Name: isolation and characterization of cardiac mesenchymal stromal cells from endomyocardial bioptic samples of arrhythmogenic cardiomyopathy patients
Uploaded: 2018-02-28T14:00:00
Duration: 9 min 16 s
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यह काम इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित किया गया था, Ricerca Corrente को Centro Cardiologico Monzino-IRCCS.

<ol>
	<li>Brooke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+applications+of+mesenchymal+stromal+cells.">Therapeutic applications of mesenchymal stromal cells.</a> Semin Cell Dev Biol. 18 (6), 846-858 (2007).</li><li>Rossini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiac+and+bone+marrow+stromal+cells+exhibit+distinctive+properties+related+to+their+origin.">Human cardiac and bone marrow stromal cells exhibit distinctive properties related to their origin.</a> Cardiovasc Res. 89 (3), 650-660 (2010).</li><li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+cells+can+be+generated+in+vitro+from+several+adult+human+organs+(heart,+liver,+and+bone+marrow).">Multipotent cells can be generated in vitro from several adult human organs (heart, liver, and bone marrow).</a> Blood. 110 (9), 3438-3446 (2007).</li><li>da Silva Meirelles, L., Chagastelles, P. C., Nardi, N. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+Isolation+of+3+Distinct+Cardiac+Stem+Cell+Populations+From+a+Single+Human+Heart+Biopsy.">Concurrent Isolation of 3 Distinct Cardiac Stem Cell Populations From a Single Human Heart Biopsy.</a> Circ Res. 121 (2), 113-124 (2017).</li><li>From, A. M., Maleszewski, J. J., Rihal, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+endomyocardial+biopsy.">Current status of endomyocardial biopsy.</a> Mayo Clin Proc. 86 (11), 1095-1102 (2011).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Mesenchymal Stromal कोशिकाओं (एमएससी) कई ऊतकों में एक महत्वपूर्ण सहायक समारोह के साथ वयस्क कोशिकाओं रहे हैं1. अस्थि मज्जा एमएससी के ऐतिहासिक स्रोत का प्रतिनिधित्व करता है, लेकिन वे अपरा, वसा ऊतक, गर्भनाल रक्त, जिगर, और दिल1,2सहित विभिन्न ऊतकों से अलग किया जा सकता है ।
२००६ में, सेलुलर थेरेपी के लिए इंटरनेशनल सोसायटी (ISCT) निर्दिष्ट, पहली बार के लिए, ंयूनतम मानदंड मानव एमएससी3को परिभाषित करने के लिए । खास तौर पर एमएससी में प्लास्टिक का पालन करने की क्षमता होनी चाहिए । वे विशिष्ट सतह एंटीजन व्यक्त: CD44, CD105, CD29, और CD90 mesenchymal मार्करों के लिए धनात्मकता, और CD14, CD45, CD34, CD31 टेम और endothelial मार्करों के लिए नकारात्मकता एमएससी की विशेषताएं । एचएलए की कमी की अभिव्यक्ति के कारण-डॉ, एमएससी alloreactivity ट्रिगर करने में असमर्थ हैं । इसके अलावा, वे adipogenic, chondrocyte, और osteoblast वंश1,3की ओर अंतर करने की क्षमता के साथ multipotent कोशिकाओं रहे हैं ।
कार्डिएक सेलुलर संरचना पर ध्यान केंद्रित, कार्डियक mesenchymal stromal कोशिकाओं (सी-एमएससी) एक सामान्य वयस्क दिल में प्रचुर मात्रा में हैं4,5. वे दोनों सामांय हृदय समारोह और रोग की स्थिति में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं । जबकि, शारीरिक, सी-एमएससी एक microenvironment कि मायोकार्डियम के संरचनात्मक और कार्यात्मक अखंडता का समर्थन करता है प्रदान करते हैं, हृदय रोगों में वे दिल की चोट के जवाब में सक्रिय कर रहे हैं घाव भरने में भाग लेने और fibrotic remodeling6 ,7.
हाल ही में, arrhythmogenic cardiomyopathy (ACM) वसा प्रतिस्थापन में सी-एमएससी के शामिल होने से8का प्रदर्शन किया गया है । विशेष रूप से, ACM एक आनुवंशिक विकार मुख्य रूप से desmosomal जीन में परिवर्तन की वजह से है कि रोधगलन fibro-फैटी प्रतिस्थापन के लिए सीसा, मुख्य रूप से सही निलय9में है । इस प्रतिस्थापन, epicardium से endocardium तक का विस्तार, एक गैर प्रवाहकीय सब्सट्रेट है कि प्रगतिशील दिल की विफलता को बढ़ाता है और वेंट्रिकुलर अतालता, जो नेतृत्व कर सकते हैं बिगड़ जाती है बनाता है, गंभीर मामलों में, अचानक मौत के लिए. Sommariva एट अल. ACM मरीजों के explanted हृदय वर्गों में उपस्थित पूर्व adipocytes के mesenchymal मूल का प्रदर्शन किया. इसके अलावा, सी-एमएससी ACM दिल desmosomal जीन एक्सप्रेस के endomyocardial बायोप्सी से अलग है और इसलिए उनके उत्परिवर्तनों से प्रभावित किया जा सकता है । विशेष रूप से, adipogenic शर्तों के तहत, ACM सी एमएससी नियंत्रण दिल से उन से अधिक लिपिड जमा । इस सबूत के निष्कर्ष है कि सी-एमएससी दोनों रोग रोगजनन में एक सक्रिय भूमिका है और ACM का अध्ययन करने के लिए एक वैध सेल मॉडल का प्रतिनिधित्व करने की ओर जाता है ।
इस संदर्भ में या अंय हृदय रोग है जिसके लिए एक हृदय बायोप्सी संकेत दिया है में भविष्य के अनुसंधान की सुविधा के लिए, एक विस्तृत प्रोटोकॉल endomyocardial ऊतक के छोटे टुकड़े से सी-एमएससी के अलगाव के लिए प्रस्तुत किया जाता है, उनके विस्तार, उनके इंयूनो-phenotypical लक्षण वर्णन, और adipogenic भेदभाव ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:804px;" width="804">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">IMDM</td>
			<td style="width:195px;">Gibco by Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:141px;">12440053</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">PENICILLIN STREPTOMYCIN</td>
			<td style="width:195px;">Life Technologies Italia</td>
			<td style="width:141px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Collagenase NB4</td>
			<td style="width:195px;">Serva</td>
			<td style="width:141px;">17454.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Basic fibroblast growth factor</td>
			<td style="width:195px;">Peprotech</td>
			<td style="width:141px;">100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">L-glutammine</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">G7513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">PBS</td>
			<td style="width:195px;">Lonza</td>
			<td style="width:141px;">17-516F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Tryple select 1X (cell dissociation reagent)</td>
			<td style="width:195px;">Gibco</td>
			<td style="width:141px;">12563029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">EDTA</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">EDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Trypsin-EDTA solution&#160;</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">T6689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">3-Isobutyl-1-methylxanthine</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">I5879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Hydrocortisone</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Indomethacin</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">I7378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Oil Red O</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">O0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">I9516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Paraformaldehyde (PFA) Solution 4% in PBS</td>
			<td style="width:195px;">D.b.a. Italia S.r.l.</td>
			<td style="width:141px;">sc-281692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">276855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody CD14-FITC (M&#966;P9)</td>
			<td style="width:195px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:141px;">345784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody Integrin &#946;1 (CD29)-PE (clone MAR4)</td>
			<td style="width:195px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:141px;">561795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody PECAM-1 (CD31)- APC&#160; (clone 9G11)</td>
			<td style="width:195px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:141px;">FAB3567A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:404px;">Antibody Hematopoietic progenitor cell antigen (CD34)-APC (clone 581)</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:141px;">CD34-581-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody H-CAM (CD44)-PE&#160; (clone G44-26)</td>
			<td style="width:195px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:141px;">561858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody L-CA (CD45)-APC (clone HI30)</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:141px;">MHCD4505-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody THY1 (CD90)-FITC (clone 5E10)</td>
			<td style="width:195px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:141px;">561969</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody Endoglin (CD105)-APC (clone 266)</td>
			<td style="width:195px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:141px;">562408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:404px;">Antibody HLA-DR-FITC (clone L243)</td>
			<td style="width:195px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:141px;"> 
			347400</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Gima Quick Plus sterilizer</td>
			<td style="width:195px;">Gima&#160;</td>
			<td style="width:141px;">35642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Bench centrifuge Sigma 3-16K</td>
			<td style="width:195px;">Sigma Centrifuges</td>
			<td style="width:141px;">10330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Mr. Frosty Freezing Container</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:141px;">5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">AxioVert 200M microscope&#160;</td>
			<td style="width:195px;">Zeiss</td>
			<td style="width:141px;">B 40-080 e 03/01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">FACS Gallios</td>
			<td style="width:195px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:141px;">773231AF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">ImageJ (image processing program)</td>
			<td style="width:195px;">NIH</td>
			<td style="width:141px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Stericup filter units</td>
			<td style="width:195px;">Merck S.P.A.&#160;</td>
			<td style="width:141px;">SCGPU05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Conical Tubes, 50 mL</td>
			<td style="width:195px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:141px;">30122178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Conical Tubes, 15 mL</td>
			<td style="width:195px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:141px;">30122151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Safe-Lock Tubes, 2 mL</td>
			<td style="width:195px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:141px;">30120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">100 mm TC-Treated Cell Culture Dish</td>
			<td style="width:195px;">Corning</td>
			<td style="width:141px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">60 mm TC-Treated Cell Culture Dish</td>
			<td style="width:195px;">Corning</td>
			<td style="width:141px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">6 well TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td style="width:195px;">Corning</td>
			<td style="width:141px;">3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">Polystyrene Round-Bottom Tubes, 5 mL</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:141px;">352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:404px;">BRAND&#160;counting chamber BLAUBRAND B&#252;rker-T&#252;rk</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:141px;">BR719520</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and characterization of cardiac mesenchymal stromal cells from endomyocardial bioptic samples of arrhythmogenic cardiomyopathy patients

एक सामांय वयस्क दिल कई विभिंन प्रकार के सेल, जो बीच में कार्डियक mesenchymal stromal कोशिकाओं एक प्रचुर मात्रा में जनसंख्या का प्रतिनिधित्व से बना है । इन कोशिकाओं के अलगाव हृदय रोगों में उनकी भागीदारी का अध्ययन करने की संभावना प्रदान करता है, और इसके अलावा, जैविक तंत्र की जांच करने के लिए एक उपयोगी प्राथमिक सेल मॉडल प्रदान करता है ।
इधर, arrhythmogenic cardiomyopathy मरीजों के bioptic नमूनों से सी-एमएससी के अलगाव के लिए विधि बताई गई है । endomyocardial बायोप्सी नमूना सही वेंट्रिकुलर इलेक्ट्रो-संरचनात्मक मानचित्रण द्वारा visualized निशान करने के लिए आसंन क्षेत्रों में निर्देशित है । collagenase में बायोप्सी के पाचन और संस्कृति माध्यम में एक प्लास्टिक डिश पर उनके चढ़ाना सी एमएससी वृद्धि की अनुमति वर्णित है । अलग कोशिकाओं कई मार्ग के लिए संस्कृति में विस्तारित किया जा सकता है । उनके mesenchymal phenotype की पुष्टि करने के लिए इंयूनो-phenotypical लक्षण वर्णन का विवरण प्रदान किया गया है । सी-एमएससी adipocytes, chondrocytes, और osteoblasts जैसे कई कोशिका प्रकार में अंतर करने में सक्षम हैं: ACM के संदर्भ में, रोगियों के दिलों में adipocyte जमा की विशेषता, सी के adipogenic भेदभाव के लिए प्रोटोकॉल-एमएससी और लिपिड छोटी बूंद संचय के लक्षण वर्णन कर रहे हैं ।

कार्डिएक stromal कोशिकाओं अलगाव: सी endomyocardial बायोप्सी प्रक्रिया से एमएससी अलगाव चित्रा 1में संक्षेप है ।
कार्डिएक stromal कोशिकाओं mesenchymal लक्षण वर्णन: के रूप में सेलुलर थेरेपी (ISCT) के लिए इंटरनेशनल सोसायटी द्वारा स्थापित, multipotent mesenchymal stromal कोशिकाओं को परिभाषित करने के लिए ंयूनतम मानदंड उनके इंयूनो-phenotypic लक्षण वर्णन3शामिल हैं । विशेष रूप से, उनके mesenchymal वंश की पुष्टि करने के लिए, कोशिकाओं को उचित FITC/पीई/APC-संयुग्मित एंटीबॉडी के साथ गर्मी और प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण कर रहे हैं । सी-एमएससी लक्षण वर्णन में इस्तेमाल किया एंटीबॉडी के सभी सामग्री की तालिकामें सूचीबद्ध हैं ।
जैसा कि चित्रा 2में सचित्र, सी-एमएससी बायोप्सी से प्राप्त विशिष्ट mesenchymal सतह एंटीजन CD29, CD44, और CD105 के लिए सकारात्मक हैं । CD90 धनात्मक कक्षों का प्रतिशत चर है, जैसा कि पहले11बताया गया है । endothelial (CD31, CD34), monocyte/मैक्रोफेज (CD14), टेम (CD45) मार्कर, और प्रमुख histocompatibility परिसर (एचएलए-DR) व्यक्त नहीं कर रहे है (चित्रा 2) ।
कार्डियक mesenchymal stromal कोशिकाओं adipogenic विभेद: उनके adipogenic विभेद, सी-एमएससी ACM और एचसी द्वारा प्रभावित रोगियों से प्राप्त करने के लिए टी ADIPO मध्यम में संस्कृति होना है (समाधान अनुभाग देखें) । कोशिकाओं ७२ ज या 1 सप्ताह के लिए संस्कृति में बनाए रखा है, मध्यम दो बार एक सप्ताह की जगह ।
intracellular लिपिड बूंदों के संचय ओरो धुंधला (चित्रा 3) द्वारा सबूत है । क्षमता में अंतर, साथ ही साथ भेदभाव की डिग्री में, ACM और HC से प्राप्त कोशिकाओं के बीच मनाया जा सकता है । के रूप में प्रतिनिधि छवियों में दिखाया गया है, ACM सी-एमएससी adipogenic माध्यम में संस्कृति के ७२ एच के बाद एचसी सी-एमएससी से अधिक लिपिड बूंदों जमा (चित्रा 3) । ये अंतर तब भी बनाए जाते है जब कक्षों को लंबी अवधि (1 सप्ताह) (चित्र 3) के लिए adipogenic भिंनता शर्तों से अवगत कराया जाता है ।
<img alt="Video 1" src="/files/ftp_upload/57263/57263video1.jpg"> वीडियो 1: electroanatomical नक्शा आणि intracardiac इकोकार्डियोग्राफी का एकीकरण. Endocardial एकध्रुवीय electroanatomical सही निलय के नक्शे (पूर्वकाल टेढ़ा और सही पूर्वकाल टेढ़ा विचार) एक रोगी जो endomyocardial बायोप्सी (कम पैनलों) से गुजरना में छोड़ दिया । सीमित क्षेत्रों में कम वोल्टेज (लाल हरे रंग की) शीर्ष पर दिखाई दे रहे हैं । Endomyocardial bioptic नमूने (सर्कल के रूप में चिह्नित) रोगग्रस्त मायोकार्डियम और interventricular पट को पत्राचार में एकत्र कर रहे हैं । वास्तविक समय intracardiac इकोकार्डियोग्राफी लक्ष्य क्षेत्र (ऊपरी पैनल) पर bioptome की सही स्थिति की जांच की अनुमति देता है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57263/Video_1.avi" target="_blank">इस वीडियो को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)</a>
<img alt="Video 2" src="/files/ftp_upload/57263/57263video2.jpg"> वीडियो 2: सही पूर्वकाल टेढ़ा दृश्य में प्रतिदीप्तिदर्शन वीडियो । bioptome एक लंबे समय से विक्षेपित म्यान के माध्यम से डाला और निलय में उंनत है । मायोकार्डियम के साथ bioptome संपर्क की एक सावधानी से जांच के बाद, जबड़े और फिर मजबूती से नमूना इकट्ठा करने के लिए बंद कर दिया जाता है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57263/Video_2.avi" target="_blank">इस वीडियो को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)</a>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57263/57263fig1.jpg"> चित्र 1: कार्यविधि ड्राफ़्ट. endomyocardial bioptic नमूना एक bioptome कैथेटर, एक छोटे से दोमुखी के आकार काटने के साधन का उपयोग कर एकत्र किया जाता है । प्राप्त बायोप्सी का वजन लगभग 5 मिलीग्राम (A) है । endomyocardial bioptic नमूना ०.५-1 मिमी3 टुकड़ों में कीमा बनाया हुआ है, बाँझ कैंची (बी) के साथ, और collagenase समाधान जोड़ा जाता है. नमूना एक ३७ डिग्री सेल्सियस में एक घूर्णन मंच मिक्सर पर १.५ के लिए पाचन के एच (ग) रखा जाता है । पचा समाधान केंद्रापसारक और एक प्लास्टिक की डिश में TMES में चढ़ाया जाता है (डी) । सी-एमएससी उनके प्लास्टिक पालन संपत्तियों के लिए धंयवाद प्राप्त कर रहे है या तो एकल कोशिकाओं या क्लोन, या छोटे से अपच bioptic टुकड़े (ई) से अंकुरित । सी-एमएससी तो फ्लो cytometry (च) की विशेषता है । सी-एमएससी में चढ़ाया जाता है adipogenic मध्यम और लिपिड छोटी बूंद संचय तेल लाल ओ धुंधला (G) द्वारा परीक्षण किया जाता है । स्केल बार्स संकेत ५० µm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57263/57263fig1large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57263/57263fig2.jpg"> चित्रा 2: सी-एमएससी के प्रतिनिधि cyto-fluorimetric प्रोफाइल । प्रत्येक हिस्टोग्राम संकेत चैनल में प्रतिदीप्ति की तीव्रता बनाम सेल गिनती से पता चलता है (पीई: phycoerythrin; APC: allophycocyanin; FITC: fluorescein-isothyocyanate) । प्रत्येक ग्राफ में isotype नियंत्रण (सफेद) और विशिष्ट कोशिका सतह मार्कर एंटीबॉडी (लाल) के साथ एक नमूना संयुग्मित दिखाया जाता है. सी-एमएससी के लिए पॉजिटिव हैं mesenchymal सरफेस एंटीजन CD29, CD44, CD105 और, आंशिक रूप से, CD90 के लिए, जबकि वे CD31, CD34, CD14, CD45, और एचएलए को व्यक्त नहीं करते-डॉ. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57263/57263fig2large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57263/57263fig3.jpg"> चित्रा 3: सी-एमएससी के Adipogenic विभेद। ACM और कोर्ट सी के प्रतिनिधि छवियां-एमएससी, ७२ ज और 1 सप्ताह के लिए adipogenic माध्यम में संस्कृति, ओरो के साथ सना हुआ (बाएं चित्र; n = 3) । सही रेखांकन में, ठहराव के २५५-लाल चैनल धुंधला के चमकदार की रिपोर्ट है: तीव्रता मनमाना इकाइयों (A.U.) में व्यक्त की है । ACM सी-एमएससी नियंत्रण से अधिक लिपिड बूंदें जमा । विद्यार्थी का T-परीक्षण उपयोग किया गया था, *: p < ०.०५ । स्केल बार्स संकेत ५० µm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57263/57263fig3large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.</a>

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Isolation and Characterization of Cardiac Mesenchymal Stromal Cells from Endomyocardial Bioptic Samples of Arrhythmogenic Cardiomyopathy Patients

अलगाव और Arrhythmogenic Cardiomyopathy रोगियों के Endomyocardial Bioptic नमूनों से कार्डियक Mesenchymal Stromal कोशिकाओं के लक्षण वर्णन

इस लेख में, arrhythmogenic cardiomyopathy रोगियों के endomyocardial bioptic नमूनों से कार्डियक mesenchymal stromal कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक विधि प्रदान की गई है । उनके लक्षण वर्णन और प्रोटोकॉल उनके adipogenic भेदभाव को बढ़ावा देने के लिए वर्णित हैं ।

A normal adult heart is composed of several different cell types, among which cardiac mesenchymal stromal cells represent an abundant population. The ...

Research

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Developmental Biology

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भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से कार्डिएक पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की व्युत्पत्ति

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Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

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माउस के लिए एंडोमेट्रियल उपकला और stromal कोशिकाओं का अलगाव<em&gt; इन विट्रो</em&gt; Decidualization

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Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

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Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

अलगाव, संस्कृति, और चूहों से अस्थि मज्जा Stromal कोशिकाओं और अस्थिशोषक Progenitors के भेदभाव

Bone marrow stromal cells (BMSCs) constitute a cell population routinely used as a representation of mesenchymal stem cells in vitro. They reside within ...