Name: preparation, purification, and use of fatty acid-containing liposomes
Uploaded: 2018-02-09T13:00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes at JoVE.com

J.W.S. является следователь Говард Хьюз медицинский институт. Эта работа частично поддержали Грант (290363) от Фонд Саймонса в J.W.S. A.E.E. и K.P.A. отметить поддержку от университета Миннесоты запуска средств.

<ol>
	<li>Hanczyc, M. M., Fujikawa, S. M., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Models+of+Primitive+Cellular+Compartments:+Encapsulation,+Growth,+and+Division.">Experimental Models of Primitive Cellular Compartments: Encapsulation, Growth, and Division.</a> Science. 302, 618-622 (2003).</li><li>Mansy, S. S., Schrum, J. P., Krishnamurthy, M., Tob&#233;, S., Da Treco, ., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Template-directed+synthesis+of+a+genetic+polymer+in+a+model+protocell.">Template-directed synthesis of a genetic polymer in a model protocell.</a> Nature. 454 (7200), 122-125 (2008).</li><li>Apel, C. L., Deamer, D. W., Mautner, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+vesicles+of+monocarboxylic+acids+and+alcohols:+conditions+for+stability+and+for+the+encapsulation+of+biopolymers.">Self-assembled vesicles of monocarboxylic acids and alcohols: conditions for stability and for the encapsulation of biopolymers.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1559 (1), 1-9 (2002).</li><li>Walde, P., Wick, R., Fresta, M., Mangone, A., Luisi, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autopoietic+Self-Reproduction+of+Fatty+Acid+Vesicles.">Autopoietic Self-Reproduction of Fatty Acid Vesicles.</a> J. Am. Chem. Soc. 116 (26), 11649-11654 (1994).</li><li>Sulston, J., Lohrmann, R., Orgel, L. E., Todd Miles, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonenzymatic+Synthesis+of+Oligoadenylates+on+a+Polyuridylic+Acid+Template.">Nonenzymatic Synthesis of Oligoadenylates on a Polyuridylic Acid Template.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 59 (3), 726-733 (1967).</li><li>Adamala, K., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonenzymatic+template-directed+RNA+synthesis+inside+model+protocells.">Nonenzymatic template-directed RNA synthesis inside model protocells.</a> Science. 342 (6162), 1098-1100 (2013).</li><li>Uhlenbeck, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+catalytic+oligoribonucleotide.">A small catalytic oligoribonucleotide.</a> Nature. 328 (6131), 596-600 (1987).</li><li>Chen, I. A., Salehi-Ashtiani, K., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+catalysis+in+model+protocell+vesicles.">RNA catalysis in model protocell vesicles.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (38), 13213-13219 (2005).</li><li>Adamala, K. P., Engelhart, A. E., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaboration+between+primitive+cell+membranes+and+soluble+catalysts.">Collaboration between primitive cell membranes and soluble catalysts.</a> Nat. Commun. 7, 1-7 (2016).</li><li>Joyce, G. F., Inoue, T., Orgel, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Template-directed+Synthesis+on+Random+Copolymers.">RNA Template-directed Synthesis on Random Copolymers.</a> J. Mol. Biol. 176, 279-306 (1984).</li><li>Adamala, K., Engelhart, A. E., Kamat, N. P., Jin, L., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+liposome+dialyzer+for+the+preparation+of+high-value,+small-volume+liposome+formulations.">Construction of a liposome dialyzer for the preparation of high-value, small-volume liposome formulations.</a> Nat. Protoc. 10 (6), 927-938 (2015).</li><li>Zhu, T. F., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+large+monodisperse+vesicles.">Preparation of large monodisperse vesicles.</a> PloS one. 4 (4), e5009 (2009).</li><li>Zhu, T. F., Budin, I., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+extrusion+through+polycarbonate+track-etched+membranes+using+a+hand-held+mini-extruder.">Vesicle extrusion through polycarbonate track-etched membranes using a hand-held mini-extruder.</a> Methods Enzym. 533, (2013).</li></ol>

Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.

Липосомы формируются из жирных кислот было предложено многими в качестве потенциальной модели для примитивных клеток из-за их высокой проницаемостью и динамических свойств. Карбоновые головной группы одной цепи жирных кислот только позволяет самостоятельной сборки в мембраны в диапазоне pH ограничен, и результате мембраны весьма чувствительны к присутствию соли. В результате жирные кислоты везикулы требуют иной подготовки и обработки методы по сравнению с фосфолипидные везикулы.
В настоящем Протоколе, хотя мы используем олеиновой кислоты в качестве примера для формирования липосом, другие длинные цепи ненасыщенных жирных кислот (C14) и их производные (ОК. миристолеиновая кислота, Пальмитолеиновая кислота и соответствующего спирты и эфиры глицерина) также образуют пузырьки следующий после метода регидратации тонкой пленки, пока общая липидные концентрации выше cmc и гидратации буфер рН близок pKa жирные кислоты в пределах мембраны. Помимо буфера tris-HCl используемые в настоящем Протоколе, другие буферные системы (ОК. bicine, фосфатов, боратов) сообщалось в поддержку формирования пузырьков жирных кислот, хотя везикулы, образованная в буфер фосфата или Борат, как правило, довольно Дырявый13. Результате везикулы жирные кислоты после регидратации являются полидисперсных и multilamellar, но легко преобразуются в небольших монодисперсных однослойных везикул экструзией как описано. По сравнению с sonication качестве альтернативного метода для создания мелких пузырьков, экструзии предоставляет больше параметров для элемента управления размер пузырьков, применяя различные поры мембраны размер. Везикулы после экструзии обычно немного больше, чем размер поры мембраны, но путем увеличения числа циклов экструзии, пузырьки с более узкий гранулометрический и средний размер недалеко от поры мембраны могут быть получены.
Чтобы синтезировать функционального protocells, жирные кислоты везикулы необходимо хост конкретных биохимических реакций, обусловленных инкапсуляции РНК или других строительных блоков. Тонкая пленка регидратации метод обеспечивает простой способ для формы везикулы, содержащие нужную инкапсулированные материалы. Однако эффективность инкапсуляции является относительно низким, и большая часть драгоценных материалов, такие как РНК обычно теряются во время процесса очистки. В некоторых случаях инкапсуляции эффективность может быть слегка повышена путем повторного замораживания оттаивания циклов перед экструдированием. Microfluidic методы для подготовки высокодоходных липосомы фосфолипидов позволяют почти 100% герметизация эффективности, однако аналогичные методы еще не разработана для жирных кислот везикулы.
Когда обработка protocells с хелатные или бесплатно мг2 +, очистки после добавления раствора магния и repurification перед каждой точке времени обеспечивает удаление утечка инкапсулированные материалы, которые могут повлиять на точность скорости реакции измерения внутри пузырьков. Поскольку каждый очистки занимает по меньшей мере 10 мин для достижения хорошего разделения и собирать пузырьки фракций, анализ быстрых реакций трудно, и реакция должна быть остановлена до столбца repurification.
Протокол, который мы представляем здесь хорошо подходит для строительства жирных кислот липосомы, содержащие реакции передразнивать те, которые могут возникнуть в примитивные клетки. Наши протоколы также обеспечивают возможности приложений в развитии биореакторов для других биохимических реакций и биомедицинских систем доставки.

Липосомы, или пузырьки – отсеков, окруженная бислоя мембраны состоит из липидов амфифильных - нашли применение в многочисленных биомедицинских приложений как средства доставки лекарственных препаратов, модели клеточных мембран и для разработки синтетических клетки. Мы и другие использовали липосомы как модели примитивных клеточных мембран в начале жизни. 1 , 2 , 3 , 4 как правило, в таких системах, мы используем сингл цепь amphiphiles, содержащие только один липидов хвост углеводородов (например, олеиновая кислота), как эти молекулы проще синтезировать без использования закодированных белка ферментов, которые используют современные клетки.
Липосомы, состоит из одного цепь липиды, аналогичны образуются из diacylphospholipids (например, 1-Олигопептид-2-диацилглицерол -sn- glycero-3-фосфохолин, или POPC) в том, что граница состоит из бислоя мембран. Липосомы формируются из любого класса липидов можно сохранить растворенных полезной нагрузки и могут быть уменьшены и очищается от различных методов. Несколько важных отличий в результате уникальных химических характеристик сингл цепь липидов. Везикулы, образованный фосфолипиды являются стабильными над широким рН, в то время как жирные кислоты везикулы стабильны только на нейтральной мягко основных рН (ОК. 7-9), которая требует определенных буфер рН для приготовления, пузырек. Большую часть времени, этот буфер может также содержать конкретные растворимых молекул для инкапсуляции везикул, который может быть либо функциональных материалов (например, РНК) для разобщенным биохимических реакций или простой Краски люминесцентные, флуоресцентные (например, Флуорексон ) для характеризации везикул.
Наличие только одного углеводородной цепи производит мембраны, которая как более проницаемыми для растворов, а также более динамичным. Кроме того карбоновые кислоты головы Группа присутствует в результатах жирных кислот в пузырьки, которые более чувствительны к присутствию соли и двухвалентной катионы (например, мг2 +). Магний является одним из наиболее важных двухвалентной катионы для катализатора биохимических реакций в protocells для исследования происхождения жизни. В начале жизни, до эволюция сложных белков-ферменты РНК может были доминирующей полимер, из-за своей двойной возможности размножаться и выполнять катализа. Один представитель пример магния требуя РНК связанных что реакция неферментативного РНК копирование, впервые продемонстрирована в 1960-х годов. 5 когда химически активации РНК нуклеотидов (т.е. 2-methylimidazolide нуклеотидов) привязки к ранее существовавшие комплекс грунт шаблон, 3'-гидроксильной группы праймера нападения 5'-фосфат прилегающих активированные мономера сместить оставляя группы (т.е. 2-метил) и формы новый Фосфодиэфирная связь. Эта РНК копирование химии требует высокой концентрации мг,2 +, которая должна быть хелатные для того, чтобы быть совместимым с жирной кислоты protocells. 6 другой мг2 +-зависит от реакции является то, что катализируемой молот рибозима, которая является, пожалуй, наиболее характерны каталитического РНК. Этот рибозима, который может быть преобразован из двух коротких олигонуклеотиды, выполняет self расщепление реакции, что удобно контролировать смену гель. Таким образом он часто используется как модель рибозима в исследования происхождения жизни. 7 из-за требование этой рибозима для unliganded магния, липосомы обычно построены смесь жирных кислот и глицерина эфиры жирных кислот, которые являются более устойчивыми к магния. 8 , 9 в настоящем Протоколе, мы представляем методов мы разработали для подготовки, манипуляции, характеристика этих пузырьков и продемонстрировать применение этих пузырьков как protocells для пребывания неферментативного РНК копирование и молот рибозима катализ.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>sephorose 4B</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>4B200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>calcein</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>C0875-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tris-HCl pH8.0 1M</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES CORP</td>
			<td>AM9851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>251275-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium hydroxide</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>71690-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>30614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>oleic acid</td>
			<td>Nu-Chek</td>
			<td>U-46-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol monooleate</td>
			<td>Nu-Chek</td>
			<td>M-239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liss Rhodamine-PE</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES CORP</td>
			<td>L1392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium chloride</td>
			<td>Fisher/Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9530G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sequagel concentrate</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sequagel DILUENT</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15% TBE-UREA GEL</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>EC68852BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>urea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>U6504-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>titon-100x</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH INC</td>
			<td>T9284-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA primer</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;Cy3-GCG UAG ACU GAC UGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA template</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;-AAC CCC CCA GUC AGU CUA CGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hammerhead substrate strand</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;Cy3-GCG CCG AAA CAC CGU GUC UCG AGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hammerhead ribozyme strand</td>
			<td>IDT</td>
			<td>5&#39;GGC UCG ACU GAU GAG GCG CG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vesicle extruder set</td>
			<td>AVANTI POLAR LIPIDS</td>
			<td>610000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fraction collector</td>
			<td>Gilson, Inc.</td>
			<td>171041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9995941/675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plate reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax i3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>confocal microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon A1R MP Confocal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel scanner</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>Typhoon 9410 scanner</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation, purification, and use of fatty acid-containing liposomes

Липосомы, содержащие одно цепь amphiphiles, особенно жирных кислот, проявляют различные свойства, по сравнению с теми содержащие diacylphospholipids из-за уникальных химических свойств этих amphiphiles. В частности жирные кислоты липосомы повысить динамический характер, из-за относительно высокой растворимости сингл цепи amphiphiles. Аналогичным образом липосомы, содержащие свободные жирные кислоты более чувствительны к соли и двухвалентной катионов, из-за сильных взаимодействий между карбоновые кислоты головы групп и ионов металлов. Здесь мы показываем техники для приготовления, очистки и использования липосом, состоит в части или всего amphiphiles единой цепи (например, олеиновой кислоты).

Мы обычно выполняют липосом очищения на размер исключение столбцов. Типичный липосом препараты содержат Флюорофор какой-то. Когда липосомы генерируются и экструдированные, вид должен быть инкапсулирован присутствуют как внутри, так и за пределами липосомы. Очищая липосомы на размер исключение смолы (Sepharose 4B), том растворенных веществ сохраняются в поры смолы, а больше липосомы не элюировать первой (рис. 1A). Сбор фракций и заговоре флуоресценции против номер дроби (рис. 1B) обычно урожаи след двух пик, с раннего элюирующие фракций, соответствующий липосомы, которые затем собираются и используются в последующих приложений.
Мы часто изучить nonenzymatic грунтовка расширения реакции, которые были вероятно средства репликации РНК до появления рибозима и на основе белок РНК-полимеразы. Эти реакции обычно используют дневно обозначенные праймер (рисунок 2A), который продлевается на активированные мономеров. Эти реакции могут контролироваться электрофорезом геля (рис. 2B), и полученный electropherograms интегрированы для получения константы скорости для состояния данной реакции (рис. 2 c).
Чтобы продемонстрировать, что РНК может функционировать внутри protocells, мы используем молот рибозима self расщепления (Рисунок 3А) как модель РНК каталитической реакции. Эта реакция требует свободного мг2 + для облегчения катализа, и поэтому мы использовали OA/ГИО везикулы, поскольку они являются стабильными в присутствии 5 мм Mg2 +. Подобно грунтовка расширения реакции, молот рибозима self расщепление реакции также может быть мониторинг электрофорезом геля (рис. 3B) и впоследствии проанализированы приобрести константа скорости при определенных условиях (рис. 3 c).
Мы изображения липосомы, используя оба флуоресценции и переданы свет. Липосомы могут быть помечены с помощью флуоресцентных липиды, которые дают метку мембраны (рис. 4A), или флуоресцентные растворимое в пределах их просвет (рис. 4В). Пропускаемого света может также использоваться для наблюдать везикулы (также показан на рис. 4B).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="2">Таблица 1.1 чистый олеиновая кислота в хлороформе</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Компонент</td>
			<td>Фондовая</td>
			<td>Сумма</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Олеиновая кислота</td>
			<td>> 99%</td>
			<td>11.7 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Хлороформ</td>
			<td></td>
			<td>1 мл</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Таблица 1.2 олеиновой кислоты и глицерол моноолеат (9:1) в хлороформе</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Компонент</td>
			<td>Фондовая</td>
			<td>Сумма</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Олеиновая кислота</td>
			<td>> 99%</td>
			<td>10.5 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Глицерин моноолеат</td>
			<td>> 99%</td>
			<td>1.4 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Хлороформ</td>
			<td></td>
			<td>1 мл</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Таблица 1.3 олеиновой кислоты с 0.2mol% родамин-PE в хлороформе</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Компонент</td>
			<td>Фондовая</td>
			<td>Сумма</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Олеиновая кислота</td>
			<td>> 99%</td>
			<td>1,6 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Родамин-PE в хлороформе</td>
			<td>10 мм</td>
			<td>20 МКЛ</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Хлороформ</td>
			<td></td>
			<td>1 мл</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1. Жирные кислоты хлороформ решения.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig1.jpg"> Рисунок 1. Везикул очищения и флуоресценции характеристика очистки фракции. A. разделение везикулы, содержащие Флуорексон от свободного Флуорексон по столбцу 4B Sepharose. Б. везикул и обнаружения пик бесплатно Флуорексон путем построения флуоресценции в каждой скважине против хорошо номер после часть коллекции. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57324/57324fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig2.jpg"> Рисунок 2. Non ферментативный репликация РНК внутри везикул О.А. A. схема неферментативного выдвижение праймера РНК. B. изображение страницы грунт расширения реакции внутри чистой олеиновой кислоты везикулы, с условиями как в разделе 4. C. линейной подходят натурального логарифма соотношения количества грунт оставшиеся на данный момент на первоначальный количество грунтовки против времени свыше 30 ч. скорость реакции, рассчитывается от склона ln (0P/P) против времени, -0,058 h-1. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57324/57324fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig3.jpg"> Рисунок 3. Молот расщепления рибозима в ОА/ГИО везикулы. A. схема молот расщепления рибозима стренги дневно обозначенные субстрата (вверху). Изображение страницы в б. молот расщепления рибозима внутри везикул OA/ГИО с 5 мм Mg2 +. C. активность рибозима внутри пузырьков. Линейной аппроксимации натурального логарифма соотношения количества субстрата, оставаясь на данный момент времени для первоначального количества субстрата против время в первые 4 ч. реакция, рассчитывается от склона ln (0/л) против времени, составляет 0.36 h-1. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57324/57324fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57324/57324fig4.jpg"> Рисунок 4. Везикулы гигантские жирных кислот для микроскопии. A. конфокальная микроскопия изображения PE родамин помечены олеиновой кислоты везикул, шкалы бар 10 мкм. B. конфокальная микроскопия образ олеиновой кислоты везикул, содержащих Alexa488 помечены РНК с мембраной, показано в канале передачи детектор (TD), шкалы 5 мкм.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes at JoVE.com

Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes

Липосомы, содержащие одно цепь amphiphiles, особенно жирных кислот, проявляют различные свойства, по сравнению с тех содержащие diacylphospholipids из-за уникальных химических свойств единой цепи amphiphiles. Здесь мы описываем методы для приготовления, очистки и использования липосом, состоит в части или всех этих amphiphiles.

Подготовка, очистки и использования липосомы, содержащие жирные кислоты

Liposomes containing single-chain amphiphiles, particularly fatty acids, exhibit distinct properties compared to those containing diacylphospholipids due ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

Использование прав Периваскулярная стволовых клеток для регенерации костной

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

On-chip Isotachophoresis for Separation of Ions and Purification of Nucleic Acids

On-чип изотахофореза для разделения ионов и очистки нуклеиновых кислот

Electrokinetic techniques are a staple of microscale applications because of their unique ability to perform a variety of fluidic and electrophoretic ...

Expression, Isolation, and Purification of Soluble and Insoluble Biotinylated Proteins for Nerve Tissue Regeneration

Выражение, изоляция, и очистка растворимых и нерастворимых Биотинилированные белков для нервной ткани Регенерация

Recombinant protein engineering has utilized Escherichia coli (E. coli) expression systems for nearly 4 decades, and today E. coli is still the most ...

Custom-designed Laser-based Heating Apparatus for Triggered Release of Cisplatin from Thermosensitive Liposomes with Magnetic Resonance Image Guidance

Пользовательские разработанный на основе лазера Отопление Аппарат для Triggered версии цисплатина из термочувствительного липосом с магнитно-резонансной Руководство Image

Liposomes have been employed as drug delivery systems to target solid tumors through exploitation of the enhanced permeability and retention (EPR) effect ...

Synthesis of Gold Nanoparticle Integrated Photo-responsive Liposomes and Measurement of Their Microbubble Cavitation upon Pulse Laser Excitation

Синтез наночастиц золота Интегрированный фотография проблематики липосом и измерении их микропузырьков кавитации при импульсном лазерном возбуждении

Photo-responsive nanoparticles (NPs) have received considerable attention because of their potential in providing spatial, temporal, and dosage control ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

Доставки терапевтических миРНК в ЦНС с использованием катионных и анионных липосом

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...

Use of Micro X-ray Computed Tomography with Phosphotungstic Acid Preparation to Visualize Human Fibromuscular Tissue

Использование микрорентгенй компьютерной томографии с фосхотунгстовой кислотой Препарат для визуализации человека фибромышечной ткани

Manual dissection and histological observation are common methods used to investigate human tissues. However, manual dissection can damage delicate ...

A Quantitative Fluorescence Microscopy-based Single Liposome Assay for Detecting the Compositional Inhomogeneity Between Individual Liposomes

Количественная флуоресценция на основе однолипосомы анализ для обнаружения композиционной неоднородности между отдельными липосомы

Most research employing liposomes as membrane model systems or drug delivery carriers relies on bulk read-out techniques and thus intrinsically assumes ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

Подготовка белка Производство синтетических клеток с использованием клеток бесплатные бактериальные экстракты, липосомы и эмульсии передачи

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Microfluidic Production of Lysolipid-Containing Temperature-Sensitive Liposomes

Микрофлюидическое производство лизолипид-содержащих температурно-чувствительных липосом

The presented protocol enables a high-throughput continuous preparation of low temperature-sensitive liposomes (LTSLs), which are capable of loading ...