Name: micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes
Uploaded: 2018-10-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes at JoVE.com

ونحن نشكر جيسيكا قاعة لمناقشة قيمة لها.

1-إعداد ثقافة الخلية الأولية Spermatocyte الحشرات ميكرومانيبوليشن
<ol><li>إعداد الشرائح<ol>
<li>الحصول على شريحة زجاجية 75 مم × 25 مم مع فتحه دائرية قطرها 20 ملم قطع في وسط الشريحة. ملاحظة: هذه قطعت من ورقة واحدة من زجاج النوافذ ليكون بحجم شريحة زجاجية مع وجود ثقب في الوسط.</li>
		<li>تشغيل ساترة 25 مم × 25 مم #1.5...

<ol>
	<li>Chambers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+II.+The+cell+aster:+a+reversible+gelation+phenomenon.">Microdissection studies II. The cell aster: a reversible gelation phenomenon.</a> Journal of Experimental Zoology. 23 (3), 483-505 (1917).</li><li>Carlson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+of+the+dividing+neuroblast+of+the+grasshopper,+Chortophaga+viridifasciata.">Microdissection studies of the dividing neuroblast of the grasshopper, Chortophaga viridifasciata.</a> Chromosoma. 5 (3), 199-220 (1952).</li><li>Nicklas, R. B., Staehly, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+I.+The+mechanics+of+chromosome+attachment+to+the+spindle.">Chromosome micromanipulation. I. The mechanics of chromosome attachment to the spindle.</a> Chromosoma. 21 (1), 1-16 (1967).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+II.+Induced+reorientation+and+the+experimental+control+of+segregation+in+meiosis.">Chromosome micromanipulation. II. Induced reorientation and the experimental control of segregation in meiosis.</a> Chromosoma. 21 (1), 17-50 (1967).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+3.+Spindle+fiber+tension+and+the+reorientation+of+mal-oriented+chromosomes.">Chromosome micromanipulation. 3. Spindle fiber tension and the reorientation of mal-oriented chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 43 (1), 40-50 (1969).</li><li>Nicklas, R. B., Ward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elements+of+error+correction+in+mitosis:+microtubule+capture,+release,+and+tension.">Elements of error correction in mitosis: microtubule capture, release, and tension.</a> Journal of Cell Biology. 126 (5), 1241-1253 (1994).</li><li>Li, X., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+forces+control+a+cell-cycle+checkpoint.">Mitotic forces control a cell-cycle checkpoint.</a> Nature. 373 (6515), 630-632 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+the+force+produced+by+the+mitotic+spindle+in+anaphase.">Measurements of the force produced by the mitotic spindle in anaphase.</a> Journal of Cell Biology. 97 (2), 542-548 (1983).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forces+that+move+chromosomes+in+mitosis.">The forces that move chromosomes in mitosis.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 17, 431-449 (1988).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+IV.+Polarized+motions+within+the+spindle+and+models+for+mitosis.">Chromosome micromanipulation. IV. Polarized motions within the spindle and models for mitosis.</a> Chromosoma. 39 (1), 1026 (1972).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+chromosomes+and+centrosomes+on+spindle+assembly+as+observed+in+living+cells.">The impact of chromosomes and centrosomes on spindle assembly as observed in living cells.</a> Journal of Cell Biology. 129 (5), 1287-1300 (1995).</li><li>Nicklas, R. B., Lee, G. M., Rieder, C. L., Rupp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+cut+mitotic+spindles:+clean+cuts+and+stable+microtubules.">Mechanically cut mitotic spindles: clean cuts and stable microtubules.</a> Journal of Cell Science. 94 (Pt 3), 415-423 (1989).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomes+initiate+spindle+assembly+upon+experimental+dissolution+of+the+nuclear+envelope+in+grasshopper+spermatocytes.">Chromosomes initiate spindle assembly upon experimental dissolution of the nuclear envelope in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Biology. 131 (5), 1125-1131 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+distribution:+experiments+on+cell+hybrids+and+in+vitro.">Chromosome distribution: experiments on cell hybrids and in vitro.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London B. 227 (955), 267-276 (1977).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reduction+of+chromosome+number+in+meiosis+is+determined+by+properties+built+into+the+chromosomes.">The reduction of chromosome number in meiosis is determined by properties built into the chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 150 (6), 1223-1232 (2000).</li><li>Church, K., Nicklas, R. B., Lin, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulated+bivalents+can+trigger+mini-spindle+formation+in+Drosophilamelanogaster+spermatocyte+cytoplasm.">Micromanipulated bivalents can trigger mini-spindle formation in Drosophilamelanogaster spermatocyte cytoplasm.</a> Journal of Cell Biology. 103 (6), 2765-2773 (1986).</li><li>Forer, A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+autosome+movements+and+of+sex-chromosome+movements+on+sex-chromosome+segregation+in+crane+fly+spermatocytes.">Influence of autosome movements and of sex-chromosome movements on sex-chromosome segregation in crane fly spermatocytes.</a> Chromosoma. 40 (4), 417-442 (1973).</li><li>Camenzind, R., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-random+chromosome+segregation+in+spermatocytes+of+Gryllotalpa+hexadactyla.+A+micromanipulation+analysis.">The non-random chromosome segregation in spermatocytes of Gryllotalpa hexadactyla. A micromanipulation analysis.</a> Chromosoma. 24 (3), 324-335 (1968).</li><li>Ault, J. G., Felt, K. D., Doan, R. N., Nedo, A. O., Ellison, C. A., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-segregation+of+sex+chromosomes+in+the+male+black+widow+spider+Latrodectus+mactans+(Araneae,+Theridiidae).">Co-segregation of sex chromosomes in the male black widow spider Latrodectus mactans (Araneae, Theridiidae).</a> Chromosoma. 126 (5), 645-654 (2017).</li><li>Felt, K. D., Lagerman, M. B., Ravida, N. A., Qian, L., Powers, S. R., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+the+amphitelically+attached+univalent+X+chromosome+in+the+spittlebug+Philaenus+spumarius.">Segregation of the amphitelically attached univalent X chromosome in the spittlebug Philaenus spumarius.</a> Protoplasma. 254 (6), 2263-2271 (2017).</li><li>Golding, A. E., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotype,+sex+determination,+and+meiotic+chromosome+behavior+in+two+pholcid+(Araneomorphae,+Pholcidae)+spiders:+implications+for+karyotype+evolution.">Karyotype, sex determination, and meiotic chromosome behavior in two pholcid (Araneomorphae, Pholcidae) spiders: implications for karyotype evolution.</a> PLoS One. 6, e24748 (2011).</li><li>Doan, R. N., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+reveals+an+XO-XX+sex+determining+system+in+the+orb-weaving+spider+Neoscona+arabesca+(Walckenaer).">Micromanipulation reveals an XO-XX sex determining system in the orb-weaving spider Neoscona arabesca (Walckenaer).</a> Hereditas. 146 (4), 180-182 (2009).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+chromosomes+reveals+that+cohesion+release+during+cell+division+is+gradual+and+does+not+require+tension.">Micromanipulation of chromosomes reveals that cohesion release during cell division is gradual and does not require tension.</a> Current Biology. 14 (23), 2124-2129 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology Micromanipulator. DIY High Precision Micromanipulator. , (2018).</li><li>Ellis, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+micromanipulators.">Piezoelectric micromanipulators.</a> Science. 138 (3537), 84-91 (1962).</li><li>Ellis, G. W., Begg, D. A., Zimmerman , . A. M., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation+studies.">Chromosome micromanipulation studies.</a> Mitosis/Cytokinesis. , 155-179 (1981).</li><li>Powell, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microforge+attachment+for+the+biological+microscope.">A microforge attachment for the biological microscope.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 72 (4), 214-217 (1953).</li><li>Alsop, G. B., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubules+continuously+dictate+distribution+of+actin+filaments+and+positioning+of+cell+cleavage+in+grasshopper+spermatocytes.">Microtubules continuously dictate distribution of actin filaments and positioning of cell cleavage in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Science. 117 (Pt 8), 1591-1602 (2004).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaphase'+and+cytokinesis+in+the+absence+of+chromosomes.">Anaphase' and cytokinesis in the absence of chromosomes.</a> Nature. 382, 466-468 (1996).</li></ol>

مع الممارسة، تتحرك الكروموسومات في الخلية يمكن أن تصبح طبيعة ثانية. الإبر التي تكون شديدة بما فيه الكفاية ورقيقة ذات الرؤوس بما فيه الكفاية من الصعب على "الحصول على براعة من" اختﻻق، ولكن هذه القدرة كما يأتي مع الممارسة. الإبر التي على ما يرام حتى أنها تشوه عند نقل النفط الهالوكربون لن يكون ...

وكشفت ميكرومانيبوليشن أجزاء إليه كونجريشن كروموسوم، وحاجز المغزل، وحركات كروموسوم طور الصعود. وكان المنشور أقرب وصف نتائج التجارب ميكرومانيبوليشن روبرت تشامبرز1. استخدام الدوائر ميكرومانيبولاتور ميكانيكية مع إبرة زجاج مرفقة التحقيق في السيتوبلازم لعدد من أنواع مختلفة من الخلايا. ولسوء الحظ، تباين الأساليب التي يسمح التصور من الكروموسومات والعديد من المكونات الخلوية الأخرى في الخلايا الحية لم تكن متاحة في ذلك الوقت، حيث لا تستطيع أن تثبت التجارب الدوائر آثار إعادة تموضع هذه المكونات الخلوية. ميكرومانيبوليشنز المبكر التي غيرت موقف كروموسوم يستخدم جهاز الدوائر لاكتساح ميدزوني المغزل في طور الصعود الخلايا، تبين أن مثل هذه المعالجات يمكن أن تغير موقف كروموسوم الأسلحة في طور الصعود جندب نيوروبلاستس2 . نيكلاس ومعاونيه كانوا الأول من أداء غرامة ميكرومانيبوليشنز من الكروموسومات، تمتد الكروموسومات3، وفصل لهم من محور الدوران والحث إعادة توجيه3،4، استقرار مالورينتيشن تطبيق التوتر إلى الكروموسومات6،،من57، وقياس القوى المنتجة بمغزل في طور الصعود8،9. أعمال أخرى بالمعمل نيكلاس أظهرت أيضا أن حبيبات هيولى التلاعب10 وأن سينتروسوميس يمكن أن تكون إعادة ميكرومانيبوليشن11. ميكرومانيبوليشن ليست مفيدة فقط لنقل الكروموسومات والمكونات الخلوية الأخرى. يمكن قطع نظيفة من خلال مغزل الانقسامية في الخلايا ديميمبراناتيد12 إبرة ميكرومانيبوليشن أو يمكن استخدامها لحل المغلف النووية13. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن تنصهر فيها الخلايا المتجاورة ميكرومانيبوليشن14،15.
مع طائفة واسعة من التجارب المثيرة للاهتمام التي يمكن القيام به باستخدام ميكرومانيبوليشن، فمن المدهش للوهلة الأولى أن ميكرومانيبوليشن تجارب أجريت بعدد قليل جداً من علماء الأحياء كروموسوم. أحد أسباب هذا القصور هو أن تقسيم ميتوتيكالي الخلايا المستزرعة التي مشتقة من الأنسجة الفقاريات وتستخدم عادة لدراسة الحركات كروموسوم صعبة للغاية في ميكرومانيبولاتي. عموما لديهم هذه الخلايا زراعة الأنسجة سيتوسكيليتون القشرية أن "يحصل في الطريق" من ميكرومانيبوليشن إبرة، والكروموسومات أما لا يمكن الوصول بالإبرة أو يطحن الإبرة عن طريق الخلية، مما يؤدي إلى تمزق الخلايا والموت. ونحن، والأخرى المجربون الذين يستخدمون ميكرومانيبوليشن، وجدت الخلايا المفصلية لتكون قابلة ميكرومانيبوليشن. وتنتشر بسهولة تحت طبقة النفط الهالوكربون spermatocytes المفصلية ويبدو cytoskeleton القشرية أقل بكثير من قوي الكامنة وراء غشاء الخلية أثناء تقسيم الخلية. وهكذا، الخصيتين المفصلية توفر مصدرا جيدا لخلايا تقسيم ميوتيكالي (سبيرماتوسيتيس) وميتوتيكالي تقسيم الخلايا (سبيرماتوجونيا) مع الكروموزومات يمكن الوصول بسهولة ميكرومانيبوليشن. تقطيع المسلسل من spermatocyte جندب ثابت خلال تلاعب كشفت أن الإبرة ابدأ تخترق غشاء الخلية؛ تبعثر غشاء الخلية حول الإبرة (نيكلاس سنغ، اتصال شخصي). سبيرماتوسيتيس من عدد من الأصناف العنكبوت والحشرات، وقد تم ميكرومانيبولاتيد بنجاح، بما في ذلك الجنادب، mantids الصلاة وذباب الفاكهة، رافعة الذباب، الصراصير، سبيتليبوجس، العث، العناكب الأرملة السوداء، عناكب القبو والجرم السماوي نسج العناكب 37،،،من1719،18،20،،من2122. يمكن أن تكون الخلايا المستزرعة، وتقسيم ميتوتيكالي من الحشرات ميكرومانيبولاتيد. على سبيل المثال، قد الكروموسومات في neuroblasts جندب في ثقافة الابتدائي الكروموسومات التي يمكن بسهولة ميكرومانيبولاتيد2،23. أننا نشتبه في أنه مثقف تتوفر خطوط المستمدة من المورفولوجية والحشرات الأخرى سوف تكون أيضا ميكرومانيبولاتابل، على الرغم من أننا لم تختبر هذه التقنية مع هذه الخلايا. ونحن سوف تظهر كيف يمكن إعداد تقسيم الخلايا من الجنادب والصراصير ميكرومانيبوليشن. الصراصير سهلة للحصول على معظم محلات الحيوانات الأليفة في أي وقت من السنة. الجنادب فقط التي يمكن الحصول عليها بسهولة في الصيف إلا إذا كان الباحث الوصول إلى مستعمرة مختبر، ولكن الأنواع المستخدمة (سانجوينيبيس ميلانوبلوس) وقد سويت بالأرض بسهولة الخلايا والكروموسومات طويلة، وسهلة للتعامل.
وهناك سبب آخر لماذا فعلت التجارب ميكرومانيبوليشن حفنة صغيرة من علماء الأحياء هو أن ميكرومانيبولاتورس أن تتحرك الكروموسومات نادراً ما تتوفر في السوق. وقد وجدنا أن يتحكم ميكرومانيبولاتور كهرضغطية جويستيك تسيطر حركة إبرة مع لا اهتزاز أو الانجراف الفاصلة بين الإبرة وحركة المقود، ولكن يمكن دفع أنواع أخرى من المتلاعبين بنجاح أيضا الكروموسومات حولها في الخلية. ميكرومانيبولاتورس صممه إيليس وبيج25،26 تعتبر مثالية ميكرومانيبوليشن الكروموسومات، على الرغم من أنها تستخدم تكنولوجيا قديمة. ميكرومانيبولاتورس كهرضغطية المتوفرة حاليا والمستخدمة عادة في الكهربية؛ ومع ذلك، ليست هذه ميكرومانيبولاتورس عادة ما تسيطر عليها جويستيك. عصا التحكم هو المفتاح لحركات سلسة المطلوبة من أجل ميكرومانيبوليشن نجاح، وحتى ينبغي تشييد جويستيك مخصصة لجعل ميكرومانيبولاتورس كهرضغطية متاحة في الوقت الراهن العمل من أجل ميكرومانيبوليشن كروموسوم. وقد ميكرومانيبولاتورس كهرضغطية تسيطر على عصا التحكم التي تعمل بشكل أفضل مراقبة الموقف المباشر، الذي يترجم حركة الجويستيك مباشرة إلى حركة إبرة.
يمكن بناؤها ميكرومانيبولاتور كهرضغطية المصممة حديثا من أجزاء المتاحة تجارياً التي يمكن استبدالها بسهولة، ومن بعض المكونات المطبوعة ثلاثي الأبعاد الصغيرة، وأنه يعمل بشكل جيد كروموسوم ميكرومانيبوليشن24. وقد ميكرومانيبولاتور حساسية قابلة للضبط أو دليل المواقع الخشنة، ولا الاهتزاز، والانجراف أو متخلفة في حركة الإبرة، ومراقبة الموقف المباشر من الإبرة. يمكن للعلماء بناء ميكرومانيبولاتور استخدام الإرشادات المتوفرة على الإنترنت24. وفيما يلي الطرق لإعداد ثقافة خلية الأولية سبيرماتوسيتي وميكرومانيبولاتينج الكروموسومات داخل الخلايا في تلك الثقافة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">VWR micro cover glass</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48366 249</td>
			<td style="width:167px;">25x25 mm, no 1.5</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dow Corning High Vacuum Grease</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td>AA44224-KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">KEL-F Oil #10</td>
			<td style="width:71px;">Ohio Valley Specialty Chemical</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microdissecting Scissors, Stainless Steel</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3271-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont #5 fine foreceps</td>
			<td style="width:71px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">0.85 mm outer diameter, 0.65 mm inner diameter Pyrex glass tube&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Drummond Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Custom order--call to request</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Inverted, Phase contrast microscope with 10X or 16X low magnification objective and 60X or 100X high magnification objective</td>
			<td style="width:71px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">microforge</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Narashige</td>
			<td style="width:119px;">MF-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:216px;">micromanipulator</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Burleigh PCS-6000 with custom piezo-controlling joystick</td>
			<td style="width:119px;">PCS-6300</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes

ميكرومانيبوليشن الكروموزومات كانت وسيلة أساسية لإلقاء الضوء على إليه كونجريشن كروموسوم، وحاجز المغزل، وحركات كروموسوم طور الصعود، وكان مفتاح لفهم ما هي الضوابط حركات كروموسوم خلال تقسيم الخلية. يمكن استخدام بيولوجي مهرة ميكرومانيبولاتور لفصل الكروموسومات من محور الدوران، لإعادة تعيين موضع الكروموزومات داخل الخلية، وتطبيق القوات على الكروموسومات باستخدام إبرة زجاجية صغيرة مع تلميح جيد جداً. بينما يمكن جعل اضطرابات الكروموسومات باستخدام أساليب أخرى مثل تعويض بصري واستخدامات أخرى لليزر، حتى الآن، لا توجد طريقة أخرى يسمح إعادة تنظيم المكونات الخلوية بمقياس من عشرات إلى مئات ميكرون مع قليل من أي ضرر للخلية .
يتم اختيار وإعداد الخلايا المناسبة ميكرومانيبوليشن الكروموسومات، تصف على وجه التحديد إعداد جندب والكريكيت spermatocyte الثقافات الأولية لاستخدامها في تصوير خلية يعيش وميكرومانيبوليشن، ووصف هنا. وباﻹضافة إلى ذلك، نعرض بناء إبرة لاستخدامها لنقل الصبغيات داخل الخلية، واستخدام ميكرومانيبولاتور كهرضغطية تسيطر جويستيك بإبرة زجاجية الملحقة بها لتغيير موضع الكروموسومات داخل تقسيم الخلايا. ويظهر عينة نتيجة استخدام ميكرومانيبولاتور لفصل كروموسوم من مغزل في سبيرماتوسيتي الأولية وتغيير موضع هذا الكروموسوم داخل الخلية.

ويبين الشكل 6 ميكرومانيبوليشن عينة من 2 جندب المتاخمة سبيرماتوسيتيس الأولية في عدة أمثلة للاستخدامات الممكنة ميكرومانيبوليشن. هذه التجربة تم استخدام مجهر تباين مرحلة مقلوب،. 0:00 (أوقات سيظهر في min:s) تظهر الصورة كلا الخليتين قبل التلاعب. ويرد كروموسوم واحد ...

Watch this Scientific Journal Video about Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes at JoVE.com

Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes

يصف لنا في هذا البروتوكول، واختيار وإعداد الخلايا المناسبة ميكرومانيبوليشن واستخدام ميكرومانيبولاتور كهرضغطية لتغيير موضع الكروموسومات داخل تلك الخلايا.

ميكرومانيبوليشن الكروموسومات في سبيرماتوسيتيس الحشرات

The micromanipulation of chromosomes has been an essential method for illuminating the mechanism for chromosome congression, the spindle checkpoint, and ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في بيولوجيا الخلايا ، مثل ، ما مدى أهمية التوتر في إرضاء نقطة التفتيش المغزل ، وما هو الدور على مرفق المغزل في سلوك الكروموسوم في الميزوز؟ الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تقنية غير هتكية تسمح للمجرب بتطبيق التوتر على أو إعادة وضع الكروموسومات في خلية حية. للبدء، إعداد شريحة 75 في 25 ملليمتر مع ثقب دائري قطره 20 ملليمتر قطع من المركز.ثم، تشغيل 25 في 25 ملليمتر عدد 1.5 غطاء شق من خلال لهب ناسخ bunsen لمدة ثانيتين. تطبيق الشحوم فراغ حول حافة الثقب في الشريحة الزجاجية. بعد ذلك، ضع زلة الغطاء فوق الحفرة واضغط عليها لتشكيل ختم محكم.الوجه أكثر من الشريحة، وملء تشريح خلق حديثا جيدا مع زيت الهالوكربون. بعد الحصول على بعض الصرصار الذكور الكبار، واستخدام مقص تشريح لقطع من خلال سطح الظهر موازية للمحور الطويل من البطن، مباشرة وراء براعم الجناح. ثم، والضغط بلطف البطن لدفع الخصية من خلال قطع في الهيكل الخارجي.باستخدام ملقط، ضع الخصيات المعزولة في تشريح جيدا. تحت المجهر تشريح، واستخدام ملقط دقيقة لافتا لتقسيم الخصيات إلى قطع أصغر، وإزالة أي الدهون. ثم، انتشار محتويات الخصيات تحت النفط على سطح فتحة الغطاء.الاستمرار في نشر محتويات الخصية حتى جزء انتشار بالكاد مرئية للعين المجردة. ويمكن استخدام آبار تشريح إضافية محملة بالزيت إذا لزم الأمر. أولا، ضع نهاية أنبوب زجاجي في شعلة شعلة بونسن.عقد نهاية أنابيب لإنشاء زاوية 150 درجة ومساحة ممتدة من أنابيب الزجاج الضيقة. كسر الأنابيب في منطقة رقيقة بحيث منطقة رقيقة تمتد من زاوية تم إنشاؤها سابقا هو ما يقرب من 10 ملليمترات طويلة. باستخدام الفروغ، تذوب غيض من إبرة الزجاج، وتشكيل زاوية 45 درجة بين الإبرة والأسلاك البلاتينية من microforge.ثم، سحب الزجاج بعيدا عن السلك في حين إيقاف الحرارة في وقت واحد. ضع الشريحة المعدة مسبقًا على خشبة مسرح مجهر تباين المرحلة المقلوب. ثم، ابحث عن الخلايا المقسمة وتوسطها في مجال الرؤية باستخدام أقل التكبير الممكنة.ضع المايكرويندل في حامل الإبرة من المايكروmanipulator. ثم، ضع الميكرون يدوياً في مسار الضوء من المجهر. التركيز على المجهر عدة طائرات التركيز فوق الطائرة التي تحتوي على الخلايا.بعد ذلك، استخدم جهاز التحكم جويستيك لإعادة وضع microneedle عدة مرات للعثور على ظل الإبرة في محاور س وص. تعديل موقف إبرة حتى موقف من طرف مرئيا، ثم، وضبط موقف الإبرة على طول محور z حتى تلميح هو في التركيز. بعد ذلك، إعادة التركيز على الخلايا، والتركيز على المجهر فقط فوق مستوى الخلية.ثم، إعادة ضبط موقف الإبرة بحيث تلميح هو في التركيز في هذه الطائرة البؤري. كرر هذه العملية باستخدام هدف التكبير الأعلى وإعداد حساسية أعلى. إعادة التركيز على الخلايا، وضبط موقفها، حتى أنها تبقى في وسط مجال الرؤية.استخدم عصا التحكم للتحكم في المايكرويندلة كما أنه يدفع الكروموسومات حول داخل الخلية. تأكد من أن طرف الإبرة يبقى في الطائرة فوق الخلايا. لتحريك الكروموسوم، ركز على كروموسوم بالقرب من أعلى الخلية.ثم، ضبط محور z على عصا التحكم لتحقيق تلميح إبرة في التركيز، وتحريك الإبرة مع عصا التحكم في س و ص. ضع طرف الإبرة مباشرة على الكروموسوم من الفائدة، ودفعها في الاتجاه المطلوب. تطبيق ما يكفي من التوتر لفصل الكروموسوم من المغزل.وأخيراً، ضع الكروموسوم في أي مكان داخل الخلية. باستخدام هذا البروتوكول، فمن الممكن لإعادة وضع، وتطبيق التوتر على، وفصل تماما كروموسوم من المغزل باستخدام micromanipulation. في هذا المثال، تم الاحتفاظ باثنين من الكروموسومات التلاعب من إعادة ربط إلى المغزل من خلال دفع باستمرار مع إبرة micromanipulation.مرة واحدة يتقن، يمكن إعداد العينات للتلاعب، ويمكن وضع micromanipulator في 15 إلى 20 دقيقة. يمكن أن تستغرق تجارب الميكرمانيبيشن في أي مكان من بضع ثوان إلى عدة ساعات. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تتلاعب بالصبغيات على جانب الخلية البعيدة عن زلة الغطاء.بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال بيولوجيا الخلايا لاستكشاف نقطة تفتيش المغزل في الجنادب والصلاة.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

مقاربة Optogenetic لتقييم تشكيل الوصلات العصبية في نظام المشارك الثقافة

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

تحليل الزرد اليرقات الهيكل العظمي النزاهة العضلات مع ايفانز الأزرق صبغ

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

تقنية لاستهداف حقن مكروي إلى البلدان النامية<em&gt; القيطم</em&gt; الكلى

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

تحليل المكاني والزماني لأحدث إرك في<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; الخط الجرثومي

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

تشريح وتلطيخ إيممونوفلوريسسينت للفطر الجسم وعلم الخلايا العصبية في أدمغة البالغين melanogaster المورفولوجية

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

تطبيق [رني] والحرارة الناجمة عن صدمة "التعبير عامل النسخ" إلى "إعادة برمجة الخلايا الجرثومية" إلى الخلايا العصبية في C. ايليجانس

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

خلية "التجميع فحوصات" لتقييم ربط الشق المورفولوجية مع ترانس-يغاندس وتثبيط عن طريق رابطة الدول المستقلة-يغاندس

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

تصور بالعقدة ولوحة نوتوتشوردال في جاسترولاتينج الأجنة الماوس باستخدام الميكروسكوب الإلكتروني المسح وكله جبل الفلورة

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

نموذج تأثير القشرية الخاضعة للرقابة لإصابة الدماغ الماوس مع زرع العلاجية من الخلايا العصبية المستمدة من الخلايا الجذعية المتعددة القوى التي يسببها الإنسان

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...