Name: a bioluminescent and fluorescent orthotopic syngeneic murine model of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer
Uploaded: 2018-03-06T14:30:00
Duration: 7 min 25 s
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इस कार्य के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान के संस्थानों द्वारा प्रवीण Thumbikat (NIDDK R01 DK094898), सरकी Abdulkadir (NCI R01 CA167966, NCI R01 CA123484, NCI P50 CA180995), और जोनाथन Anker (NCI F30 CA203472) को समर्थन दिया गया.

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

इस पांडुलिपि में हम सर्जिकल इंट्रा-स्थिर कैंसर सेल इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए प्रोटोकॉल रूपरेखा । हम एण्ड्रोजन पर निर्भर है और MYC-एक्सप्रेस (MYC एक्सप्रेस का उपयोग 80-90% मानव प्रोस्टेट कैंसर के39) murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन, MYC-कैप, मूल रूप से उच्च MYC माउस से अलग32 को देखा है ,33. इस सेल लाइन छुरा transduced था दोनों luciferase और mCherry व्यक्त करने के लिए, गैर के लिए vivo bioluminescent और फ्लोरोसेंट ट्यूमर इमेजिंग, में इनवेसिव क्रमशः । इसके अलावा, शल्य बधिया भी एण्ड्रोजन पर निर्भर ट्यूमर विकास के बाद किया गया था, ट्यूमर प्रतिगमन और बाद की पुनरावृत्ति के लिए अग्रणी. इसलिए, हम एक असुरक्षित मेजबान में दोनों orthotopic एण्ड्रोजन-निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी मॉडल के लिए विवरण प्रदान करते हैं ।
Myc-कैप कोशिकाओं चूहों के पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि में इंजेक्शन थे । माउस प्रोस्टेट पूर्वकाल, ventral, और dorsolateral प्रोस्टेट पालियों के होते हैं, और मानव प्रोस्टेट एक परिधीय क्षेत्र के होते हैं, संक्रमणकालीन क्षेत्र, और एक एकल पालि के भीतर केंद्रीय क्षेत्र40. जबकि पहले अध्ययन है anatomically और histologically मानव परिधीय क्षेत्र के लिए dorsolateral माउस पालि की तुलना में, प्रोस्टेट कैंसर के बहुमत की साइट41, और मानव केंद्रीय क्षेत्र के लिए पूर्वकाल माउस पालि42, 43, और अधिक हाल ही में व्यापक विश्लेषण का प्रदर्शन किया है कि पूर्वकाल पालि और dorsolateral पालि बारीकी से संबंधित जीन अभिव्यक्ति पैटर्न प्रदर्शन, के रूप में ventral पालि की तुलना में । 44 इसके अलावा, प्रोस्टेट कैंसर के विकास के40जवाहरात के पूर्वकाल पालि में मनाया गया है, और, अंतर-स्थिर प्रक्रिया के लिए, पूर्वकाल पालि कैंसर कोशिका समाधान की आवश्यक मात्रा के इंजेक्शन के लिए न्यूनतम रिसाव के साथ अनुमति देता है और परिवर्तनशीलता ।
एस॰सी॰ और ट्रांसजेनिक मणि कैंसर मॉडल का प्रयोग कई खामियों और सीमाएं हैं । एस॰सी॰ एक कृत्रिम टीएमई में उगाया ट्यूमर chemotherapies के लिए अंतर प्रतिक्रियाओं, एक ही सेल लाइनों और मानव रोग से दोनों orthotopic ट्यूमर के विपरीत है20,21,22। यह एस॰सी॰ ट्यूमर की बदल vasculature के कारण हो सकता है, के रूप में उदाहरण विरोधी angiogenic थेरेपी के लिए उनके अंतर प्रतिक्रिया द्वारा18,19। इसके विपरीत, orthotopic ट्यूमर एक उचित टीएमई के साथ विकसित, लिम्फ नोड्स draining, और vasculature, और murine सेल लाइनों के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है, जिससे भी ट्यूमर इम्यूनोलॉजी और immunotherapies के लिए प्रतिक्रिया के विश्लेषण के लिए अनुमति देता है ।
ट्रांसजेनिक जवाहरात एक असुरक्षित मेजबान में एक उचित टीएमई के साथ ट्यूमर का विकास, अभी तक इन मॉडलों को आम तौर पर एकल या कुछ आनुवंशिक परिवर्तन के साथ ट्यूमर के विकास के द्वारा मानव कैंसर को सरल29। Myc के एक विश्लेषण-कैप और अंय प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों से पता चला कि वे उच्च Myc चूहों और अंय जवाहरात से जो वे29प्राप्त थे से ट्यूमर की तुलना में बहुत अधिक दैहिक प्रतिलिपि संख्या परिवर्तन और गुणसूत्र परिवर्तन निहित । इसके अलावा, जवाहरात वृद्धि की लागत और चूहों प्रजनन के लिए आवश्यक समय पर्याप्त शक्ति के प्रयोगों प्रदर्शन द्वारा सीमित हैं । Orthotopic ट्यूमर मॉडलिंग इन सीमाओं को दूर कर सकते हैं । मानव और murine प्रोस्टेट कैंसर कोशिका लाइनों कई आनुवंशिक मानव रोग के लिए प्रासंगिक परिवर्तन होते हैं29, और, मानव कैंसर की तरह, भी व्यक्तिगत कोशिकाओं के बीच महान विविधता दिखाने के30. Orthotopic murine syngeneic ट्यूमर प्रतिरक्षा विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं, जबकि Orthotopic मानव xenogeneic ट्यूमर मानव कोशिकाओं पर चिकित्सकीय के विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं । अंत में, जवाहरात के साथ विपरीत, सेल लाइनों इंजेक्शन से पहले संशोधित किया जा सकता है, bioluminescent या फ्लोरोसेंट इमेजिंग अणुओं की अभिव्यक्ति के लिए ट्यूमर के विकास की निगरानी की अनुमति, प्रयोगात्मक समूहों के बीच ट्यूमर बोझ को सामान्य, उपचार के लिए प्रतिक्रिया की निगरानी, और सर्जिकल बधिया के बाद ट्यूमर प्रतिगमन और सीआरपीसी पुनरावृत्ति का पालन करें ।
इस प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम का पता लगाने और externalizing लाभदायक पुटिका और अंय ऊतकों को नुकसान पहुंचाने या प्राथमिक पुटिका puncturing के बिना पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि संलग्न, सेल के 30 µ एल के एक सफल इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन प्रदर्शन शामिल रिसाव के बिना निलंबन, और ठीक से पेट भर गैर orthotopic ट्यूमर विकास को रोकने के लिए किसी भी रिसाव का संग्रह. अंतर-स्थिर इंजेक्शन की प्रमुख सीमा के लिए चूहों के बीच ट्यूमर परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए आवश्यक तकनीकी कौशल प्राप्त कर रहा है । यह खास तौर पर मॉडलिंग सीआरपीसी के लिए महत्वपूर्ण है, जिसमें सर्जिकल बधिया का जोड़ा चर है । अंतर-स्थिर इंजेक्शन और castrated चूहों भी बारीकी से वसूली और प्रतिकूल घटनाओं के लिए पीछा किया जाना चाहिए, के रूप में वे दो प्रमुख अस्तित्व सर्जरी आया है । एक और सीमा के प्रत्येक अंतरराज्यीय स्थिर इंजेक्शन के समय है । यह 20 मिनट के रूप में कम करने के लिए कम किया जा सकता है, और सर्जन सहायक वर्तमान माउस टांका जा रहा है के रूप में अगले माउस तैयार कर सकते हैं । अंत में, orthotopic Myc-कैप ट्यूमर आक्रामक हैं, तेजी से बढ़ ट्यूमर है कि लगभग 46 दिनों में अस्तित्व समापन बिंदु तक पहुंचने (और के रूप में 35 दिनों के रूप में जल्दी) प्राथमिक ट्यूमर द्रव्यमान के कारण । धीमी ट्यूमर के विकास या दीर्घकालिक उपचार की आवश्यकता के अध्ययन प्रारंभिक इंजेक्शन सेल गिनती और उपचार आहार के लिए empirically अनुकूलित किया जाना चाहिए । एस॰सी॰ ट्यूमर और जवाहरात की सीमाओं के विपरीत, orthotopic ट्यूमर मॉडल के ऊपर सीमाओं के सभी दूर किया जा सकता है, और प्रोटोकॉल के अतिरिक्त संशोधनों व्यक्तिगत प्रायोगिक जरूरतों के आधार पर किया जा सकता है ।
orthotopic ट्यूमर मॉडल के रूप में इन विट्रो-संभाला कोशिकाओं का उपयोग शामिल है, इन कोशिकाओं को अध्ययन की जरूरतों के आधार पर संशोधित किया जा सकता है । यहाँ, हम इन कोशिकाओं को छुरा व्यक्त करने के लिए संशोधित luciferase और mCherry के लिए vivo ट्यूमर निगरानी में . हम भी ट्यूमर शमनकर्ता PTENके एक CRISPR-Cas9 नॉकआउट प्रदर्शन किया है, एक और अधिक आक्रामक, नैदानिक प्रासंगिक सेल लाइन है कि orthotopic ट्यूमर (समीक्षा में पांडुलिपि) के रूप में तेजी से बढ़ता उत्पंन करने के लिए । orthotopic ट्यूमर मॉडल के लाभ के साथ, दोनों एण्ड्रोजन पर निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी का अध्ययन करने की क्षमता, और इमेजिंग मोडल या पछाड़ना या एक्सप्रेस का चयन जीन एक्सप्रेस करने की क्षमता, इस प्रोटोकॉल सभी के लिए एक मूल्यवान संसाधन के रूप में कार्य करता है प्रोस्टेट कैंसर अनुसंधान ।

प्रोस्टेट कैंसर के लिए सबसे अधिक घटना (१६१,३६० पुरुषों) का अनुमान है और तीसरे सबसे पुरुष कैंसर की मौतों (८४,५९० पुरुषों) के कारण 20171में । निदान पर, प्रोस्टेट ट्यूमर एण्ड्रोजन पर निर्भर हैं, और शल्य चिकित्सा prostatectomy द्वारा इलाज कर रहे हैं, विकिरण चिकित्सा, और/या एण्ड्रोजन अभाव चिकित्सा (ADT), अभी तक प्रत्येक उपचार कई प्रमुख रुग्णता और जटिलताओं के साथ जुड़ा हुआ है2 , 3 , 4 , 5 , ६ , 7 , 8 , 9 , 10. ADT के बाद ट्यूमर प्रतिगमन के बावजूद, लगभग सभी ट्यूमर बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर (सीआरपीसी) के रूप में पुनरावृत्ति । इस स्तर पर, अनुमोदित चिकित्सा docetaxel, Sipuleucel-टी immunotherapy, और विरोधी एण्ड्रोजन छोटे अणुओं enzalutamide और abiraterone, अभी तक कोई व्यक्ति चिकित्सा से अधिक 5.2 महीने11के अस्तित्व के लाभ प्रदान शामिल है, 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17. इसलिए, प्रोस्टेट कैंसर के सभी चरणों में पुरुषों दोनों बेहतर उपचार के विकल्प और रुग्णताओं के प्रबंधन की जरूरत है, जिसके लिए इष्टतम पूर्व नैदानिक रोग मॉडलिंग महत्वपूर्ण है ।
सही प्रक्रिया के साथ, प्रोस्टेट कैंसर कोशिका लाइनों शल्य चिकित्सा murine प्रोस्टेट में फिर भी हो सकता है, दोनों syngeneic या xenogeneic orthotopic ट्यूमर के विकास के लिए अग्रणी । Orthotopic ट्यूमर मॉडलिंग एक नैदानिक प्रतिनिधि ट्यूमर microenvironment (टीएमई) के साथ ट्यूमर के विकास के लिए अनुमति देता है, सभी ट्यूमर जीव विज्ञान और दवा विकास अनुसंधान के लिए आदर्श है । पहले के अध्ययनों का प्रदर्शन किया है कि चमड़े के नीचे (एस॰सी॰) ट्यूमर एक बदल ट्यूमर vasculature है, अंतर के लिए अग्रणी और कम नैदानिक विरोधी angiogenic चिकित्सा के लिए सही जवाब18,19। इसके अलावा, एकाधिक अध्ययनों से मनाया गया है या एक ही सेल लाइन के इलाज में कई chemotherapeutics की कमी हुई प्रभावकारिता, पर निर्भर करता है कि यह एस॰सी॰ या orthotopically प्रशासित किया गया था, जो के बाद सबसे अच्छा प्रतिनिधित्व क्या मानव में देखा जाता है कर्क२०,२१,२२. इसके अलावा, केवल बृहदांत्र कैंसर के एक orthotopic मॉडल में है, लेकिन एस॰सी॰ मॉडल में नहीं, ट्यूमर सही degradative के लिए आवश्यक मेटास्टेसिस23प्रेरित एंजाइमों का उत्पादन किया । अंत में, के रूप में immunotherapies कैंसर थेरेपी में सबसे आगे उभरने के लिए जारी है, और विशेष रूप से के रूप में वे अभी तक प्रोस्टेट कैंसर के लिए महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करने के लिए24,25, syngeneic पूर्व-सटीक टीएमई के साथ नैदानिक मॉडल और असुरक्षित होस्ट्स में लिम्फ नोड्स draining महत्वपूर्ण हैं ।
कई कारकों ट्यूमर साइट पर आधारित इन असंगत निष्कर्षों के लिए जिंमेदार हैं । एक अलग टीएमई के साथ, कैंसर कोशिकाओं को विभिंन ऊतक विशिष्ट endothelium और बदल angiogenesis, जिससे ट्यूमर विकास को प्रभावित करने के लिए उजागर कर रहे है26,27। सही टीएमई के साथ Orthotopic ट्यूमर नैदानिक प्रासंगिक दवा वितरण, hypoxic शर्तों, और विरोधी angiogenic चिकित्सा के मूल्यांकन के लिए अनुमति देते हैं28. जबकि आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मॉडल (रत्न) एक सटीक टीएमई होते हैं, वे प्रजनन, उच्च लागत के लिए लंबे समय की आवश्यकता है, और अक्सर एकल या कुछ जीनों की जोड़तोड़ के आधार पर बाहर खटखटाया या नैदानिक प्रासंगिक स्तरों से परे व्यक्त । इसके विपरीत, मानव या murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों orthotopic ट्यूमर में इस्तेमाल किया, मानव ट्यूमर की तरह, और अधिक आनुवंशिक रूप से दोनों एकल कोशिकाओं के भीतर और कोशिकाओं के बीच विविधता प्रदर्शित करने में29,30से अधिक जटिल हैं । इसके अलावा जवाहरात के विपरीत, orthotopic कैंसर सेल लाइनों के लिए इमेजिंग विधियों या ब्याज के अंय अणुओं की वृद्धि हुई है या कम स्तर एक्सप्रेस इंजीनियर जा सकता है, और इन विट्रो में और vivo में प्रयोगात्मक परिणाम सीधे तुलना में किया जा सकता है । Orthotopic ट्यूमर भी प्राथमिक रोगी व्युत्पंन कोशिकाओं से गठित किया जा सकता है । यहां, हम प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं है कि orthotopic एण्ड्रोजन-निर्भर ट्यूमर फार्म का अंतर-स्थिर इंजेक्शन प्रदर्शन के लिए पद्धति की रिपोर्ट, और, बधिया के बाद, orthotopic सीआरपीसी के रूप में पुनरावृत्ति ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Myc-CaP cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3255</td>
			<td>Verify as mycoplasma-free before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graege forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe tissue forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar needle holder with suture cutters</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 &#181;L Syringe 705 RN SYR</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7637-01</td>
			<td>Sterilize by ethylene oxide gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28-gauge Needles Small Hub RN</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-02</td>
			<td>Point style 4, Angle 45&#176;, Length 0.75 in. Sterilized by ethylene oxide gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>18875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pencillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel basement membrane matrix, phenol red-free, LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356237</td>
			<td>Thaw on ice in 4&#176;C overnight before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>11695-0500-2</td>
			<td>Acquired from Northwestern University Center for Comparative Medicine (CCM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 5/8-gauge syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309597</td>
			<td>For meloxicam and buprenorphine injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hyrochloride 0.3 mg/mL</td>
			<td></td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td>Controlled substance, acquired from Northwestern University CCM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment lubrication</td>
			<td>Akron</td>
			<td>17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine surgical scrub (povidone-iodine, 7.5%)</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-151-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile non-adhering pads</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>10775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol wipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope Stemi DV4</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile polyester tipped applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-806 1PD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 vicryl absorbable reverse cutting needle sutures</td>
			<td>eSutures</td>
			<td>J493G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 nylon monfilament non-absorbable reverse cutting needle sutures</td>
			<td>eSutures</td>
			<td>699H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bead sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline 0.9% sodium chloride</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>0409-4888-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Eloxiject) 5 mg/mL</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>11695-6925-1</td>
			<td>Acquired from Northwestern University CCM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin Firefly, sodium salt monohydrate</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCNA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cauery surgical pen</td>
			<td>Bovie Medical Corporation</td>
			<td>AA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3&#949; antibody (clone 2GV6)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>790-4341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caliper</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-648-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Androgen receptor antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>RB-9030-P1</td>
			<td>1:500 staining dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synaptophysin antibody (clone Z66)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>18-0130</td>
			<td>1:200 staining dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a bioluminescent and fluorescent orthotopic syngeneic murine model of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer

Orthotopic ट्यूमर मॉडलिंग पूर्व नैदानिक प्रोस्टेट कैंसर अनुसंधान के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है, के रूप में यह दोनों चमड़े के नीचे और ट्रांसजेनिक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल पर कई फायदे हैं । चमड़े के नीचे ट्यूमर के विपरीत, orthotopic ट्यूमर अधिक नैदानिक सटीक vasculature, ट्यूमर microenvironment, और कई उपचारों के लिए प्रतिक्रियाओं होते हैं । आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल के विपरीत, orthotopic मॉडल कम लागत के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है और कम समय में, अत्यधिक जटिल और विषम माउस या मानव कैंसर सेल लाइनों का उपयोग शामिल है, बल्कि है कि एक आनुवंशिक परिवर्तन, और इन सेल लाइनों आनुवंशिक रूप से संशोधित किया जा सकता है, जैसे एक्सप्रेस इमेजिंग एजेंटों के लिए । यहां, हम शल्य चिकित्सा के लिए एक प्रोटोकॉल वर्तमान चूहों के पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि में एक luciferase-और mCherry-व्यक्त murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन इंजेक्शन । इन चूहों orthotopic ट्यूमर है कि गैर इनवेसिव vivo में नजर रखी थी और आगे ट्यूमर की मात्रा, वजन, माउस अस्तित्व, और प्रतिरक्षा घुसपैठ के लिए विश्लेषण विकसित की है । इसके अलावा, orthotopic ट्यूमर असर चूहों शल्य चिकित्सा castrated थे, तत्काल ट्यूमर प्रतिगमन और बाद की पुनरावृत्ति, बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर का प्रतिनिधित्व करने के लिए अग्रणी । हालांकि तकनीकी कौशल के लिए इस प्रक्रिया को पूरा करने की आवश्यकता है, दोनों एण्ड्रोजन पर निर्भर है और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर के इस syngeneic orthotopic मॉडल क्षेत्र में सभी जांचकर्ताओं के लिए महान उपयोग की है ।

इस पांडुलिपि में, हम शल्य चिकित्सा murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन, Myc-कैप, पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि (आंकड़ा 1a) में, एक नैदानिक प्रासंगिक टीएमई और सही के साथ orthotopic प्रोस्टेट ट्यूमर के विकास के लिए अग्रणी इंजेक्शन प्रोस्टेट-draining लिम्फ नोड्स (चित्र 1b) । इस सूक्ष्म विदारक कैंची, Graefe संदंश, Graefe ऊतक संदंश, टांका कटर के साथ एक सुई धारक का उपयोग किया गया था, और एक 50 µ एल एक 28 गेज सुई (चित्रा 1C) के साथ सिरिंज । preputial ग्रंथियों (चित्र 1 d) के ऊपर लगभग 1 सेमी midline उदर चीरा प्रदर्शन करने के बाद, एक लाभदायक पुटिका और संलग्न पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि स्थित थे और बाह्य (चित्रा 1E) और 30 µ l (1x106 कोशिकाओं) के एक 1:1 पंजाबन/matrigel सेल निलंबन प्रोस्टेट (चित्रा 1F) में इंजेक्ट किया गया था, के रूप में शुरू में पालि के engorgement द्वारा सत्यापित और रिसाव की कमी (चित्रा 1G) ।
orthotopic ट्यूमर के विकास की निगरानी करने के लिए, हम छुरा transfected Myc-कैप कोशिकाओं दोनों जुगनू luciferase और mCherry व्यक्त करने के लिए, ट्यूमर के लिए अनुमति देने के लिए गैर इनवेसिव vivo में bioluminescence (चित्रा 2a) और प्रतिदीप्ति (चित्रा बी), क्रमशः । इस इमेजिंग की एक सीमा है कि, संकेत की शक्ति के आधार पर, इमेजिंग ठहराव जबकि ट्यूमर आकार में वृद्धि जारी है संतृप्त कर सकते हैं । इसलिए, उच्च संकेत तीव्रता के साथ, इस vivo में इमेजिंग प्रयोगात्मक समूहों में ट्यूमर के बोझ को सामान्य करने के लिए अधिक उपयोगी है और बाद में निर्धारित करने के लिए प्रयोगात्मक उपचार के बाद ट्यूमर के आकार में कम हो जाती है. अतिरिक्त इमेजिंग मोडलों का उपयोग भी किया जा सकता है, जैसे छोटे जानवर एमआरआई, पीईटी, या सीटी ।
Orthotopic ट्यूमर 30 दिन पर पेट से अंतर के बाद स्थिर इंजेक्शन (चित्रा 3) विच्छेदित किया गया । Orthotopic ट्यूमर पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि के स्थल पर स्थित होना चाहिए । पेट भर में ट्यूमर जनता या पूर्वकाल पेट की दीवार से जुड़ी अनुचित इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन और रिसाव का संकेत है । उचित तकनीक के साथ, ट्यूमर की मात्रा (चित्र 3 बी) और वजन (चित्रासी) अपेक्षाकृत छोटे मानक त्रुटि के साथ दर्ज किया जा सकता है । हालांकि, के रूप में मनाया, वहां छोटे और बड़े ट्यूमर जनता के साथ कुछ परिवर्तनशीलता होगा । इसलिए, पूर्व उपचार इमेजिंग ठहराव के प्रारंभिक उपयोग प्रयोगात्मक हथियारों के बीच बराबर ट्यूमर बोझ के लिए सभी प्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण है । इसके अलावा, के रूप में इन murine कैंसर की कोशिकाओं को असुरक्षित FVB में इंजेक्शन थे/एनजे चूहों, टीएमई immunohistochemistry (आइएचसी) द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है (या प्रवाह cytometry या अंय तकनीकों) CD3 टी कोशिकाओं के लिए (चित्र 3d) (या अंय प्रतिरक्षा कोशिका प्रकार) । अंत में, यह मॉडल एक उद्देश्य अस्तित्व समापन बिंदु प्रदान करता है, के रूप में बड़े प्राथमिक ट्यूमर द्रव्यमान का कारण बनता है रक्तस्रावी उदर जलोदर36 (चित्रा 3E) और/या कम ambulation, सौंदर्य, और/ कभी कभार, मौत भी ट्यूमर के विकास अवरुद्ध मूत्र उत्पादन की वजह से हो सकता है ।
अंत में, इस मॉडल दोनों एण्ड्रोजन पर निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी, जो की उत्तरार्द्ध गरीब रोग का निदान प्रदान करने के लिए और उपंयास उपचार के विकल्प की जरूरत है अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है । orthotopic ट्यूमर के विकास के बाद, चूहों शल्य चिकित्सा castrated थे, के रूप में पहले से वर्णित38। के रूप में यह दूसरा प्रमुख अस्तित्व सर्जरी है, अतिरिक्त देखभाल के लिए वसूली और किसी भी प्रतिकूल घटनाओं या जटिलताओं के लिए निगरानी दिया जाना चाहिए । बधिया के बाद 3 दिनों के भीतर, मजबूत ट्यूमर प्रतिगमन, लगभग 30 दिनों के बाद बाद में ट्यूमर पुनरावृत्ति के बाद सीआरपीसी (चित्रा 4a) का प्रतिनिधित्व करते हुए मनाया गया था । सीआरपीसी ट्यूमर विच्छेदन और विश्लेषण histologically किया जा सकता है, और किसी भी neuroendocrine भेदभाव प्रदर्शित नहीं करते हैं, के रूप में वे उच्च एआर स्तर को बनाए रखने और neuroendocrine मार्कर के लिए नकारात्मक हैं, synaptophysin (चित्रा 4B) ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57301/57301fig1.jpg"> चित्रा 1: पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि, लिम्फ नोड्स draining, और अंतर-स्थिर सेल इंजेक्शन के लिए प्रतिनिधि तकनीक । (क) सही पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि (काले, की छवियां *), सही लाभदायक पुटिका संलग्न (सफेद), सही अंडकोष और वसा पैड (हरा), और मूत्राशय (पीला), (ख) द्विपक्षीय प्रोस्टेट-नाली पैरा-महाधमनी लिम्फ नोड्स (नारंगी), (ग) सूक्ष्म विदारक कैंची, Graefe संदंश, Graefe ऊतक संदंश, टांका कटर के साथ एक सुई धारक, और 50 µ एल 28 गेज सुई के साथ सिरिंज (सही करने के लिए छोड़ दिया), (घ) midline चीरा, (ई) लाभदायक पुटिका और पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि externalization, (च), अंतर-स्थिर इंजेक्शन, और (छ) पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि के engorgement । <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57301/57301fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57301/57301fig2.jpg"> चित्रा 2: vivo में bioluminescent और फ्लोरोसेंट ट्यूमर इमेजिंग. (क) Luciferase-और (ख) mCherry-व्यक्त orthotopic Myc-कैप ट्यूमर एक IVIS स्पेक्ट्रम इमेजिंग प्रणाली का उपयोग कर imaged थे । Bioluminescence कुल प्रवाह (फोटॉनों s) द्वारा quantified था । <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57301/57301fig2large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57301/57301fig3.jpg"> चित्रा 3: ट्यूमर की मात्रा, वजन, प्रतिरक्षा घुसपैठ के लिए प्रोटोकॉल द्वारा Orthotopic ट्यूमर विश्लेषण, और अस्तित्व । Orthotopic ट्यूमर 30 दिन पर विच्छेदित-स्थिर इंजेक्शन के बाद किया गया था और द्वारा विश्लेषण (क) सकल इमेजिंग, (ख) ट्यूमर की मात्रा (π/6 × L × W × H; एल = ट्यूमर की सबसे लंबी धुरी की लंबाई, डब्ल्यू = सीधा चौड़ाई, ज = सीधा ऊंचाई), (ग) ट्यूमर वजन, (घ) CD3 आइएचसी (स्केल बार = 100 µm), और (ई) अस्तित्व, रक्तस्रावी उदर की उपस्थिति के रूप में उद्देश्य समापन बिंदु के साथ जलोदर. (A-B) माध्य का अर्थ ± मानक त्रुटि के रूप में प्रस्तुत डेटा । <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57301/57301fig3large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57301/57301fig4.jpg"> चित्रा 4: दोनों एण्ड्रोजन-निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी मॉडल करने के लिए बाद में शल्य बधिया के साथ अंतर-स्थिर इंजेक्शन. (क) चूहों असर orthotopic luciferase-व्यक्त ट्यूमर bioluminescence पूर्व और पोस्ट बधिया (Cx) द्वारा imaged थे, और (ख) recurred सीआरपीसी ट्यूमर विच्छेदित थे (काले = orthotopic प्रोस्टेट ट्यूमर; पीला = मूत्राशय) और द्वारा विश्लेषण एच एंड E, AR आइएचसी, और synaptophysin आइएचसी (धनात्मक murine नियंत्रण के साथ) (स्केल बार = 50 µm) । <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57301/57301fig4large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

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A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

एक Bioluminescent और फ्लोरोसेंट Orthotopic Syngeneic Murine मॉडल एण्ड्रोजन के आश्रित और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर

इस प्रोटोकॉल के लक्ष्य को प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं के अंतर-स्थिर इंजेक्शन का प्रदर्शन है, बाद में बधिया के साथ । Orthotopic पूर्व नैदानिक मॉडल एण्ड्रोजन के आश्रित और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर के लिए एक नैदानिक प्रासंगिक ट्यूमर microenvironment और एक असुरक्षित मेजबान के संदर्भ में रोग का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण हैं ।

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

फ्लोरोसेंट Orthotopic माउस अग्नाशय के कैंसर के मॉडल

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

मूल ट्यूमर के विकास की murine प्रयोगात्मक मॉडल और पेरिटोनियल मेटास्टेसिस<em&gt; के माध्यम से</em&gt; डिम्बग्रंथि कार्सिनोमा कोशिकाओं के साथ Orthotopic टीका

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

एक murine Orthotopic मूत्राशय ट्यूमर मॉडल और ट्यूमर का पता लगाने प्रणाली

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

पूर्व नैदानिक ​​चिकित्सा के मात्रात्मक और अनुदैर्ध्य मूल्यांकन के लिए एक syngeneic माउस प्रक्षेपि के मॉडल गुर्दे सेल कार्सिनोमा

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

थकान के एक माउस मॉडल परिधीय विकिरण से प्रेरित

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

कोलोरेक्टल कैंसर के ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल में ट्यूमर कोशिकाओं को प्रसारित करने का अलगाव

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping के Orthotopic Homograft (Syngeneic) के Murine प्राथमिक KPC अग्नाशय वाहिनीई ग्रंथिकर्कटता द्वारा प्रवाह Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

पीडी-L1 एक्सप्रेशन का अध्ययन करने के लिए Syngeneic लंग ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं का Orthotopic ट्रांसप्लांटेशन

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

ऑर्थोटोपिक स्तन कैंसर मॉडल का उपयोग कर ट्रिपल नकारात्मक स्तन कैंसर का अध्ययन

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

मैरिन अग्नाशय के डक्टल एडेनोकार्सिनोमा के अल्ट्रासाउंड-गाइडेड ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...