Name: treatment with vancomycin loaded calcium sulphate and autogenous bone in an improved rabbit model of bone infection
Uploaded: 2019-03-14T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Treatment with Vancomycin Loaded Calcium Sulphate and Autogenous Bone in an Improved Rabbit Model of Bone Infection at JoVE.com

Questo lavoro è stato supportato dal National Foundation Natural Science of China (81803808, 81873062), Zhejiang Provincial Medical Health Science e Technology Fund (2017KY271) e scienza e tecnologia progetto della provincia del Zhejiang (2017 37181).

I conigli utilizzati nel presente studio sono stati trattati in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio. Tutte le procedure sperimentali sono state seguite dalle regole di bioetica Comitato di Zhejiang Accademia di medicina tradizionale cinese.
1. preparazione della sospensione batterica
<ol><li>Sciogliere 0,5 mg di S. aureus liofilizzazione polvere (ATCC 6538) con 0,3 mL di terreno di coltura di Luria-Bertani. Mescolare la sospensione completamente.</...

<ol>
	<li>Malizos, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Forum:+The+Burden+of+Bone+and+Joint+Infection:+A+Growing+Demand+for+More+Resources.">Global Forum: The Burden of Bone and Joint Infection: A Growing Demand for More Resources.</a> Journal of Bone and Joint Surgery-American Volume. 99, 20 (2017).</li><li>Peeters, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teicoplanin+-+based+antimicrobial+therapy+in+Staphylococcus+aureus+bone+and+joint+infection:+tolerance,+efficacy+and+experience+with+subcutaneous+administration.">Teicoplanin - based antimicrobial therapy in Staphylococcus aureus bone and joint infection: tolerance, efficacy and experience with subcutaneous administration.</a> BMC Infectious Diseases. 16, 622 (2016).</li><li>Sugaya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+autologous+concentrated+bone+marrow+grafting+in+the+treatment+for+nonunion.">Percutaneous autologous concentrated bone marrow grafting in the treatment for nonunion.</a> European Journal of Orthopeadic Surgery and Traumatology. 24, 671-678 (2014).</li><li>Birt, M. C., Anderson, D. W., Bruce, T. E., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteomyelitis:+Recent+advances+in+pathophysiology+and+therapeutic+strategies.">Osteomyelitis: Recent advances in pathophysiology and therapeutic strategies.</a> Journal of Orthopeadics. 14, 45-52 (2017).</li><li>Walter, G., Kemmerer, M., Kappler, C., Hoffmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+algorithms+for+chronic+osteomyelitis.">Treatment algorithms for chronic osteomyelitis.</a> Deutsches Arzteblatt International. 109, 257-264 (2012).</li><li>Henriksen, K., Neutzsky-Wulff, A. V., Bonewald, L. F., Karsdal, M. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+vancomycin+powder+on+bone+healing+in+a+rat+spinal+rhBMP-2+model.">The effect of vancomycin powder on bone healing in a rat spinal rhBMP-2 model.</a> Journal of Neurosurgery Spine. 25, 147-153 (2016).</li><li>Cohn Yakubovich, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computed+Tomography+and+Optical+Imaging+of+Osteogenesis-angiogenesis+Coupling+to+Assess+Integration+of+Cranial+Bone+Autografts+and+Allografts.">Computed Tomography and Optical Imaging of Osteogenesis-angiogenesis Coupling to Assess Integration of Cranial Bone Autografts and Allografts.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53459 (2015).</li><li>Brecevich, A. 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I: A description of the model.</a> Journal of Infectious Diseases. 122, 410-418 (1970).</li><li>Mistry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+multi-barrier,+drug+eluting+calcium+sulfate/biphasic+calcium+phosphate+biodegradable+composite+bone+cement+for+treatment+of+experimental+MRSA+osteomyelitis+in+rabbit+model.">A novel, multi-barrier, drug eluting calcium sulfate/biphasic calcium phosphate biodegradable composite bone cement for treatment of experimental MRSA osteomyelitis in rabbit model.</a> Journal of Controlled Release. 239, 169-181 (2016).</li><li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+In+vivo+Optical+and+&#181;CT+Imaging+to+Monitor+Infection,+Inflammation,+and+Bone+Anatomy+in+an+Orthopaedic+Implant+Infection+in+Mice.">Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51612 (2014).</li><li>Koeth, L. M., DiFranco-Fisher, J. M., McCurdy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Reference+Broth+Microdilution+Method+for+Dalbavancin+In+Vitro+Susceptibility+Testing+of+Bacteria+that+Grow+Aerobically.">A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically.</a> Journal of Visualized Experiments. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephedra+gerardiana+aqueous+ethanolic+extract+and+fractions+attenuate+Freund+Complete+Adjuvant+induced+arthritis+in+Sprague+Dawley+rats+by+downregulating+PGE2,+COX2,+IL-1&#946;,+IL-6,+TNF-&#945;,+NF-kB+and+upregulating+IL-4+and+IL-10.">Ephedra gerardiana aqueous ethanolic extract and fractions attenuate Freund Complete Adjuvant induced arthritis in Sprague Dawley rats by downregulating PGE2, COX2, IL-1&#946;, IL-6, TNF-&#945;, NF-kB and upregulating IL-4 and IL-10.</a> Journal of Ethnopharmacology. 224, 482-496 (2018).</li><li>Harrasser, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+implant-related+osteomyelitis+in+the+metaphysis+of+rat+tibiae.">A new model of implant-related osteomyelitis in the metaphysis of rat tibiae.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 17, 152 (2016).</li><li>Abedon, S. 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F., Schortinghuis, J., Vissink, A., Raghoebar, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+study+on+the+morbidity+resulting+from+calvarial+bone+harvesting+for+intraoral+reconstruction.">A prospective study on the morbidity resulting from calvarial bone harvesting for intraoral reconstruction.</a> International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 44, 513-517 (2015).</li><li>Yin, J., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Completely+resorption+of+autologous+skull+flap+after+orthotopic+transplantation:+a+case+report.">Completely resorption of autologous skull flap after orthotopic transplantation: a case report.</a> International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 7, 1169-1171 (2014).</li><li>Takehiko, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+results+of+managing+large+medial+tibial+defects+in+primary+total+arthroplasty:+autogenous+morcellised+bone+graft.">Preliminary results of managing large medial tibial defects in primary total arthroplasty: autogenous morcellised bone graft.</a> International Orthopaedics. 41, 931-937 (2017).</li></ol>

Negli studi precedenti, sono stati costruiti vari tipi di modelli animali per studiare sia l'infezione acuta e cronica dell'osso; Tuttavia, la ricerca per il modello ideale persiste ancora17,18. Inoltre, il modello di infezione ossea ideale è previsto per simulare le caratteristiche patologiche di infezione ossea in ambiente clinico, mentre i periodi di modellazione, rimanere basso costo e facile da realizzare. Finora, il modello di infezione dell'osso di conigl...

L'infezione dell'osso provoca solitamente da batteri o altri invasione microorganismo dopo traumi, fratture ossee o altre malattie di osso1. L'infezione dell'osso può indurre un alto livello di distruzione del tessuto dell'osso e l'infiammazione. Nella clinica, lo Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) è l'agente causativo predominante di osso infezione2,3. L'infezione dell'osso è doloroso e debilitante e spesso assume un decorso cronico che è estremamente difficile da trattare4. Allo stato attuale, lo sbrigliamento del tessuto necrotico e impiantare dei branelli di vancomicina-caricati del calcio (VCS) sono stati confermati come una strategia efficace per il controllo di infezione locale5,6. Tuttavia, 10-15% dei pazienti ha avvertito un processo di riparazione dell'osso prolungato, ritardi di consolidazione o pseudoartrosi dopo trattamento anti-infezione7. Il grande segmento di un difetto dell'osso è la questione più difficile per i chirurghi ortopedici. Un innesto di osso autologo è considerato la sostituzione ottimale dell'osso nell'osso non sindacale trattamento8,9.
Ad oggi, la maggior parte degli studi sull'osso infezione e l'impianto di osso autologo sono stati condotti in vari tipi di modelli animali, come i ratti, conigli, cani, maiali e pecore10,11. Modelli di coniglio sono più comunemente utilizzati per studi di infezione dell'osso, come prima interpretata da Norden e Kennedy nel 197012,13. Nel nostro studio precedente, abbiamo utilizzato modelli di coniglio seguendo il metodo di Norden, e abbiamo trovato che la quantità di S. aureus iniettato nel midollo osseo non era possibile quantificare con precisione, come la fuoriuscita di sangue dal midollo osseo ha condotto all'overflow di soluzione di batteri.
Questo articolo presenta un metodo chirurgico migliore per indurre infezione ossea sui conigli. Al termine della procedura, un'analisi biochimica del sangue, un esame batteriologico e un esame istopatologico sono stati effettuati per verificare il modello di infezione dell'osso. Quindi, VCS è stata impiantata per inibire l'infezione e l'osso autogeno è stato impiantato per promuovere la rigenerazione ossea.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:824px;" width="825">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">absorbable surgical suture</td>
			<td style="width:264px;">Jinghuan</td>
			<td style="width:119px;">18S0604A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">asepsis injector</td>
			<td style="width:264px;">Jinglong</td>
			<td style="width:119px;">20170501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">bone wax</td>
			<td style="width:264px;">ETHICON</td>
			<td style="width:119px;">JH5CQLM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">CCD camera</td>
			<td style="width:264px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">DP72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">EDTA-K2 anticoagulant blood vessel</td>
			<td style="width:264px;">XINGE</td>
			<td style="width:119px;">20170802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Electric bone drill unit</td>
			<td style="width:264px;">Bao Kang</td>
			<td style="width:119px;">BKZ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:264px;">Codos</td>
			<td style="width:119px;">3800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">flexible silica gel mold&#160;</td>
			<td style="width:264px;">WRIGHT</td>
			<td style="width:119px;">1527745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td style="width:264px;">Beyotime</td>
			<td style="width:119px;">20170523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Luria-Bertani culture medium</td>
			<td style="width:264px;">Baisi Biothchnology</td>
			<td style="width:119px;">20170306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Medical-grade calcium sulphate</td>
			<td style="width:264px;">WRIGHT</td>
			<td style="width:119px;">1527745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">microcomputed tomography (micro-CT)</td>
			<td style="width:264px;">Bruker</td>
			<td style="width:119px;">SkyScan 1172&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Microscope</td>
			<td style="width:264px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">CX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">New Zealand white rabbits</td>
			<td style="width:264px;">Zhejiang Experimental Animal Center&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SCXK 2014-0047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:275px;">No. 11 scalpel&#160;</td>
			<td style="width:264px;">Yuanlikang</td>
			<td style="width:119px;">20170604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">normal saline</td>
			<td style="width:264px;">Mingsheng</td>
			<td style="width:119px;">20170903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">PBS</td>
			<td style="width:264px;">TBD(Jingyi)</td>
			<td style="width:119px;">20170703-0592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">pentobarbital sodium</td>
			<td style="width:264px;">Merk</td>
			<td style="width:119px;">2070124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">povidone-iodinesolution</td>
			<td style="width:264px;">Lierkang</td>
			<td style="width:119px;">20170114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:275px;">S. aureus freeze drying powder</td>
			<td style="width:264px;">China General Microbiological Culture Collection Center</td>
			<td style="width:119px;">ATCC 6538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">sheep blood agar</td>
			<td style="width:264px;">HuanKai Microbial</td>
			<td style="width:119px;">3103210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:275px;">tryptic soy agar plates</td>
			<td style="width:264px;">HuanKai Microbial</td>
			<td style="width:119px;">3105697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">tryptic soy broth tubes</td>
			<td style="width:264px;">HuanKai Microbial</td>
			<td style="width:119px;">3104260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Vancomycin</td>
			<td style="width:264px;">Lilly</td>
			<td style="width:119px;">C599180</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

treatment with vancomycin loaded calcium sulphate and autogenous bone in an improved rabbit model of bone infection

Risultati di infezione dell'osso dall'invasione batterica, che è estremamente difficile da trattare in chirurgia clinica, ortopedica e traumatica. L'infezione ossea può provocare l'infiammazione continua, osteomielite ed eventuale osso non-Unione. Istituzione di un modello animale fattibile, riproducibile è importante alle ossa ricerca di infezione e di trattamento antibiotico. Come un modello in vivo, il modello di coniglio è ampiamente usato nella ricerca di infezione dell'osso. Tuttavia, gli studi precedenti sul coniglio dell'osso ha mostrati che lo stato di infezione era incoerente, così come la quantità di batteri variabile di modelli di infezione. Questo studio presenta un metodo chirurgico migliore per indurre l'infezione dell'osso su un coniglio, bloccando i batteri nel midollo osseo. Quindi, valutazioni multi-livelli possono essere effettuate per verificare il metodo di modellazione.
In generale, sbrigliamento del tessuto necrotico e l'impianto di solfato di calcio di vancomicina-caricato (VCS) sono predominanti nel trattamento antibiotico. Sebbene il solfato di calcio in VCS benefici Osteocita strisciando e nuova crescita ossea, voluminosa dell'osso difetti si verificano dopo rimuovere il tessuto morto. L'osso autogeno (AB) è una strategia interessante per superare i difetti dell'osso per il trattamento di difetti ossei massiccia dopo rimuovere il tessuto morto osso necrotico.
In questo studio, abbiamo usato l'osso della coda come un osso autologo impiantato nel difetto osseo. Riparazione ossea è stata misurata utilizzando micro-computare-tomografia (micro-CT) e l'analisi istologica dopo sacrificio animale. Di conseguenza, nel gruppo VCS, non-Unione dell'osso è stata ottenuta costantemente. Al contrario, le zone di difetto dell'osso nel gruppo VCS-AB sono state diminuite significativamente. Il presente metodo di modellazione descritto un metodo riproducibile, fattibile, stabile per preparare un modello di infezione dell'osso. Il trattamento di VCS-AB è provocato da tassi più bassi di pseudoartrosi dell'osso dopo il trattamento antibiotico. Il modello di infezione migliore dell'osso e il trattamento di combinazione di VCS e osso autogeno potrebbe essere utile per studiare i meccanismi di fondo nella rigenerazione ossea dell'osso e infezione pertinente per applicazioni ortopediche di traumatologia.

Valutazione del modello di infezione dell'osso Dopo l'infezione con S. aureus, le manifestazioni patologiche dei conigli erano simili al sintomo rappresentativo di osteomielite cronica nella clinica. Nel nostro studio, 30 conigli sono stati infettati e sottomesso come un gruppo di modello, e 10 conigli sono stati sottoposti come animali di controllo. Tutti i conigli di modello hanno infettato i seni del sito locale di tibia, con pus bianco e giallo sul flusso ...

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Treatment with Vancomycin Loaded Calcium Sulphate and Autogenous Bone in an Improved Rabbit Model of Bone Infection

Questo studio presenta un coniglio migliorato modello infettato da Staphylococcus aureus bloccando la stessa quantità di batteri nel midollo osseo. Vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno sono utilizzati per il trattamento di riparazione dell'osso e antibiotico. Il protocollo potrebbe essere utile per studiare l'infezione dell'osso e la rigenerazione.

Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno in un modello di coniglio migliorata dell'infezione dell'osso

Bone infection results from bacterial invasion, which is extremely difficult to treat in clinical, orthopedic, and traumatic surgery. The bone infection ...

Un modello animale producibile è molto importante per la ricerca sulle infezioni ossee. Tuttavia, attualmente non esiste un modello di coniglio per il quale lo stato delle infezioni e il numero di batteri è coerente. Il nostro modello di coniglio per infezione ossea utilizza un batterio coerente ed è trattato da solfato di calcio caricato con vancomicina e frammenti autogeni.La tecnica potrebbe essere estesa verso la diagnosi di infezione ossea e terapia non di unione ossea, e nella comprensione della patogenesi dell'infezione ossea. Questo metodo potrebbe fornire informazioni su altri modelli di infezione ossea in ratti, topi e maiali. È difficile caricare lo stesso volume di sospensione batterica nel midollo osseo.La dimostrazione visiva può aiutare i ricercatori a eseguire i passaggi critici in modo semplice e accurato. Per preparare la sospensione batterica, sciogliere prima 0,5 milligrammi di polvere liofilizzato S.aureus in 0,3 millilitri di terreno di coltura LB. Mescolare accuratamente la sospensione e striare i batteri su piastre di agar di soia triptica per la loro incubazione per 16 ore a 37 gradi Celsius.La mattina seguente, scegli una singola unità batterica di formazione di colonie per la coltura in tubi di brodo di soia triptico per 24 ore a 37 gradi Celsius. Quando i batteri si trovano nella fase di crescita logaritmica media, trasferire 1 millilitro di batteri in un tubo da 1,5 millilitri e raccogliere i batteri mediante centrifugazione. Quindi, lavare il pellet di cellule batteriche tre volte in 100 microlitri di PBS per lavaggio, rimospensendo i batteri in 3 millilitri di PBS fresco dopo il lavaggio finale.Per impostare lo stampo di infezione ossea, confermare la mancanza di risposta al pizzico di zampa in un coniglio bianco maschio neozelandese di tre mesi di tre chilogrammi e utilizzare un rasoio elettrico per rimuovere i capelli dalla regione tibiale prossimale contro la direzione della crescita dei capelli. Disinfettare la pelle esposta con soluzione di iodio povidone e utilizzare una penna e un righello per contrassegnare l'estremità superiore della tibia e la posizione del foro di perforazione per l'iniezione di S.Aureus, facendo attenzione che la posizione del foro di perforazione si trova nel centro orizzontale dell'altopiano tibiale. Successivamente, utilizzare un bisturi numero 11 per fare un'incisione nella pelle, seguita da un'incisione di un centimetro nel peritoneo.Utilizzando un'unità di perforazione ossea elettrica, perforare un foro di due millimetri di diametro nella tibia e premere il foro con un cilindro di cera ossea lungo due millimetri di diametro di due millimetri. Rimuovere qualsiasi cera ossea di ricambio lungo il piano orizzontale dell'altopiano tibiale e confermare che il foro è pieno di cera ossea. Quindi, utilizzare suture chirurgiche assorbibili per cucire il periostio e la pelle in una sutura verticale del materasso per impedire all'animale di masticare i punti.E utilizzare un iniettore di asepsi millilitro per iniettare lentamente uno per 10 alle otto unità di formazione della colonia per millilitro della soluzione di S.Aureus nel foro di perforazione. Al settimo giorno, 14, 21 e 28 dopo l'iniezione, posizionare i conigli infetti in un limitatore di conigli con la testa e l'orecchio all'esterno del trattino e raccogliere campioni di sangue dalle vene auricolari per i globuli bianchi e l'analisi delle proteine C-reattive. Dopo l'anestesia, utilizzare un bisturi numero 11 per fare la pelle tibiale centimetrica e le incisioni peritoneali e pulire la cera ossea.Successivamente, utilizzare un'unità di perforazione ossea elettrica per perforare due fori adiacenti di 4,8 millimetri di diametro per debridere l'osso necrotico e utilizzare un cucchiaio osseo per debridere il midollo osseo necrotico e il tessuto di granulazione. Quindi, raschiare e pulire il tessuto osseo tra i due fori e stendere un millilitro del midollo osseo debridato sulle piastre di agar di sangue di pecora per un'incubazione notturna a 37 gradi Celsius. La mattina seguente, seleziona le piastre con da 30 a 300 colonie e calcola il numero di unità di formazione della colonia per animale infetto.Il 28 ° giorno dopo l'infezione, aggiungere un grammo di polvere di cloridrato di vancomicina a 9,5 grammi di solfato di calcio di grado medico e utilizzare una spatola per mescolare la miscela con tre millilitri di soluzione salina normale per 30-45 secondi. Aggiungere il prodotto misto in uno stampo flessibile in gel di silice e lasciare asciugare il prodotto a temperatura ambiente per 15 minuti. Quindi, flettere lo stampo per rimuovere il solfato di calcio caricato con vancomicina o il tallone VCS.Per il trattamento antibiotico e l'impianto dell'osso autogeno, in primo luogo, riesporre la tibia ferita prima di radere la regione della coda e disinfettare la pelle della coda esposta con soluzione di iodio povidone. Usa le forbici chirurgiche per tagliare la coda e usa suture chirurgiche assorbibili per chiudere la pelle in una sutura del materasso verticale per impedire all'animale di masticare i punti. Usa un bisturi numero 11 per tagliare la pelle della coda per rivelare l'osso della coda.Rimuovere qualsiasi muscolo, tessuto molle e periostio e staccare il coccino ad ogni articolazione. Trasferire i frammenti ossei in un piatto di plastica da 100 millimetri contenente soluzione salina sterile. Successivamente, utilizzare forbici curve per impiantare quattro pezzi della perla VCS nella cavità del midollo tibiale e utilizzare forcep curve per riempire il difetto osseo con otto pezzi di frammenti di osso di coda autogeni.Quindi, chiudere il periostio e le incisioni cutanee con suture chirurgiche assorbibili in modo da sutura del materasso. I livelli di proteine c-reattive e globuli bianchi sono più alti nel gruppo del modello di infezione ossea che negli animali di controllo. Due, quattro, sei e otto settimane dopo il trattamento osseo autogeno VCS o VCS, le proteine C-reattive e i livelli dei globuli bianchi sono significativamente ridotti.Le immagini di ricostruzione bidimensionale indicano un progressivo aumento del volume osseo durante il periodo di 12 settimane dopo il trattamento con VCS o VCS e osso autogeno, mentre la perdita ossea è significativa nel gruppo del modello di infezione ossea non trattata. Per analizzare gli indici quantitativi di rigenerazione ossea, le immagini del modello 3D possono essere ricostruite utilizzando dati bitmap e in ogni osso è possibile selezionare un diametro ovale di 4,8 millimetri per una regione ovale di interesse di 9,6 millimetri. Il rapporto tra volume osseo e volume tissutale nel gruppo di modelli di infezione ossea non trattata è significativamente inferiore a quelli misurati nei gruppi ossei autogeni VCS e VCS.Il numero trabecolare e i punteggi di spessore nel gruppo osseo autogeno VCS sono significativamente più alti di quelli del modello di infezione ossea non trattata e degli animali VCS. Inoltre, i punteggi di separazione trabecolare nel gruppo osseo autogeno VCS sono notevolmente inferiori a quelli misurati nel modello di infezione ossea non trattata e nei gruppi VCS. Fai attenzione a selezionare conigli con un peso corporeo appropriato.Bloccare la soluzione di Staphylococcus aureus con cera ossea. Debride completamente l'osso necrotico e perfora i due fori adiacenti di 4,8 millimetri di diametro. Seguendo la procedura, è possibile eseguire altri metodi di misura diagnostica come ultrasuoni, radiologia e tomografia computerizzata per monitorare i processi patologici dell'infezione ossea e riparare.Questo modello migliorato di infezione ossea e la combinazione VCS e trattamento osseo autogeno potrebbero essere utili per studiare il meccanismo di sottolineatura dell'infezione ossea e della rigenerazione ossea. Poiché la polvere liofilizzato Staphylococcus aureus è pericolosa, la sospensione batterica deve sempre essere preparata in un laboratorio batterico isolato.

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