Name: treatment with vancomycin loaded calcium sulphate and autogenous bone in an improved rabbit model of bone infection
Uploaded: 2019-03-14T12:30:00
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Este trabalho foi apoiado pelo Nacional Natural Science Foundation da China (81803808, 81873062), Zhejiang Provincial médica e Ciências da saúde e Technology Fund (2017KY271) e ciência e tecnologia de projeto da província de Zhejiang (2017 37181).

Os coelhos utilizados no presente estudo foram tratados de acordo com o guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório. Todos os procedimentos experimentais foram seguidos as regras da bioética Comité de Zhejiang Academia de medicina tradicional chinesa.
1. preparação da suspensão bacteriana
<ol><li>Dissolva 0,5 mg de S. aureus (ATCC 6538) de pó de liofilização com 0,3 mL de meio de cultura de Luria-Bertani. Misture a suspensão completamente.</li>
	<li>Marcam a susp...

<ol>
	<li>Malizos, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Forum:+The+Burden+of+Bone+and+Joint+Infection:+A+Growing+Demand+for+More+Resources.">Global Forum: The Burden of Bone and Joint Infection: A Growing Demand for More Resources.</a> Journal of Bone and Joint Surgery-American Volume. 99, 20 (2017).</li><li>Peeters, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teicoplanin+-+based+antimicrobial+therapy+in+Staphylococcus+aureus+bone+and+joint+infection:+tolerance,+efficacy+and+experience+with+subcutaneous+administration.">Teicoplanin - based antimicrobial therapy in Staphylococcus aureus bone and joint infection: tolerance, efficacy and experience with subcutaneous administration.</a> BMC Infectious Diseases. 16, 622 (2016).</li><li>Sugaya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+autologous+concentrated+bone+marrow+grafting+in+the+treatment+for+nonunion.">Percutaneous autologous concentrated bone marrow grafting in the treatment for nonunion.</a> European Journal of Orthopeadic Surgery and Traumatology. 24, 671-678 (2014).</li><li>Birt, M. C., Anderson, D. W., Bruce, T. E., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteomyelitis:+Recent+advances+in+pathophysiology+and+therapeutic+strategies.">Osteomyelitis: Recent advances in pathophysiology and therapeutic strategies.</a> Journal of Orthopeadics. 14, 45-52 (2017).</li><li>Walter, G., Kemmerer, M., Kappler, C., Hoffmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+algorithms+for+chronic+osteomyelitis.">Treatment algorithms for chronic osteomyelitis.</a> Deutsches Arzteblatt International. 109, 257-264 (2012).</li><li>Henriksen, K., Neutzsky-Wulff, A. V., Bonewald, L. F., Karsdal, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+communication+on+and+within+bone+controls+bone+remodeling.">Local communication on and within bone controls bone remodeling.</a> Bone. 44, 1026-1033 (2009).</li><li>Mendoza, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+vancomycin+powder+on+bone+healing+in+a+rat+spinal+rhBMP-2+model.">The effect of vancomycin powder on bone healing in a rat spinal rhBMP-2 model.</a> Journal of Neurosurgery Spine. 25, 147-153 (2016).</li><li>Cohn Yakubovich, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computed+Tomography+and+Optical+Imaging+of+Osteogenesis-angiogenesis+Coupling+to+Assess+Integration+of+Cranial+Bone+Autografts+and+Allografts.">Computed Tomography and Optical Imaging of Osteogenesis-angiogenesis Coupling to Assess Integration of Cranial Bone Autografts and Allografts.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53459 (2015).</li><li>Brecevich, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+Comparison+of+Accell+Evo3+and+Grafton+Demineralized+Bone+Matrix+Putties+against+Autologous+Bone+in+a+Rat+Posterolateral+Spine+Fusion+Model.">Efficacy Comparison of Accell Evo3 and Grafton Demineralized Bone Matrix Putties against Autologous Bone in a Rat Posterolateral Spine Fusion Model.</a> Spine Journal. 17, 855-862 (2017).</li><li>Jensen, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+porcine+model+of+implant-associated+osteomyelitis:+A+comprehensive+analysis+of+local,+regional,+and+systemic+response.">Novel porcine model of implant-associated osteomyelitis: A comprehensive analysis of local, regional, and systemic response.</a> Journal of Orthopeadic Research. 35, 2211-2221 (2016).</li><li>de Mesy Bentley, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+Staphylococcus+Aureus+Deformation,+Proliferation,+and+Migration+in+Canaliculi+of+Live+Cortical+Bone+in+Murine+Models+of+Osteomyelitis.">Evidence of Staphylococcus Aureus Deformation, Proliferation, and Migration in Canaliculi of Live Cortical Bone in Murine Models of Osteomyelitis.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 32, 985-990 (2017).</li><li>Norden, C. W., Kennedy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+osteomyelitis.+I:+A+description+of+the+model.">Experimental osteomyelitis. I: A description of the model.</a> Journal of Infectious Diseases. 122, 410-418 (1970).</li><li>Mistry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+multi-barrier,+drug+eluting+calcium+sulfate/biphasic+calcium+phosphate+biodegradable+composite+bone+cement+for+treatment+of+experimental+MRSA+osteomyelitis+in+rabbit+model.">A novel, multi-barrier, drug eluting calcium sulfate/biphasic calcium phosphate biodegradable composite bone cement for treatment of experimental MRSA osteomyelitis in rabbit model.</a> Journal of Controlled Release. 239, 169-181 (2016).</li><li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+In+vivo+Optical+and+&#181;CT+Imaging+to+Monitor+Infection,+Inflammation,+and+Bone+Anatomy+in+an+Orthopaedic+Implant+Infection+in+Mice.">Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51612 (2014).</li><li>Koeth, L. M., DiFranco-Fisher, J. M., McCurdy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Reference+Broth+Microdilution+Method+for+Dalbavancin+In+Vitro+Susceptibility+Testing+of+Bacteria+that+Grow+Aerobically.">A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53028 (2015).</li><li>Uttra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephedra+gerardiana+aqueous+ethanolic+extract+and+fractions+attenuate+Freund+Complete+Adjuvant+induced+arthritis+in+Sprague+Dawley+rats+by+downregulating+PGE2,+COX2,+IL-1&#946;,+IL-6,+TNF-&#945;,+NF-kB+and+upregulating+IL-4+and+IL-10.">Ephedra gerardiana aqueous ethanolic extract and fractions attenuate Freund Complete Adjuvant induced arthritis in Sprague Dawley rats by downregulating PGE2, COX2, IL-1&#946;, IL-6, TNF-&#945;, NF-kB and upregulating IL-4 and IL-10.</a> Journal of Ethnopharmacology. 224, 482-496 (2018).</li><li>Harrasser, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+implant-related+osteomyelitis+in+the+metaphysis+of+rat+tibiae.">A new model of implant-related osteomyelitis in the metaphysis of rat tibiae.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 17, 152 (2016).</li><li>Abedon, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commentary:+Phage+Therapy+of+Staphylococcal+Chronic+Osteomyelitis+in+Experimental+Animal+Model.">Commentary: Phage Therapy of Staphylococcal Chronic Osteomyelitis in Experimental Animal Model.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1251 (2016).</li><li>Tan, H. L., Ao, H. Y., Ma, R., Lin, W. T., Tang, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+effect+of+quaternized+chitosan-loaded+polymethylmethacrylate+bone+cement+on+methicillin-resistant+Staphylococcus+epidermidis+infection+of+the+tibial+metaphysis+in+a+rabbit+model.">In vivo effect of quaternized chitosan-loaded polymethylmethacrylate bone cement on methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis infection of the tibial metaphysis in a rabbit model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58, 6016-6023 (2014).</li><li>Chiara, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Osteomyelitis+in+the+Diabetic+Foot+by+Imaging+Techniques:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis+Comparing+MRI,+White+Blood+Cell+Scintigraphy,+and+FDG-PET.">Detection of Osteomyelitis in the Diabetic Foot by Imaging Techniques: A Systematic Review and Meta-analysis Comparing MRI, White Blood Cell Scintigraphy, and FDG-PET.</a> Diabetes Care. 40, 1111-1120 (2017).</li><li>Khalid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+Spectroscopy+detects+changes+in+Bone+Mineral+Quality+and+Collagen+Cross-linkage+in+Staphylococcus+Infected+Human+Bone.">Raman Spectroscopy detects changes in Bone Mineral Quality and Collagen Cross-linkage in Staphylococcus Infected Human Bone.</a> Scientific Reports. 8, 9417 (2018).</li><li>Putters, T. F., Schortinghuis, J., Vissink, A., Raghoebar, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+study+on+the+morbidity+resulting+from+calvarial+bone+harvesting+for+intraoral+reconstruction.">A prospective study on the morbidity resulting from calvarial bone harvesting for intraoral reconstruction.</a> International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 44, 513-517 (2015).</li><li>Yin, J., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Completely+resorption+of+autologous+skull+flap+after+orthotopic+transplantation:+a+case+report.">Completely resorption of autologous skull flap after orthotopic transplantation: a case report.</a> International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 7, 1169-1171 (2014).</li><li>Takehiko, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+results+of+managing+large+medial+tibial+defects+in+primary+total+arthroplasty:+autogenous+morcellised+bone+graft.">Preliminary results of managing large medial tibial defects in primary total arthroplasty: autogenous morcellised bone graft.</a> International Orthopaedics. 41, 931-937 (2017).</li></ol>

Nos estudos anteriores, vários tipos de modelos animais foram construídos para estudar ambos infecção óssea aguda e crônica; no entanto, a busca do modelo ideal ainda persiste17,18. Além disso, o modelo de infecção óssea ideal é esperado para simular as características patológicas da infecção óssea em ambiente clínico, enquanto os períodos de modelização, permanecem, baixo custo e fácil de realizar. Até agora, o modelo de infecção óssea c...

Infecção óssea geralmente resulta de bactérias ou outra invasão de microorganismo após trauma, fratura óssea ou outros ossos doenças1. Infecção óssea pode induzir a um elevado nível de destruição tecidual de inflamação e osso. Na clínica, Staphylococcus aureus (S. aureus) é o agente causador predominante de osso infecção2,3. A infecção óssea é dolorosa, debilitante e muitas vezes leva um curso crônico que é extremamente difícil de tratar4. Presentemente, desbridamento de tecido necrótico e implantação dos grânulos de cálcio vancomicina-carregado (VCS) foram confirmados como uma estratégia eficiente para controlar a infecção local5,6. No entanto, 10% a 15% dos pacientes experimentaram um processo de reparação óssea prolongada, retarde ou não-União após tratamento anti-infecção7. O grande segmento de um defeito ósseo é a questão mais difícil para os cirurgiões ortopédicos. Um enxerto ósseo autólogo é considerado a substituição óssea ideal no tratamento de não-União de osso8,9.
Até à data, a maioria dos estudos sobre osso autólogo implantação e infecção têm sido realizados em vários tipos de modelos animais, como ratos, coelhos, cães, porcos e ovelhas10,11. Modelos de coelho são mais comumente utilizados para estudos de infecção do osso, como primeira interpretada por Norden e Kennedy em 197012,13. Em nosso estudo anterior, usamos modelos de coelho, seguindo o método do Norden, e achamos que a quantidade de S. aureus injetado em medula óssea não foi possível quantificar com precisão, como o vazamento de sangue fora da medula óssea levou ao excesso de solução de bactérias.
Este artigo apresenta um método cirúrgico melhorado para induzir infecção óssea em coelhos. No final do processo, um exame de bioquímica de sangue, um exame bacteriológico e um exame histopatológico foram realizados para verificar o modelo de infecção óssea. Então, VCS foi implantado para inibir a infecção, e osso autógeno foi implantado para promover a regeneração óssea.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:824px;" width="825">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">absorbable surgical suture</td>
			<td style="width:264px;">Jinghuan</td>
			<td style="width:119px;">18S0604A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">asepsis injector</td>
			<td style="width:264px;">Jinglong</td>
			<td style="width:119px;">20170501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">bone wax</td>
			<td style="width:264px;">ETHICON</td>
			<td style="width:119px;">JH5CQLM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">CCD camera</td>
			<td style="width:264px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">DP72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">EDTA-K2 anticoagulant blood vessel</td>
			<td style="width:264px;">XINGE</td>
			<td style="width:119px;">20170802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Electric bone drill unit</td>
			<td style="width:264px;">Bao Kang</td>
			<td style="width:119px;">BKZ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:264px;">Codos</td>
			<td style="width:119px;">3800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">flexible silica gel mold&#160;</td>
			<td style="width:264px;">WRIGHT</td>
			<td style="width:119px;">1527745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td style="width:264px;">Beyotime</td>
			<td style="width:119px;">20170523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Luria-Bertani culture medium</td>
			<td style="width:264px;">Baisi Biothchnology</td>
			<td style="width:119px;">20170306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Medical-grade calcium sulphate</td>
			<td style="width:264px;">WRIGHT</td>
			<td style="width:119px;">1527745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">microcomputed tomography (micro-CT)</td>
			<td style="width:264px;">Bruker</td>
			<td style="width:119px;">SkyScan 1172&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Microscope</td>
			<td style="width:264px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">CX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">New Zealand white rabbits</td>
			<td style="width:264px;">Zhejiang Experimental Animal Center&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SCXK 2014-0047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:275px;">No. 11 scalpel&#160;</td>
			<td style="width:264px;">Yuanlikang</td>
			<td style="width:119px;">20170604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">normal saline</td>
			<td style="width:264px;">Mingsheng</td>
			<td style="width:119px;">20170903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">PBS</td>
			<td style="width:264px;">TBD(Jingyi)</td>
			<td style="width:119px;">20170703-0592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">pentobarbital sodium</td>
			<td style="width:264px;">Merk</td>
			<td style="width:119px;">2070124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">povidone-iodinesolution</td>
			<td style="width:264px;">Lierkang</td>
			<td style="width:119px;">20170114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:275px;">S. aureus freeze drying powder</td>
			<td style="width:264px;">China General Microbiological Culture Collection Center</td>
			<td style="width:119px;">ATCC 6538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">sheep blood agar</td>
			<td style="width:264px;">HuanKai Microbial</td>
			<td style="width:119px;">3103210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:275px;">tryptic soy agar plates</td>
			<td style="width:264px;">HuanKai Microbial</td>
			<td style="width:119px;">3105697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">tryptic soy broth tubes</td>
			<td style="width:264px;">HuanKai Microbial</td>
			<td style="width:119px;">3104260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Vancomycin</td>
			<td style="width:264px;">Lilly</td>
			<td style="width:119px;">C599180</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

treatment with vancomycin loaded calcium sulphate and autogenous bone in an improved rabbit model of bone infection

Infecção óssea resulta da invasão bacteriana, que é extremamente difícil de tratar em cirurgia clínica, ortopédica e traumática. A infecção óssea pode resultar em inflamação sustentada, osteomielite e osso eventual não-sindicalizados. Estabelecimento de um modelo animal viável, pode ser reproduzido é importante para pesquisa de infecção e tratamento antibiótico de osso. Como um modelo in vivo, o modelo de coelho é amplamente utilizado na investigação de infecção óssea. No entanto, estudos anteriores sobre coelho óssea modelos de infecção, mostrou que o status de infecção era inconsistente, como a quantidade de bactérias foi variável. Este estudo apresenta um melhor método cirúrgico para induzir infecção óssea em um coelho, bloqueando as bactérias na medula óssea. Em seguida, multi-nível avaliações podem efectuar para verificar se o método de modelagem.
Em geral, desbridante tecido necrótico e implantação vancomicina-carregado de sulfato de cálcio (VCS) são predominantes no tratamento com antibióticos. Apesar de sulfato de cálcio em VCS beneficia osteócito rastejando e crescimento de novo osso, defeitos ósseos maciça ocorrerem após desbridamento. Osso autógeno (AB) é uma estratégia atraente para superar falhas ósseas para o tratamento de defeitos de massa óssea após desbridamento ósseo necrótico.
Neste estudo, nós usamos o osso da cauda como um osso autógeno implantado no defeito ósseo. Reparação óssea foi medida usando micro--tomografia computadorizada (micro-CT) e análise histológica após o sacrifício de animais. Como resultado, o grupo de VCS, não-união óssea consistentemente foi obtido. Em contraste, as áreas de defeito ósseo no grupo de VCS-AB foram diminuiu significativamente. O presente método de modelagem descrito um método reprodutível, viável, estável para preparar um modelo de infecção óssea. O tratamento de VCS-AB resultou em taxas mais baixas de não-união óssea após tratamento com antibióticos. O modelo de infecção óssea melhorada e o tratamento de combinação de VCS e osso autógeno podem ser útil para estudar os mecanismos subjacentes em infecção e osso regeneração óssea pertinente para aplicações ortopédicas de Traumatologia.

Avaliação do modelo de infecção óssea Após a infecção com S. aureus, as manifestações patológicas de coelhos foram semelhantes para o sintoma representativo da osteomielite crônica na clínica. Em nosso estudo, 30 coelhos foram infectados e submetidos como um grupo de modelos, e 10 coelhos estavam sujeitos como animais de controle. Todos os coelhos de modelo tem infectado seios do site local da tíbia, com pus branco e amarelo sobre o fluxo de seio...

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Treatment with Vancomycin Loaded Calcium Sulphate and Autogenous Bone in an Improved Rabbit Model of Bone Infection

Este estudo apresenta um melhoria coelho modelo infectado com Staphylococcus aureus , bloqueando a mesma quantidade de bactérias na medula óssea. Vancomicina carregado de sulfato de cálcio e osso autógeno são utilizados para tratamento de reparação de antibiótico e osso. O protocolo pode ser útil para estudar a infecção óssea e regeneração.

Tratamento com vancomicina carregado de sulfato de cálcio e osso autógeno em um modelo melhorado coelho de infecção óssea

Bone infection results from bacterial invasion, which is extremely difficult to treat in clinical, orthopedic, and traumatic surgery. The bone infection ...

Um modelo animal produtível é muito importante para a pesquisa de infecção óssea. No entanto, atualmente não há um modelo de coelho para o qual o estado das infecções e o número de bactérias são consistentes. Nosso modelo de coelho de infecção óssea usa uma bactéria consistente e é tratado por sulfato de cálcio carregado de vancomicina e fragmentos autógenos.A técnica pode ser estendida para o diagnóstico de infecção óssea e terapia de não-união óssea, e na compreensão da patogênese da infecção óssea. Este método poderia fornecer insights sobre outros modelos de infecção óssea em ratos, ratos e suínos. É difícil carregar o mesmo volume de suspensão bacteriana em medula óssea.A demonstração visual pode ajudar os pesquisadores a realizar os passos críticos de forma fácil e precisa. Para preparar a suspensão bacteriana, primeiro dissolva 0,5 miligramas de pó seco congelado S.aureus em 0,3 mililitros de meio de cultura LB. Misture bem a suspensão e estique as bactérias em placas de ágar de soja ótica para sua incubação por 16 horas a 37 graus Celsius.Na manhã seguinte, escolha uma única unidade de formação de colônias bacterianas para cultura em tubos de caldo de soja tripptico por 24 horas a 37 graus Celsius. Quando as bactérias estiverem em fase de crescimento logarítmico médio, transfira 1 mililitro de bactérias para um tubo de 1,5 mililitro, e colete as bactérias por centrifugação. Em seguida, lave a pelota de célula bacteriana três vezes em 100 microliters de PBS por lavagem, reutilizando a bactéria em 3 mililitros de PBS fresco após a lavagem final.Para configurar o molde de infecção óssea, confirme a falta de resposta ao beliscão de três meses de idade do coelho branco masculino da Nova Zelândia, e use um barbeador elétrico para remover o cabelo da região tibial proximal contra a direção do crescimento capilar. Desinfete a pele exposta com solução de iodo povidone, e use uma caneta e uma régua para marcar a extremidade superior da tíbia e a posição do furo de perfuração para a injeção de S.Aureus, tomando cuidado para que a posição do furo de perfuração esteja no meio horizontal do platô tibial. Em seguida, use um bisturi número 11 para fazer uma incisão na pele, seguido de uma incisão de um centímetro no peritônio.Usando uma unidade de perfuração óssea elétrica, faça um buraco de dois milímetros de diâmetro na tíbia e pressione o orifício com um cilindro de dois milímetros de diâmetro de dois milímetros de cera óssea. Remova qualquer cera óssea sobressalente ao longo do plano horizontal do planalto tibial, e confirme que o orifício está cheio de cera óssea. Em seguida, use suturas cirúrgicas absorvíveis para costurar o peristoum e a pele em uma sutura vertical de colchão para evitar que o animal mastigue os pontos.E use um injetor de assepsia de um mililitro para injetar lentamente uma vezes 10 às oito unidades formadoras de colônias por mililitro de solução S.Aureus no furo de perfuração. Nos dias sete, 14, 21 e 28 após a injeção, coloque os coelhos infectados em um cabides de coelho com a cabeça e a orelha fora do conterreiro, e colete amostras de sangue das veias auriculares para glóbulos brancos e análise de proteína c-reativa. Após a anestesia, use um bisturi número 11 para fazer pele tibial centítômetro e incisões peritoneais, e limpar a cera óssea.Em seguida, use uma unidade de perfuração óssea elétrica para perfurar dois orifícios adjacentes de 4,8 milímetros de diâmetro para desbridar o osso necrosado, e usar uma colher óssea para debridar a medula óssea necrótica e o tecido de granulação. Em seguida, raspe e limpe o tecido ósseo entre os dois orifícios, e espalhe um mililitro da medula óssea desbridada em placas de ágar de sangue de ovelha para uma incubação durante a noite a 37 graus Celsius. Na manhã seguinte, selecione placas com 30 a 300 colônias, e calcule o número de unidades formadoras de colônias por animal infectado.No 28º dia após a infecção, adicione um grama de pó de cloridrato de vancomicina a 9,5 gramas de sulfato de cálcio de grau médico, e use uma espátula para agitar a mistura com três mililitros de soro fisiológico normal por 30 a 45 segundos. Adicione o produto misto em um molde de gel de sílica flexível e deixe o produto secar à temperatura ambiente por 15 minutos. Em seguida, flexione o molde para remover o sulfato de cálcio carregado de vancomicina, ou conta VCS.Para tratamento antibiótico e implantação do osso autógeno, primeiro, exponha a tíbia ferida antes de raspar a região da cauda, e desinfetar a pele da cauda exposta com solução de iodo povidone. Use uma tesoura cirúrgica para cortar a cauda e use suturas cirúrgicas absorvíveis para fechar a pele em uma sutura de colchão vertical para evitar que o animal mastigue os pontos. Use um bisturi número 11 para cortar a pele da cauda para revelar o osso da cauda.Remova qualquer músculo, tecido mole e periosteum, e desprende o osso da cauda em cada articulação. Transfira os fragmentos ósseos para uma antena de plástico de 100 milímetros contendo soro fisiológico estéril. Em seguida, use uma tesoura curva para implantar quatro pedaços da conta VCS na cavidade da medula tibial, e use fórceps curvos para preencher o defeito ósseo com oito pedaços de fragmentos de cóccix autógeno.Em seguida, feche o periosteum e as incisões da pele com suturas cirúrgicas absorvíveis de forma sutura de colchão. Proteína c-reativa e níveis de glóbulos brancos são mais elevados no grupo modelo de infecção óssea do que nos animais de controle. Duas, quatro, seis e oito semanas após o tratamento ósseo autógeno vcs ou VCS, proteína C-reativa e níveis de glóbulos brancos são significativamente reduzidos.Imagens de reconstrução bidimensional indicam um aumento progressivo do volume ósseo durante o período de 12 semanas após o tratamento com VCS ou VCS e osso autógeno, enquanto a perda óssea é significativa no grupo modelo de infecção óssea não tratada. Para analisar os índices quantitativos de regeneração óssea, as imagens do modelo 3D podem ser reconstruídas usando dados de bitmap, e um diâmetro oval de 4,8 milímetros por uma região oval de 9,6 milímetros de comprimento pode ser selecionado em cada osso. A razão do volume ósseo para o volume tecidual no grupo modelo de infecção óssea não tratada é significativamente menor do que as medidas nos grupos vcs e vcs autogenos ósseos.Os escores de número trabecular e espessura no grupo vcs autogenos são significativamente maiores do que os do modelo de infecção óssea não tratada e animais VCS. Além disso, os escores de separação trabecular no grupo ósseo autógeno vcs são marcadamente inferiores aos medidos no modelo de infecção óssea não tratada e nos grupos VCS. Tome cuidado para selecionar coelhos com peso corporal adequado.Bloqueie a solução Staphylococcus aureus com cera óssea. Debrie completamente o osso necrosado, e soque os dois buracos adjacentes de 4,8 milímetros de diâmetro. Após o procedimento, outros métodos de medida diagnóstica, como ultrassom, radiologia e tomografia computadorizada podem ser realizados para monitorar os processos patológicos da infecção óssea e reparação.Este modelo de infecção óssea melhorado e a combinação VCS e tratamento ósseo autógeno podem ser úteis no estudo do mecanismo sublinhado da infecção óssea e da regeneração óssea. Como o pó seco staphylococcus aureus é perigoso, a suspensão bacteriana deve ser sempre preparada em um laboratório bacteriano isolado.

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