Name: an in ovo model for testing insulin-mimetic compounds
Uploaded: 2018-04-23T14:00:00
Duration: 6 min 9 s
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यह काम ऑस्ट्रिया के अनुसंधान संवर्धन एजेंसी द्वारा वित्त पोषित किया गया (FFG; परियोजना संख्या ८५०६८१), एप्लाइड साइंसेज अपर ऑस्ट्रिया के विश्वविद्यालय बुनियादी धन पहल (परियोजना GlucoSTAR) और चिकित्सा में तकनीकी नवाचार के लिए केंद्र (समय पर केंद्र) कि ऊपरी ऑस्ट्रिया के प्रांत द्वारा बुनियादी धन प्राप्त करता है ।

निर्देशन के अनुसार 2010/63/यूरोपीय संघ, भ्रूण विकास के पहले दो तिहाई के दौरान गैर रची एवियन भ्रूण के साथ प्रयोग एक नैतिकता समिति द्वारा अनुमति की जरूरत नहीं है ।
1. भंडारण और अंडे की प्रजनन
<ol><li>निषेचित मुर्गी अंडे (सामग्री की तालिका) एक स्थानीय ब्रीडर से प्राप्त करें । नोट: अंडे एक humidified वातावरण में 14 ° c में 10 दिनों के प्रयोगों के लिए उपयोग करने से पहले बिछाने के बाद संग्रहीत किया जा सकता है ।</li>
	<li>एक मशीन है कि लगातार अंडे बदल जाता है में 10 या 11 दिनों के लिए ४०-६०% की औसत आर्द्रता के साथ ३८ ° c पर अंडे की मशीन ।</li>
</ol>2. अंडे का चयन
<ol><li>11 दिनों तक की मशीन के बाद निषेचन के लिए अंडे की जांच करें । इस चरण के लिए एक candling लाइट का उपयोग करें । एक inkpad में candling लैंप के किनारे डुबकी और अंडे की ओर इशारा किया मोमबत्ती ।</li>
	<li>वायु मूत्राशय की पहचान करने के लिए, अंडे के शीर्ष पर चमक में अंतर के लिए जांच करें । नोट: हवा मूत्राशय एक दौर, अधिक पारदर्शी क्षेत्र के रूप में दिखाई देता है, जबकि सफ़ेदी गहरा है जब अंडा मोमबत्ती है ।</li>
	<li>वायु मूत्राशय का पता लगाने के बाद, पहले से लागू स्याही के साथ अंडे के खिलाफ थोड़ा दीपक दबाकर स्थान चिह्नित करें ।</li>
	<li>इस कदम पर गैर निषेचित अंडे, जो सफ़ेदी और वायु मूत्राशय के बीच चमक में एक फर्क नहीं दिखा बाहर ।</li>
</ol>3. मादक पदार्थों का इंजेक्शन
<ol><li>ब्याज के पदार्थ तैयार (जैसे, हर्बल उद्धरण या इंसुलिन) हांक संतुलित नमक समाधान (HBSS) बफर में वांछित एकाग्रता में पदार्थ कमजोर द्वारा । उदाहरण के लिए, HBSS में एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध इंसुलिन एनालॉग की ३.३ U/</li>
	<li>चयनित यौगिक के आवेदन के लिए, ध्यान से हवा मूत्राशय के चिह्नित क्षेत्र में चिमटी की एक नुकीले जोड़ी के साथ eggshell चोंच । एक छेद सिरिंज की सुई के व्यास से बड़ा फार्म नहीं है । बफर समाधान सुई (३०० µ एल) एक सिरिंज के माध्यम से चोंच क्षेत्र में ब्याज के पदार्थ युक्त. नोट: बाँझ, 1-मिलीलीटर एकल उपयोग सिरिंज, पिपेट युक्तियाँ, और जहाजों का उपयोग करें । दस्ताने पहनते है और प्रयोगों के लिए एक प्रयोगशाला कोट ।</li>
	<li>रक्त ग्लूकोज का निर्धारण करने के लिए एक पदार्थ के प्रभाव को कम करने, अंडे की जगह वापस ६०, १२० के लिए मशीन में, और १८० मिनट, क्रमशः । बेसल रक्त शर्करा के स्तर का निर्धारण करने के लिए, कम से 10-15 गैर इलाज नियंत्रण अंडे शामिल हैं ।</li>
</ol>4. विषाक्तता परीक्षण
<ol><li>24 ज के लिए चयनित यौगिक के आवेदन के बाद, equilibrate eggshell झिल्ली फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) बफर (पर्याप्त eggshell झिल्ली को कवर करने के लिए) के साथ कम से 30 एस के लिए ।</li>
	<li>इसे दूर डालने से अतिरिक्त पंजाबियों बफर निकालें ।</li>
	<li>eggshell झिल्ली को चिमटी की नुकीले जोड़ी से सावधानीपूर्वक खींच लें ।</li>
	<li>घावों के लिए रक्त वाहिकाओं की जांच करें और जीवन शक्ति की पुष्टि (जैसे, आंदोलन) चिकी भ्रूण की । नोट: एक विषाक्त हर्बल निकालने के आवेदन के बाद महत्वपूर्ण बनाम गैर-महत्वपूर्ण भ्रूण की तुलना के लिए चित्रा 1 देखें ।</li>
</ol>5. रक्त ग्लूकोज मूल्य का मापन
<ol><li>संबंधित समय बिंदु पर, ध्यान से वायु मूत्राशय के ऊपर eggshell निकालें और equilibrate eggshell झिल्ली के साथ पंजाबियों बफर (पूरी eggshell झिल्ली को कवर करने के लिए पर्याप्त) ।</li>
	<li>इसे दूर डालने से अतिरिक्त पंजाबियों बफर निकालें ।</li>
	<li>ध्यान से चिमटी के एक नुकीले जोड़ी के साथ eggshell झिल्ली खींच ।</li>
	<li>कट और एक माइक्रो-कैंची के साथ chorioallantoic झिल्ली को दूर, उपयुक्त रक्त वाहिकाओं के लिए अच्छा पहुँच सक्षम करने के लिए. झिल्ली में कटौती कम से 2-3 सेमी । भ्रूण की अवांछित खून की कमी से बचने के लिए झिल्ली में किसी भी बड़े जहाजों को न काटें ।</li>
	<li>बड़े भ्रूण के पेट से उद्भव पोत का पता लगाएं । एक बंद माइक्रो-कैंची के साथ सफ़ेदी से बाहर इस पोत लिफ्ट और यह एक प्लास्टिक पीएच पट्टी पर जगह है । पोत, जो माइक्रो कैंची के साथ आयोजित की जाती है के तहत पीएच पट्टी ले जाएं, और वापस माइक्रो-कैंची दूर ध्यान से खींच ।</li>
	<li>अगले चरण में रक्त के कमजोर पड़ने से बचने के लिए एक पिपेट के साथ chorioallantoic झिल्ली के नीचे तरल की 1-2 मिलीलीटर निकालें । पोत को काटने से पहले बर्तन और पीएच-पट्टी को फिल्टर पेपर से सुखा लें ।</li>
	<li>एक तरफ माइक्रो-कैंची से रक्त वाहिका को सावधानीपूर्वक काटें । पोत के माध्यम से पूरी तरह से कटौती न करें । नोट: पोत लगभग 1 मिमी मोटी है । जहाज के आधे से अधिक कटौती नहीं पोत के माध्यम से पूरी तरह से काटने से बचने के लिए, क्योंकि यह पट्टी से फिसल सकता है और कोई रक्त संग्रह संभव है ।</li>
	<li>एक पिपेट का उपयोग कर पीएच पट्टी पर लीक रक्त इकट्ठा । रक्त ग्लूकोज़ मीटर का उपयोग कर ग्लूकोज के स्तर का निर्धारण करने के लिए रक्त की दस microliters आवश्यक हैं ।</li>
</ol>6. सांख्यिकीय मूल्यांकन
<ol><li>समय बिंदु प्रति कम से कम 10 व्यक्तिगत अंडे का मतलब मूल्य की गणना और नियंत्रण अंडे (गैर या बफर इलाज अंडे) में से एक के लिए इन मूल्यों को सामान्य ।</li>
	<li>इसके बाद, घट का प्रतिशत निर्धारित करें । इसके अलावा, एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इंसुलिन का उपयोग करें । नोट: प्रत्येक प्रयोग को कम से तीन बार दोहराएँ.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Defronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Banting+Lecture.+From+the+triumvirate+to+the+ominous+octet:+a+new+paradigm+for+the+treatment+of+type+2+diabetes+mellitus.">Banting Lecture. From the triumvirate to the ominous octet: a new paradigm for the treatment of type 2 diabetes mellitus.</a> Diabetes. 58 (4), 773-795 (2009).</li><li>American_Diabetes_Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus.">Diagnosis and classification of diabetes mellitus.</a> Diabetes Care. 37, S81-S90 (2014).</li><li>Han Cho, N., Cavan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IDF Diabetes Atlas. 7, (2015).</li><li>Bailey, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individualized+glycaemic+targets+and+pharmacotherapy+in+type+2+diabetes.">Individualized glycaemic targets and pharmacotherapy in type 2 diabetes.</a> Diabetes &amp; vascular disease research. 10 (5), 397-409 (2013).</li><li>Maruthur, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+Medications+as+Monotherapy+or+Metformin-Based+Combination+Therapy+for+Type+2+Diabetes:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Diabetes Medications as Monotherapy or Metformin-Based Combination Therapy for Type 2 Diabetes: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Annals of internal medicine. 164 (11), 740-751 (2016).</li><li>Aleman-Gonzalez-Duhart, D., Tamay-Cach, F., Alvarez-Almazan, S., Mendieta-Wejebe, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Advances+in+the+Biochemical+and+Physiological+Aspects+of+the+Treatment+of+Type+2+Diabetes+Mellitus+with+Thiazolidinediones.">Current Advances in the Biochemical and Physiological Aspects of the Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus with Thiazolidinediones.</a> PPAR research. , 7614270 (2016).</li><li>Cohen, F. J., Neslusan, C. A., Conklin, J. E., Song, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+antihyperglycemic+prescribing+trends+for+US+privately+insured+patients+with+type+2+diabetes.">Recent antihyperglycemic prescribing trends for US privately insured patients with type 2 diabetes.</a> Diabetes care. 26 (6), 1847-1851 (2003).</li><li>Desai, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+medication+initiation+in+newly+diagnosed+diabetes+mellitus:+quality+and+cost+implications.">Patterns of medication initiation in newly diagnosed diabetes mellitus: quality and cost implications.</a> The American journal of medicine. 125 (3), e301-e307 (2012).</li><li>Martel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-obesogenic+and+antidiabetic+effects+of+plants+and+mushrooms.">Anti-obesogenic and antidiabetic effects of plants and mushrooms.</a> Nature reviews. Endocrinology. , (2016).</li><li>Lanzerstorfer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+insulin+mimetic+drugs+by+quantitative+total+internal+reflection+fluorescence+(TIRF)+microscopy.">Identification of novel insulin mimetic drugs by quantitative total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.</a> British journal of pharmacology. 171 (23), 5237-5251 (2014).</li><li>Onur, S., St&#246;ckmann, H., Zenthoefer, M., Piker, L., D&#246;ring, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Extract+Collection+Kiel+in+Schleswig-Holstein+(PECKISH)+Is+an+Open+Access+Screening+Library.">The Plant Extract Collection Kiel in Schleswig-Holstein (PECKISH) Is an Open Access Screening Library.</a> Journal of Food Research. 2 (4), (2013).</li><li>Haselgrubler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluc-HET,+a+complementary+chick+embryo+model+for+the+characterization+of+antidiabetic+compounds.">Gluc-HET, a complementary chick embryo model for the characterization of antidiabetic compounds.</a> PloS one. 12 (8), e0182788 (2017).</li><li>Stadlbauer, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomolecular+Characterization+of+Putative+Antidiabetic+Herbal+Extracts.">Biomolecular Characterization of Putative Antidiabetic Herbal Extracts.</a> PloS one. 11 (1), e0148109 (2016).</li><li>Greywe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applicability+and+robustness+of+the+hen's+egg+test+for+analysis+of+micronucleus+induction+(HET-MN):+results+from+an+inter-laboratory+trial.">Applicability and robustness of the hen's egg test for analysis of micronucleus induction (HET-MN): results from an inter-laboratory trial.</a> Mutation research. 747 (1), 118-134 (2012).</li><li>Manakova, E., Hubickova, L., Kostalova, J., Zemanova, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryotoxicity+of+mirtazapine:+a+study+using+Chick+Embryotoxicity+Screening+Test.">Embryotoxicity of mirtazapine: a study using Chick Embryotoxicity Screening Test.</a> Neuro endocrinology letters. 31, 8-10 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis.">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> International review of cell and molecular biology. 270, 181-224 (2008).</li><li>Yoshiyama, Y., Sugiyama, T., Kanke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+diabetes+model+in+chick+embryos+treated+with+streptozotocin.">Experimental diabetes model in chick embryos treated with streptozotocin.</a> Biological &amp; pharmaceutical bulletin. 28 (10), 1986-1988 (2005).</li><li>Wolf, T., Niehaus-Rolf, C., Luepke, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+new+methodological+aspects+of+the+hen's+egg+test+for+micronucleus+induction+(HET-MN).">Some new methodological aspects of the hen's egg test for micronucleus induction (HET-MN).</a> Mutation research. 514 (1-2), 59-76 (2002).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

हेत-सांचा परख एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया है उद्योग में पशु परीक्षण के लिए वैकल्पिक परीक्षण प्रणाली12। इन-ovo प्रणाली यहां वर्णित हेत-सांचा परख के एक संशोधित संस्करण का प्रतिनिधित्व करता है । जबकि अपने मूल रूप में, हेत-सांचा प्रयोगों यौगिकों और निर्माण या angiogenesis के विश्लेषण के परेशान गुणों का अध्ययन करने के लिए प्रदर्शन कर रहे हैं14,15,16, हम परीक्षण करने के लिए दृष्टिकोण अनुकूलित किया है ख्यात इंसुलिन के साथ यौगिकों-mimetic विशेषताओं12. निर्देशन के अनुसार 2010/63/यूरोपीय संघ, भ्रूण विकास के पहले दो तिहाई के दौरान गैर-रची एवियन भ्रूण के साथ प्रयोग एक नैतिकता समिति द्वारा अनुमति की जरूरत नहीं है क्योंकि इन प्रयोगों पशु प्रयोगों पर विचार नहीं कर रहे हैं । हाल के अध्ययनों में इन-ovo प्रणाली की उपयुक्तता साबित करने के लिए चयनित हर्बल निष्कर्षों, जो एक GLUT4-translocation-आधारित प्राथमिक स्क्रीन10में पहचान की गई है की प्रभावकारिता विशेषताएं है, में रक्त शर्करा का स्तर कम करने के लिए इंसुलिन की अनुपस्थिति12,13. इन-ovo प्रणाली के एक अच्छे प्रदर्शन के लिए महत्वपूर्ण बिंदुओं में शामिल हैं: पहला, एक विश्वसनीय प्रजनक निषेचित अंडे देने । Lohmann क्लासिक ब्राउन चिकन नस्ल का एक अच्छा विकल्प है । दूसरा, विषाक्तता परीक्षण के कार्यांवयन के लिए जांच की यौगिक के विषाक्त प्रभाव को बाहर करने के लिए किया जाना चाहिए । इसके अलावा, रक्त संग्रह के लिए एक उपयुक्त रक्त वाहिका की तैयारी महत्वपूर्ण है । यह chorioallantoic झिल्ली में बड़े जहाजों के काटने से बचने के लिए महत्वपूर्ण है, के रूप में यह एक गैर खून की बेहतर नुकसान के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । इसके अलावा, इससे पहले कि पोत पीएच पट्टी पर काट रहा है, यह फिल्टर कागज का उपयोग करने के लिए एकत्र रक्त के कमजोर पड़ने को रोकने के सूखे ठोक दिया जाना है । अंत में, पर्याप्त संख्या में प्रयोग महत्वपूर्ण प्रतीत होते हैं । हम प्रत्येक समय बिंदु के लिए, और एक तीन गुना संबंधित प्रयोग की पुनरावृत्ति के लिए कम से कम 10 अंडे का उपयोग करने की सलाह देते हैं ।
स्वाभाविक रूप से, इस में-ovo दृष्टिकोण की कुछ सीमाएं हैं । चूंकि यह पदार्थ eggshell झिल्ली के माध्यम से अवशोषित कर रहे हैं और chorioallantoic झिल्ली के साथ निकट संपर्क में आने तक 30 मिनट तक ले जाता है, यह लागू यौगिक करने के लिए भ्रूण की एक तेजी से प्रतिक्रिया यों तो संभव नहीं है. इसके अलावा, कुछ यौगिकों लागू एकाग्रता, जो अक्सर chorioallantoic झिल्ली में रक्त वाहिकाओं के घावों में परिणाम में विषाक्त हो सकता है । इस प्रकार, cytotoxicity परीक्षण के बारे में 24 घंटे के लिए यौगिकों के दीर्घकालिक मशीन पर आधारित उचित प्रतीत होता है । अंत में, हमने पाया है कि बफर प्रणाली यौगिकों के आवेदन के लिए इस्तेमाल किया परख के प्रदर्शन पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है । 12 वर्तमान में, HBSS बफर प्रयोग किया जाता है क्योंकि यह भ्रूण के रक्त शर्करा के स्तर पर सबसे छोटी प्रभाव में परिणाम है ।
भविष्य अनुप्रयोगों के लिए, HBSS के लिए एक विकल्प के रूप में अतिरिक्त बफर सिस्टम का परीक्षण किया जा सकता है । इसके अलावा, इस तरह के कोलेस्ट्रॉल, ट्राइग्लिसराइड्स या लिपो के रूप में अतिरिक्त रक्त मापदंडों पर हर्बल निष्कर्षों के प्रभाव एक आकर्षक सवाल हो सकता है ।
हमारी नई इन-ovo प्रणाली एक पशु प्रयोग की आवश्यकता के बिना एक जीवित जीव में इंसुलिन mimetic विशेषताओं के साथ पदार्थों का परीक्षण करने के लिए एक होनहार और महत्वपूर्ण उपकरण है । इसलिए, यह इन -विट्रो और इन-vivo approaches के बीच अंतर भरता है । में मौजूदा की तुलना में-ovo मॉडल सिस्टम17 कोई streptozotocin (STZ) उपचार द्वारा मधुमेह पैदा की जरूरत है, के रूप में हम 10 या मशीन के 11 दिन में भ्रूण का उपयोग करें । इस स्तर पर इंसुलिन का उत्पादन शुरू नहीं हुआ है, लेकिन भ्रूण पहले से ही संवेदनशील इंसुलिन है । इसके अतिरिक्त, एक नैतिकता समिति द्वारा अनुमति की आवश्यकता हो सकती है अगर 14-17 दिन आयु वर्ग के भ्रूण का उपयोग किया जाताहै17 । इसके अलावा, वैकल्पिक रणनीतियों के लिए18की तुलना में, यौगिक आवेदन के रूप में यहां वर्णित कम हानिकारक और श्रमसाध्य है, वृद्धि प्रयोगात्मक माध्यम से डाल दरों ।
एक साथ लिया, इस में ovo दृष्टिकोण एक आकर्षक प्रणाली अगर एक रक्त इंसुलिन-mimetic पदार्थ के घटते प्रभाव एक जीवित जीव में परीक्षण किया जा करने की जरूरत है ।

मधुमेह एक चयापचय hyperglycemia द्वारा विशेषता रोग है और इंसुलिन स्राव या इंसुलिन कार्रवाई में दोषों के कारण होता है1. सभी मधुमेह के मामलों की ९० प्रतिशत श्रेणी टाइप 2 मधुमेह (T2DM), जहां व्यक्तियों इंसुलिन प्रतिरोध और ज्यादातर इंसुलिन की कमी का प्रदर्शन कर रहे हैं2। कई कारकों T2DM की वैश्विक घटनाओं में वृद्धि के लिए जाना जाता है, जीवन शैली में परिवर्तन सहित, विशेष रूप से अधिक पोषण से संबंधित उन, उंर बढ़ने, और शारीरिक निष्क्रियता । लगभग ४००,०००,००० लोगों को मधुमेह अंतरराष्ट्रीय मधुमेह फेडरेशन (ई ड फ) के अनुसार दुनिया भर में हो रहा है । अगले 20 साल के भीतर यह संख्या ६००,०००,००० तक पहुंचने की उम्मीद है3।
मधुमेह hyperglycemia और इंसुलिन प्रतिरोध, उच्च रक्तचाप, डिसलिपिडेमिया, ग्लूकोज असहिष्णुता, कोरोनरी हृदय रोग, और मस्तिष्क संवहनी रोग के रूप में की वजह से जटिलताओं, एक काफी कम जीवन प्रत्याशा और गुणवत्ता के लिए सीसा4. प्रभावित व्यक्तियों को ग्लूकोज-कम pharmacotherapy की आवश्यकता होती है; हालांकि, दवाओं के उपयोग, ऐसे मेटफार्मिन के रूप में5 अक्सर नाटकीय पक्ष प्रभाव6,7,8के साथ जुड़ा हुआ है । इसलिए, आगे मधुमेह दृष्टिकोण है कि सुरक्षित हैं, व्यापक रूप से उपलब्ध है और सस्ती आवश्यक हैं ।
विभिन्न हर्बल यौगिकों, अर्क, पौधों, और न्यूट्रास्यूटिकल्स विभिंन सेलुलर कार्यों संग्राहक द्वारा इंसुलिन mimetic गुणों की सुविधा के लिए जिंमेदार माना किया गया है । एक महत्वपूर्ण विशेषता intracellular भंडारण डिब्बों से प्लाज्मा झिल्ली के लिए ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर 4 (GLUT4) के translocation की उत्तेजना है, इंसुलिन के अभाव में मांसपेशियों और वसा ऊतक में ग्लूकोज की एक वृद्धि हुई में जिसके परिणामस्वरूप, के रूप में जाना जाता इंसुलिन-mimetic गुण9. पहले, हमने GLUT410की translocation प्रक्रिया को बढ़ाता हुआ एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी आधारित दृष्टिकोण लागू किया । एक निकालने के पुस्तकालय से कई संयंत्र निष्कर्षों का विश्लेषण11 इस परख का उपयोग होनहार उंमीदवारों की पहचान के परिणामस्वरूप हुआ । हालांकि, जीवित जीवों में आगे परीक्षण की आवश्यकता है । इस पत्र में विस्तार से वर्णित दृष्टिकोण, एक संशोधित चिकी भ्रूण मॉडल, इंसुलिन mimetic गुणों के साथ पदार्थों की पहचान करने के लिए एक होनहार मॉडल साबित हो गया है । यह एक आकर्षक इन-विट्रो और में-vivo अध्ययन के बीच व्यापक अंतर भरने उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है और मौजूदा प्रणालियों की तुलना में ऐसी स्वीकार्य लागत, सरल हैंडलिंग प्रक्रियाओं, और पर्याप्त प्रवाह दरों के रूप में कई लाभ उपलब्ध कराता है । इसके अलावा, किसी एथिक्स कमेटी द्वारा अनुमति की आवश्यकता नहीं है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="621">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:279px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:140px;">Biochrom</td>
			<td style="width:123px;">L1825</td>
			<td style="width:80px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hank&#8217;s balanced salt solution (HBSS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30268.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NovoRapid</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>8-0905-82-304-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hens eggs (Lohmann classic brown chicken)</td>
			<td>Local Breeder</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accu-check performa</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6454011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accu-check Inform II Teststreifen</td>
			<td>Roche&#160;</td>
			<td>5942861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Incubator&#160; HEKA- Turbo 288</td>
			<td>HEKA Brutger&#228;te</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe Omnican F 1 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td>09161502S&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Extracts</td>
			<td>PEKISH extract library</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lamp Tempo Nr. 119</td>
			<td>ORBAN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in ovo model for testing insulin-mimetic compounds

प्रकार में ऊंचा रक्त शर्करा का स्तर 2 मधुमेह (T2DM), एक जटिल और multifactorial चयापचय रोग, इंसुलिन प्रतिरोध और β-सेल विफलता के कारण होते हैं. इंसुलिन के इंजेक्शन या इंसुलिन-संवेदी दवाओं के उपयोग सहित विभिन्न रणनीतियों, T2DM का इलाज करने के लिए पीछा किया गया था या कम से कम लक्षणों को कम. इसके अलावा, हर्बल यौगिकों के आवेदन बढ़ती ध्यान आकर्षित किया है । इस प्रकार, यह आवश्यक है की पहचान करने के लिए कुशल परीक्षण प्रणालियों को खोजने और इंसुलिन mimetic यौगिकों की विशेषता है । यहां हम एक संशोधित चिकी भ्रूण मॉडल है, जो सिंथेटिक यौगिकों और इंसुलिन mimetic गुणों के साथ हर्बल निष्कर्षों के परीक्षण में सक्षम बनाता है विकसित की है । एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी आधारित प्राथमिक स्क्रीन है, जो प्लाज्मा झिल्ली को ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर 4 (Glut4) के translocation quantifies का उपयोग करना, हम यौगिकों की पहचान करने में सक्षम थे, मुख्य रूप से हर्बल निष्कर्षों, जो intracellular ग्लूकोज की वृद्धि करने के लिए नेतृत्व adipocytes में सांद्रता । हालांकि, इन पदार्थों की प्रभावकारिता एक जीवित जीव में आगे सत्यापन की आवश्यकता है । इस प्रकार, हम अपने रक्त ग्लूकोज को कम करने के गुण की पहचान करने के लिए एक में-ovo दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया । एक आचार समिति द्वारा अनुमोदन की जरूरत नहीं है क्योंकि भ्रूण के विकास के पहले दो तिहाई के दौरान चिकन भ्रूण के उपयोग के एक जानवर प्रयोग नहीं माना जाता है । इधर, इस मॉडल के आवेदन में विस्तार से बताया गया है ।

Gluc-हेत दृष्टिकोण का विवरण:
ब्याज के पदार्थों के साथ मशीन के बाद, निषेचित अंडे खोला और eggshell (चित्रा 2) को हटाने के द्वारा रक्त संग्रह के लिए तैयार कर रहे हैं । आगे की तैयारी equilibration और chorioallantoic झिल्ली तक पहुंच प्राप्त करने के लिए eggshell झिल्ली को हटाने शामिल है । यह झिल्ली तो रक्त संग्रह के लिए एक उपयुक्त रक्त वाहिनियों तक पहुँच प्रदान करने के लिए सावधानीपूर्वक काटी जाती है. अधिमानतः, बड़े भ्रूण के पेट से उद्भव पोत एक प्लास्टिक पीएच पट्टी पर रखा गया है । संग्रह के दौरान रक्त के कमजोर पड़ने से बचने के लिए, पोत और पीएच पट्टी फिल्टर कागज के साथ सूखी ठोक दिया है । रक्त वाहिका तो कटौती और पीएच पट्टी पर खून टपक रहा है एक पिपेट का उपयोग कर विश्लेषण के लिए एकत्र की है ।
रक्त शर्करा के स्तर पर चयनित हर्बल निष्कर्षों के प्रभाव:
हाल ही में स्थापित GLUT4-translocation quantitation-आधारित प्राथमिक स्क्रीन के साथ, हम एक इंसुलिन mimetic विशेषता के साथ पदार्थों की पहचान करने में सक्षम हैं10. पानी में घुलनशील हर्बल निष्कर्षों के सैकड़ों की स्क्रीनिंग कई हिट की पहचान के परिणामस्वरूप । इन निष्कर्षों हमारे में-ovo मॉडल में परीक्षण किया गया । अर्क से तैयार की गई Combretum कुल्फा (रंगून लता) और एक गैर-खुलासा निकालने (मियादी निकालने ०८४५) का प्रयोग इन प्रयोगों के लिए किया गया. हम ३०० mg/L पर HBSS बफर में अर्क भंग, एक एकाग्रता है कि बाहर कर दिया पिछले अध्ययन में उपयुक्त हो12,13. पदार्थ 11 दिनों के लिए मशीन भ्रूण को लागू किया गया । के रूप में चित्रा 3में संकेत दिया, रंगून लता से निकालने में एक महत्वपूर्ण रक्त शर्करा की कमी में परिणाम नहीं था -ovo। हालांकि, रक्त ग्लूकोज एकाग्रता सफलतापूर्वक ०८४५ निकालने के साथ कम किया गया था, ६० मिनट के बाद एक छोटी सी कमी के साथ, जो प्रभाव के लिए तुलनीय है एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध इंसुलिन एनालॉग का उपयोग कर मनाया. एक महत्वपूर्ण प्रभाव जब अंडे की गर्मी समय तक देखा गया था ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig1.jpg"> चित्रा 1: भ्रूण जीवन शक्ति पर विषाक्त यौगिकों के प्रभाव । अंडे 11 दिनों के लिए (ए और सी) या एक और 24 एच (बी और डी) के लिए 10 दिन पर एक विषाक्त हर्बल निकालने के साथ इलाज के लिए मशीन थे । निकालने के आवेदन chorioallantoic झिल्ली में रक्त वाहिकाओं के गंभीर घावों के लिए नेतृत्व किया (घ) और भ्रूण (ख).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig2.jpg"> चित्र 2: इन-ovo मॉडल का वर्णन । बाएं से दाएं: eggshell को खोलना और निकालना (1-2); equilibration और chorioallantoic झिल्ली के साथ eggshell झिल्ली को हटाने उजागर (3); एक पीएच-पट्टी पर तैयार पोत (4); रक्त का संग्रह और ग्लूकोज एकाग्रता की माप एक ग्लूकोज मीटर का उपयोग (5). Haselgruebler एट अल, २०१७12से अनुकूलित । <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig2large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig3.jpg"> चित्रा 3: अनुपचारित या इंसुलिन का इलाज अंडे की तुलना में रक्त शर्करा के स्तर पर हर्बल निष्कर्षों का प्रभाव. अंडे 11 दिनों के लिए और संकेत पदार्थ (व्यावसायिक रूप से उपलब्ध इंसुलिन एनालॉग के साथ इलाज किया गया: ३.३ यू/एमएल; अर्क: ३०० mg/l) HBSS बफर में भंग (३०० µ एल मात्रा) अप करने के लिए 3 ज. रक्त शर्करा का स्तर एक रक्त ग्लूकोज मीटर का उपयोग कर निर्धारित किया गया था. परिणाम बफ़र के प्रभाव के बिना दिखाए जाते हैं । त्रुटि पट्टियां माध्य की मानक त्रुटि पर आधारित होती हैं । * p < 0.05 और * * * * p < 0.0001, समान मशीन समय के HBSS-इलाज वाले अंडों के संबंध में महत्वपूर्ण कमी । Haselgruebler एट अल, २०१७12से अनुकूलित । <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig3large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

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An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

इस अध्ययन में, हम एक जीवित जीव में इंसुलिन mimetic यौगिकों का परीक्षण करने के लिए एक होनहार उपकरण के रूप में एक ovo प्रणाली का वर्णन. मुख्य लाभ पर्याप्त प्रवाह दर और स्वीकार्य लागत, जो इंसुलिन mimetic गुणों के साथ फाइटोकेमिकल्स की पहचान करने में सक्षम शामिल हैं ।

इंसुलिन-mimetic यौगिकों के परीक्षण के लिए एक Ovo मॉडल में

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

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The use of electrocorticographic (ECoG) recordings in rodents is relevant to sleep research and to the study of a wide range of neurological conditions. ...