Name: a method for the measurement of salivary gland function in mice
Uploaded: 2018-01-25T14:30:00
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Die Studie wurde unterstützt durch ein Stipendium der National Institutes of Health, National Institut of Dental und Craniofacial Forschung (DE025030).

Die nachfolgend beschriebene Protokoll von institutionellen Animal Care und Use Committee genehmigt wurde und es folgt die ethischen Leitlinien durch die National Institutes of Health. Alle Daten, die in diesem Bericht vorgestellten entstanden mithilfe von weiblichen Mäusen, die 10-12 Wochen alt waren. Die folgenden Stämme von Mäusen wurden verwendet: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S und F1 (B6XA/J). Alle Mäuse waren in Barriere Käfigen (5 Tiere pro Käfig) in bestimmten Pathogen-freies Bedingungen untergebracht und Futt...

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	<li>Proctor, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+salivary+secretion.">The physiology of salivary secretion.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).</li><li>Fox, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sj&#246;gren's+syndrome.">Sj&#246;gren's syndrome.</a> Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).</li><li>Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. 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Speichelproduktion ist ein komplexer Prozess und wird durch viele Faktoren beeinflusst. Daher kann die Messfunktion Speicheldrüse bei Versuchstieren eine Herausforderung sein. Eine zusätzliche Herausforderung ist, dass wiederholte Messungen der Speicheldrüse Funktion im gleichen Tier erforderlich, um den Ausbruch der Krankheit zu etablieren oder zur Erholung nach der Behandlung zeigen.
In diesem Bericht beschriebenen Tupfer-Methode ist technisch einfach mit mehreren Optionen zur Darstellung...

Die Speicheldrüsen produzieren Speichel in Reaktion auf eine Vielzahl von neurologischen und mechanische Reize1. Die Reize werden durch die sympathischen und parasympathischen Nervensystem an die adrenergen und cholinergen Rezeptoren in der Drüse durchgeführt. Pilocarpin ist ein cholinergen, Para-Sympathomimetikum, das überwiegend auf Muskarin-Rezeptoren wirkt. In der Speicheldrüse induziert es die Produktion von Speichel durch Einwirkung auf die Muskarin Acetylcholin-Rezeptor M31. Speichelproduktion nach Pilocarpin Gabe ist ein Indikator für die Fähigkeit der Speicheldrüsen, auf Reize reagieren und wird allgemein als ein Maß für die Speicheldrüse Funktion verwendet.
Genaue Messung der Speichelproduktion ist entscheidend für das Studium der Speicheldrüse Krankheiten einschließlich Sjögren Syndrom2 und Strahlung Verletzung nach Kopf und Nacken Krebs Behandlung3. Verschiedene Methoden wurden entwickelt, um die Speichelproduktion bei Nagetieren zu messen. Dazu gehören direkte Kanülierung der Speicheldrüsen Ausführungsgang4, die Sammlung von Speichel aus der Mundhöhle unter Vakuum5und Inkasso mit Glas Kapillaren6 oder einer Mikropipette7,8, 9. direkte Kanülierung der Speicheldrüsen Rohrleitung bietet am meisten präzise und reine Speichel. Aber dies ist eine technisch anspruchsvolle Verfahren und das Potenzial für Umstehende Duktales schließt sich wiederholende Speichel Sammlungen vom selben Tier. Sammeln von Speichel unter Vakuum führen zu unterschiedliche Ergebnisse durch Trocknung des Speichels aus dem Rohr. Dieser Verlust ist bei Mäusen mit reduzierter Speichelfluss weiter übertrieben. Glaskapillaren erlauben die Sammlung des Speichels für spätere Analysen, Veränderungen in der Viskosität des Speichels abgesondert im kranken Zustand verhindert jedoch, dass effiziente Füllung der Kapillare. Darüber hinaus können Versuche die Mundhöhle residual Speichel sammeln zu fegen zu Verletzungen führen. Pipettieren Methode ermöglicht die komplette Sammlung, und für den gleichen Betreiber ist es bemerkenswert konsistent zwischen Experimente. Aus unbekannten Gründen zeigt diese Methode jedoch erhebliche Unterschiede zwischen verschiedenen Betreibern. Daher um entsprechende Vergleiche zu ermöglichen, ist es zwingend notwendig, dass die gleiche Betreiber alle Experimente, die im Zusammenhang mit einem bestimmten Projekt führt. Natürlich ist dies einen großen Nachteil für ein Labor.
Um diese Probleme zu überwinden, wurde ein Verfahren entwickelt, dass verbindet Speichel Erhebungsmethoden für Menschen und Nagern verwendet. Die unten beschriebene, für Pilocarpin induzierten Speichel Messvolumen Tupfer-Methode ist einfach, reproduzierbar und nicht beeinflusst durch den Betreiber und immer wieder in das gleiche Tier durchgeführt werden kann. Darüber hinaus ermöglicht es den Speichel für spätere Analysen von Proteinen, Immunglobuline oder andere Biomoleküle zu sammeln.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals for saliva collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pilocarpine hydrochloride</td>
			<td>Alfa Aesar, Tewksbury, MA, USA</td>
			<td>B21410</td>
			<td>Dilute in sterile isotonic saline. Store single use aliquots of 100X stock at -80oC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Mix solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Mix 1 mL ketamine hydrochloride + 0.5 mL xylazine + 8.5 mL sterile isotonic saline in a sterile vial. Can be used for 3 months.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetamine (Ketamine hydrochloride)</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>C3N VT1</td>
			<td>Stock is 100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased (Xylazine)</td>
			<td>Med-Vet International, Mettawa, IL, USA</td>
			<td>RXANASED-20</td>
			<td>Stock is 20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sterile saline</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>501032</td>
			<td>Used as diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial tears (lubricant ophthalmic ointment)</td>
			<td>Henry Schien, Dublin, OH, USA</td>
			<td>48272</td>
			<td>Used to prevent eyes from drying during the procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for saliva collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SalivaBio Children&#39;s swab</td>
			<td>Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Individually wrapped swabs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL polypropylene tubes</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>89004-364</td>
			<td>Cut off the bottom 1 cm of the tube. Make sure that the cut edge is smooth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 0.6 mL</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>87003-290</td>
			<td>Make holes in the bottom of tube with heated 18 gauge needles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 2 mL</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>87003-298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes with permanently attached needles</td>
			<td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>324702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 gauge regular bevel needles</td>
			<td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel blade #11</td>
			<td>Integra York Inc PA, USA</td>
			<td>4-311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissecting forceps</td>
			<td>Roboz, Gaithersburg, MD, USA</td>
			<td>RS-5139</td>
			<td>Serrated angular 0.8 mm tip, 4&#34; length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Label tape</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA</td>
			<td>sc-224487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 channel timer</td>
			<td>Amazon.com, Seattle, WA, USA</td>
			<td>B06W2KCYVN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Mettler Toledo, Columbus OH, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals/ reagents for inducing salivary dysfunction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Invivogen, San Deigo, CA, USA</td>
			<td>tlrl-b5lps</td>
			<td>Dissolve in endotoxin free water, and store stock solution at 5 mg/mL . dilute in sterile HBSS 100 ug/mL - inject 100 uL/ moue ip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imject Alum adjuvant</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>77161</td>
			<td>Dilute 1:1 in sterile saline. Inject intraperitoneally 0.1 mL/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Ro52 antiserum</td>
			<td>Generated in lab</td>
			<td></td>
			<td>Immunization of rabbits with recombinant mouse Ro52</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals/ Kits for saliva analyses</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salivary lysozyme estimation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnzChek Lysozyme Assay Kit</td>
			<td>Molecular Probes, Eugene, OR, USA</td>
			<td>E-22013</td>
			<td>Used as per manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salivary IgA estimation by sandwich ELISA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgA</td>
			<td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td>
			<td>0106-01</td>
			<td>Standards for sandwich ELISA - range 30 ng/mL to 0.5 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti- mouse IgA unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td>
			<td>1040-01</td>
			<td>Coat at 1 ug/mL in bicarbonate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti- mouse IgA HRP</td>
			<td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td>
			<td>1040-05</td>
			<td>Detection antibody used at 1:4000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB substrate</td>
			<td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>555214</td>
			<td>Used as per manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immulon 4HBX Microtiter 96 well plates</td>
			<td>Thermo Scientific, Rochester, NY, USA</td>
			<td>3855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salivary protein estimation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate</td>
			<td>BioRad, Hercules, CA, USA</td>
			<td>5000006</td>
			<td>For protein estimation as per manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for the measurement of salivary gland function in mice

Patienten mit Sjögren Syndrom, eine Autoimmunerkrankung, die Auswirkungen auf die therapeutisches Drüsen, Entzündung der Speicheldrüse zu entwickeln und Speichelproduktion reduziert haben. Ebenso ist Speichelproduktion bei Patienten, die Strahlentherapie bei Kopf-Hals-Tumoren stark beeinträchtigt. Nager-Modelle entwickelt, um diese Krankheitsbilder imitieren ein Verständnis der Pathogenese der Krankheit erleichtern und die Entwicklung neuer therapeutischer Strategien ermöglichen. Daher ist die Fähigkeit, präzise, reproduzierbar und wiederholt Speicheldrüse Funktion in Tiermodellen messen entscheidend. Aufbauend auf den bisher in der Literatur beschriebenen Verfahren, wurde eine Methode entwickelt, die diese Kriterien erfüllt und wurde verwendet, um die Speicheldrüse Funktion bei Mäusen zu bewerten. Ein weiterer Vorteil dieser neuen Methode ist, dass es problemlos gemeistert und wenig Inter-Operator-Variation hat. Speicheldrüse Funktion wird als die Menge (Gewicht oder Volumen) oder die Rate (mL/min) in Reaktion auf die Pilocarpin Stimulation produziert Speichel ausgewertet. Die gesammelten Speichel ist eine gute Quelle für die Analysen der Eiweißgehalt, Immunglobulin-Konzentrationen und andere Biomoleküle.

In der experimentellen Maus-Modellsystemen ist die Fähigkeit, Speichel in Reaktion auf die Pilocarpin Stimulation produzieren als Indikator der Speicheldrüse Funktion verwendet. Speichelproduktion wurde in 11 Wochen alten C57BL/6 weiblichen Mäusen durch die Tupfer-Methode gemessen. Die Ergebnisse sind in Abbildung 1Aals die Menge des Speichels (mg) gesammelten nach zunehmenden Dosen von Pilocarpin ausgedrückt. Bei der Dosis von 1 mg/kg Körpergewicht bega...

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A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Speicheldrüse Unterfunktion ist eine häufige Folge von Autoimmun-Krankheit und Strahlentherapie. Reproduzierbare Beurteilung der Speicheldrüse Funktion in Mausmodellen dieser Krankheiten ist eine technische Herausforderung. Hier ist eine einfache Methode für die genaue und reproduzierbare Messung der Speichelproduktion bei Mäusen beschrieben.

Eine Methode zur Messung der Speicheldrüse Funktion bei Mäusen

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Forschung

Immunologie und Infektion

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

Ein Verfahren zur Markierung Gefäßsystem in embryonalen Mäuse

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

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Die Messung der γHV68 Infektion bei Mäusen

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

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Hybridisierung<em&gt; In-situ-</em&gt; Der Speicheldrüsen, Ovarien und Embryonen von Vektor-Mücken

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Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

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A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Eine Silber Nanopartikel-Methode für bessernde biliären Atresie-Syndrom bei Mäusen

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Measurement of Specific Mycobacterial Mistranslation Rates with Gain-of-function Reporter Systems

Messung spezieller mycobakterieller Mistranslation-Raten mit Funktionsfunktionen

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 ...

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

Isolierung von Speicheldrüsenepithelzellen aus menschlichen Speicheldrüsen für In-Vitro-Wachstum als Speicheldrüsen oder Monolayer

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...