Name: preparation, purification, and use of fatty acid-containing liposomes
Uploaded: 2018-02-09T13:00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes at JoVE.com

J.W.S. هو محقق من معهد هوارد هيوز الطبي. بتأييد هذا العمل جزئيا بمنحه (290363) من "مؤسسة سيمونز" إلى J.W.S. A.E.E. و K.P.A. على حد سواء الاعتراف بدعم من جامعة مينيسوتا أموال بدء التشغيل.

<ol>
	<li>Hanczyc, M. M., Fujikawa, S. M., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Models+of+Primitive+Cellular+Compartments:+Encapsulation,+Growth,+and+Division.">Experimental Models of Primitive Cellular Compartments: Encapsulation, Growth, and Division.</a> Science. 302, 618-622 (2003).</li><li>Mansy, S. S., Schrum, J. P., Krishnamurthy, M., Tob&#233;, S., Da Treco, ., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Template-directed+synthesis+of+a+genetic+polymer+in+a+model+protocell.">Template-directed synthesis of a genetic polymer in a model protocell.</a> Nature. 454 (7200), 122-125 (2008).</li><li>Apel, C. L., Deamer, D. W., Mautner, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+vesicles+of+monocarboxylic+acids+and+alcohols:+conditions+for+stability+and+for+the+encapsulation+of+biopolymers.">Self-assembled vesicles of monocarboxylic acids and alcohols: conditions for stability and for the encapsulation of biopolymers.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1559 (1), 1-9 (2002).</li><li>Walde, P., Wick, R., Fresta, M., Mangone, A., Luisi, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autopoietic+Self-Reproduction+of+Fatty+Acid+Vesicles.">Autopoietic Self-Reproduction of Fatty Acid Vesicles.</a> J. Am. Chem. Soc. 116 (26), 11649-11654 (1994).</li><li>Sulston, J., Lohrmann, R., Orgel, L. E., Todd Miles, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonenzymatic+Synthesis+of+Oligoadenylates+on+a+Polyuridylic+Acid+Template.">Nonenzymatic Synthesis of Oligoadenylates on a Polyuridylic Acid Template.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 59 (3), 726-733 (1967).</li><li>Adamala, K., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonenzymatic+template-directed+RNA+synthesis+inside+model+protocells.">Nonenzymatic template-directed RNA synthesis inside model protocells.</a> Science. 342 (6162), 1098-1100 (2013).</li><li>Uhlenbeck, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+catalytic+oligoribonucleotide.">A small catalytic oligoribonucleotide.</a> Nature. 328 (6131), 596-600 (1987).</li><li>Chen, I. A., Salehi-Ashtiani, K., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+catalysis+in+model+protocell+vesicles.">RNA catalysis in model protocell vesicles.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (38), 13213-13219 (2005).</li><li>Adamala, K. P., Engelhart, A. E., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaboration+between+primitive+cell+membranes+and+soluble+catalysts.">Collaboration between primitive cell membranes and soluble catalysts.</a> Nat. Commun. 7, 1-7 (2016).</li><li>Joyce, G. F., Inoue, T., Orgel, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Template-directed+Synthesis+on+Random+Copolymers.">RNA Template-directed Synthesis on Random Copolymers.</a> J. Mol. Biol. 176, 279-306 (1984).</li><li>Adamala, K., Engelhart, A. E., Kamat, N. P., Jin, L., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+liposome+dialyzer+for+the+preparation+of+high-value,+small-volume+liposome+formulations.">Construction of a liposome dialyzer for the preparation of high-value, small-volume liposome formulations.</a> Nat. Protoc. 10 (6), 927-938 (2015).</li><li>Zhu, T. F., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+large+monodisperse+vesicles.">Preparation of large monodisperse vesicles.</a> PloS one. 4 (4), e5009 (2009).</li><li>Zhu, T. F., Budin, I., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+extrusion+through+polycarbonate+track-etched+membranes+using+a+hand-held+mini-extruder.">Vesicle extrusion through polycarbonate track-etched membranes using a hand-held mini-extruder.</a> Methods Enzym. 533, (2013).</li></ol>

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

وقد اقترحت الدهنية التي تكونت من الأحماض الدهنية الكثيرون كنماذج محتملة للخلايا البدائية سبب نفاذية عالية وخصائص ديناميكية. كاربوكسيليك رئيس مجموعة الأحماض الدهنية سلسلة واحدة فقط يسمح التجميع الذاتي في الأغشية في مجموعة الرقم الهيدروجيني مقيدة، والأغشية الناتجة حساسة جداً لوجود الأملاح. نتيجة لذلك تتطلب حويصلات الأحماض الدهنية إعداد مختلفة والتعامل مع أساليب مقارنة مع الحويصلات فسفوليبيد.
في هذا البروتوكول، على الرغم من أننا استخدام حمض الأولييك كمثال لتكوين الحويصلية، وأخرى طويلة سلسلة الأحماض الدهنية غير المشبعة (C14) ومشتقاتها (ca. حمض ميريستوليك، وحمض palmitoleic، والكحول المقابلة والجلسرين استرات) أيضا شكل حويصلات اتباع أسلوب الإماهة رقيقة طالما تركيز الدهن المجموع أعلاه اللجنة العسكرية المركزية ودرجة الحموضة العازلة ترطيب بالقرب من pKa للأحماض الدهنية داخل الغشاء. أخرى غير HCl تريس المخزن المؤقت المستخدمة في هذا البروتوكول، نظم أخرى المخزن المؤقت (ca. بيسين، الفوسفات، بورات) أفيد بدعم تكوين حويصلة الأحماض الدهنية، على الرغم من أن عادة ما تكون حويصلات شكلت في المخزن المؤقت للفوسفات أو بورات راشح تماما13. حويصلات الأحماض الدهنية الناتجة بعد الإماهة بوليديسبيرسي ومولتيلاميلار، ولكن يتم تحويله بسهولة إلى الحويصلات أونيلاميلار مونوديسبيرسي الصغيرة بقذف كما هو موضح. مقارنة مع سونيكيشن كأسلوب بديل لتوليد حويصلات صغيرة، البثق يوفر المزيد من الخيارات للتحكم في حجم حويصلة بتطبيق أغشية حجم المسام مختلفة. عادة ما تكون أكبر قليلاً من حجم المسام غشاء الحويصلات بعد البثق، ولكن عن طريق زيادة عدد دورات البثق، يمكن الحصول على حويصلات مع توزيع حجم أضيق وحجم متوسط قريبة من حجم مسام الغشاء.
من أجل توليف بروتوسيلس الوظيفية، حويصلات الأحماض الدهنية بحاجة إلى المضيف محددة التفاعلات الكيميائية الحيوية الناتجة عن التغليف للحمض النووي الريبي أو كتل الإنشاء. الأسلوب الإماهة رقيقة يوفر طريقة سهلة لشكل الحويصلات المحتوية على المواد المغلفة المرجوة. ومع ذلك، كفاءة تغليف منخفضة نسبيا وجزء كبير من المواد الثمينة مثل الحمض النووي الريبي تضيع عادة أثناء عملية تنقية. وفي بعض الحالات يمكن تحسين كفاءة تغليف متواضعة بدورات تجميد أذاب المتكررة قبل قذف. تسمح أساليب موائع جزيئية لإعداد فسفوليبيد الدهنية عالية الغلة لكفاءة التغليف 100% تقريبا، ولكن حتى الآن لم توضع أساليب مماثلة حويصلات الأحماض الدهنية.
عند التعامل مع بروتوسيلس مع الكلاب أو الحرة Mg2 +تنقية بعد إضافة الحل المغنيسيوم وريبوريفيكيشن قبل كل نقطة الوقت يضمن الإزالة تسربت تغليف المواد التي قد تؤثر على دقة معدل التفاعل القياسات داخل الحويصلات. حيث يأخذ كل تنقية مالا يقل عن 10 دقيقة لتحقيق فصل جيدة وجمع الكسور حويصلة، تحليل ردود فعل سريعة من الصعب، وأن رد الفعل يجب أن تتوقف قبل ريبوريفيكيشن العمود.
البروتوكول ونحن الحاضرين هنا أيضا مناسبة لتشييد الدهنية الأحماض الدهنية التي تستضيف ردود فعل محاكاة تلك التي قد تحدث في الخلايا البدائية. لدينا البروتوكولات أيضا تمكين التطبيقات المحتملة في تطوير منظومات إيصال الطب الحيوي والمفاعلات الحيوية للتفاعلات الكيميائية الحيوية الأخرى.

الدهنية، أو حويصلات – المقصورات المحاط بالأغشية بيلايير تتألف من الدهون أمفيفيليك-وجدت الاستخدام في العديد من التطبيقات الطبية الحيوية كوسائل إيصال للمستحضرات الصيدلية، ونماذج أغشية الخلية، ولتطوير الاصطناعية الخلايا. كما استخدمت نحن وآخرون الدهنية كنماذج لأغشية الخلايا البدائية في وقت مبكر من الحياة. 1 , 2 , 3 , 4 عادة، في مثل هذه الأنظمة، نحن نوظف أمفيفيليس سلسلة واحدة تحتوي على ذيل الهيدروكربونية الدهنية واحد فقط (مثلحمض الأولييك)، هذه الجزيئات أبسط لتوليف دون الاستفادة من البروتين المبرمج الإنزيمات تستخدم الخلايا الحديثة.
الدهنية التي تتكون من الدهون سلسلة واحدة مماثلة لتلك التي تكونت من دياسيلفوسفوليبيدس (مثلاً، 1-بالميتويل-2-أوليويل-sn-جليسيرو-3-phosphocholine، أو بوبك) في ذلك الحدود وتتألف من أغشية بلير. الدهنية التي تكونت من أي فئة من الدهون يمكن الاحتفاظ بحمولة المذاب، ويمكن تقليص حجمها وتنقيته باستخدام تقنيات مختلفة. العديد من الاختلافات الهامة نتيجة للخصائص الكيميائية الفريدة للدهون سلسلة واحدة. الحويصلات التي شكلتها فوسفوليبيدات مستقرة على نطاق واسع درجة حموضة، بينما حويصلات الأحماض الدهنية فقط مستقرة في الأس الهيدروجيني المحايدة إلى الأساسية أقل ما يقال (ca. 7-9)، الأمر الذي يتطلب بعض الحموضة العازلة لإعداد حويصلة. معظم الوقت، وهذا المخزن المؤقت قد تحتوي أيضا على جزيئات قابلة للذوبان محددة لتغليف حويصلة، التي يمكن أن تكون أما المواد الفنية (مثلالحمض النووي الريبي) للتفاعلات الكيميائية الحيوية مجزأة أو صبغات الفلورسنت بسيطة (مثلاً، كالسين ) لوصف حويصلة.
وجود سلسلة الهيدروكربون واحدة فقط تنتج من غشاء الذي على حد سواء أكثر نفاذية الذوائب، فضلا عن أكثر دينامية. بالإضافة إلى ذلك، حمض الكربوكسيلية رئيس الفريق في نتائج الأحماض الدهنية في الحويصلات التي أكثر حساسية لوجود الملح و divalent الكاتيونات (مثلاً، Mg2 +). المغنيسيوم أحد الكاتيونات divalent الأكثر أهمية لتحفيز التفاعلات الكيميائية الحيوية في بروتوسيلس للدراسات أصل الحياة. في الحياة المبكرة، قبل تطور إنزيمات البروتين متطورة، قد رنا البوليمر المهيمنة، نظراً لقدرتها المزدوجة لتكرار الذاتي والقيام بالحفز. مثال واحد من الحمض النووي الريبي التي تتطلب المغنسيوم المتعلقة برد الفعل هو الحمض النووي الريبي غير الانزيمية النسخ، أثبتت أولاً في الستينات. 5 عند تنشيط كيميائيا النيوكليوتيدات الحمض النووي الريبي (أي 2-ميثيليميدازوليدي النيوكليوتيدات) ربط مجمع التمهيدي-قالب موجود مسبقاً، 3 '-هيدروكسيل مجموعة من التمهيدي الهجمات 5'-الفوسفات من مونومر المنشط المتاخمة لتحل محل ترك المجموعة (أي 2-ميثيليميدازولي)، وأشكال السندات فوسفوديستير جديدة. ويتطلب هذا الكيمياء نسخ الحمض النووي الريبي تركيزات عالية من Mg2 +، الذي يحتاج إلى أن يكون له علاقة بالكلاب ولكي تكون متوافقة مع بروتوسيلس الأحماض الدهنية. 6 "مغ آخر"2 +-يتوقف رد الفعل أن تحفزها رايبوزيم المطرقة، وهو ربما تتسم أفضل حافز الجيش الملكي النيبالي. هذا رايبوزيم، التي يمكن أن يعاد تشكيلها من النوكليوتيد قصيرة اثنين، يقوم برد فعل ملائم لرصد تحول جل الانقسام الذاتي. على هذا النحو، وكثيراً ما يستخدم رايبوزيم نموذج في دراسات أصل الحياة. 7 بسبب شرط بهذا رايبوزيم المغنسيوم أونليجانديد، الدهنية عادة تصنع من خليط من الأحماض الدهنية والأحماض الدهنية استرات والغليسيرول، التي أكثر استقرارا المغنيسيوم. 8 , 9 في هذا البروتوكول، نقدم التقنيات ونحن قد وضعت لإعداد، والتلاعب، وتوصيف هذه الحويصلات وتثبت تطبيق هذه الحويصلات بروتوسيلس لنسخ والمطرقة رايبوزيم الجيش الملكي النيبالي المضيف غير الانزيمية الحفز.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>sephorose 4B</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>4B200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>calcein</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>C0875-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tris-HCl pH8.0 1M</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES CORP</td>
			<td>AM9851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>251275-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium hydroxide</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>71690-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>30614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>oleic acid</td>
			<td>Nu-Chek</td>
			<td>U-46-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol monooleate</td>
			<td>Nu-Chek</td>
			<td>M-239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liss Rhodamine-PE</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES CORP</td>
			<td>L1392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium chloride</td>
			<td>Fisher/Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9530G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sequagel concentrate</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sequagel DILUENT</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15% TBE-UREA GEL</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>EC68852BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>urea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>U6504-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>titon-100x</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>T9284-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA primer</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;Cy3-GCG UAG ACU GAC UGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA template</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;-AAC CCC CCA GUC AGU CUA CGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hammerhead substrate strand</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;Cy3-GCG CCG AAA CAC CGU GUC UCG AGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hammerhead ribozyme strand</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;GGC UCG ACU GAU GAG GCG CG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vesicle extruder set</td>
			<td>AVANTI POLAR LIPIDS</td>
			<td>610000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fraction collector</td>
			<td>Gilson, Inc.</td>
			<td>171041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9995941/675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plate reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax i3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon A1R MP Confocal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel scanner</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>Typhoon 9410 scanner</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation, purification, and use of fatty acid-containing liposomes

الدهنية التي تحتوي على سلسلة واحدة أمفيفيليس، لا سيما الأحماض الدهنية، يحمل خصائص متميزة مقارنة بتلك التي تحتوي على دياسيلفوسفوليبيدس بسبب الخواص الكيميائية الفريدة لهذه أمفيفيليس. على وجه الخصوص، تعزيز الدهنية الأحماض الدهنية الطابع الدينامي، نظراً لأن القابلية للذوبان عالية نسبيا من سلسلة واحدة أمفيفيليس. وبالمثل، الدهنية التي تحتوي على الأحماض الدهنية الحرة أكثر حساسية للاتصالات الملح وديفالينت، بسبب التفاعلات القوية بين مجموعات حمض الكربوكسيلية الرأس والايونات المعدنية. نحن هنا لتوضيح تقنيات لتنقية، إعداد واستخدام الدهنية تتألف جزئيا أو كلياً من أمفيفيليس سلسلة واحدة (مثلاً، الأحماض الأولييك).

عادة ما نقوم بتنقية الحويصلية على استبعاد حجم الأعمدة. الاستعدادات الحويصلية نموذجية تحتوي على فلوروفوري نوع ما. عندما يتم إنشاؤها الدهنية ومقذوف، الأنواع تكون مغلفة موجودة داخل وخارج في الدهنية. بتنقية الدهنية راتنج حجم الاستبعاد (سيفاروسي 4B)، يتم الاحتفاظ الذوائب الحاسوبية داخل مسام الراتنج، بينما لا الدهنية أكبر والوت الأولى (الشكل 1A). جمع الكسور والتآمر fluorescence مقابل عدد الكسر (الشكل 1B) عادة غلة تتبع اثنين-الذروة، مع كسور المبكر التينج المقابلة الدهنية، ومن ثم جمعها واستخدامها في التطبيقات اللاحقة.
وكثيراً ما ندرس نونينزيماتيك التمهيدي ملحق ردود الفعل، التي كانت وسيلة المحتمل للجيش الملكي النيبالي النسخ المتماثل قبل ظهور رايبوزيم ورنا بولمرس القائم على البروتين. عادة تستخدم هذه التفاعلات تمهيدي مسمى فلوريسسينتلي (الشكل 2A)، الذي تم تمديده بتنشيط مونومرات. ردود الفعل هذه يمكن أن ترصدها هلام استشراد (الشكل 2B) ومتكاملة اليكتروفيروجرامس الناجمة عن ذلك للحصول على معدل الثوابت لشرط رد فعل معين (الشكل 2).
لإظهار أن الجيش الملكي النيبالي ويمكن أن تعمل داخل بروتوسيلس، نحن نوظف المطرقة رايبوزيم المتمتعة بالحكم الذاتي-انشقاق (الشكل 3A) كرد فعل الجيش الملكي النيبالي حفاز على نموذج. يتطلب هذا التفاعل الحر Mg2 + تيسيرا للحفز، وذلك استخدمنا حويصلات الزراعة العضوية/الكائنات المعدلة وراثيا حيث أنها مستقرة حضور مم 5 ملغ2 +. مشابهة للتفاعلات تمديد التمهيدي، كما يمكن رد فعل الانقسام الذاتي رايبوزيم المطرقة يرصدها هلام استشراد (الشكل 3B) وتحليلها في وقت لاحق للحصول على معدل ثابت تحت ظروف معينة (الشكل 3).
ونحن الصورة الدهنية توظف كل الأسفار وأحال الضوء. يمكن أن يكون المسمى الدهنية استخدام الدهون فلوري، الذي يعطي تسمية غشاء (الشكل 4 أ)، أو باستخدام المذاب نيون داخل التجويف بهم (الشكل 4 باء). يمكن أيضا استخدام يبث ضوء لمراقبة حويصلات (كما هو موضح في الشكل 4 باء).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="2">الجدول 1-1 حمض الأولييك نقية في كلوروفورم</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">المكون</td>
			<td>الأوراق المالية</td>
			<td>المبلغ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">حمض الأولييك</td>
			<td>> 99 ٪</td>
			<td>ميليلتر 11.7</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">كلوروفورم</td>
			<td></td>
			<td>1 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">الجدول 1.2 حمض الأولييك والجلسرين مونولياتي (9:1) في كلوروفورم</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">المكون</td>
			<td>الأوراق المالية</td>
			<td>المبلغ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">حمض الأولييك</td>
			<td>> 99 ٪</td>
			<td>ميليلتر 10.5</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">مونوليتي الجلسرين</td>
			<td>> 99 ٪</td>
			<td>ميليلتر 1.4</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">كلوروفورم</td>
			<td></td>
			<td>1 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">الجدول 1-3 حمض الأولييك مع 0.2mol% والرودامين-PE في كلوروفورم</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">المكون</td>
			<td>الأوراق المالية</td>
			<td>المبلغ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">حمض الأولييك</td>
			<td>> 99 ٪</td>
			<td>ميليلتر 1.6</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">والرودامين-PE في كلوروفورم</td>
			<td>10 ملم</td>
			<td>20 ميليلتر</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">كلوروفورم</td>
			<td></td>
			<td>1 مل</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1. حلول كلوروفورم الأحماض الدهنية.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig1.jpg"> رقم 1. حويصلة توصيف تنقية والأسفار لتنقية الكسر. ألف فصل حويصلات التي تحتوي على كالسين من كالسين الحرة على عمود 4B سيفاروسي. باء- حويصلة والكشف عن ذروة كالسين مجاناً برسم الأسفار في كل بئر مقابل عدد جيدا بعد جمع الكسر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57324/57324fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig2.jpg"> رقم 2. النسخ المتماثل عدم الانزيمية للجيش الملكي النيبالي داخل حويصلات الزراعة العضوية. ألف مخطط ملحق التمهيدي الحمض النووي الريبي غير الانزيمية. ب صورة الصفحة من فعل التمديد التمهيدي داخل حويصلات حمض الأولييك الصرفة، مع الظروف كما في القسم 4. جيم خطي تناسب من اللوغاريتم الطبيعي لنسبة مبلغ المتبقي التمهيدي في النظر إلى نقطة الوقت مقدار التمهيدي مقابل الوقت ما يزيد على 30 h. معدل رد الفعل الأولى، محسوبة من المنحدر من ln (P/P0) مقابل الوقت، هو ح 0.058-1. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57324/57324fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig3.jpg"> الشكل 3. قرش أبو مطرقة رايبوزيم الانقسام في حويصلات الزراعة العضوية/الكائنات المعدلة وراثيا. ألف مخطط المطرقة رايبوزيم الانقسام من الركازة المسمى فلوريسسينتلي ستراند (أعلى). صورة صفحة ب المطرقة رايبوزيم الانقسام داخل حويصلات الزراعة العضوية/المعدلة وراثيا مع مم 5 ملغ2 +. جيم رايبوزيم النشاط داخل الحويصلات. تناسب خطي من اللوغاريتم الطبيعي لنسبة مبلغ من الركازة المتبقية في النظر إلى النقطة الزمنية للمبلغ الأولى من الركازة مقابل الوقت في h. 4 أول رد فعل هو معدل، محسوبة من منحدر الوقت مقابل ln (S/S0)، ح 0.36-1. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57324/57324fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig4.jpg"> الشكل 4. حويصلات الأحماض الدهنية العملاقة للفحص المجهري. ألف صورة مجهرية [كنفوكل] PE والرودامين المسمى حمض الأولييك حويصلة، مقياس بار 10 ميكرومترات. ب صورة مجهرية [كنفوكل] من حمض الأولييك حويصلة تحتوي على Alexa488 المسماة الجيش الملكي النيبالي مع غشاء سيظهر في قناة الكاشف المنقولة (الدفتيريا)، ومقياس بار 5 ميكرومترات.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes at JoVE.com

Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes

الدهنية التي تحتوي على سلسلة واحدة أمفيفيليس، لا سيما الأحماض الدهنية، يحمل خصائص متميزة مقارنة بتلك التي تحتوي على دياسيلفوسفوليبيدس بسبب الخصائص الكيميائية الفريدة من أمفيفيليس واحد في سلسلة. هنا يمكننا وصف تقنيات لإعداد وتنقية، واستخدام الدهنية تتألف جزئيا أو كلياً من هذه أمفيفيليس.

إعداد وتنقية، واستخدام الدهنية المحتوية على الأحماض الدهنية

Liposomes containing single-chain amphiphiles, particularly fatty acids, exhibit distinct properties compared to those containing diacylphospholipids due ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

استخدام الخلايا الجذعية البشرية ارتشاح لتجديد العظام

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

On-chip Isotachophoresis for Separation of Ions and Purification of Nucleic Acids

على رقاقة Isotachophoresis للفصل بين الأيونات والتنقية من الأحماض النووية

Electrokinetic techniques are a staple of microscale applications because of their unique ability to perform a variety of fluidic and electrophoretic ...

Expression, Isolation, and Purification of Soluble and Insoluble Biotinylated Proteins for Nerve Tissue Regeneration

التعبير، والعزلة، وتنقية القابلة للذوبان وغير القابلة للذوبان البيروكسيديز البروتينات لتجديد الأنسجة العصبية

Recombinant protein engineering has utilized Escherichia coli (E. coli) expression systems for nearly 4 decades, and today E. coli is still the most ...

Custom-designed Laser-based Heating Apparatus for Triggered Release of Cisplatin from Thermosensitive Liposomes with Magnetic Resonance Image Guidance

مصمم خصيصا القائم على الليزر التدفئة جهاز لإطلاق الحفز من سيسبلاتين من حساس للحرارة الليبوزومات مع الرنين المغناطيسي الإرشاد صورة

Liposomes have been employed as drug delivery systems to target solid tumors through exploitation of the enhanced permeability and retention (EPR) effect ...

Synthesis of Gold Nanoparticle Integrated Photo-responsive Liposomes and Measurement of Their Microbubble Cavitation upon Pulse Laser Excitation

توليف الذهب الجسيمات النانوية الليبوزومات المتكاملة صور متجاوبة وقياس تلك Microbubble التجويف على نبض الليزر الإثارة

Photo-responsive nanoparticles (NPs) have received considerable attention because of their potential in providing spatial, temporal, and dosage control ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

تسليم العلاجية سيرنا إلى الجهاز العصبي المركزي عن طريق الموجبة وأنيوني الليبوزومات

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...

Use of Micro X-ray Computed Tomography with Phosphotungstic Acid Preparation to Visualize Human Fibromuscular Tissue

استخدام التصوير المقطعي المحوسب للأشعة السينية الدقيقة مع إعداد حمض فوسفيوالتنغستن لتصور الأنسجة الليفية البشرية

Manual dissection and histological observation are common methods used to investigate human tissues. However, manual dissection can damage delicate ...

A Quantitative Fluorescence Microscopy-based Single Liposome Assay for Detecting the Compositional Inhomogeneity Between Individual Liposomes

A الكمي الفلورية المجهري القائم علي فحص ليبوسوم واحد للكشف عن التجانس التركيبي بين الجسيمات الشحمية الفردية

Most research employing liposomes as membrane model systems or drug delivery carriers relies on bulk read-out techniques and thus intrinsically assumes ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

إعداد البروتين إنتاج الخلايا الاصطناعية باستخدام مقتطفات البكتيريا الحرة الخلية، Liposomes ونقل المستحلب

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Microfluidic Production of Lysolipid-Containing Temperature-Sensitive Liposomes

إنتاج ميكرووبوبي من الليسوبيد اتووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووووو

The presented protocol enables a high-throughput continuous preparation of low temperature-sensitive liposomes (LTSLs), which are capable of loading ...