Name: isolation protocol of mouse monocyte-derived dendritic cells and their subsequent in vitro activation with tumor immune complexes
Uploaded: 2018-05-31T13:00:00
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프로토콜 아래 마우스 MoDC의 격리를 참조 하십시오 아직 전반적인 원리 다른 DC 하위 집합 셀에도 적용 될 수 있습니다. 12-16 주 된 C57Bl/6j 생쥐 실험 동물 관리 인증-공인 동물 시설에 대 한 미국 협회에서 유지 되었다. 모든 프로토콜은 스탠포드 대학 및-텔아비브 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다.
1. 종양의 절연 관련 Monocyte 파생 된 DC
<ol><li>층 류 두건?...

<ol>
	<li>Steinman, R. M., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+dendritic+cells+into+medicine.">Taking dendritic cells into medicine.</a> Nature. 449 (7161), 419-426 (2007).</li><li>Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic-cell-based+therapeutic+cancer+vaccines.">Dendritic-cell-based therapeutic cancer vaccines.</a> Immunity. 39 (1), 38-48 (2013).</li><li>Mildner, A., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+dendritic+cell+subsets.">Development and function of dendritic cell subsets.</a> Immunity. 40 (5), 642-656 (2014).</li><li>Merad, M., Sathe, P., Helft, J., Miller, J., Mortha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dendritic+cell+lineage:+ontogeny+and+function+of+dendritic+cells+and+their+subsets+in+the+steady+state+and+the+inflamed+setting.">The dendritic cell lineage: ontogeny and function of dendritic cells and their subsets in the steady state and the inflamed setting.</a> Annual review of immunology. 31, 563-604 (2013).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells,+monocytes+and+macrophages:+a+unified+nomenclature+based+on+ontogeny.">Dendritic cells, monocytes and macrophages: a unified nomenclature based on ontogeny.</a> Nature reviews. Immunology. 14 (8), 571-578 (2014).</li><li>Spitzer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Immunity+Is+Required+for+Effective+Cancer+Immunotherapy.">Systemic Immunity Is Required for Effective Cancer Immunotherapy.</a> Cell. 168 (3), 487-502 (2017).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsupervised+High-Dimensional+Analysis+Aligns+Dendritic+Cells+across+Tissues+and+Species.">Unsupervised High-Dimensional Analysis Aligns Dendritic Cells across Tissues and Species.</a> Immunity. 45 (3), 669-684 (2016).</li><li>Anguille, S., Smits, E. L., Lion, E., van Tendeloo, V. F., Berneman, Z. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+use+of+dendritic+cells+for+cancer+therapy.">Clinical use of dendritic cells for cancer therapy.</a> Lancet Oncol. 15 (7), e257-e267 (2014).</li><li>Wimmers, F., Schreibelt, G., Skold, A. E., Figdor, C. G., De Vries, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paradigm+Shift+in+Dendritic+Cell-Based+Immunotherapy:+From+in+vitro+Generated+Monocyte-Derived+DCs+to+Naturally+Circulating+DC+Subsets.">Paradigm Shift in Dendritic Cell-Based Immunotherapy: From in vitro Generated Monocyte-Derived DCs to Naturally Circulating DC Subsets.</a> Front Immunol. 5, 165 (2014).</li><li>Banchereau, J., Palucka, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+as+therapeutic+vaccines+against+cancer.">Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer.</a> Nature reviews. Immunology. 5 (4), 296-306 (2005).</li><li>Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+dendritic+cells.">Isolation of dendritic cells.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li><li>Greter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+controls+nonlymphoid+tissue+dendritic+cell+homeostasis+but+is+dispensable+for+the+differentiation+of+inflammatory+dendritic+cells.">GM-CSF controls nonlymphoid tissue dendritic cell homeostasis but is dispensable for the differentiation of inflammatory dendritic cells.</a> Immunity. 36 (6), 1031-1046 (2012).</li><li>Vremec, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+granulocyte/macrophage+colony-stimulating+factor+on+dendritic+cell+levels+in+mouse+lymphoid+organs.">The influence of granulocyte/macrophage colony-stimulating factor on dendritic cell levels in mouse lymphoid organs.</a> Eur J Immunol. 27 (1), 40-44 (1997).</li><li>Helft, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+Mouse+Bone+Marrow+Cultures+Comprise+a+Heterogeneous+Population+of+CD11c(+)MHCII(+)+Macrophages+and+Dendritic+Cells.">GM-CSF Mouse Bone Marrow Cultures Comprise a Heterogeneous Population of CD11c(+)MHCII(+) Macrophages and Dendritic Cells.</a> Immunity. 42 (6), 1197-1211 (2015).</li><li>Dong, M. B., Rahman, M. J., Tarbell, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+gating+for+spleen+monocyte+and+DC+subsets:+differences+in+autoimmune+NOD+mice+and+with+acute+inflammation.">Flow cytometric gating for spleen monocyte and DC subsets: differences in autoimmune NOD mice and with acute inflammation.</a> J Immunol Methods. 432, 4-12 (2016).</li><li>Drutman, S. B., Kendall, J. C., Trombetta, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+spleen+monocytes+can+upregulate+CD11c+expression+without+converting+into+dendritic+cells.">Inflammatory spleen monocytes can upregulate CD11c expression without converting into dendritic cells.</a> J Immunol. 188 (8), 3603-3610 (2012).</li><li>Hanada, K., Tsunoda, R., Hamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF-induced+in+vivo+expansion+of+splenic+dendritic+cells+and+their+strong+costimulation+activity.">GM-CSF-induced in vivo expansion of splenic dendritic cells and their strong costimulation activity.</a> J Leukoc Biol. 60 (2), 181-190 (1996).</li><li>Gilboa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DC-based+cancer+vaccines.">DC-based cancer vaccines.</a> J Clin Invest. 117 (5), 1195-1203 (2007).</li><li>Melief, C. J., van der Burg, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotherapy+of+established+(pre)malignant+disease+by+synthetic+long+peptide+vaccines.">Immunotherapy of established (pre)malignant disease by synthetic long peptide vaccines.</a> Nat Rev Cancer. 8 (5), 351-360 (2008).</li><li>Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunotherapy+via+dendritic+cells.">Cancer immunotherapy via dendritic cells.</a> Nat Rev Cancer. 12 (4), 265-277 (2012).</li><li>Bol, K. F., Schreibelt, G., Gerritsen, W. R., de Vries, I. J., Figdor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cell-Based+Immunotherapy:+State+of+the+Art+and+Beyond.">Dendritic Cell-Based Immunotherapy: State of the Art and Beyond.</a> Clin Cancer Res. 22 (8), 1897-1906 (2016).</li><li>Rafiq, K., Bergtold, A., Clynes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+complex-mediated+antigen+presentation+induces+tumor+immunity.">Immune complex-mediated antigen presentation induces tumor immunity.</a> J Clin Invest. 110 (1), 71-79 (2002).</li><li>Schuurhuis, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+complex-loaded+dendritic+cells+are+superior+to+soluble+immune+complexes+as+antitumor+vaccine.">Immune complex-loaded dendritic cells are superior to soluble immune complexes as antitumor vaccine.</a> J Immunol. 176 (8), 4573-4580 (2006).</li><li>Carmi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+IgG+combined+with+dendritic+cell+stimuli+induce+antitumour+T-cell+immunity.">Allogeneic IgG combined with dendritic cell stimuli induce antitumour T-cell immunity.</a> Nature. 521 (7550), 99-104 (2015).</li><li>Carmi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Akt+and+SHP-1+are+DC-intrinsic+checkpoints+for+tumor+immunity.">Akt and SHP-1 are DC-intrinsic checkpoints for tumor immunity.</a> JCI Insight. 1 (18), e89020 (2016).</li><li>Kenkel, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Immunosuppressive+Dendritic+Cell+Subset+Accumulates+at+Secondary+Sites+and+Promotes+Metastasis+in+Pancreatic+Cancer.">An Immunosuppressive Dendritic Cell Subset Accumulates at Secondary Sites and Promotes Metastasis in Pancreatic Cancer.</a> Cancer Res. 77 (15), 4158-4170 (2017).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Activation+of+CD103(+)+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition.">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44 (4), 924-938 (2016).</li><li>Roslansky, P. F., Novitsky, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+Limulus+amebocyte+lysate+(LAL)+to+LAL-reactive+glucans.">Sensitivity of Limulus amebocyte lysate (LAL) to LAL-reactive glucans.</a> J Clin Microbiol. 29 (11), 2477-2483 (1991).</li><li>Jahr, H., Pfeiffer, G., Hering, B. J., Federlin, K., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin-mediated+activation+of+cytokine+production+in+human+PBMCs+by+collagenase+and+Ficoll.">Endotoxin-mediated activation of cytokine production in human PBMCs by collagenase and Ficoll.</a> J Mol Med (Berl). 77 (1), 118-120 (1999).</li><li>Zhang, X., Morrison, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+selective+priming+effects+on+tumor+necrosis+factor+alpha+and+nitric+oxide+production+in+mouse+peritoneal+macrophages.">Lipopolysaccharide-induced selective priming effects on tumor necrosis factor alpha and nitric oxide production in mouse peritoneal macrophages.</a> J Exp Med. 177 (2), 511-516 (1993).</li><li>Hirohashi, N., Morrison, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+lipopolysaccharide+(LPS)+pretreatment+of+mouse+macrophages+modulates+LPS-dependent+interleukin-6+production+in+vitro.">Low-dose lipopolysaccharide (LPS) pretreatment of mouse macrophages modulates LPS-dependent interleukin-6 production in vitro.</a> Infect Immun. 64 (3), 1011-1015 (1996).</li><li>Deng, H., Maitra, U., Morris, M., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+responsible+for+the+priming+of+macrophage+activation.">Molecular mechanism responsible for the priming of macrophage activation.</a> J Biol Chem. 288 (6), 3897-3906 (2013).</li><li>Cella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inhibitory+receptor+(ILT3)+expressed+on+monocytes,+macrophages,+and+dendritic+cells+involved+in+antigen+processing.">A novel inhibitory receptor (ILT3) expressed on monocytes, macrophages, and dendritic cells involved in antigen processing.</a> J Exp Med. 185 (10), 1743-1751 (1997).</li><li>Kramer, P. R., Winger, V., Reuben, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+limits+TNF-alpha+production+in+CD16-activated+monocytes.">PI3K limits TNF-alpha production in CD16-activated monocytes.</a> Eur J Immunol. 39 (2), 561-570 (2009).</li><li>Rose, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+gamma+receptor+cross-linking+activates+p42,+p38,+and+JNK/SAPK+mitogen-activated+protein+kinases+in+murine+macrophages:+role+for+p42MAPK+in+Fc+gamma+receptor-stimulated+TNF-alpha+synthesis.">Fc gamma receptor cross-linking activates p42, p38, and JNK/SAPK mitogen-activated protein kinases in murine macrophages: role for p42MAPK in Fc gamma receptor-stimulated TNF-alpha synthesis.</a> J Immunol. 158 (7), 3433-3438 (1997).</li><li>Rezzonico, R., Imbert, V., Chicheportiche, R., Dayer, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+CD11b+and+CD11c+beta(2)+integrins+by+antibodies+or+soluble+CD23+induces+macrophage+inflammatory+protein+1alpha+(MIP-1alpha)+and+MIP-1beta+production+in+primary+human+monocytes+through+a+pathway+dependent+on+nuclear+factor-kappaB.">Ligation of CD11b and CD11c beta(2) integrins by antibodies or soluble CD23 induces macrophage inflammatory protein 1alpha (MIP-1alpha) and MIP-1beta production in primary human monocytes through a pathway dependent on nuclear factor-kappaB.</a> Blood. 97 (10), 2932-2940 (2001).</li></ol>

마우스에 우 두를 접종에 필요한 DC의 많은 수를 감안할 때 (약 2-4 x 106 DC 한 마우스 당), 예방 접종 BM과 비장 뒤에 그들의 비보 전 활성화에서 DC의 격리를 기반으로하는 생쥐에서 전략의 대부분. 그러나, 종양 DC에서 vivo에서, 비장 및 BM DC 활성화에 대 한 동일한 조건을 사용 하 여 활성화, 자주 하지 효과적인 면역 생산에 성공 하려고 합니다. 두 후속 출판물, Carmi 외. 그 ...

그들의 발견부터 수지상 세포 (DC) T 세포 감 별 법1왜곡 그들의 독특한 능력으로 인해 광범위 한 연구의 초점을 했습니다. 지난 몇 년간 광범위 한 연구 노력 종양 진행과 면역 2동안 다양 한 DC 하위 집합 및 그들의 기능을 정의 하기 위해 노력해왔다. Dc는 그들의 패턴 인식 수용 체, 조직 배포에서에서 서로 다른 이기종 세포 인구 구성 및 철새와 항 원 프레 젠 테이 션 기능3,,45. 다른 DC 하위 집합에 비해 monocyte 파생 된 DC (MoDC) 종양에 훨씬 더 풍부 하 고 순환에서 쉽게 생성 될 수 또는 종양 침투 monocytes6,7. 따라서, 그들의 상대 보급을 활용 하고자 하는 많은 임상 실험은 T 세포 면역 8,9를 유도 하기 위해 헌 MoDC의 비보와 비보 전 조작 기반으로 합니다.
마찬가지로, DC 기반으로 예방 접종 실험 종양 모델의 2-3 직렬 주사, 떨어져, 1-2 10 x 5-7 일 필요6 활성화 된 DC 펄스와 종양 항 원. 따라서, DC의이 많은 수를 달성 하기 위해, 대부분 마우스 연구 주로 사용 MoDC 7-9 일 (IL-4 마우스 설정에 필요 하지 않습니다)에 대 한 GM-CSF에 골 수 (BM) 선구자에서 교양10,11. 그럼에도 불구 하 고, 주어진 그 GM-CSF 녹아웃 쥐가 전반적으로 정상적인 DC 구획 12,의13, 그리고 그 문화에서 얻은 혼합된 인구를 주어진14 이러한 DC의 생리 적인 관련성 질문으로 불려 왔다.
또는, DC 비장 세포에서 정기적으로 격리 된 수 있습니다. 그러나, DC 구성 약 0.3-0.8% (약 7 × 105 DC/비장 결과), 총 비장 세포의이 세포, CD103만의+ DC 및 MoDC 림프 기관에 다시 마이그레이션할 수 있습니다. MoDCs 비장 DC 인구15,16의 약 10-15%를 구성, 이후 대부분 격리 프로토콜 약 1 × 105 MoDC 비장 당 양보. MoDC의 확장 GM-CSF, 비장 MoDC17100 증가 결과 분 비 하는 transfected B16 셀을 삽입 하 여 얻을 수 있습니다. 그러나, DC 백신 개발을 위한 MoDC의 사용은 제한 때문에 인간과 취득에이 절차를 수행할 수 없습니다 MoDC 이미 매우 활성화 됩니다.
DC의 적절 한 숫자를 얻는 이외에 헌 암 세포에 대 한 효과적인 DC 백신을 개발 하기 위한 또 다른 도전은 완전히 DC를 활성화 하는 종양에 충분 한 위험 신호의 부족을 포함 한다. Co-stimulatory 신호 유도 패턴 인식 수용 체 (PRR), 또는 c 형 lectin 신호 통로18,19,,2021의 활성화를 통해 일반적으로 달성 된다. DC를 활성화 하기 위한 더 접근 표면 Fcγ 수용 체 (FcγR)와 상호 작용을 통해 항 원까지 자신의 능력을 악용 합니다. 실제로, 중요 한 원고 수 나타났습니다 예방 설정에서 종양의 성장을 막을 수는 BM 선구자 활성화에서 MoDC의 주입 종양-IgG IC 및 설립된 종양22,23 의 박멸을 이어질 수 있습니다 .
2 최근 논문, Carmi 외 는 BMDC 및 비장 DC, 달리 고 혈액 종양에서 MoDC에 응답할 수 없습니다 IgG IC 추가 자극 없이 발견 했다. 이 티로신 인산 가수분해 효소 신호24,25FcγR 통제의 상부 세포내의 존재 때문에 발견 되었다. DC에서 중요 한 검사점을 정의 하 여이 작품 성공 DC 기반 예방 접종에 대 한 요구 사항에 대 한 중요 한 통찰력을 제공 합니다. FcγR 신호, 그리고 아마도 비슷한 인 산화 폭포를 활용 하 여 다른 lectin 수용 체에서 신호 수 있도록 추가 자극에 대 한 요구 따라서 그들의 고립 동안 DC의 애 벌 칠을 피하에 대 한 필요성을 밑줄.
따라서, 현재 프로토콜 혈액 및 종양, BM, 비장 DC에서 현저 하 게 다르다에서 MoDC의 격리를 설명 하 고 과정에서 고려 가치가 주의 강조.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque PREMIUM</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>17-5442-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>07820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-052-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Monocyte Isolation Kit</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>19861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9697-50MG</td>
			<td>Test each lot for endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DN25-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>16140071</td>
			<td>Test each lot for endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CD11c</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-CD11b</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 650 MHCII</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>107641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF48- CD86</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>105017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cy7-Ly-C6</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>108423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy7-CD15</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>135523</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation protocol of mouse monocyte-derived dendritic cells and their subsequent in vitro activation with tumor immune complexes

수지상 세포 (DC)는 이종 세포 인구에 그들의 세포 막 마커, 마이그레이션 패턴 및 유통, 그리고 그들의 프레 젠 테이 션 항 원에 T 세포 활성화 능력을 다른. 실험적 종양 모델의 대부분 예방 접종 필요 DC의 수백만, 그들은 널리 골 수 나 비장 으로부터 격리 됩니다. 그러나, 이러한 DC 크게 다 혈액과 종양 DC에 그들의 응답에서 면역성이 있는 복합물 (IC), 그리고 아마도 다른 lectin Syk 결합 수용 체. 중요 한 것은, 위험 관련 분자에 DC의 감도 감안할 때, 독 또는 crosslink 활성화 수용 체는 격리 중 하나는 항 체의 존재 수 DC의 못쓰게 되며 따라서 매개 변수를 영향을 하거나 적어도 복용량, 그들을 활성화 하는 데 필요한 따라서, 여기 우리가 그들의 조기 활성화를 피하고 있는 동안 혈액과 종양에서 MoDC를 고립 시키기를 위한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 또한, 프로토콜 종양 IC와 함께 MoDC 활성화 및 그들의 연속적인 분석을 위해 제공 됩니다.

우리는 처음 종양 세포에 바인딩할 순 syngeneic 고 수용자 쥐에서 항 체의 용량 비교. 이 위해, B16F10 LMP 종양 세포 라인 paraformaldehyde에서 고정 되었고 광범위 하 게 씻어. B16F10 흑색 종 세포 선, C57Bl/6 마우스의 폐 전이에서 원래 고립 되었다 이다. LMP는 KrasG12D에서 고립 되었다 췌 장 종양 세포 / +, LSL-Trp53R172H / +, 그리고 Pdx-1-Cre 마우스 129F1 마우스에 꾸준히 성장 하 고. IC를, 종?...

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Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Monocyte 파생 된 DC (MoDC) 위험 관련 된 분자의 작은 금액을 느낄 수 및 따라서 쉽게 끝났다. 우리는 혈액과 종양과 그들의 조기 활성화를 피하기 위해 고려해 야 하는 주요 조치를 강조 하면서 면역성이 있는 복합물으로 그들의 활성화에서 MoDC의 격리에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

마우스 Monocyte 파생 된 모 수석 세포 및 종양 면역 단지와 활성화 후속 생체 외에서 그들의 격리 프로토콜

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

대장 암 정위 마우스 모델에서의 순환 종양 세포의 분리

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

연구

암 연구학

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

전 비보 인간의 폐 종양에 거주 CD8 T 림프 톨의 이미징 조각 사용 하 여 Confocal 현미경 검사 법

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

위쪽으로 이동: 간단 하 고 유연한 생체 외에서 3 차원 침공 분석 실험 프로토콜

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 발하는 세포의 격리 및 특성화

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

농축 및 설립된 피하 Murine 종양에서 종양 면역 및 비 면역 Microenvironments의 특성

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

펄프 조직 문화와 공동 암 세포와 그들의 상호 작용을 공부 하에서 중간 엽 줄기 세포 분리

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

실시간 탐지의 체 외 종양 세포 Apoptosis에 CD8에 의해 유도 된+ T 세포 종양 침투 골수성 세포의 면역 진압 기능 연구

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

종양 면역 프로 파일링에 대 한 쥐 및 치료 반응 평가에 편평 세포 암 종 세포의 intramucosal 접종

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Transfer of Manipulated Tumor-associated Neutrophils into Tumor-Bearing Mice to Study their Angiogenic Potential In Vivo

조작된 종양 관련 호중구를 종양 베어링 마우스로 옮겨 생체 내 혈관신생 잠재력을 연구합니다.

The contribution of neutrophils to the regulation of tumorigenesis is getting increased attention. These cells are heterogeneous, and depending on the ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

종양 대식 세포 상호 작용을 연구 하는 시험관 내 분석

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...