Name: a simple method for isolation of soybean protoplasts and application to transient gene expression analyses
Uploaded: 2018-01-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Method for Isolation of Soybean Protoplasts and Application to Transient Gene Expression Analyses at JoVE.com

इस काम को नेशनल साइंस फाउंडेशन (NSF-PGRP-IOS-१३३९३८८) से प्लांट जीनोम रिसर्च प्रोग्राम ने सपोर्ट किया था ।

1. पौधों की वृद्धि
<ol><li>बोना 5-10 सोयाबीन बीज (विलियंस ८२) ग्रीनहाउस में एक 13 सेमी पॉट में लंबे समय तक की स्थिति के तहत (16 ज लाइट १,५०० µmolm -2s-1) पर 25 ° c पर सोयाबीन के लिए कस्टम मिट्टी मिश्रण पर (1:1:1 मिट्टी के अनु?...

<ol>
	<li>Melchers, G., Labib, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+hybridisation+of+plants+by+fusion+of+protoplasts.">Somatic hybridisation of plants by fusion of protoplasts.</a> Mol. Gen. Genet. 135 (4), 277-294 (1974).</li><li>Gresshoff, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+white+clover:+callus,+suspension,+protoplast+culture,+and+plant+regeneration.">In vitro culture of white clover: callus, suspension, protoplast culture, and plant regeneration.</a> Bot. Gaz. 141 (2), 157-164 (1980).</li><li>L&#246;rz, H., Baker, B., Schell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+to+cereal+cells+mediated+by+protoplast+transformation.">Gene transfer to cereal cells mediated by protoplast transformation.</a> Mol. Gen. Genet. 199 (2), 178-182 (1985).</li><li>Hayashimoto, A., Li, Z., Murai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+polyethylene+glycol-mediated+protoplast+transformation+system+for+production+of+fertile+transgenic+rice+plants.">A polyethylene glycol-mediated protoplast transformation system for production of fertile transgenic rice plants.</a> Plant Physiol. 93 (3), 857-863 (1990).</li><li>Koop, H. -. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+foreign+sequences+into+the+tobacco+plastome+via+polyethylene+glycol-mediated+protoplast+transformation.">Integration of foreign sequences into the tobacco plastome via polyethylene glycol-mediated protoplast transformation.</a> Planta. 199 (2), 193-201 (1996).</li><li>Hrazdina, G., Wagner, G. J., Siegelman, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+enzymes+of+anthocyanin+biosynthesis+in+protoplasts.">Subcellular localization of enzymes of anthocyanin biosynthesis in protoplasts.</a> Phytochemistry. 17 (1), 53-56 (1978).</li><li>Lin, W., Wittenbach, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+proteases+in+wheat+and+corn+mesophyll+protoplasts.">Subcellular localization of proteases in wheat and corn mesophyll protoplasts.</a> Plant Physiol. 67 (5), 969-972 (1981).</li><li>V&#246;geli-Lange, R., Wagner, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+cadmium+and+cadmium-binding+peptides+in+tobacco+leaves.">Subcellular localization of cadmium and cadmium-binding peptides in tobacco leaves.</a> Plant Physiol. 92 (4), 1086-1093 (1990).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+efficient+transient+protoplast+system+for+analyzing+defence+gene+expression+and+protein-protein+interactions+in+rice.">A highly efficient transient protoplast system for analyzing defence gene expression and protein-protein interactions in rice.</a> Mol. Plant Pathol. 7 (5), 417-427 (2006).</li><li>Wu, F. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tape-Arabidopsis+Sandwich-a+simpler+Arabidopsis+protoplast+isolation+method.">Tape-Arabidopsis Sandwich-a simpler Arabidopsis protoplast isolation method.</a> Plant methods. 5 (1), 16 (2009).</li><li>Christensen, A. H., Sharrock, R. A., Quail, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maize+polyubiquitin+genes:+structure,+thermal+perturbation+of+expression+and+transcript+splicing,+and+promoter+activity+following+transfer+to+protoplasts+by+electroporation.">Maize polyubiquitin genes: structure, thermal perturbation of expression and transcript splicing, and promoter activity following transfer to protoplasts by electroporation.</a> Plant Mol. Biol. 18 (4), 675-689 (1992).</li><li>Marcotte, W. R., Bayley, C. C., Quatrano, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+a+wheat+promoter+by+abscisic+acid+in+rice+protoplasts.">Regulation of a wheat promoter by abscisic acid in rice protoplasts.</a> Nature. 335 (6189), 454-457 (1988).</li><li>Dron, M., Clouse, S. D., Dixon, R. A., Lawton, M. A., Lamb, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+and+fungal+elicitor+regulation+of+a+plant+defense+gene+promoter+in+electroporated+protoplasts.">Glutathione and fungal elicitor regulation of a plant defense gene promoter in electroporated protoplasts.</a> P. Natl. A. Sci. USA. 85 (18), 6738-6742 (1988).</li><li>Cocking, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+of+plant+protoplasts+and+vacuoles.">A method for the isolation of plant protoplasts and vacuoles.</a> Nature. 187 (4741), 962-963 (1960).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+rice+plants+produced+by+electroporation-mediated+plasmid+uptake+into+protoplasts.">Transgenic rice plants produced by electroporation-mediated plasmid uptake into protoplasts.</a> Plant Cell Rep. 7 (6), 379-384 (1988).</li><li>Fromm, M., Taylor, L. P., Walbot, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+genes+transferred+into+monocot+and+dicot+plant+cells+by+electroporation.">Expression of genes transferred into monocot and dicot plant cells by electroporation.</a> P. Natl. A. Sci. USA. 82 (17), 5824-5828 (1985).</li><li>Crossway, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+foreign+DNA+following+microinjection+of+tobacco+mesophyll+protoplasts.">Integration of foreign DNA following microinjection of tobacco mesophyll protoplasts.</a> Mol. Gen. Genet. 202 (2), 179-185 (1986).</li><li>Holm, P. B., Olsen, O., Schnorf, M., Brinch-Pedersen, H., Knudsen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+barley+by+microinjection+into+isolated+zygote+protoplasts.">Transformation of barley by microinjection into isolated zygote protoplasts.</a> Transgenic Res. 9 (1), 21-32 (2000).</li><li>Schapire, A. L., Lois, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+and+rapid+method+for+the+isolation+and+transfection+of+Arabidopsis+leaf+mesophyll+protoplasts+for+large-scale+applications.">A simplified and rapid method for the isolation and transfection of Arabidopsis leaf mesophyll protoplasts for large-scale applications.</a> Plant Signal Transduction: Methods and Protocols. 1363, 79-88 (2016).</li><li>Niedz, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+somatic+embryos+from+sweet+orange+(C.+sinensis)+protoplasts+using+semi-permeable+membranes.">Regeneration of somatic embryos from sweet orange (C. sinensis) protoplasts using semi-permeable membranes.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 84 (3), 353-357 (2006).</li><li>Sheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protoplast+isolation+and+plant+regeneration+of+different+doubled+haploid+lines+of+cauliflower+(Brassica+oleracea+var.+botrytis).">Protoplast isolation and plant regeneration of different doubled haploid lines of cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis).</a> Plant Cell Tiss. Org. 107 (3), 513-520 (2011).</li><li>Grun, P., Chu, L. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+plants+from+protoplasts+of+Solanum+(Solanaceae).">Development of plants from protoplasts of Solanum (Solanaceae).</a> Am. J. Bot. 65 (5), 538-543 (1978).</li><li>Davey, M. R., Anthony, P., Power, J. B., Lowe, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+protoplasts:+status+and+biotechnological+perspectives.">Plant protoplasts: status and biotechnological perspectives.</a> Biotechnol. 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J., Wu, F., Hanzawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+domestication:+the+origin,+genetic+architecture+and+molecular+bases.">Soybean domestication: the origin, genetic architecture and molecular bases.</a> New Phytol. 214 (2), 539-553 (2017).</li><li>Yang, Y., Li, R., Qi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+plant+promoters+and+transcription+factors+by+agroinfiltration+of+tobacco+leaves.">In vivo analysis of plant promoters and transcription factors by agroinfiltration of tobacco leaves.</a> Plant J. 22 (6), 543-551 (2000).</li><li>Marion, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+analysis+of+protein+subcellular+localization+and+interaction+using+high-throughput+transient+transformation+of+Arabidopsis+seedlings.">Systematic analysis of protein subcellular localization and interaction using high-throughput transient transformation of Arabidopsis seedlings.</a> Plant J. 56 (1), 169-179 (2008).</li><li>Wu, H. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGROBEST:+an+efficient+Agrobacterium-mediated+transient+expression+method+for+versatile+gene+function+analyses+in+Arabidopsis+seedlings.">AGROBEST: an efficient Agrobacterium-mediated transient expression method for versatile gene function analyses in Arabidopsis seedlings.</a> Plant methods. 10 (1), 19 (2014).</li><li>Govindarajulu, M., Elmore, J. M., Fester, T., Taylor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+constitutive+viral+promoters+in+transgenic+soybean+roots+and+nodules.">Evaluation of constitutive viral promoters in transgenic soybean roots and nodules.</a> Mol Plant Pathol. 21 (8), 1027-1035 (2008).</li><li>Nagamatsu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+soybean+genes+involved+in+flavonoid+biosynthesis+by+virus-induced+gene+silencing.">Functional analysis of soybean genes involved in flavonoid biosynthesis by virus-induced gene silencing.</a> Plant Biotechnol. J. 5 (6), 778-790 (2007).</li><li>Juvale, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+spatial+Bean+pod+mottle+virus-induced+gene+silencing+in+soybean.">Temporal and spatial Bean pod mottle virus-induced gene silencing in soybean.</a> Mol. Plant Pathol. 13 (9), 1140-1148 (2012).</li><li>Zhang, C., Bradshaw, J. D., Whitham, S. A., Hill, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+an+efficient+multipurpose+bean+pod+mottle+virus+viral+vector+set+for+foreign+gene+expression+and+RNA+silencing.">The development of an efficient multipurpose bean pod mottle virus viral vector set for foreign gene expression and RNA silencing.</a> Plant Physiol. 153 (1), 52-65 (2010).</li><li>Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mesophyll+protoplasts+from+mature+leaves+of+soybeans.">Isolation of mesophyll protoplasts from mature leaves of soybeans.</a> Plant Physiol. 73 (4), 1067-1069 (1983).</li><li>Yi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single-repeat+MYB+transcription+factor,+GmMYB176,+regulates+CHS8+gene+expression+and+affects+isoflavonoid+biosynthesis+in+soybean.">A single-repeat MYB transcription factor, GmMYB176, regulates CHS8 gene expression and affects isoflavonoid biosynthesis in soybean.</a> Plant J. 62 (6), 1019-1034 (2010).</li><li>Faria, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NAC+domain-containing+protein,+GmNAC6,+is+a+downstream+component+of+the+ER+stress-and+osmotic+stress-induced+NRP-mediated+cell-death+signaling+pathway.">The NAC domain-containing protein, GmNAC6, is a downstream component of the ER stress-and osmotic stress-induced NRP-mediated cell-death signaling pathway.</a> BMC Plant Biol. 11 (1), 129 (2011).</li><li>Kidokoro, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+DREB1/CBF-type+transcription+factors+function+in+heat+and+drought+as+well+as+cold+stress-responsive+gene+expression.">Soybean DREB1/CBF-type transcription factors function in heat and drought as well as cold stress-responsive gene expression.</a> Plant J. 81 (3), 505-518 (2015).</li><li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+mutagenesis+in+soybean+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Targeted mutagenesis in soybean using the CRISPR-Cas9 system.</a> Sci Rep-UK. 5, 10342 (2015).</li><li>Karimi, M., Inz&#233;, D., Depicker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GATEWAY&#8482;+vectors+for+Agrobacterium-mediated+plant+transformation.">GATEWAY&#8482; vectors for Agrobacterium-mediated plant transformation.</a> Trends Plant Sci. 7 (5), 193-195 (2002).</li><li>Xia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positional+cloning+and+characterization+reveal+the+molecular+basis+for+soybean+maturity+locus+E1+that+regulates+photoperiodic+flowering.">Positional cloning and characterization reveal the molecular basis for soybean maturity locus E1 that regulates photoperiodic flowering.</a> P. Natl. A. Sci. USA. 109 (32), E2155-E2164 (2012).</li></ol>

सोयाबीन protoplasts और क्षणिक अभिव्यक्ति अध्ययन करने के लिए आवेदन के अलगाव के लिए इस प्रोटोकॉल अच्छी तरह से परीक्षण किया गया है और हमारी प्रयोगशाला में बहुत अच्छा काम करता है । प्रक्रियाओं सरल और आसान कर रहे ?...

Protoplasts सेल दीवारों हटा दिया है कि संयंत्र कोशिकाओं रहे हैं । के रूप में वे सुविधाओं और संयंत्र कोशिकाओं की गतिविधियों के सबसे बनाए रखने, protoplasts एक अच्छा मॉडल प्रणाली का पालन करने और विविध सेलुलर घटनाओं का मूल्यांकन कर रहे हैं, और मूल्यवान उपकरण के लिए दैहिक hybridisation1 और संयंत्र पुनर्जनन2अध्ययन कर रहे हैं । Protoplasts भी व्यापक रूप से संयंत्र परिवर्तन3,4,5के लिए उपयोग किया गया है, क्योंकि सेल दीवारों अंयथा सेल में डीएनए के पारित होने रोकेंगे । Protoplasts शारीरिक प्रतिक्रियाओं और बरकरार पौधों की सेलुलर प्रक्रियाओं के कुछ अधिकारी, इसलिए बुनियादी अनुसंधान में मौलिक मूल्य की पेशकश करने के लिए सेलुलर प्रोटीन स्थानीयकरण अध्ययन6,7,8, प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन9,10, और प्रमोटर गतिविधि11,12,13 लाइव सेल में ।
संयंत्र protoplasts के अलगाव पहले १९६० में रिपोर्ट की गई थी14 और दोनों अलगाव और protoplasts के परिवर्तन के लिए प्रोटोकॉल विकसित किया गया है और अनुकूलित । protoplast अलगाव की एक मानक प्रक्रिया पत्तियों के काटने और कोशिका दीवारों के एंजाइमी पाचन, गैर पचा ऊतक मलबे से जारी protoplasts की जुदाई के बाद शामिल है । परिवर्तन रणनीतियों electroporation15,16, microinjection17,18, और पॉलीथीन ग्लाइकोल आधारित (खूंटी)4,5,19 तरीकों शामिल हैं । प्रजातियों की एक विस्तृत श्रृंखला protoplast अलगाव के लिए सफल बताया गया है, खट्टे20, ब्रेसिका21, Solanaceae22 और अंय सजावटी संयंत्र परिवार23,24शामिल हैं । जबकि विविध ऊतक प्रकार विभिंन प्रजातियों में उपयोग किया जाता है, Arabidopsis mesophyll protoplast (TEAMP) मॉडल संयंत्र Arabidopsis थालियाना की पत्तियों से अलग में क्षणिक अभिव्यक्ति की एक प्रणाली अच्छी तरह से स्थापित किया गया है25 और व्यापक रूप से विविध अनुप्रयोगों के लिए अपनाया ।
सोयाबीन (Glycine max (एल.) Merr.) सबसे महत्वपूर्ण प्रोटीन और तेल फसलों में से एक है26। Arabidopsis और चावल के विपरीत, ट्रांसजेनिक सोयाबीन संयंत्रों प्राप्त करने के बजाय मुश्किल और कम दक्षता जाना जाता है । एग्रोबेक्टीरियम tumefaciens-मध्यस्थता घुसपैठ लोकप्रिय27 और अंकुर में Arabidopsis28,29में तंबाकू में एपिडर्मल कोशिकाओं में क्षणिक जीन अभिव्यक्ति अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया गया है, जबकि एग्रोबेक्टीरियम rhizogenes 30सोयाबीन में बालों की जड़ों के परिवर्तन के लिए इस्तेमाल किया गया है । वायरस प्रेरित जीन मुंह दृष्टिकोण एक प्रणालीगत तरीके से लक्ष्य जीन31,३२ और क्षणिक अभिव्यक्ति३३ के downregulation के लिए उपयोग किया गया है । Protoplasts इन तरीकों के लिए एक मूल्यवान और बहुमुखी विकल्प प्रदान करते हैं । Protoplasts सोयाबीन की aboveground सामग्रियों से प्राप्त किया जा सकता है और त्वरित और सिंक्रनाइज़ transgene अभिव्यक्ति की अनुमति है । हालांकि, १९८३३४में सोयाबीन protoplasts के प्रारंभिक सफल अलगाव के बाद से, वहां सोयाबीन३५,३६,३७में protoplasts के आवेदन पर सीमित रिपोर्ट कर दिया गया है, ३८, मुख्यतः सोयाबीन protoplasts की अपेक्षाकृत कम पैदावार के कारण.
यहां, हम सोयाबीन protoplasts और क्षणिक जीन अभिव्यक्ति अध्ययन के लिए अपने आवेदन के अलगाव के लिए एक सरल और कुशल प्रोटोकॉल का वर्णन । सोयाबीन अंकुर से युवा unifoliate पत्तियों का प्रयोग, हम कुछ ही घंटों के भीतर महत्वपूर्ण protoplasts की बड़ी मात्रा में प्राप्त करने में सक्षम थे । इसके अलावा, हम एक खूंटी कैल्शियम मध्यस्थता परिवर्तन विधि है कि सरल और कम लागत के लिए उच्च दक्षता के साथ सोयाबीन protoplasts में डीएनए देने के लिए अनुकूलित है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="723">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">MES</td>
			<td style="width:181px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">M8250-100G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cellulase CELF</td>
			<td>Worthington Biological Corporation</td>
			<td>LS002611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pectolyase Y-23</td>
			<td>BioWorld</td>
			<td>9033-35-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CELLULASE &#34;ONOZUKA&#34; R-10</td>
			<td>yakult</td>
			<td>10g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MACEROZYME R-10</td>
			<td>yakult</td>
			<td>10g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mannitol</td>
			<td>ICN Biomedicals&#160;</td>
			<td>152540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>C79-500g&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3535S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DTT</td>
			<td>Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>D5545-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>S7653-1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>P217-500g&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgCl2</td>
			<td>Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>M8266-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PEG4000</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>81240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nylon mesh</td>
			<td>carolina</td>
			<td>652222N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Tissue Culture Plates&#160;</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>CC7682-7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Razor Blades</td>
			<td style="width:181px;">Fisher</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hemacytometer</td>
			<td>hausserscientific</td>
			<td>1483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">QIAprep Spin Miniprep Kit</td>
			<td style="width:181px;">Qiagen</td>
			<td>27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">EZNA plasmid miniprep kit</td>
			<td style="width:181px;">Omega</td>
			<td>D6942-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">GeneJET Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td style="width:181px;">Thermo Scientific</td>
			<td>K0502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Centrifuge 5810</td>
			<td style="width:181px;">eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5811000827</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Centrifuge 5424</td>
			<td style="width:181px;">eppendorf</td>
			<td>22620401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Jencons Powerpette Plus Pipet Controller</td>
			<td style="width:181px;">Jencons</td>
			<td>14526-202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:256px;">Zeiss 710 Confocal Microscope</td>
			<td style="width:181px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:256px;">Nonstick, RNase-free Microfuge Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:181px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">15 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:181px;">Denville</td>
			<td style="width:119px;">C1018-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">50 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:181px;">Denville</td>
			<td style="width:119px;">C1060-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Newborn Calf Serum</td>
			<td style="width:181px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">16010159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Soil</td>
			<td style="width:181px;">Ingram&#39;s Nursery</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">perlite</td>
			<td style="width:181px;">Vigoro</td>
			<td style="width:119px;">100521091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Torpedo Sand</td>
			<td style="width:181px;">JKS Ventures</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">LB Broth, Lennox (Powder)</td>
			<td style="width:181px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP1427-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple method for isolation of soybean protoplasts and application to transient gene expression analyses

सोयाबीन (Glycine max (एल.) Merr.) एक महत्वपूर्ण फसल प्रजातियों है और आनुवंशिक और जैव रासायनिक रास्ते के अध्ययन के लिए एक फली मॉडल बन गया है । इसलिए सोयाबीन में दक्ष क्षणिक जीन अभिव्यक्ति प्रणाली स्थापित करना जरूरी है. यहां, हम सोयाबीन protoplasts की तैयारी और क्षणिक कार्यात्मक विश्लेषण के लिए अपने आवेदन के लिए एक सरल प्रोटोकॉल की रिपोर्ट । हमने पाया कि सोयाबीन अंकुर से युवा unifoliate पत्तियों उच्च गुणवत्ता protoplasts की बड़ी मात्रा में हुई । एक खूंटी-कैल्शियम मध्यस्थता परिवर्तन विधि का अनुकूलन करके, हम सोयाबीन unifoliate protoplasts का उपयोग कर उच्च परिवर्तन दक्षता हासिल की । इस प्रणाली के रहने वाले सोयाबीन कोशिकाओं में जटिल विनियामक और संकेत तंत्र की परीक्षा के लिए एक कुशल और बहुमुखी मॉडल प्रदान करता है और बेहतर विविध सेलुलर, विकास और फलियां की शारीरिक प्रक्रियाओं को समझने में मदद कर सकते हैं ।

10 दिन पुराने सोयाबीन के विभिंन अंगों protoplast तैयारी (चित्रा 1) और पैदावार माइक्रोस्कोप (चित्रा 2) के तहत मनाया गया के लिए परीक्षण किया गया । hypocotyl और epicotyl से कोशिका दीवारें शायद...

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A Simple Method for Isolation of Soybean Protoplasts and Application to Transient Gene Expression Analyses

हम जी कोशिकाओं में जटिल विनियामक और संकेत तंत्र का अध्ययन करने के लिए सोयाबीन protoplasts की बड़ी मात्रा की तैयारी के लिए एक सरल और कुशल प्रोटोकॉल विकसित की है ।

सोयाबीन Protoplasts और क्षणिक जीन अभिव्यक्ति के लिए आवेदन के अलगाव के लिए एक सरल तरीका विश्लेषण

Soybean (Glycine max (L.) Merr.) is an important crop species and has become a legume model for the studies of genetic and biochemical pathways. ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

प्राथमिक electroporation के लिए murine अस्थि मज्जा से hematopoietic सेल संस्कृतियों की तैयारी

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

भ्रूणीय Zebrafish और सीडीएनए संश्लेषण से जीन एक्सप्रेशन विश्लेषण के लिए शाही सेना अलगाव

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

जीन Pulser MXcell electroporation प्रणाली का उपयोग करने के लिए उच्च क्षमता के साथ प्राथमिक कोशिकाओं transfect

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

हाय-C: विधि अध्ययन जीनोम के तीन आयामी वास्तुकला.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

एक स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग करने के लिए जीन एक्सप्रेशन अध्ययन सरल: आईएल-4 निर्भर जीन एक्सप्रेशन के Namalwa कक्ष में siRNA नॉकडाउन

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

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के आयल - एंबेडेड और जमे हुए वर्गों ड्रोसोफिला वयस्क स्नायु

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

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सक्रिय टी. के पुनर्गठन इन विट्रो में castaneum टेलोमिरेज

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

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Ribosome बाध्य नवजात polypeptides का अलगाव<em&gt; इन विट्रो में</em&gt; MRNA के साथ translational रोकें ब्लॉग की पहचान के लिए

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Hypoxia निम्नलिखित एकल कोशिका के स्तर पर ग्लोबल शाही सेना संश्लेषण का विश्लेषण

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

चूहे में द्रव्यगतिकी जीन डिलीवरी द्वारा प्रोटीन की क्षणिक अभिव्यक्ति

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...