Name: replication of the ordered, nonredundant library of pseudomonas aeruginosa strain pa14 transposon insertion mutants
Uploaded: 2018-05-04T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants at JoVE.com

Vi vil gerne takke Lisa Philpotts MGH Treadwell virtuelle bibliotek for hendes vejledning i til databasesøgning. Dette arbejde blev støttet af cystisk fibrose Foundation (YONKER16G0 og HURLEY16G0) og NIH NIAID (BPH og ADE: R01 A1095338).

Forsigtig: Udnytte standard BSL-2 sikkerhedsforanstaltninger ved håndtering af P. aeruginosa, en menneskelig patogen. Hvis du er privatperson immunkompromitterede eller har en sygdomstilstand, der øger din modtagelighed over for bakteriel infektion, tage særlig forsigtighed, når du arbejder med s. aeruginosa. Kontakt kontoret for Biosikkerhed i din institution og indhente godkendelse fra din læge før du arbejder med den PA14 NR indstillet eller mutant biblioteker af bakterielle patogener.
<p c...

P. aeruginosa PA14NR er en værdifuld ressource for det videnskabelige samfund. Ifølge marts 2017 datasæt fra Clarivate Analytics' væsentlige videnskab Indicators database, Liberati et al. (2006) 37, der beskriver opbygningen af PA14NR sat, er placeret i den øverste 1% af Mikrobiologi publikationer. Google Scholar rapporter over 600 citater af Liberati et al. (2006) originale manuskript fra August 2017. Biblioteket har spillet en vigtig rolle i belyse de und...

Pseudomonas aeruginosa er en fænotype og genotypisk forskelligartede og tilpasningsdygtige Gram-negative bakterien findes i jord, vand, og de fleste menneskelige miljøer samt hud mikroflora. Sammenlignet med mange bakteriearter, har P. aeruginosa et relativt stort genom af 5,5-7 Mbp med høj G + C indhold (65-67%). Desuden en betydelig del af dets gener er involveret i metaboliske tilpasningsevne og er en del af regulerende net, giver mulighed for stor fleksibilitet i respons til miljøstress1. P. aeruginosa udtrykker en overflod af virulens faktorer, udstiller hang til form biofilm, besidder evnen til at koordinere svar gennem flere quorum sensing veje og viser en bemærkelsesværdig evne til at udvikle resistens over for antibiotika og tolerance2,3,4,5,6,7,8. Disse attributter præsentere betydelige udfordringer til behandling af infektioner forårsaget af P. aeruginosa.
Kronisk P. aeruginosa infektioner kan opstå i mange sygdomstilstande. Cystisk fibrose (CF), en genetisk sygdom forårsaget af mutation af genet Cystisk fibrose Transmembrane ledningsevne Regulator (CFTR) resulterer i inspissated, inficerede sekret i luftvejene, progressive bronchiectasis og i sidste ende, død fra respirationssvigt9. Af voksenalderen, er størstedelen af patienter med CF kronisk inficeret med P. aeruginosa, som spiller en central rolle i sygelighed og dødelighed forbundet med denne sygdom10. Derudover, er patienter med svær brænde skader11, tracheostomies12, ledalloplastik13eller iboende katetre14 i risiko for P. aeruginosa infektion relateret til bakteriernes evne til at danne biofilm og undslippe vært inflammatoriske respons15. Yderligere, kolonisering opstår uden konkurrence efter en multi antibiotika-resistente eller tolerant befolkning er valgt gennem bredspektret, sekventiel antimikrobiel behandling12,16,17 , 18. bedre forståelse af P. aeruginosa's patogenese vil få betydelige følger for adskillige sygdomstilstande.
Flere P. aeruginosa kliniske isolater, herunder stammer PAO1, PA103, PA14 og PAK, er blevet grundigt undersøgt for at undersøge forskellige funktioner af P. aeruginosa patogenese. Stamme PA14 er en klinisk isolat, der hører til en af de mest almindelige klonede grupper verden over19,20 og ikke har været omfattende passaged i laboratoriet. PA14is stærkt virulente i hvirveldyr modeller af infektion med en bemærkelsesværdig endotoxin profil21, pili strukturere22, patogenicitet øer23, Skriv III sekretion system (TTSS), cytotoksicitet mod pattedyr celler24 og profiler i antibiotisk resistens og persistens25. Derudover PA14 er også stærkt virulente i talrige vært-patogen modelsystemer, herunder plante blad infiltration modeller26,27,Caenorhabditis elegans infektion modeller28, 29, insekt modeller30,31, samt mus lungebetændelse modeller32,33 og hud brænde modeller34.
Genome-wide mutant biblioteker er samlinger af isogene mutanter i uvæsentlige gener, der udgør meget kraftfulde værktøjer til at forstå i en organisme biologi ved at tillade analyse af genfunktioner på en genomisk skala. To nær-mætning transposon indsættelse mutant biblioteker bygget i P. aeruginosa er i øjeblikket tilgængelig for distribution. Indsættelse lokaliteter af transposoner er blevet fastsat for begge biblioteker. Disse såkaldte nonredundant biblioteker lette genome-wide undersøgelser af bakteriestammer af væsentligt reducere tid og omkostninger, der er involveret i screening uncharacterized tilfældige transposon mutanter. P. aeruginosa PAO1 transposon mutant biblioteket, bygget i MPAO1 isolere stamme PAO1 ved hjælp af transposoner erphoA/ hah og erlacZ/ hah35, er kurateret af Manoil lab, University of Washington. Biblioteket består af en sekvens-verificerede samling af 9,437 transposon mutanter, der giver bred genom dækning og omfatter to mutanter for de fleste gener36. Oplysninger om P. aeruginosa PAO1 transposon mutant biblioteket er tilgængelig på den offentlige, internet-adgang Manoil lab hjemmeside på http://www.gs.washington.edu/labs/manoil/libraryindex.htm. P. aeruginosa stamme PA14 nonredundant transposon indsættelse mutant bibliotek (PA14NR indstille) fremstillet i stammen PA14 ved hjælp af transposoner MAR2xT7 og TnphoA37 er i øjeblikket distribueres af Department of Pediatrics på Massachusetts General Hospital. PA14NR sæt består af en samling af mere end 5.800 mutanter med enkelt transposon indsættelser i uvæsentlige gener37. Detaljer om opførelsen af PA14NR sæt er beskrevet i den offentlige, internet-adgang site http://pa14.mgh.harvard.edu/cgi-bin/pa14/home.cgi?section=NR_LIB, som også indeholder en bred vifte af online værktøjer til at lette anvendelsen af PA14NR Sæt.
Den oprindelige PA14NR Set består 5,459 mutanter, udvalgt fra et omfattende bibliotek af cirka 34.000 tilfældige transposon indsættelse mutanter, der svarer til 4,596 forudsagte PA14 gener der repræsenterer 77% af alle forudsagte PA14 gener37. Siden opførelsen af biblioteket i 2006 blev der tilføjet nye mutanter, og i øjeblikket PA14NR sættet indeholder mere end 5.800 mutanter38 , der repræsenterer ca. 4.600 PA14 gener. Fleste af PA14 transposon mutanter blev genereret i vildtype baggrund37. Oplysninger om hvert medlem af biblioteket mutant, herunder genetiske baggrund, er tilgængelig enten via søgning online database eller ved at downloade Nonredundant bibliotek regnearket, begge funktioner på webstedet PA14 (http:// pa14.MGH.Harvard.edu/cgi-bin/pa14/Home.cgi). Fleste af mutanter var skabt benytter MAR2xT7 (MrT7) transposon, med et lille sæt oprettet ved hjælp af TnPhoA (phoA) transposon37. Hver transposon har en antibiotisk resistens kassette, som giver mulighed for mutant markeringen ved hjælp af gentamicin (MrT7) eller kanamycin (phoA). PA14NR sæt af mutanter er gemt i 63 96-brønd plader og omfatter to yderligere 96-brønd kontrol plader, der består af vildtype PA14 podes og utilsåede wells imidlerid i en forudindstillet mønster. 96-brønd plade format parret med online søgeredskaber høj grad letter den brugerdefinerede udvikling af screening assays, der giver brugerne til nemt at identificere gener forbundet med mutant fænotyper. Online-søgning værktøjer også lette søgning og udvælgelse af yderligere relevante mutanter kræves for yderligere undersøgelser.
De PA14 og PAO1 transposon mutant biblioteker er meget vigtige globale ressourcer for forskerverdenen, og de supplerer hinanden i validering af funktionen af ukendt gener og veje på dette bakteriel patogen. Tilfældigvis, siden opførelsen af PAO1 og PA14 transposon mutation bibliotekerne, har fuld-genom DNA-sekventering analyse af mange P. aeruginosa -isolater vist at PAO1 og PA14 tilhører forskellige større subclades af P. aeruginosa fylogeni7,39,40,41. Fordi kliniske P. aeruginosa -isolater findes fordelt i hele fylogeni, det faktum, at PAO1 og PA14 tilhører forskellige P. aeruginosa undergrupper øger værdien af de to transposon mutation biblioteker for sammenlignende undersøgelser.
Publikationer, der beskriver opbygningen og screening af bakteriel mutant biblioteker, herunder P. aeruginosa biblioteker35,er37,42, let tilgængelige i litteraturen. Dog til bedst af vores viden, ingen publicerede protokoller der beskriver detaljerede procedurer og teknikker, der anvendes til replikering, er vedligeholdelse og validering af bakteriel mutant biblioteker tilgængelige.
Den metode, der er skitseret i denne publikation beskriver et sæt af tre protokoller, der letter brug og vedligeholdelse af PA14NR sæt. Den første protokol beskriver replikering af biblioteket som anbefalet til modtagere af PA14NR sæt. Den anden protokol omfatter retningslinjer for striber, voksende, og opbevaring individuelle mutanter identificeret ved hjælp af PA14NR sæt. Den tredje protokol beskriver kvalitetskontrol teknikker, herunder PCR-amplifikation af fragmenter fra transposon mutanter og efterfølgende sekventering at bekræfte mutant identitet. Dette sæt af protokoller kan også tilpasses til replikering og vedligeholdelse af andre bakterielle mutant biblioteker eller samlinger. Replikering af bakteriel mutant biblioteker eller samlinger er stærkt tilrådes at bevare integriteten af "masterkopien" (original kopi modtaget). Replikering af flere kopier af PA14NR angive til rutinemæssige laboratoriebrug minimerer sandsynligheden for interwell kontaminering af masterkopi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials for Library Replication</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 96-well Tissue-culture treated, case of 50</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>353072</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 96 Well Clear V-Bottom 2000&#956;L Deep Well Plates, case of 25</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>3960</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc OmniTray (rectangular plates), case of 60</td>
			<td>Thermo Scientific Rochester</td>
			<td>242811</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectangular Ice Pan, Midi (4L)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>432104</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secure-Gard Cone Mask, case of 300</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>AT7509</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AluminaSeal, pack of 100</td>
			<td>Diversified Biotech</td>
			<td>ALUM-100</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breathe-Easy membrane, pack of 100</td>
			<td>Diversified Biotech</td>
			<td>BEM-1</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile, individually wrapped, 50mL Solution Trough/Reagent Reservoir, case of 100</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>S50100</td>
			<td>via Westnet Incorporated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate roller</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60941-118</td>
			<td>via VWR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo Laser Labels - CRYOLAZRTAG 2.64&#34; x 0.277&#34;, pack of 16 sheets</td>
			<td>GA International</td>
			<td>RCL-11T1-WH</td>
			<td>via Labtag.com (template for printing also available from Labtag.com)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well replicator</td>
			<td>V &#38; P Scientific, Inc.</td>
			<td>Custom 407C, 3.18mm pin diameter, 57mm long</td>
			<td>via V &#38; P Scientific, Inc.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multitron Pro, 3mm Shaking incubator</td>
			<td>Infors HT</td>
			<td>l10003P</td>
			<td>via Infors HT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picus 12 Channel 50-1200&#956;L Electronic Pipette</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>735491PR</td>
			<td>via Sartorius</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Tips 50-1200&#956;L, pack of 960</td>
			<td>Biohit</td>
			<td>14-559-512</td>
			<td>via Fisher Scientific; use electronic multichannel-compatible tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Ice</td>
			<td>User-specific vendor</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for Individual Mutant Storage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes (P1000, P200, P20, P2)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F167370</td>
			<td>via Gilson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for Quality Control PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-2000</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Thermocycler</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnistrips PCR Tubes with domed lids</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AB0404</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ART Barrier low-retention pipette tips (10 uL, 100 uL, 1000 uL)</td>
			<td>Molecular BioProducts, Inc.</td>
			<td>Z676543 (10 uL), Z676713 (100 uL), Z676802 (1000 uL)</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes (P1000, P200, P20, P2)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F167370</td>
			<td>via Gilson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-130</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MasterPure DNA Purification Kit</td>
			<td>Epicentre</td>
			<td>MCD85201</td>
			<td>via Epicentre Technologies Corp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder, ready-to-use</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SM1333</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RediLoad Loading Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>750026</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals for Library and Individual Mutant Storage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol MB Grade, 1L</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Per 1L dH2O: 10g tryptone, 5g yeast extract, 5g NaCl, 1ml 1N NaOH (Current Protocols in Molecular Biology.&#160; Wiley, 1994.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB&#160; agar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>See preparation above, add 15g Bacto Agar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A5306</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin sulfate, 10g</td>
			<td>BioReagent</td>
			<td>1405-41-0</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11815024</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 190 proof</td>
			<td>Decon</td>
			<td>04-355-221</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals for Quality Control PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers</td>
			<td>User-preferred vendor</td>
			<td></td>
			<td>See primers listed in Table 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning cellgro Molecular Biology Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46000CV</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq Polymerase Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10342020</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase, recombinant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10342020</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10297018</td>
			<td>via ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9539</td>
			<td>via Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

replication of the ordered, nonredundant library of pseudomonas aeruginosa strain pa14 transposon insertion mutants

Pseudomonas aeruginosa er en fænotype og genotypisk forskelligartede og tilpasningsdygtige Gram-negative bakterie allestedsnærværende i menneskeskabte miljøer. P. aeruginosa er i stand til at danne biofilm, udvikle resistens over for antibiotika, producere virulens faktorer og hurtigt udvikler sig i løbet af en kronisk infektion. Dermed kan P. aeruginosa medføre både akutte og kroniske, vanskelige at behandle infektioner, resulterer i betydelig sygelighed i bestemte patientgrupper. P. aeruginosa stamme PA14 er en menneskelig klinisk isolere med et bevaret genom struktur, der inficerer en bred vifte af pattedyr og nonvertebrate værter at gøre PA14 en attraktiv stamme til at studere dette patogen. I 2006, blev en nonredundant transposon indsættelse mutant bibliotek indeholdende 5,459 mutanter svarende til 4,596 forudsagte PA14 gener genereret. Siden da har distribution i biblioteket PA14 tilladt forskersamfundet til bedre at forstå funktionen af enkelte gener og komplekse veje af P. aeruginosa. Vedligeholdelse af bibliotek integritet gennem replikering processen kræver korrekt håndtering og præcise teknikker. Med henblik herpå præsenterer dette manuskript protokoller, der beskriver i detaljer trin involveret i biblioteket replikering, bibliotek kvalitetskontrol og korrekt opbevaring af individuelle mutanter.

Tolv nye kopier af PA14NR Set blev kopieret ved hjælp af protokollen jeg, og en kvalitetskontrol vurdering af de nye kopier genereret blev gennemført ved hjælp af protokollen III.
PA14NR sæt mutant plader sammen med kontrol plader, der består af vildtype PA14 podes og utilsåede wells imidlerid i en forudindstillet mønster (figur 4A), blev kopieret efter methology beskrevet i protokollen I. ko...

Watch this Scientific Journal Video about Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants at JoVE.com

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Replikering af bestilt, Nonredundant bibliotek af Pseudomonas aeruginosa stamme PA14 Transposon indsættelse mutanter

Pseudomonas aeruginosa infektion forårsager betydelig sygelighed i sårbare værter. Nonredundant transposon indsættelse mutant bibliotek af P. aeruginosa stamme PA14, udpeget som PA14NR sæt, letter analyse af genet funktionalitet i mange processer. Præsenteres her er en protokol til at skabe høj kvalitet kopier af PA14NR indstillet mutant biblioteket.

Pseudomonas aeruginosa is a phenotypically and genotypically diverse and adaptable Gram-negative bacterium ubiquitous in human environments. P. aeruginosa ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Langtids kronisk<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Luftvejsinfektion i mus

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis

Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis

Identifikation af nye gener forbundet med Alginat Produktion i<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Brug Mini-<em&gt; Himar1</em&gt; Mariner Transposon-medieret mutagenese

Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative, environmental bacterium with versatile metabolic capabilities. P. aeruginosa is an opportunistic bacterial ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation og Multi-fænotypisk High-indhold Screening af<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Oprettelsen af en tætte Transposon indsættelse bibliotek ved hjælp af bakteriel konjugation i Enterobacterial stammer som Escherichia Coli eller Shigella flexneri

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...

High-throughput Parallel Sequencing to Measure Fitness of Leptospira interrogans Transposon Insertion Mutants During Golden Syrian Hamster Infection

High-throughput Parallel Sequencing to Measure Fitness of Leptospira interrogans Transposon Insertion Mutants During Golden Syrian Hamster Infection

Høj overførselshastighed parallelle sekvensering til foranstaltning Fitness af Leptospira interrogans Transposon indsættelse mutanter under Golden syriske Hamster infektion

In this manuscript, we describe a transposon sequencing (Tn-Seq) technique to identify and quantify Leptospira interrogans mutants altered in fitness ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generation af in-frame-Gensletnings mutanter i Pseudomonas aeruginosa og testning for virulens dæmpning i en simpel muse model af infektion

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...