Name: isolation protocol of mouse monocyte-derived dendritic cells and their subsequent in vitro activation with tumor immune complexes
Uploaded: 2018-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes at JoVE.com

Fare MoDC yalıtım için aşağıdaki protokolleri bakın, henüz genel ilkeleri diğer DC alt kümeleri hücreleri için de geçerli olabilir. 12 - 16-hafta-yaşlı C57Bl/6j fareler bir Amerikan Derneği Akreditasyon laboratuvar hayvan bakımı-akredite hayvan tesisi için muhafaza. Tüm iletişim kuralları Stanford Üniversitesi ve Tel-Aviv Üniversitesi Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından kabul edildi.
1. yalıtım tümör monosit kaynaklı DC ilişkili
<ol><li>Lami...

<ol>
	<li>Steinman, R. M., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+dendritic+cells+into+medicine.">Taking dendritic cells into medicine.</a> Nature. 449 (7161), 419-426 (2007).</li><li>Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic-cell-based+therapeutic+cancer+vaccines.">Dendritic-cell-based therapeutic cancer vaccines.</a> Immunity. 39 (1), 38-48 (2013).</li><li>Mildner, A., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+dendritic+cell+subsets.">Development and function of dendritic cell subsets.</a> Immunity. 40 (5), 642-656 (2014).</li><li>Merad, M., Sathe, P., Helft, J., Miller, J., Mortha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dendritic+cell+lineage:+ontogeny+and+function+of+dendritic+cells+and+their+subsets+in+the+steady+state+and+the+inflamed+setting.">The dendritic cell lineage: ontogeny and function of dendritic cells and their subsets in the steady state and the inflamed setting.</a> Annual review of immunology. 31, 563-604 (2013).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells,+monocytes+and+macrophages:+a+unified+nomenclature+based+on+ontogeny.">Dendritic cells, monocytes and macrophages: a unified nomenclature based on ontogeny.</a> Nature reviews. Immunology. 14 (8), 571-578 (2014).</li><li>Spitzer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Immunity+Is+Required+for+Effective+Cancer+Immunotherapy.">Systemic Immunity Is Required for Effective Cancer Immunotherapy.</a> Cell. 168 (3), 487-502 (2017).</li><li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsupervised+High-Dimensional+Analysis+Aligns+Dendritic+Cells+across+Tissues+and+Species.">Unsupervised High-Dimensional Analysis Aligns Dendritic Cells across Tissues and Species.</a> Immunity. 45 (3), 669-684 (2016).</li><li>Anguille, S., Smits, E. L., Lion, E., van Tendeloo, V. F., Berneman, Z. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+use+of+dendritic+cells+for+cancer+therapy.">Clinical use of dendritic cells for cancer therapy.</a> Lancet Oncol. 15 (7), e257-e267 (2014).</li><li>Wimmers, F., Schreibelt, G., Skold, A. E., Figdor, C. G., De Vries, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paradigm+Shift+in+Dendritic+Cell-Based+Immunotherapy:+From+in+vitro+Generated+Monocyte-Derived+DCs+to+Naturally+Circulating+DC+Subsets.">Paradigm Shift in Dendritic Cell-Based Immunotherapy: From in vitro Generated Monocyte-Derived DCs to Naturally Circulating DC Subsets.</a> Front Immunol. 5, 165 (2014).</li><li>Banchereau, J., Palucka, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+as+therapeutic+vaccines+against+cancer.">Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer.</a> Nature reviews. Immunology. 5 (4), 296-306 (2005).</li><li>Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+dendritic+cells.">Isolation of dendritic cells.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li><li>Greter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+controls+nonlymphoid+tissue+dendritic+cell+homeostasis+but+is+dispensable+for+the+differentiation+of+inflammatory+dendritic+cells.">GM-CSF controls nonlymphoid tissue dendritic cell homeostasis but is dispensable for the differentiation of inflammatory dendritic cells.</a> Immunity. 36 (6), 1031-1046 (2012).</li><li>Vremec, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+granulocyte/macrophage+colony-stimulating+factor+on+dendritic+cell+levels+in+mouse+lymphoid+organs.">The influence of granulocyte/macrophage colony-stimulating factor on dendritic cell levels in mouse lymphoid organs.</a> Eur J Immunol. 27 (1), 40-44 (1997).</li><li>Helft, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+Mouse+Bone+Marrow+Cultures+Comprise+a+Heterogeneous+Population+of+CD11c(+)MHCII(+)+Macrophages+and+Dendritic+Cells.">GM-CSF Mouse Bone Marrow Cultures Comprise a Heterogeneous Population of CD11c(+)MHCII(+) Macrophages and Dendritic Cells.</a> Immunity. 42 (6), 1197-1211 (2015).</li><li>Dong, M. B., Rahman, M. J., Tarbell, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+gating+for+spleen+monocyte+and+DC+subsets:+differences+in+autoimmune+NOD+mice+and+with+acute+inflammation.">Flow cytometric gating for spleen monocyte and DC subsets: differences in autoimmune NOD mice and with acute inflammation.</a> J Immunol Methods. 432, 4-12 (2016).</li><li>Drutman, S. B., Kendall, J. C., Trombetta, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+spleen+monocytes+can+upregulate+CD11c+expression+without+converting+into+dendritic+cells.">Inflammatory spleen monocytes can upregulate CD11c expression without converting into dendritic cells.</a> J Immunol. 188 (8), 3603-3610 (2012).</li><li>Hanada, K., Tsunoda, R., Hamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF-induced+in+vivo+expansion+of+splenic+dendritic+cells+and+their+strong+costimulation+activity.">GM-CSF-induced in vivo expansion of splenic dendritic cells and their strong costimulation activity.</a> J Leukoc Biol. 60 (2), 181-190 (1996).</li><li>Gilboa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DC-based+cancer+vaccines.">DC-based cancer vaccines.</a> J Clin Invest. 117 (5), 1195-1203 (2007).</li><li>Melief, C. J., van der Burg, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotherapy+of+established+(pre)malignant+disease+by+synthetic+long+peptide+vaccines.">Immunotherapy of established (pre)malignant disease by synthetic long peptide vaccines.</a> Nat Rev Cancer. 8 (5), 351-360 (2008).</li><li>Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunotherapy+via+dendritic+cells.">Cancer immunotherapy via dendritic cells.</a> Nat Rev Cancer. 12 (4), 265-277 (2012).</li><li>Bol, K. F., Schreibelt, G., Gerritsen, W. R., de Vries, I. J., Figdor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cell-Based+Immunotherapy:+State+of+the+Art+and+Beyond.">Dendritic Cell-Based Immunotherapy: State of the Art and Beyond.</a> Clin Cancer Res. 22 (8), 1897-1906 (2016).</li><li>Rafiq, K., Bergtold, A., Clynes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+complex-mediated+antigen+presentation+induces+tumor+immunity.">Immune complex-mediated antigen presentation induces tumor immunity.</a> J Clin Invest. 110 (1), 71-79 (2002).</li><li>Schuurhuis, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+complex-loaded+dendritic+cells+are+superior+to+soluble+immune+complexes+as+antitumor+vaccine.">Immune complex-loaded dendritic cells are superior to soluble immune complexes as antitumor vaccine.</a> J Immunol. 176 (8), 4573-4580 (2006).</li><li>Carmi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+IgG+combined+with+dendritic+cell+stimuli+induce+antitumour+T-cell+immunity.">Allogeneic IgG combined with dendritic cell stimuli induce antitumour T-cell immunity.</a> Nature. 521 (7550), 99-104 (2015).</li><li>Carmi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Akt+and+SHP-1+are+DC-intrinsic+checkpoints+for+tumor+immunity.">Akt and SHP-1 are DC-intrinsic checkpoints for tumor immunity.</a> JCI Insight. 1 (18), e89020 (2016).</li><li>Kenkel, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Immunosuppressive+Dendritic+Cell+Subset+Accumulates+at+Secondary+Sites+and+Promotes+Metastasis+in+Pancreatic+Cancer.">An Immunosuppressive Dendritic Cell Subset Accumulates at Secondary Sites and Promotes Metastasis in Pancreatic Cancer.</a> Cancer Res. 77 (15), 4158-4170 (2017).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Activation+of+CD103(+)+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition.">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44 (4), 924-938 (2016).</li><li>Roslansky, P. F., Novitsky, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+Limulus+amebocyte+lysate+(LAL)+to+LAL-reactive+glucans.">Sensitivity of Limulus amebocyte lysate (LAL) to LAL-reactive glucans.</a> J Clin Microbiol. 29 (11), 2477-2483 (1991).</li><li>Jahr, H., Pfeiffer, G., Hering, B. J., Federlin, K., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxin-mediated+activation+of+cytokine+production+in+human+PBMCs+by+collagenase+and+Ficoll.">Endotoxin-mediated activation of cytokine production in human PBMCs by collagenase and Ficoll.</a> J Mol Med (Berl). 77 (1), 118-120 (1999).</li><li>Zhang, X., Morrison, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+selective+priming+effects+on+tumor+necrosis+factor+alpha+and+nitric+oxide+production+in+mouse+peritoneal+macrophages.">Lipopolysaccharide-induced selective priming effects on tumor necrosis factor alpha and nitric oxide production in mouse peritoneal macrophages.</a> J Exp Med. 177 (2), 511-516 (1993).</li><li>Hirohashi, N., Morrison, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+lipopolysaccharide+(LPS)+pretreatment+of+mouse+macrophages+modulates+LPS-dependent+interleukin-6+production+in+vitro.">Low-dose lipopolysaccharide (LPS) pretreatment of mouse macrophages modulates LPS-dependent interleukin-6 production in vitro.</a> Infect Immun. 64 (3), 1011-1015 (1996).</li><li>Deng, H., Maitra, U., Morris, M., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+responsible+for+the+priming+of+macrophage+activation.">Molecular mechanism responsible for the priming of macrophage activation.</a> J Biol Chem. 288 (6), 3897-3906 (2013).</li><li>Cella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inhibitory+receptor+(ILT3)+expressed+on+monocytes,+macrophages,+and+dendritic+cells+involved+in+antigen+processing.">A novel inhibitory receptor (ILT3) expressed on monocytes, macrophages, and dendritic cells involved in antigen processing.</a> J Exp Med. 185 (10), 1743-1751 (1997).</li><li>Kramer, P. R., Winger, V., Reuben, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+limits+TNF-alpha+production+in+CD16-activated+monocytes.">PI3K limits TNF-alpha production in CD16-activated monocytes.</a> Eur J Immunol. 39 (2), 561-570 (2009).</li><li>Rose, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc+gamma+receptor+cross-linking+activates+p42,+p38,+and+JNK/SAPK+mitogen-activated+protein+kinases+in+murine+macrophages:+role+for+p42MAPK+in+Fc+gamma+receptor-stimulated+TNF-alpha+synthesis.">Fc gamma receptor cross-linking activates p42, p38, and JNK/SAPK mitogen-activated protein kinases in murine macrophages: role for p42MAPK in Fc gamma receptor-stimulated TNF-alpha synthesis.</a> J Immunol. 158 (7), 3433-3438 (1997).</li><li>Rezzonico, R., Imbert, V., Chicheportiche, R., Dayer, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+CD11b+and+CD11c+beta(2)+integrins+by+antibodies+or+soluble+CD23+induces+macrophage+inflammatory+protein+1alpha+(MIP-1alpha)+and+MIP-1beta+production+in+primary+human+monocytes+through+a+pathway+dependent+on+nuclear+factor-kappaB.">Ligation of CD11b and CD11c beta(2) integrins by antibodies or soluble CD23 induces macrophage inflammatory protein 1alpha (MIP-1alpha) and MIP-1beta production in primary human monocytes through a pathway dependent on nuclear factor-kappaB.</a> Blood. 97 (10), 2932-2940 (2001).</li></ol>

Fareler telkih için gerekli DC çok sayıda göz önüne alındığında (yaklaşık 2-4 x 106 DC bir fare başına), farelerde stratejileri yalıtım DC BM ve onların ex vivo harekete geçirmek tarafından takip dalak dayalı aşılamanın en. Ancak, saldırılara tümör DC in vivodalak ve BM DC etkinleştirmek için aynı koşullar kullanarak, etkinleştirmek kez etkili bağışıklık üretiminde başarısız oldu. İki sonraki yayınlarda Karmi ve ark. Onlar doğal olarak yük...

Onların keşif beri dendritik hücreler (DC) kapsamlı bir araştırma T hücre farklılaşması1eğriltmek için benzersiz yetenekleri nedeniyle bir odak noktası olmuştur. Son birkaç on yıl içinde bir kapsamlı bir araştırma çaba tümör ilerleme ve bağışıklık 2sırasında çeşitli DC alt kümeleri ve işlevleri tanımlamak araştırmıştır. DCs onların örüntü tanıma reseptörleri, doku dağıtım, birbirinden farklı türdeş olmayan hücre popülasyonlarının oluşan ve göçmen ve antijen sunumu yetenekleri3,4,5. Diğer DC alt kümeleri için karşılaştırıldığında, monosit kaynaklı DC (MoDC) tümörleri içinde çok daha bol ve döngüye girmesini kolayca oluşturulabilir veya tümör infiltre monosit6,7. Bu nedenle, onların göreceli yaygınlık yararlanmak isteyen birçok klinik T hücre bağışıklık 8,9temin için otolog MoDC vivo içinde ve ex vivo manipülasyon temel alır.
Benzer şekilde, DC-esaslı aşı deneysel tümör modelleri 2-3 seri enjeksiyon, 5-7 gün arayla 1-2 x 10 gerektirir harekete geçirmek DC geniş puls tümör antijenleri ile6 . Bu nedenle, bu sayıda DC elde etmek için çoğu fare çalışmalar öncelikle 7-9 gün (IL-4 Fare ayarlarında gerekli değildir) kemik iliği (BM) GM-CSF kara filmin tarih öncesi gelen kültürlü MoDC kullandım10,11. Yine de, bu GM-CSF nakavt fareler var genel olarak normal DC yuvası 12,13ve o kültürü, elde edilen karışık nüfus göz önüne alındığında14 bu DC fizyolojik alaka soru içine çağrıldı.
Alternatif olarak, DC dalak hücrelerden rutin olarak izole olabilir. Ancak, DC oluşturan yaklaşık 0,3-%0,8 Toplam dalak hücre (yaklaşık 7 x 105 ' te DC/dalak kaynaklanan) ve bu hücreler, sadece CD103+ DC ve MoDC lenfoid organlar için geçiş. Dalak DC nüfusu15,16yaklaşık % 10-15 MoDCs oluşturan beri çoğu yalıtım protokolleri yaklaşık 1 x 10-5 MoDC dalak verim. MoDC genişleme GM-CSF, dalak MoDC17100-fold bir artış sonuçlanan salgılar transfected B16 hücreleri enjekte edilerek elde edilebilir. Bu yordamı insanlar ve elde edilen mümkün değil ancak, DC aşı geliştirmek için MoDC kullanımı sınırlı vardır MoDC zaten çok aktif.
Yeterli adet DC elde etmek ek olarak, otolog kanser hücrelerine karşı etkili DC aşı geliştirmek için başka bir sorun tam olarak DC etkinleştirmek için yeterli tehlike sinyalleri tümör ortamda eksikliği içerir. İndüksiyon co-stimulatory sinyal genellikle örüntü tanıma reseptörleri (PRR) veya c tipi lektin sinyal yolları18,19,20,21aktivasyonu ile elde edilir. DC etkinleştirmek için başka bir yaklaşım yeteneklerini antijenleri yüzey Fcγ reseptörleri (FcγR) ile etkileşimleri aracılığıyla almak için kullanır. Gerçekten de, bir dizi önemli el yazmaları göstermiştir MoDC enjeksiyon BM öncüleri harekete geçirmek ile gelen tümör-IC IgG ki tümör büyüme profilaktik ayarlarında engelleyebilir ve kurulan tümörler22,23 ortadan kaldırılması için yol açabilir .
İki son gazetelerde Carmi BMDC ve dalak DC aksine, MoDC kan ve tümör ek uyaranlara karşı IgG IC yanıt veremiyor keşfetti. Bu FcγR24,25sinyal düzenleyen Tirozin fosfatazlar yüksek hücre içi düzeyde varlığı nedeniyle bulundu. DC'de kritik bir denetim noktası tanımlayarak, bu eser başarılı DC-esaslı aşı için gereksinimleri önemli bir içgörü sağladı. Sinyal ve muhtemelen benzer bir fosforilasyon çağlayan kullanan diğer lektin reseptörleri sinyal FcγR etkinleştirmek ek bir çekim gücü gereksinimini böylece DC astar onların yalıtım sırasında kaçınmak gereğini vurgular.
Bu nedenle, mevcut protokol MoDC yalıtım kan ve belirgin BM ve dalak DC farklı, tümör açıklar ve önlemler işlemi sırasında dikkate değer vurgulamaktadır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque PREMIUM</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>17-5442-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>07820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-052-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Monocyte Isolation Kit</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>19861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9697-50MG</td>
			<td>Test each lot for endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DN25-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>16140071</td>
			<td>Test each lot for endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CD11c</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-CD11b</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 650 MHCII</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>107641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF48- CD86</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>105017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cy7-Ly-C6</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>108423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy7-CD15</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>135523</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation protocol of mouse monocyte-derived dendritic cells and their subsequent in vitro activation with tumor immune complexes

Dendritik hücreler (DC) onların hücre zarı işaretleyicileri, geçiş desen ve dağıtım ve antijen sunumu ve T hücre harekete geçirmek kapasiteleri farklı türdeş olmayan hücre popülasyonlarının vardır. Deneysel tümör modellerin çoğu aşıları DC milyonlarca gerektiren bu yana, dalak ve kemik iliği yaygın olarak izole edilmiştir. Ancak, bu DC önemli ölçüde farklı kan ve tümör verdikleri yanıtlara DC bağışıklık kompleksleri (IC) ve muhtemelen diğer Syk birleştiğinde lektin reseptörleri. Önemlisi, DC duyarlılığını tehlike ilişkili moleküllerin göz önüne alındığında, endotoxins veya crosslink harekete geçirmek reseptörleri birinde yalıtma, adım adım yol gösteren antikor varlığı neden DC astar içinde ve böylece Parametreler etkiler ya da en azından Dozaj, onları harekete geçirmek için gerekli. Bu nedenle, burada biz onların erken harekete geçirmek kaçınırken kan ve tümör oluşmuş MoDC izole için detaylı bir protokol tanımlamak. Buna ek olarak, bir protokol ile tümör IC MoDC harekete geçirmek ve onların daha sonraki analizler için sağlanır.

Biz başlangıçta tümör hücreleri bağlamak için saf syngeneic ve allojenik fareler gelen antikorlar kapasitesine göre. Bu amaçla, B16F10 ve LMP tümör hücre hatları paraformaldehyde içinde sabit ve kapsamlı bir şekilde yıkanmış. B16F10 C57Bl/6 farelerde akciğer Metastazlari üzerinden aslında izole bir melanom hücre çizgi var. LMP olduğunu KrasG12D izole bir pankreas tümörü hücre / + LSI-Trp53R172H / + ve Pdx-1-Cre fare ve giderek 129F1 farelerde büyür. IC elde...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes at JoVE.com

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Monosit kaynaklı DC (MoDC) tehlike ilişkili molekülleri küçük miktarlarda hissi olabilir ve bu nedenle kolayca astarlanmalıdır. MoDC yalıtım kan ve tümörleri ve onların harekete geçirmek bağışıklık kompleksleri ile onların erken harekete geçirmek önlemek için düşünülmesi gereken önemli önlemler vurgulayarak süre için detaylı bir protokol sağlar.

Yalıtım Protokolü fare monosit kaynaklı dendritik hücreler ve onların sonraki Vitro harekete geçirmek ile tümör bağışıklık kompleksleri

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Kolorektal kanserli bir Ortotopik Fare Modelinde Dolaşan Tümör Hücrelerinin İzolasyonu

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo İnsan akciğer tümörü içinde ikamet CD8 T lenfositlerin görüntüleme Confocal mikroskobu kullanma dilim

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Yukarı doğru hareket: Bir basit ve esnek Vitro üç boyutlu işgali tahlil iletişim kuralı

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Sarkom hasta türevi xenografts tümör-başlatma hücrelerinin yalıtım ve karakterizasyonu

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Zenginleştirme ve kurulan subkutan fare tümör tümör bağışıklık ve Non-immün Microenvironments karakterizasyonu

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mezenkimal kök hücre izolasyon hamuru doku ve kanser hücreleri ile ortak kültür ilişkileri incelemek için

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Gerçek zamanlı hafiye-in Vitro tümör hücre Apoptosis içinde CD8 tarafından indüklenen+ T hücreleri Myeloid hücrelerin tümör infiltre bağışıklık baskılayıcı işlevlerini çalışmaya

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Skuamöz Hücre Karsinomu Hücre Tümörü bağışıklık profil oluşturma için fareler ve tedaviye yanıt değerlendirme intramucosal aşı

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Transfer of Manipulated Tumor-associated Neutrophils into Tumor-Bearing Mice to Study their Angiogenic Potential In Vivo

Anjiogenik potansiyelinin In vivo çalışması için Işlenmiş tümör ilişkili Nötroflelerin tümör taşıyan fareler içine aktarılması

The contribution of neutrophils to the regulation of tumorigenesis is getting increased attention. These cells are heterogeneous, and depending on the ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

In vitro assay tümör çalışma-macrophage etkileşim

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...