Name: a murine pancreatic islet cell-based screening for diabetogenic environmental chemicals
Uploaded: 2018-06-25T12:30:00
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यह काम CREH केंद्र से एक पायलट परियोजना अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था NIEHS द्वारा प्रायोजित और राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा चीन (No. ३१५७२६२६) ।

सभी संबंधित दिशानिर्देशों, विनियमों और विनियामक एजेंसियों के अनुपालन में सभी पशु प्रयोगों का निष्पादन किया गया. प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया जा रहा मार्गदर्शन और संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति के ...

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	<li>Maruthur, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growing+prevalence+of+type+2+diabetes:+increased+incidence+or+improved+survival?.">The growing prevalence of type 2 diabetes: increased incidence or improved survival?.</a> Current diabetes reports. 13 (6), 786-794 (2013).</li><li>Houstis, N., Rosen, E. D., Lander, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+have+a+causal+role+in+multiple+forms+of+insulin+resistance.">Reactive oxygen species have a causal role in multiple forms of insulin resistance.</a> Nature. 440 (7086), 944-948 (2006).</li><li>Ma, Z. 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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCB126+induces+differential+changes+in+androgen,+cortisol,+and+aldosterone+biosynthesis+in+human+adrenocortical+H295R+cells.">PCB126 induces differential changes in androgen, cortisol, and aldosterone biosynthesis in human adrenocortical H295R cells.</a> Toxicological Sciences. 85 (1), 530-540 (2005).</li><li>Asahi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphenol+A+induces+endoplasmic+reticulum+stress-associated+apoptosis+in+mouse+non-parenchymal+hepatocytes.">Bisphenol A induces endoplasmic reticulum stress-associated apoptosis in mouse non-parenchymal hepatocytes.</a> Life sciences. 87 (13), 431-438 (2010).</li><li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. 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(7), e255 (2007).</li><li>Kirstetter, P., Lagneau, F., Lucas, O., Krupa, Y., Marty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+endothelium+in+the+modulation+of+isoflurane-induced+vasodilatation+in+rat+thoracic+aorta.">Role of endothelium in the modulation of isoflurane-induced vasodilatation in rat thoracic aorta.</a> British journal of anaesthesia. 79 (1), 84-87 (1997).</li><li>Brown, E., Umino, Y., Loi, T., Solessio, E., Barlow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+can+cause+sustained+hyperglycemia+in+C57/BL6J+mice.">Anesthesia can cause sustained hyperglycemia in C57/BL6J mice.</a> Visual neuroscience. 22 (5), 615-618 (2005).</li><li>Vaupel, D., McCoun, D., Cone, E. 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सबूत जमा पता चलता है कि पर्यावरण रसायनों के लिए जोखिम T2DM के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है । Xenobiotics-प्रेरित ROS एक संभावित etiological T2DM के विकास में योगदान कारक के रूप में मांयता प्राप्त किया गया है । मान?...

T2DM की व्यापकता में वृद्धि हाल के वर्षों में एक वैश्विक स्वास्थ्य संकट बन गए है सार्वजनिक स्वास्थ्य1के लिए एक गंभीर खतरा खड़ी । कई कारकों के लिए कारण T2DM के विकास से जुड़ा हो पाया गया है, जो बीच में, आवर्ती निष्कर्षों का सुझाव है कि इन कारकों के लिए एक आम अभिसरण बिंदु ऑक्सीडेटिव तनाव की प्रेरण जो अत्यधिक ROS2 की पीढ़ी की ओर जाता है , 3.
पीसीबी, डाइअॉकॉ्सिन सहित पर्यावरणीय रसायनों की एक व्यापक स्पेक्ट्रम, और BaP ऑक्सीडेटिव तनाव पैदा करने के लिए पाया गया है, जो अग्नाशय β कोशिकाओं के समारोह ख़राब कर सकते हैं और इंसुलिन प्रतिरोध और T2DM4के लिए नेतृत्व. हालांकि ROS के शारीरिक स्तर सेलुलर कार्यों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, ROS कि कोशिकाओं को नुकसान में एंटीऑक्सीडेंट प्रणाली के परिणाम की क्षमता से अधिक है/ऊतकों और रोगों की ओर जाता है5. अग्नाशय β कोशिकाओं एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम के एक निम्न स्तर व्यक्त, और इस प्रकार ऑक्सीडेटिव तनाव के लिए एक संवेदनशील लक्ष्य-6,7की मध्यस्थता नुकसान कर रहे हैं. ROS के उच्च स्तर के लिए पुरानी जोखिम तनाव प्रेरित अग्नाशय कोशिका रोग5 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से जिगर और वसा ऊतक में इंसुलिन प्रतिरोध के कारण दिखाया गया है8.
इस परियोजना का समग्र लक्ष्य एक कोशिका को विकसित करने के लिए परख के लिए अपने diabetogenic अग्नाशय कोशिकाओं में ROS की प्रेरण के आधार पर क्षमता के लिए रसायनों स्क्रीन है । अग्ंयाशय चयापचय detoxification का अभाव है और xenobiotic प्रेरित नुकसान6,7के लिए एक संवेदनशील लक्ष्य है । इसलिए, सीधे अग्नाशय कोशिकाओं में उत्पन्न ROS को मापने के द्वारा, इस परख अग्न्याशय में रासायनिक प्रेरित चोट के एक प्रत्यक्ष सन्निकटन प्रदान करना चाहिए. इस विधि को विकसित करने के लिए, हम अलग माउस अग्नाशय के टाप, रसायन के साथ कोशिका संस्कृति हालत के तहत पृथक टाप कल्चरित, और readout के रूप में रासायनिक प्रेरित ROS पीढ़ी का उपयोग किया । इस प्रक्रिया को अलग टाप में ROS उत्प्रेरण रसायनों की पहचान करने में सरल और प्रभावी है; यह और विषाक्तता के तंत्र है कि इन विट्रो मेंअग्ंयाशय के लिए विशिष्ट है की जांच के लिए विकसित किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="858">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:289px;">10&#215;Hank&#8217;s balanced salt solution&#160;</td>
			<td style="width:283px;">GIBCO</td>
			<td style="width:119px;">14185-052</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase Type 4</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>CLS-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">polysucrose/sodium diatrizoate solution&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2&#8217;,7&#8217;-dichlorofluorescein (DCFH-DA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6883-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fluorescence microplate reader&#160;</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8540-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">streptomycin</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>11875-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">avertin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat/Mouse Insulin ELISA Kit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>EZRMI-13K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sorval</td>
			<td>Sorval RT7</td>
			<td>for 96-well plate centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microplate reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td>for fluorescence reading</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine pancreatic islet cell-based screening for diabetogenic environmental chemicals

मानव और पशुओं में कुछ पर्यावरणीय रसायनों के संपर्क में अग्नाशय β कोशिकाओं के सेलुलर नुकसान का कारण पाया गया है जो टाइप 2 मधुमेह (T2DM) के विकास के लिए नेतृत्व करेंगे । हालांकि रासायनिक के लिए तंत्र-प्रेरित β कोशिका क्षति अस्पष्ट और जटिल होने की संभावना थे, एक आवर्ती खोज है कि इन रसायनों ऑक्सीडेटिव तनाव अत्यधिक प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) जो नुकसान के लिए प्रेरित की पीढ़ी के लिए अग्रणी प्रेरित β कक्ष. संभावित diabetogenic पर्यावरणीय रसायनों की पहचान करने के लिए, हम C57BL/6 चूहों और ९६-well सेल कल्चर प्लेटों में कल्चरल टाप सेल से अग्नाशय टाप कोशिकाओं अलग; इसके बाद, टाप कोशिकाओं को रसायनों से खुराक दी गई और ROS जनरेशन को 2 ', 7 '-dichlorofluorescein (DCFH-DA) फ्लोरोसेंट डाई का पता चला । इस विधि का प्रयोग, हमने पाया है कि bisphenol एक (BPA), Benzo [एक] pyrene (BaP), और polychlorinated biphenyls (पीसीबी), ROS के उच्च स्तर को प्रेरित कर सकता है, सुझाव है कि वे संभवतः टाप कोशिकाओं में नुकसान पैदा कर सकता है. यह विधि diabetogenic xenobiotics को परखने के लिए उपयोगी होनी चाहिए । इसके अलावा, संस्कृतिक टाप कोशिकाओं को भी इन विट्रो में अग्नाशय कोशिकाओं में रासायनिक प्रेरित विषाक्तता के विश्लेषण के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।

स्वस्थ पृथक टाप का एक micrograph चित्रा 2में दिखाया गया है, जिसमें टाप अपेक्षाकृत समान आकार के साथ गोल या अंडाकार आकार के होते हैं (हालांकि आकार एकरूपता तनाव से तनाव में भिन्न हो सकती है)...

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A Murine Pancreatic Islet Cell-based Screening for Diabetogenic Environmental Chemicals

यहां हम xenobiotics द्वारा ROS प्रेरण स्क्रीनिंग के लिए माउस अग्नाशय टाप कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत क्रम में संभावित diabetogenic xenobiotic रसायनों की पहचान करने के लिए ।

Diabetogenic पर्यावरणीय रसायनों के लिए एक Murine अग्नाशय टाप सेल आधारित स्क्रीनिंग

Exposure to certain environmental chemicals in human and animals has been found to cause cellular damage of the pancreatic &#946; cells which will lead to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A New Screening Method for the Directed Evolution of Thermostable Bacteriolytic Enzymes

निर्देशित थर्मास्टाइबल जीवाणुलयनी एंजाइमों के विकास के लिए एक नई स्क्रीनिंग पद्धति

Directed evolution is defined as a method to harness natural selection in order to engineer proteins to acquire particular properties that are not ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

अलगाव, पहचान, और murine Thymic उपकला कोशिकाओं के शोधन

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

पर्यावरण के नमूनों से नई Faustoviruses के अलगाव का उपयोग के लिए एक तेजी रणनीति<em&gt; Vermamoeba vermiformis</em

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant ...

Developing a Salivary Antibody Multiplex Immunoassay to Measure Human Exposure to Environmental Pathogens

एक लार एंटीबॉडी मल्टीप्लेक्स Immunoassay का विकास पर्यावरण रोगजनकों के लिए मानव एक्सपोजर को मापने के लिए

The etiology and impacts of human exposure to environmental pathogens are of major concern worldwide and, thus, the ability to assess exposure and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

एक प्रतिदीप्ति आधारित लिम्फोसाइट परख छोटे अणुओं के उच्च throughput स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

A Method to Test the Efficacy of Handwashing for the Removal of Emerging Infectious Pathogens

उभरते संक्रमित रोगजनकों को हटाने के लिए हाथ धोने की प्रभावकारीता का परीक्षण करने के लिए एक विधि

Handwashing is widely recommended to prevent infectious disease transmission. However, little comparable evidence exists on the efficacy of handwashing ...

Electrochemiluminescence Assays for Human Islet Autoantibodies

मानव टाप एंटीबॉडी के लिए Electrochemiluminescence परख

Pinpointing islet autoantibodies associated with type 1 diabetes (T1D) leads the way to project and deter this disease in the general population. A novel ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

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साल्मोनेला एसपीपी की स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च प्रवाह मंच./शिगेला एसपीपी.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Arbovirus Infections As Screening Tools for the Identification of Viral Immunomodulators and Host Antiviral Factors

वायरल Immunomodulators और मेजबान एंटीवायरल कारकों की पहचान के लिए स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में Arbovirus संक्रमण

RNA interference- and genome editing-based screening platforms have been widely used to identify host cell factors that restrict virus replication. ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

लसीका Endothelial कोशिकाओं के एक प्रवाह Cytometric विश्लेषण के लिए Murine जिगर के पाचन

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...