Name: in vivo imaging of muscle-tendon morphogenesis in drosophila pupae
Uploaded: 2018-02-06T15:00:00
Duration: 8 min 33 s
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हम फिल्म S3 के अधिग्रहण के लिए Manuela Weitkunat धंयवाद । हम उदार समर्थन के लिए रेइनहार्ड Fässler के आभारी हैं । यह काम EMBO यंग अंवेषक कार्यक्रम (F.S.), यूरोपीय संघ के सातवें फ्रेमवर्क कार्यक्रम (एफ पी/2007-2013)/ERC अनुदान ३१०९३९ (F.S.), मैक्स प्लैंक सोसायटी (S.B.L., F.S.), के तहत यूरोपीय अनुसंधान परिषद द्वारा समर्थित किया गया था केंद्र नेशनल डे ला सूक्ष्म Scientifique (CNRS) (F.S.), द एक्सीलेंस इनिशिएटिव ऐक्स-मार्सैय यूनिवर्सिटी AMIDEX (F.S.), द LabEX-सूचित (F.S.) और द Boehringer Ingelheim शौकीन्स (S.B.L.) ।

1. स्टेज कोषस्थों
<ol><li>20-40 कुंवारी महिलाओं के साथ एक क्रॉस सेट अप करें और फ्लाई फूड(figure 1a) की बॉटल प्रति 20 पुरुषों के बारे में । वैकल्पिक रूप से, अगर शेयरों का इस्तेमाल किया जाएगा, नई बोतलों में प्रत्येक शेयर फ्लिप । पर्याप्त कोषस्थों पाने के लिए, प्रति जीनोटाइप दो बोतलें स्थापित करने पर विचार करें ।</li>
	<li>पांच से छह दिनों के लिए (चित्र 1b) के लिए 25 डिग्री सेल्सियस (या 27 डिग्री सेल्सियस प्रयोगात्मक डिजाइन के अनुसार) पर बोतलें मशीन । नोट: भीड़ से बचने के लिए हर दो से तीन दिन मक्खियों की शुरआत रखें और कोषस्थों की निरंतर आपूर्ति सुनिश्चित करें ।</li>
	<li>बोतलों की दीवारों से सफेद prepupae इकट्ठा करने के लिए एक गीले ब्रश का प्रयोग करें और उन्हें कांच की स्लाइड्स (फिगर 1C) पर ट्रांसफर कर दें । समय मचान ऐसी है कि कोषस्थों वांछित उंर तक पहुंचने जब माइक्रोस्कोप के तहत जीना इमेजिंग शुरू । नोट: ये prepupae उनके शेप के मामले में उम्रदराज कोषस्थों की तरह दिखते हैं, लेकिन ये अब भी लार्वा की तरह सफेद होते हैं । prepupal चरण की शुरुआत puparium गठन (0 एच APF) के बाद 0 एच के रूप में परिभाषित किया गया है ।</li>
	<li>मक्खी एक गीले ब्रश के साथ कोषस्थों से चिपके हुए भोजन के झुरमुट निकालें और एक stereomicroscope (चित्रा 1 डी) का उपयोग कर ग्लास स्लाइड की ओर कोषस्थों के ventral पक्ष ओरिएंट. छोड़ कोषस्थों है कि अभी भी (बहुत युवा) चलती है या कि भूरे रंग (बहुत पुराना) बारी शुरू कर दिया है । यह सुनिश्चित करता है कि सभी कोषस्थों एक ही उंर (0-1 ज APF) है ।</li>
	<li>स्लाइड को जीनोटाइप, दिनांक और संग्रह के समय के साथ लेबल करें । एक पेट्री डिश के लिए गिलास स्लाइड स्थानांतरण प्रत्येक और बाहर सुखाने (चित्रा 1E) से कोषस्थों को रोकने के लिए एक गीले ऊतक जोड़ें ।</li>
	<li>25 डिग्री सेल्सियस या 27 डिग्री सेल्सियस पर एक मशीन में कोषस्थों स्टोर जब तक वे वांछित उंर तक पहुंचने । इमेजिंग से पहले अगले चरण 1 ज के साथ जारी रखें, ताकि लाइव इमेजिंग (चरण 3) को प्रारंभ करते समय वांछित आयु कोषस्थों है, उदाहरण के लिए 13 ज APF में चित्र 2a-Dमें दिखाई गई मूवी के लिए । नोट: जल्दी से संभव प्रारंभिक समय बिंदु के बाद सिर-eversion 27 डिग्री सेल्सियस पर 8-10 ज APF में होने वाली कोषस्थों की है ।</li>
</ol>2. इमेजिंग के लिए कोषस्थों तैयार करें
<ol><li>सुनिश्चित करें कि कोषस्थों अब कांच स्लाइड के लिए छड़ी की तरह वे स्वाभाविक रूप से अवशिष्ट मक्खी भोजन की वजह से बोतलों की दीवारों से चिपके रहते हैं । कोई अतिरिक्त गोंद की आवश्यकता है । यदि कोषस्थों अच्छी तरह से उच्च आर्द्रता की वजह से छड़ी नहीं है, कुछ मिनट के लिए पेट्री डिश खोलने के लिए उंहें सूखी । वैकल्पिक रूप से, उंहें एक गिलास स्लाइड पर डबल पक्षीय टेप करने के लिए स्थानांतरण, लेकिन आमतौर पर, यह आवश्यक नहीं है ।</li>
	<li>
अप्रत्यक्ष उड़ान मांसपेशियों की इमेजिंग के लिए ुपाल मामले में खुली खिड़की (चित्र 1F; पेट की मांसपेशियों की इमेजिंग के लिए धारा २.३ के लिए छोड़ें.)<ol>
<li>ओरिएंट कोषस्थों एक stereomicroscope के तहत शोधकर्ता से दूर का सामना करना पड़ के साथ कांच स्लाइड से चिपके हुए । 2x के लिए ज़ूम समायोजित करें ।</li>
		<li>जीव विज्ञान ग्रेड #5 संदंश के एक छोर का उपयोग करना, धीरे ुपाल के मामले में एक छेद पंख पर प्रहार जहां पेट समाप्त होता है, और छाती शुरू होता है ।</li>
		<li>ुपाल मामला खुला टुकड़ा करने के लिए, धीरे पंख के साथ छाती के पूर्वकाल अंत करने के लिए संदंश चाल लेकिन कमजोर पंख ऊतक हानिकारक से बचें । नोट: यदि pupa से द्रव लीक, यह क्षतिग्रस्त है; इसे छोड़ें और किसी भिंन pupa के साथ प्रारंभ करें ।</li>
		<li>संदंश के साथ छाती के ऊपर ुपाल मामले की धारा ऊपर उठा और फिर ठीक है, पृष्ठीय midline के विपरीत पक्ष पर तेज कैंची के साथ बंद इस अनुभाग में कटौती ।</li>
	</ol>
</li>
	<li>
पेट की मांसपेशियों की इमेजिंग के लिए ुपाल मामले में खुली खिड़की (चित्रा 1G)<ol>
<li>ओरिएंट कोषस्थों एक stereomicroscope के तहत शोधकर्ता के दिशा में सामना करना पड़ के साथ कांच स्लाइड से चिपके हुए । 2x के लिए ज़ूम समायोजित करें ।</li>
		<li>जीव विज्ञान ग्रेड #5 संदंश के एक छोर का प्रयोग, धीरे विंग जहां छाती समाप्त होता है, और पेट शुरू होता है ुपाल मामले पृष्ठन में एक छेद प्रहार ।</li>
		<li>को ुपाल मामले खुला टुकड़ा, धीरे पेट के पीछे अंत की ओर संदंश चाल । नोट: यदि pupa से द्रव लीक, यह क्षतिग्रस्त है; इसे छोड़ें और किसी भिंन pupa के साथ प्रारंभ करें ।</li>
		<li>संदंश के साथ पेट के ऊपर ुपाल मामले की धारा ऊपर उठा और फिर ठीक है, पृष्ठीय midline के विपरीत पक्ष पर तेज कैंची के साथ बंद इस अनुभाग में कटौती ।</li>
	</ol>
</li>
	<li>
माउंट कोषस्थों (चित्र अ.ज)<ol>
<li>एक नाली के साथ एक प्लास्टिक स्लाइड के लिए पांच कोषस्थों को हस्तांतरण करने के लिए एक गीला ब्रश का प्रयोग करें (कस्टम-निर्मित, पुन: प्रयोज्य, चर्चा और सामग्री की सूची देखें) । नाली की गहराई और कोषस्थों की मोटाई के आधार पर प्रत्येक पक्ष के लिए एक या दो स्पेसर coverslips जोड़ें. प्रत्येक स्पेसर coverslip नीचे पानी की एक छोटी सी बूंद डाल करने के लिए यह स्लाइड करने के लिए छड़ी और नाली और हर तरफ स्पेसर coverslips के बीच कुछ जगह छोड़ दें । नोट: स्पेसर coverslips भी स्थाई रूप से पहले से सुपर गोंद के साथ स्लाइड करने के लिए, संलग्न किया जा सकता है ।</li>
		<li>ओरिएंट कोषस्थों ऐसी है कि ुपाल मामले में खोलने ब्रश का उपयोग कर ऊपर के चेहरे । अच्छी इमेजिंग गुणवत्ता के लिए सही कोण पर कोषस्थों की सावधान स्थिति सुनिश्चित करें । प्रत्येक ऊतक और विकास के समय बिंदु के लिए कोण का अनुकूलन । नोट: नाली में पानी की एक छोटी राशि कोषस्थों की स्थिति आसान बनाता है । बाद में डूबने से बचने के लिए ब्रश के साथ अतिरिक्त पानी नाली ।</li>
		<li>उंहें छूने के बिना कोषस्थों के ऊपर एक coverslip (18 x 18 मिमी) पकड़ो । एक 20 µ l पिपेट का उपयोग कर coverslip पर प्रत्येक ुपाल मामले खोलने के ऊपर छोटी बूंदों (लगभग ०.५ µ l) को ५०% ग्लिसरॉल सॉल्यूशन के स्थान पर रखें । नोट: इस कार्यविधि सुनिश्चित करता है कि कोषस्थों के रूप में समान रिक्ति बूंदों है ।</li>
		<li>coverslip पर मुड़ें और हाथ से कोषस्थों या संदंश (मानक #5) का उपयोग करके ऊपर की स्थिति है, जबकि coverslips के बगल कोषस्थों पर coverslip के एक तरफ आराम । अगले, धीरे कोषस्थों पर coverslip ड्रॉप । सुनिश्चित करें कि ुपाल मामले के उद्घाटन अच्छी इमेजिंग गुणवत्ता के लिए ५०% ग्लिसरॉल के साथ ठीक से कवर कर रहे है और बाहर सुखाने से कोषस्थों को रोकने के लिए ।</li>
		<li>चिपकने वाला टेप का एक टुकड़ा के एक छोर पर गुना और उस छोर पर संदंश (मानक #5) के साथ इसे पकड़ो । धीरे टेप जगह ऐसी है कि यह शीर्ष coverslip के एक किनारे, स्पेसर coverslip (ओं) को शामिल किया गया है, और एक तरफ प्लास्टिक स्लाइड । टेप नीचे, अभी तक प्रेस मत करो । पहले, स्लाइड को चारों ओर घुमाएं और दूसरे पक्ष के लिए दोहराएं ।</li>
		<li>दोनों किनारों पर एक साथ टेप नीचे प्रेस करने के लिए दोनों सूचकांक उंगलियों का प्रयोग करें । यह प्रक्रिया सुनिश्चित करता है कि कोषस्थों विस्थापित नहीं हैं ।</li>
		<li>जांच करें कि क्या कोषस्थों coverslip के साथ संपर्क में हैं । इष्टतम इमेजिंग गुणवत्ता के लिए कोषस्थों धीरे coverslip के नीचे निचोड़ा जाना चाहिए । यदि आवश्यक हो तो स्पेसर coverslips की संख्या समायोजित करें ।</li>
		<li>स्लाइड को स्टिकी टेप पर लिख कर लेबल कर ᱶ ।</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. कोषस्थों की लाइव इमेजिंग
<ol><li>बढ़ते विधि दोनों औंधा सूक्ष्मदर्शी (चित्रा 1I) पर और ईमानदार सूक्ष्मदर्शी (चित्रा 1J) पर कोषस्थों की इमेजिंग की अनुमति देता है । लाइव इमेजिंग के लिए विशेष रूप से उपयुक्त फोकल सूक्ष्मदर्शी, दो फोटॉन सूक्ष्मदर्शी और कताई डिस्क फोकल सूक्ष्मदर्शी चाहे वे औंधा या ईमानदार है स्कैनिंग कर रहे हैं । लंबी अवधि की फिल्मों के लिए, यदि उपलब्ध हो तो तापमान नियंत्रित चरण का उपयोग करें ।</li>
	<li>नेत्र और एक यूवी लैंप या संचरण प्रकाश का उपयोग कर, एक pupa और pupa अंदर ध्यान का पता लगाएं ।</li>
	<li>कैमरा का उपयोग करना, वांछित संरचना खोजने के लिए और ज़ूम स्तर को समायोजित.</li>
	<li>लंबे समय तक फिल्मों के लिए, एक जेड-ढेर है कि अच्छी तरह से ब्याज की संरचना शामिल है परिभाषित (उदाहरण के लिए, अप्रत्यक्ष उड़ान की मांसपेशियों, उनके लगाव साइटों, पट्टा कोशिकाओं या aforementioned एक संयोजन) और एक समय अंतराल का चयन करें । बेहतर छवि गुणवत्ता के लिए औसत करने पर विचार करें । उच्च गति, अल्पकालिक फिल्मों के लिए, एक उच्च फ्रेम दर को प्राप्त करने के लिए एक एकल जेड विमान का चयन करें ।</li>
	<li>सबसे अच्छा संभव संकेत लेकिन थोड़ा संतृप्ति देने के लिए लेजर शक्ति को समायोजित करें । हालांकि, बहुत अधिक लेजर शक्ति समय के साथ pupa नुकसान कर सकते हैं ।</li>
	<li>इमेजिंग प्रारंभ करें और समय-समय पर चलचित्र की जांच करें और यदि आवश्यक हो तो z-स्टैक स्थिति को समायोजित करने के लिए वापस ।</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57312/57312fig1.jpg"> चित्रा 1: मांसपेशी की लाइव इमेजिंग के लिए कार्यप्रवाह-पट्टा morphogenesis में Drosophila कोषस्थों में । विवरण के लिए प्रोटोकॉल देखें । <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57312/57312fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

<ol>
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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+of+Drosophila+with+the+CRISPR+RNA-guided+Cas9+nuclease.">Genome engineering of Drosophila with the CRISPR RNA-guided Cas9 nuclease.</a> Genetics. 194 (4), 1029-1035 (2013).</li><li>Zhang, X., Koolhaas, W. H., Schnorrer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+two-step+CRISPR-+and+RMCE-based+strategy+for+efficient+genome+engineering+in+Drosophila.">A versatile two-step CRISPR- and RMCE-based strategy for efficient genome engineering in Drosophila.</a> G3. 4 (12), 2409-2418 (2014).</li><li>Port, F., Chen, H. -. M., Lee, T., Bullock, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+CRISPR/Cas+tools+for+efficient+germline+and+somatic+genome+engineering+in+Drosophila.">Optimized CRISPR/Cas tools for efficient germline and somatic genome engineering in Drosophila.</a> P. Natl. Acad. Sci. USA. 111 (29), E2967-E2976 (2014).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

प्रस्तुत प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे छवि मांसपेशी को-पट्टा morphogenesis में रहने वाले Drosophila कोषस्थों के एक किस्म का उपयोग कर फ्लोरोसेंट प्रोटीन टैग । vivo इमेजिंग रणनीति में यह संपूर्ण जीव के अपने प्राकृतिक वातावरण में विकासात्मक प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
यह एक सफल प्रयोग के लिए महत्वपूर्ण है सही विकास के समय बिंदु को खोजने के लिए विश्लेषण । उदाहरण के लिए, dorsolongitudinal अप्रत्यक्ष उड़ान की मांसपेशियों को ≈ 16 एच APF23 पर अपने पट्टा लक्ष्यों को लगाव शुरू जबकि पेट की मांसपेशियों को बाद में विकसित करने और दोनों सिरों पर संलग्न केवल 30 और ४० एच APF26के बीच । इसके फलस्वरूप पूर्व में प्रकाशित साहित्य को विकास के सही समय बिंदुओं का विश्लेषण करने के लिए खोजना चाहिए या, यदि उसके पहले के ऊतक या संरचना का विस्तार से अध्ययन नहीं किया गया है, तो समग्र विकास के लिए पहले विशेषता की जानी चाहिए.
कस्टम-निर्मित प्लास्टिक स्लाइड पर सफलतापूर्वक बढ़ते कोषस्थों के लिए, यह खांचे उपयुक्त आयाम है कि महत्वपूर्ण है: खांचे १.०-१.५ मिमी चौड़ा और ०.३-०.४ मिमी गहरी होने की जरूरत है । इस गहराई की जरूरत के रूप में स्पेसर coverslips के साथ शीर्ष coverslip के लिए सटीक दूरी का समायोजन करने की अनुमति देता है । हालांकि, कम से कम एक स्पेसर coverslip केशिका बलों द्वारा नमूने से दूर ग्लिसरॉल ५०% draining से बचने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए । नाली में कोषस्थों की सही स्थिति कुछ अनुभव की आवश्यकता है और इस तरह है कि ब्याज की संरचना के रूप में coverslip के लिए संभव के रूप में बंद है अनुकूलित किया जाना चाहिए ।
यदि कोषस्थों की एक बड़ी संख्या में एक खुर्दबीन सत्र में imaged होना चाहिए, वे सब पहले से बढ़ सकता है और फिर एक मशीन में संग्रहित इमेजिंग तक उचित विकासात्मक समय सुनिश्चित करने के लिए । कोषस्थों पूरी प्रक्रिया जीवित रहना चाहिए और भी कम से eclose करने की कोशिश अगर इमेजिंग के बाद स्लाइड पर रखा । जीवित रहने की दर की जांच करने के लिए एक readout के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है कि इमेजिंग शर्तों कोषस्थों नुकसान ।
इमेजिंग सेटिंग्स को प्रायोगिक आवश्यकताओं के अनुसार सावधानीपूर्वक चुना जाना चाहिए । अल्पकालिक फिल्मों के लिए, एक उच्च संकेत बनाम शोर अनुपात एक उच्च फ्रेम दर को संतुलित करने की जरूरत है, जबकि अपेक्षाकृत उच्च लेजर शक्ति कोषस्थों बहुत ज्यादा नुकसान पहुंचाए बिना इस्तेमाल किया जा सकता है । हालांकि, लंबी अवधि की फिल्मों के लिए, लेजर शक्ति को एक मध्यम स्तर पर रखा जाना है और कोषस्थों लगातार नहीं बल्कि निश्चित समय बिंदुओं पर, उदाहरण के लिए, हर 20 मिनट में imaged किया जाना चाहिए । यह सुनिश्चित करने के लिए कि रुचि की संरचना दृश्य के फ़ील्ड से बाहर नहीं जाती है, यह समय बिंदुओं के बीच z-स्टैक की स्थिति को पुनः समायोजन करने के लिए आवश्यक हो सकती है. हमारे ज्ञान के लिए, प्रति ुपाल मामले के उद्घाटन से विकास के समय को प्रभावित नहीं करता है । हालांकि, एक तापमान नियंत्रित चरण लंबी अवधि फिल्मों के लिए उचित विकासात्मक समय सुनिश्चित करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए । इन विचारों को ध्यान में रखते हुए, अत्यधिक जानकारीपूर्ण फिल्मों का अधिग्रहण किया जा सकता है ।
प्रस्तुत प्रोटोकॉल न केवल मांसपेशी-पट्टा morphogenesis लेकिन यह भी अंय विकासशील ऊतकों, उदाहरण के लिए, विंग29उपकला की कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल के लिए केवल तीन संशोधनों की आवश्यकता है: (1) छाती या पेट के बजाय विंग के ऊपर ुपाल मामले के खोलने, (2) शीर्ष coverslip की ओर विंग के साथ कोषस्थों की स्थिति, और (3) अलग फ्लोरोसेंट मार्कर प्रोटीन का उपयोग करें । CRISPR/Cas9-प्रौद्योगिकी की उंनति के साथ, अधिक से अधिक endogenously टैग फ्लोरोसेंट प्रोटीन उपलब्ध हो जाएगा, क्योंकि यह और अधिक सीधा हो गया है लक्ष्य अंतर्जात loci में Drosophila30,31 , ३२. भविष्य में, यह elucidating कई प्रोटीन की गतिशीलता की अनुमति होगी, कोशिकाओं और उनके शारीरिक वातावरण में पूरे ऊतकों विस्तार में ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>product has been replaced by Leica M60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fly food in bottles (or vials)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>standard culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paint brush</td>
			<td>da Vinci</td>
			<td>1526Y</td>
			<td>size 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>VWR: 631-1303</td>
			<td>76 x 26 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>double-sided tape (optional)</td>
			<td>Scotch</td>
			<td>6651263</td>
			<td>12 mm x 6.3 m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petri dishes</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>632102</td>
			<td>94 x 16 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paper tissues</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>7695251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps #5 (Dumont, inox, standard)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td>0.1 mm x 0.06 mm tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps #5 (Dumont, inox, biology grade)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-20</td>
			<td>0.05 mm x 0.02 mm tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td>straight tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic slides with a groove (reusable)</td>
			<td>custom-built</td>
			<td>-</td>
			<td>75 x 26 x 4 mm plexi glass slide with 1.0-1.5 mm wide and 0.3-0.4 mm deep groove</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>coverslips</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>107032</td>
			<td>18 x 18 mm, No. 1.5H</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>49781</td>
			<td>dilute to 50 % in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>adhesive tape</td>
			<td>Tesa</td>
			<td>57370-02</td>
			<td>1.5 mm x 10 m</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of muscle-tendon morphogenesis in drosophila pupae

tendons और कंकाल के साथ एक साथ मांसपेशियों को अपने शरीर के अंगों को स्थानांतरित करने के लिए मनुष्यों सहित जानवरों को सक्षम । मांसपेशी morphogenesis अत्यधिक मनुष्यों के लिए पशुओं से संरक्षित है । इसलिए, शक्तिशाली Drosophila मॉडल प्रणाली मांसपेशियों की अवधारणाओं का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता-पट्टा विकास भी मानव मांसपेशी जीव विज्ञान के लिए लागू किया जा सकता है । यहां, हम विस्तार से वर्णन कैसे वयस्क मांसपेशी की morphogenesis-पट्टा प्रणाली को आसानी से रहने में छवि हो सकती है, Drosophila कोषस्थों विकासशील । इसलिए, विधि प्रोटीन, कोशिकाओं और उनके शारीरिक वातावरण में ऊतकों की जांच की अनुमति देता है । उपयोगी सुझावों के साथ एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल के अलावा, हम फ्लोरोसेंट टैग मार्कर प्रोटीन कि मांसपेशी पट्टा प्रणाली का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है की एक व्यापक सिंहावलोकन प्रदान करते हैं । प्रोटोकॉल के बहुमुखी अनुप्रयोगों को हाइलाइट करने के लिए, हम उदाहरण के लंबे समय तक morphogenetic घटनाओं के दृश्य से लेकर फिल्मों शो-घंटे और दिनों के समय पैमाने पर होने वाली-अल्पकालिक मांसपेशियों की तरह गतिशील प्रक्रियाओं के दृश्य को हिल सेकंड के समय स्केल पर होने वाली है । एक साथ ले लिया, इस प्रोटोकॉल पाठक डिजाइन करने के लिए सक्षम होना चाहिए और मांसपेशी की जांच के लिए लाइव इमेजिंग प्रयोगों प्रदर्शन-बरकरार जीव में पट्टा morphogenesis ।

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In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

यहां, हम एक आसान उपयोग करने के लिए और बहुमुखी विधि सामांय और मांसपेशी में विकासात्मक प्रक्रियाओं की लाइव इमेजिंग प्रदर्शन करने के लिए वर्तमान में विशेष रूप से रहने वाले Drosophila कोषस्थों में पट्टा morphogenesis ।

Vivo में मांसपेशी की इमेजिंग- Drosophila कोषस्थों में पट्टा Morphogenesis

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

Upright Imaging of Drosophila Egg Chambers

Upright Imaging of Drosophila Egg Chambers

की ईमानदार इमेजिंग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; अंडे मंडलों

Drosophila melanogaster oogenesis provides an ideal context for studying varied developmental processes since the ovary is relatively simple in ...

Imaging Calcium in Drosophila at Egg Activation

Imaging Calcium in Drosophila at Egg Activation

में इमेजिंग कैल्शियम<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; अंडा एक्टिवेशन पर

Egg activation is a universal process that includes a series of events to allow the fertilized egg to complete meiosis and initiate embryonic development. ...

Using In Vivo and Tissue and Cell Explant Approaches to Study the Morphogenesis and Pathogenesis of the Embryonic and Perinatal Aorta

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Morphogenesis और भ्रूण और प्रसवकालीन महाधमनी के रोगजनन का अध्ययन करने के लिए Vivo और ऊतक और सेल Explant दृष्टिकोण में का उपयोग करना

The aorta is the largest artery in the body. The aortic wall is composed of an inner layer of endothelial cells, a middle layer of alternating elastic ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

माउस द्वितीयक ताललेट फ्यूजन की लाइव इमेजिंग

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

The C. elegans Excretory Canal as a Model for Intracellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis in a Single Cell: labeling by GFP-fusions, RNAi Interaction Screen and Imaging

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सी. एलिगेंस निकालनेवाला नहर Intracellular लुमेन Morphogenesis के लिए एक मॉडल के रूप में और Vivo में एक एकल कक्ष में ध्रुवीकरण झिल्ली की उत्पत्ति: लेबलिंग द्वारा GFP-फ्यूजन, RNAi इंटरेक्शन स्क्रीन और इमेजिंग

The four C. elegans excretory canals are narrow tubes extended through the length of the animal from a single cell, with almost equally far extended ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

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वयस्क Drosophila melanogaster दिमाग में मशरूम शरीर और Photoreceptor न्यूरॉन्स के विच्छेदन और Immunofluorescent धुंधला

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

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सेल एकत्रीकरण परख सीआईएसद्वारा ट्रांस-लाइगैंडों और उसके निषेध के साथ Drosophila पायदान के बंधन का मूल्यांकन करने के लिए-लाइगैंडों

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Gastrulating माउस में नोड और Notochordal प्लेट visualizing इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग कर भ्रूण

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

लाइव इमेजिंग और Drosophila भ्रूण में मांसपेशी संकुचन का विश्लेषण

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

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गल, Culturing, और Cryopreserving Drosophila सेल लाइनों

There are currently over 160 distinct Drosophila cell lines distributed by the Drosophila Genomics Resource Center (DGRC). With genome engineering, the ...