتم توفيرها بروتوكولا لتفعيل مودك مع الورم IC، وتحليلاتها اللاحقة.

نحن في البداية بالمقارنة مع قدرة الأجسام المضادة من الفئران سينجينيك ومتمكنة من السذاجة لربط الخلايا السرطانية. وتحقيقا لهذه الغاية، كانت ثابتة في بارافورمالدهيد خطوط الخلايا السرطانية B16F10 و LMP وغسلها على نطاق واسع. B16F10 هو خط خلية سرطان الجلد، الذي كان أصلاً معزولة من ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes at JoVE.com

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

DC المشتقة من الوحيدات (مودك) يمكن الشعور بمبالغ صغيرة من الجزيئات المرتبطة بالخطر ويتم ذلك بسهولة جاهزة للانفجار. نحن نقدم بروتوكول مفصل لعزل مودك من الدم والأورام ومن التفعيل مع مجمعات محصنة مع تسليط الضوء على الاحتياطات الرئيسية التي يجب أن تعتبر تفاديا من تفعيل سابق لأوانه.

بروتوكول عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الوحيدات الماوس ومن تفعيل اللاحقة في المختبر مع مجمعات محصنة ضد الورم

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

عزل الخلايا السرطانية المتداولة في نموذج الفأر المثلي لسرطان القولون والمستقيم

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

السابقين فيفو تصوير لمفاوية T CD8 المقيم في ورم الرئة البشرية شرائح باستخدام الفحص المجهري [كنفوكل]

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

تتحرك صعودا: بسيطة ومرنة في المختبر غزو ثلاثية الأبعاد مقايسة بروتوكول

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

عزل وتوصيف الخلايا التي تبدأ الورم من الساركوما المستمدة من المرضى Xenografts

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

تخصيب اليورانيوم وتوصيف ميكرونفيرونمينتس المناعي والمناعة غير ورم في المنشأة الأورام مورين تحت الجلد

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

الكشف عن الوقت الحقيقي في المختبر ورم الخلايا المبرمج الناجمة عن CD8+ تي الخلايا لدراسة وظائف المناعة القمعية من التسلل إلى ورم الخلايا النقوي

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

إينتراموكوسال تلقيح خلايا الخلايا الحرشفية في الفئران للورم التنميط المناعي وتقييم استجابة العلاج

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Transfer of Manipulated Tumor-associated Neutrophils into Tumor-Bearing Mice to Study their Angiogenic Potential In Vivo

نقل العدلات المرتبطة بالورم إلى الفئران الحاملة للورم لدراسة إمكاناتها الوعائية في الجسم الحي

The contribution of neutrophils to the regulation of tumorigenesis is getting increased attention. These cells are heterogeneous, and depending on the ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

في المختبر الاختبار لدراسة التفاعل الورم الضامة

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...