Name: micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes
Uploaded: 2018-10-22T12:30:00
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हम उसे मूल्यवान चर्चा के लिए जेसिका हॉल धंयवाद ।

1. Micromanipulation के लिए प्राथमिक कीट Spermatocyte सेल कल्चर की तैयारी
<ol><li>स्लाइड तैयारी<ol>
<li>एक 20 मिमी व्यास परिपत्र छेद स्लाइड के केंद्र में बाहर कट के साथ एक ७५ मिमी x 25 मिमी ग्लास स्लाइड प्राप्त करें । नोट: ये खिड़की कां?...

<ol>
	<li>Chambers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+II.+The+cell+aster:+a+reversible+gelation+phenomenon.">Microdissection studies II. The cell aster: a reversible gelation phenomenon.</a> Journal of Experimental Zoology. 23 (3), 483-505 (1917).</li><li>Carlson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+of+the+dividing+neuroblast+of+the+grasshopper,+Chortophaga+viridifasciata.">Microdissection studies of the dividing neuroblast of the grasshopper, Chortophaga viridifasciata.</a> Chromosoma. 5 (3), 199-220 (1952).</li><li>Nicklas, R. B., Staehly, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+I.+The+mechanics+of+chromosome+attachment+to+the+spindle.">Chromosome micromanipulation. I. The mechanics of chromosome attachment to the spindle.</a> Chromosoma. 21 (1), 1-16 (1967).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+II.+Induced+reorientation+and+the+experimental+control+of+segregation+in+meiosis.">Chromosome micromanipulation. II. Induced reorientation and the experimental control of segregation in meiosis.</a> Chromosoma. 21 (1), 17-50 (1967).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+3.+Spindle+fiber+tension+and+the+reorientation+of+mal-oriented+chromosomes.">Chromosome micromanipulation. 3. Spindle fiber tension and the reorientation of mal-oriented chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 43 (1), 40-50 (1969).</li><li>Nicklas, R. B., Ward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elements+of+error+correction+in+mitosis:+microtubule+capture,+release,+and+tension.">Elements of error correction in mitosis: microtubule capture, release, and tension.</a> Journal of Cell Biology. 126 (5), 1241-1253 (1994).</li><li>Li, X., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+forces+control+a+cell-cycle+checkpoint.">Mitotic forces control a cell-cycle checkpoint.</a> Nature. 373 (6515), 630-632 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+the+force+produced+by+the+mitotic+spindle+in+anaphase.">Measurements of the force produced by the mitotic spindle in anaphase.</a> Journal of Cell Biology. 97 (2), 542-548 (1983).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forces+that+move+chromosomes+in+mitosis.">The forces that move chromosomes in mitosis.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 17, 431-449 (1988).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+IV.+Polarized+motions+within+the+spindle+and+models+for+mitosis.">Chromosome micromanipulation. IV. Polarized motions within the spindle and models for mitosis.</a> Chromosoma. 39 (1), 1026 (1972).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+chromosomes+and+centrosomes+on+spindle+assembly+as+observed+in+living+cells.">The impact of chromosomes and centrosomes on spindle assembly as observed in living cells.</a> Journal of Cell Biology. 129 (5), 1287-1300 (1995).</li><li>Nicklas, R. B., Lee, G. M., Rieder, C. L., Rupp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+cut+mitotic+spindles:+clean+cuts+and+stable+microtubules.">Mechanically cut mitotic spindles: clean cuts and stable microtubules.</a> Journal of Cell Science. 94 (Pt 3), 415-423 (1989).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomes+initiate+spindle+assembly+upon+experimental+dissolution+of+the+nuclear+envelope+in+grasshopper+spermatocytes.">Chromosomes initiate spindle assembly upon experimental dissolution of the nuclear envelope in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Biology. 131 (5), 1125-1131 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+distribution:+experiments+on+cell+hybrids+and+in+vitro.">Chromosome distribution: experiments on cell hybrids and in vitro.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London B. 227 (955), 267-276 (1977).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reduction+of+chromosome+number+in+meiosis+is+determined+by+properties+built+into+the+chromosomes.">The reduction of chromosome number in meiosis is determined by properties built into the chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 150 (6), 1223-1232 (2000).</li><li>Church, K., Nicklas, R. B., Lin, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulated+bivalents+can+trigger+mini-spindle+formation+in+Drosophilamelanogaster+spermatocyte+cytoplasm.">Micromanipulated bivalents can trigger mini-spindle formation in Drosophilamelanogaster spermatocyte cytoplasm.</a> Journal of Cell Biology. 103 (6), 2765-2773 (1986).</li><li>Forer, A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+autosome+movements+and+of+sex-chromosome+movements+on+sex-chromosome+segregation+in+crane+fly+spermatocytes.">Influence of autosome movements and of sex-chromosome movements on sex-chromosome segregation in crane fly spermatocytes.</a> Chromosoma. 40 (4), 417-442 (1973).</li><li>Camenzind, R., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-random+chromosome+segregation+in+spermatocytes+of+Gryllotalpa+hexadactyla.+A+micromanipulation+analysis.">The non-random chromosome segregation in spermatocytes of Gryllotalpa hexadactyla. A micromanipulation analysis.</a> Chromosoma. 24 (3), 324-335 (1968).</li><li>Ault, J. G., Felt, K. D., Doan, R. N., Nedo, A. O., Ellison, C. A., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-segregation+of+sex+chromosomes+in+the+male+black+widow+spider+Latrodectus+mactans+(Araneae,+Theridiidae).">Co-segregation of sex chromosomes in the male black widow spider Latrodectus mactans (Araneae, Theridiidae).</a> Chromosoma. 126 (5), 645-654 (2017).</li><li>Felt, K. D., Lagerman, M. B., Ravida, N. A., Qian, L., Powers, S. R., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+the+amphitelically+attached+univalent+X+chromosome+in+the+spittlebug+Philaenus+spumarius.">Segregation of the amphitelically attached univalent X chromosome in the spittlebug Philaenus spumarius.</a> Protoplasma. 254 (6), 2263-2271 (2017).</li><li>Golding, A. E., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotype,+sex+determination,+and+meiotic+chromosome+behavior+in+two+pholcid+(Araneomorphae,+Pholcidae)+spiders:+implications+for+karyotype+evolution.">Karyotype, sex determination, and meiotic chromosome behavior in two pholcid (Araneomorphae, Pholcidae) spiders: implications for karyotype evolution.</a> PLoS One. 6, e24748 (2011).</li><li>Doan, R. N., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+reveals+an+XO-XX+sex+determining+system+in+the+orb-weaving+spider+Neoscona+arabesca+(Walckenaer).">Micromanipulation reveals an XO-XX sex determining system in the orb-weaving spider Neoscona arabesca (Walckenaer).</a> Hereditas. 146 (4), 180-182 (2009).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+chromosomes+reveals+that+cohesion+release+during+cell+division+is+gradual+and+does+not+require+tension.">Micromanipulation of chromosomes reveals that cohesion release during cell division is gradual and does not require tension.</a> Current Biology. 14 (23), 2124-2129 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology Micromanipulator. DIY High Precision Micromanipulator. , (2018).</li><li>Ellis, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+micromanipulators.">Piezoelectric micromanipulators.</a> Science. 138 (3537), 84-91 (1962).</li><li>Ellis, G. W., Begg, D. A., Zimmerman , . A. M., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation+studies.">Chromosome micromanipulation studies.</a> Mitosis/Cytokinesis. , 155-179 (1981).</li><li>Powell, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microforge+attachment+for+the+biological+microscope.">A microforge attachment for the biological microscope.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 72 (4), 214-217 (1953).</li><li>Alsop, G. B., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubules+continuously+dictate+distribution+of+actin+filaments+and+positioning+of+cell+cleavage+in+grasshopper+spermatocytes.">Microtubules continuously dictate distribution of actin filaments and positioning of cell cleavage in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Science. 117 (Pt 8), 1591-1602 (2004).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaphase'+and+cytokinesis+in+the+absence+of+chromosomes.">Anaphase' and cytokinesis in the absence of chromosomes.</a> Nature. 382, 466-468 (1996).</li></ol>

अभ्यास के साथ, चलती गुणसूत्रों कोशिका में चारों ओर दूसरा प्रकृति बन सकता है । सुइयों कि दोनों पर्याप्त कड़ी है और पर्याप्त रूप से पतली इत्तला दे दी है "के आदत प्राप्त" बनाना मुश्किल है, लेकिन यह क्षमता भी...

Micromanipulation एक गुणसूत्र कांग्रेस, धुरी चौकी, और anaphase गुणसूत्र आंदोलनों के लिए तंत्र के कुछ हिस्सों से पता चला है । जल्दी micromanipulation प्रयोगों के परिणामों का वर्णन प्रकाशन रॉबर्ट चेंबर्स1द्वारा किया गया । चैंबर्स एक यांत्रिक micromanipulator एक संलग्न गिलास सुई के साथ एक नंबर की कोशिका द्रव्य जांच करने के लिए इस्तेमाल किया विभिन्न प्रकार के सेल. दुर्भाग्य से, विपरीत तरीकों कि गुणसूत्रों और कई अंय जीवित कोशिकाओं में सेलुलर घटकों के दृश्य की अनुमति दी समय पर उपलब्ध नहीं थे, इसलिए ' चैंबर प्रयोगों ऐसे सेलुलर घटकों की स्थिति का प्रभाव नहीं दिखा सकता है । जल्दी micromanipulations कि गुणसूत्र स्थिति बदल मंडलों उपकरण इस्तेमाल के लिए anaphase कोशिकाओं में धुरी midzone झाडू, दिखा रहा है कि इस तरह के जोड़तोड़ anaphase टिड्डी neuroblasts 2 में गुणसूत्र हथियारों की स्थिति को बदल सकता है . Nicklas और उनके सहयोगियों के गुणसूत्रों के ठीक micromanipulations प्रदर्शन करने के लिए पहले थे,3गुणसूत्रों खींच, उन्हें धुरी से अलग और एक reorientation उत्प्रेरण3,4, एक स्थिर गुणसूत्रों5,6,7, और anaphase8,9में धुरी द्वारा उत्पादित बलों को मापने के लिए तनाव लागू करके malorientation । Nicklas लैब द्वारा अंय काम से पता चला कि cytoplasmic granules भी10 हेरफेर किया जा सकता है और कि centrosomes11micromanipulation द्वारा स्थिति हो सकती है । Micromanipulation गुणसूत्रों और अन्य सेलुलर घटकों को ले जाने के लिए सिर्फ उपयोगी नहीं है । एक micromanipulation सुई साफ कर सकते हैं demembranated कोशिकाओं12 में एक mitotic धुरी के माध्यम से कटौती या परमाणु लिफाफा13भंग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता. इसके अलावा, आसंन कोशिकाओं micromanipulation14,15से जुड़े हो सकते हैं ।
दिलचस्प प्रयोग है कि micromanipulation का उपयोग किया जा सकता है की इस तरह के एक विस्तृत विविधता के साथ, यह पहली नज़र में आश्चर्य की बात यह है कि micromanipulation प्रयोगों बहुत कुछ गुणसूत्र जीव द्वारा किया गया है । इस कमी के लिए एक कारण यह है कि mitotically-विभाजित प्रसंस्कृत कोशिकाओं है कि हड्डीवाला ऊतकों से प्राप्त कर रहे हैं और आमतौर पर गुणसूत्र आंदोलनों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं micromanipulate के लिए बेहद मुश्किल है. इन ऊतक संस्कृति कोशिकाओं को आम तौर पर एक cortical cytoskeleton कि "micromanipulation सुई के रास्ते में हो जाता है, और गुणसूत्रों या तो सुई से नहीं पहुंचा जा सकता है या सुई सेल के माध्यम से grinds, एक कोशिका टूटना और मौत के लिए अग्रणी । हम, और अन्य प्रयोगकर्ता जो micromanipulation का उपयोग करते हैं, सन्धिपाद कोशिकाओं को micromanipulation के लिए उत्तरदायी पाया है. सन्धिपाद spermatocytes आसानी से halocarbon तेल की एक परत के नीचे फैल रहे है और एक बहुत कम मजबूत cortical cytoskeleton एक कोशिका विभाजन के दौरान कोशिका झिल्ली अंतर्निहित है दिखाई देते हैं । इस प्रकार, सन्धिपाद परीक्षण spermatogonia के लिए आसानी से सुलभ गुणसूत्रों के साथ meiotically-विभाजन कोशिकाओं (spermatocytes) और mitotically-विभाजन कोशिकाओं (micromanipulation) का एक अच्छा स्रोत प्रदान करते हैं । एक सीरियल एक टिड्डी एक हेरफेर के दौरान तय spermatocyte के अनुभाग में पता चला कि सुई कोशिका झिल्ली प्रवेश कभी नहीं; कोशिका झिल्ली सुई के आसपास विकृतियों (Nicklas R.B., व्यक्तिगत संचार) । कीट और मकड़ी taxa की एक संख्या से Spermatocytes सफलतापूर्वक micromanipulated किया गया है, टिड्डे सहित, प्रार्थना mantids, फल मक्खियों, क्रेन मक्खियों, क्रिकेट, spittlebugs, पतंगे, काली विधवा मकड़ियों, तहखाने मकड़ियों, और गोला-बुनाई मकड़ियों 3,7,17,18,19,20,21,22। कल्चर्ड, mitotically-कीड़ों से कोशिकाओं को विभाजित कर micromanipulated जा सकता है. उदाहरण के लिए, टिड्डी neuroblasts में गुणसूत्रों एक प्राथमिक संस्कृति में गुणसूत्रों है कि आसानी से2,23micromanipulated जा सकता है । हमें संदेह है कि Drosophila और अन्य कीड़ों से प्राप्त उपलब्ध कल्चरल लाइनें भी micromanipulatable होंगी, हालांकि हमने इन कोशिकाओं के साथ तकनीक का परीक्षण नहीं किया है. हम बताएंगे कि कैसे टिड्डे और क्रिकेट से विभाजित कोशिकाओं को एक micromanipulation के लिए तैयार किया जा सकता है । क्रिकेट के लिए वर्ष के किसी भी समय सबसे पालतू दुकानों से प्राप्त करने के लिए आसान कर रहे हैं । टिड्डे गर्मियों में केवल आसानी से प्राप्य होते हैं जब तक शोधकर्ता के पास कोई प्रयोगशाला कॉलोनी तक पहुँच न हो, लेकिन इस्तेमाल की गई प्रजातियों (Melanoplus sanguinipes) में आसानी से कोशिकाओं को चपटा कर दिया जाता है, और लंबे, आसानी से छेड़छाड़ करने वाले गुणसूत्र होते हैं.
एक और कारण है कि micromanipulation प्रयोगों जीव की एक छोटी सी मुट्ठी भर से किया गया है कि micromanipulators कदम गुणसूत्रों अच्छी तरह से शायद ही बाजार में उपलब्ध हैं । हमने पाया है कि एक जॉयस्टिक नियंत्रित piezoelectric micromanipulator कोई कंपन, बहाव, या जॉयस्टिक आंदोलन और सुई आंदोलन के बीच अंतराल के साथ सुई आंदोलन को नियंत्रित करता है, लेकिन जोड़तोड़ के अन्य प्रकार भी सफलतापूर्वक गुणसूत्रों धक्का कर सकते हैं कक्ष में चारों ओर । एलिस और भीख25,26 द्वारा डिजाइन micromanipulators गुणसूत्रों के micromanipulation के लिए आदर्श होते हैं, हालांकि वे पुराने प्रौद्योगिकी का उपयोग करें । Piezoelectric micromanipulators वर्तमान में उपलब्ध है और आमतौर पर इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी में इस्तेमाल किया; हालांकि, इन micromanipulators नहीं सामांयतया जॉयस्टिक-नियंत्रित हैं । जॉयस्टिक नियंत्रण एक सफल micromanipulation के लिए आवश्यक चिकनी आंदोलनों के लिए महत्वपूर्ण है, और इसलिए एक कस्टम जॉयस्टिक एक गुणसूत्र micromanipulation के लिए वर्तमान में उपलब्ध piezoelectric micromanipulators काम करने के लिए निर्माण किया जाना चाहिए । जॉयस्टिक नियंत्रित piezoelectric micromanipulators है कि सबसे अच्छा काम सीधे स्थिति नियंत्रण है, जिसमें जॉयस्टिक के आंदोलन एक सुई आंदोलन करने के लिए सीधे अनुवाद ।
एक नए डिजाइन piezoelectric micromanipulator व्यावसायिक रूप से उपलब्ध भागों है कि आसानी से और कुछ छोटे 3 डी मुद्रित घटकों से प्रतिस्थापित किया जा सकता से निर्माण किया जा सकता है, और यह24micromanipulation गुणसूत्र के लिए अच्छी तरह से काम करता है । micromanipulator समायोज्य संवेदनशीलता, मैनुअल मोटे स्थिति, और कोई कंपन, बहाव, या सुई आंदोलन में अंतराल, और सुई के प्रत्यक्ष स्थिति नियंत्रण है । वैज्ञानिकों उपलब्ध निर्देशों का उपयोग कर micromanipulator का निर्माण कर सकते है ऑनलाइन24। नीचे एक प्राथमिक spermatocyte सेल संस्कृति की तैयारी के लिए और उस संस्कृति में कोशिकाओं के भीतर गुणसूत्रों micromanipulating के लिए तरीके हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">VWR micro cover glass</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48366 249</td>
			<td style="width:167px;">25x25 mm, no 1.5</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dow Corning High Vacuum Grease</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td>AA44224-KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">KEL-F Oil #10</td>
			<td style="width:71px;">Ohio Valley Specialty Chemical</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microdissecting Scissors, Stainless Steel</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3271-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont #5 fine foreceps</td>
			<td style="width:71px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">0.85 mm outer diameter, 0.65 mm inner diameter Pyrex glass tube&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Drummond Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Custom order--call to request</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Inverted, Phase contrast microscope with 10X or 16X low magnification objective and 60X or 100X high magnification objective</td>
			<td style="width:71px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">microforge</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Narashige</td>
			<td style="width:119px;">MF-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:216px;">micromanipulator</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Burleigh PCS-6000 with custom piezo-controlling joystick</td>
			<td style="width:119px;">PCS-6300</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes

गुणसूत्रों के micromanipulation गुणसूत्र कांग्रेस, धुरी चौकी, और anaphase गुणसूत्र आंदोलनों के लिए तंत्र को रोशन करने के लिए एक अनिवार्य तरीका रहा है, और गुणसूत्र आंदोलनों नियंत्रण क्या समझ के लिए महत्वपूर्ण है एक कक्ष विभाजन के दौरान । एक कुशल जीवविज्ञानी एक micromanipulator का उपयोग करने के लिए धुरी से गुणसूत्रों अलग कर सकते हैं, सेल के भीतर गुणसूत्रों की स्थिति, और एक बहुत ही ठीक टिप के साथ एक छोटे गिलास सुई का उपयोग गुणसूत्रों के लिए बलों को लागू करने के लिए । जबकि perturbations इस तरह के ऑप्टिकल ट्रैपिंग और एक लेज़र के अंय उपयोगों के रूप में अंय तरीकों का उपयोग कर गुणसूत्रों के लिए बनाया जा सकता है, तारीख करने के लिए, कोई अंय तरीका सेल को कोई नुकसान के साथ माइक्रोन के सैकड़ों के लिए दसियों के पैमाने पर सेलुलर घटकों की स्थिति की अनुमति देता है .
गुणसूत्रों के micromanipulation के लिए उपयुक्त कोशिकाओं के चयन और तैयारी, विशेष रूप से टिड्डी और क्रिकेट spermatocyte प्राथमिक संस्कृतियों के लाइव सेल इमेजिंग और micromanipulation में उपयोग के लिए तैयारी का वर्णन है, यहां बताई । इसके अलावा, हम एक सुई के निर्माण के लिए सेल के भीतर गुणसूत्रों चलती के लिए इस्तेमाल किया जा दिखाने के लिए, और विभाजन कोशिकाओं के भीतर गुणसूत्रों की स्थिति के लिए यह करने के लिए संलग्न एक गिलास सुई के साथ एक जॉयस्टिक नियंत्रित piezoelectric micromanipulator का उपयोग करें । एक नमूना परिणाम एक micromanipulator का उपयोग एक प्राथमिक spermatocyte में एक धुरी से एक गुणसूत्र अलग करने के लिए और कक्ष के भीतर उस गुणसूत्र की स्थिति को दर्शाता है ।

चित्रा 6 micromanipulation के संभावित उपयोग के कई उदाहरणों में 2 आसंन टिड्डी प्राथमिक spermatocytes का एक नमूना micromanipulation से पता चलता है । यह प्रयोग एक उल्टे, चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप का उपयोग कर किया ...

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Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes

इस प्रोटोकॉल में, हम micromanipulation के लिए उपयुक्त कक्षों के चयन और तैयारी का वर्णन करते हैं और उन कक्षों के भीतर गुणसूत्रों का स्थान लेने के लिए एक piezoelectric micromanipulator का उपयोग करते हैं ।

गुणसूत्रों के Micromanipulation में कीट Spermatocytes

The micromanipulation of chromosomes has been an essential method for illuminating the mechanism for chromosome congression, the spindle checkpoint, and ...

इस विधि से सेल बायोलॉजी में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद मिल सकती है, जैसे कि धुरी चेकपॉइंट को संतुष्ट करने में तनाव कितना महत्वपूर्ण है, और मियोसिस में गुणसूत्र व्यवहार में धुरी लगाव पर क्या भूमिका है? इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह एक गैर-नापठ तकनीक है जो प्रयोगकर्ता को एक जीवित कोशिका में गुणसूत्रों को तनाव लागू करने या फिर से स्थान देने की अनुमति देती है। शुरू करने के लिए, केंद्र से बाहर एक 20 मिलीमीटर व्यास परिपत्र छेद कट के साथ एक 75 बाय 25 मिलीमीटर स्लाइड तैयार करें।फिर, दो सेकंड के लिए एक बुनसेन बर्नर लौ के माध्यम से एक 25 बाय 25 मिलीमीटर संख्या १.५ कवर भट्ठा चलाएं । ग्लास स्लाइड में छेद के किनारे के चारों ओर वैक्यूम तेल लागू करें। इसके बाद, छेद पर कवर स्लिप रखें और इसे एक तंग सील बनाने के लिए दबा दें।स्लाइड को पलटें, और नव निर्मित विच्छेदन को हेलोकार्बन तेल के साथ अच्छी तरह से भरें। कुछ वयस्क पुरुष क्रिकेट प्राप्त करने के बाद, पंख कलियों के पीछे सीधे पेट की लंबी धुरी के समानांतर पृष्ठीय सतह के माध्यम से काटने के लिए विच्छेदन कैंची का उपयोग करें। फिर, एक्सोस्केलेटन में कट के माध्यम से टेस्ट्स को पुश करने के लिए पेट को धीरे-धीरे निचोड़ें।संदंश का उपयोग करके, अलग-थलग टेस्ट को विच्छेदन में अच्छी तरह से रखें। विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, टेस्ट को छोटे टुकड़ों में विभाजित करने के लिए ठीक पॉइंटिंग संदंश का उपयोग करें, और किसी भी वसा को हटा दें। फिर, कवर भट्ठा की सतह पर तेल के नीचे टेस्ट की सामग्री फैलाएं।जब तक फैल हिस्सा नग्न आंखों को मुश्किल से दिखाई न दे, तब तक टेस्ट की सामग्री को फैलाना जारी रखें। यदि आवश्यक हो तो अतिरिक्त तेल लोडेड विच्छेदन कुओं का उपयोग किया जा सकता है। सबसे पहले, एक कांच की ट्यूब के अंत को बुनसेन बर्नर की लौ में रखें।150 डिग्री कोण और संकीर्ण ग्लास ट्यूबिंग का एक विस्तारित क्षेत्र बनाने के लिए ट्यूबिंग के अंत को पकड़ो। पतले क्षेत्र में टयूबिंग तोड़ें ताकि पहले बनाए गए कोण से विस्तारित पतला क्षेत्र लगभग 10 मिलीमीटर लंबा हो। माइक्रोफॉर्ज का उपयोग करके, कांच की सुई की नोक को पिघलादें, सुई और माइक्रोफॉर्ज के प्लेटिनम तार के बीच 45 डिग्री कोण बनाते हैं।फिर, एक साथ गर्मी को बंद करते हुए कांच को तार से दूर खींचें। एक उल्टे चरण विपरीत माइक्रोस्कोप के चरण पर पहले से तैयार स्लाइड रखें। फिर, विभाजित कोशिकाओं को ढूंढें और उन्हें सबसे कम आवर्धन का उपयोग करके देखने के क्षेत्र में केंद्र करें।माइक्रोनीपुलेटर के सुई धारक में माइक्रोनीडल रखें। फिर, माइक्रोस्कोप के प्रकाश पथ में माइक्रोनीडल को मैन्युअल रूप से रखें। माइक्रोस्कोप कोशिकाओं युक्त विमान के ऊपर कई फोकल विमानों पर ध्यान केंद्रित करें।इसके बाद, एक्स और वाई अक्षों में सुई की छाया खोजने के लिए माइक्रोनीडल को कई बार फिर से स्थान देने के लिए जॉयस्टिक कंट्रोलर का उपयोग करें। जब तक टिप की स्थिति दिखाई न दे, तब तक सुई की स्थिति को फिर से समायोजित करें, तब तक जेड अक्ष के साथ सुई की स्थिति को समायोजित करें जब तक कि टिप ध्यान में न हो जाए। इसके बाद, कोशिकाओं पर फिर से ध्यान केंद्रित करें, और सेल प्लेन के ठीक ऊपर माइक्रोस्कोप पर ध्यान केंद्रित करें।फिर, सुई की स्थिति को फिर से समायोजित करें ताकि टिप इस फोकल प्लेन में फोकस में रहे। उच्च आवर्धन उद्देश्य और एक उच्च संवेदनशीलता सेटिंग का उपयोग करके इस प्रक्रिया को दोहराएं। कोशिकाओं पर फिर से ध्यान केंद्रित करें, और अपनी स्थिति को समायोजित करें, इसलिए वे देखने के क्षेत्र के केंद्र में रहते हैं।माइक्रोनीडल को नियंत्रित करने के लिए जॉयस्टिक का उपयोग करें क्योंकि यह कोशिका के अंदर गुणसूत्रों को धक्का देता है। सुनिश्चित करें कि सुई टिप कोशिकाओं के ऊपर विमान में रहता है। गुणसूत्र को स्थानांतरित करने के लिए, कोशिका के शीर्ष के पास एक गुणसूत्र पर ध्यान केंद्रित करें।फिर, सुई टिप को ध्यान में लाने के लिए जॉयस्टिक पर जेड एक्सिस को समायोजित करें, और एक्स और वाई में जॉयस्टिक के साथ सुई को स्थानांतरित करें। सुई की नोक को सीधे ब्याज के गुणसूत्र पर रखें, और इसे वांछित दिशा में धकेल दें। गुणसूत्र को धुरी से अलग करने के लिए पर्याप्त तनाव लागू करें।अंत में, गुणसूत्र को कोशिका के भीतर कहीं भी रखें। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, माइक्रोमैनिमुलेशन का उपयोग करके एक धुरी से एक गुणसूत्र को फिर से स्थापित करना, तनाव लागू करना और पूरी तरह से अलग करना संभव है। इस उदाहरण में, दो हेरफेर गुणसूत्रों को माइक्रोमैनिपुलेशन सुई के साथ लगातार नज करके धुरी तक फिर से संलग्न करने से रखा गया था।एक बार महारत हासिल करने के बाद, नमूनों को हेरफेर के लिए तैयार किया जा सकता है, और माइक्रोमैनीपुलेटर को 15 से 20 मिनट में तैनात किया जा सकता है। माइक्रोमैनिमुलेशन प्रयोग कुछ सेकंड से लेकर कई घंटों तक कहीं भी ले जा सकते हैं। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, कवर स्लिप से सबसे दूर सेल के किनारे गुणसूत्रों में हेरफेर करना याद रखना महत्वपूर्ण है।इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने सेल जीव विज्ञान के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए टिड्डी और प्रार्थना करने वाले मैटिस में धुरी चौकी का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

एक सह-संस्कृति प्रणाली में neuronal कनेक्शन के गठन का आकलन करने के लिए एक optogenetic दृष्टिकोण

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

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इवांस नीले रंग की डाई के साथ zebrafish लार्वा कंकाल की मांसपेशी वफ़ादारी का विश्लेषण

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Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

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विकसित करने के लिए Microinjection लक्ष्य करने के लिए तकनीक<em&gt; Xenopus</em&gt; किडनी

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

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में सक्रिय ERK के स्थानिक और लौकिक विश्लेषण<em&gt; सी। एलिगेंस</em&gt; जर्मलाइन

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

मानव Pluripotent स्टेम सेल से आदिम और निश्चित टेम Progenitors के विभेद का निर्देशन

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

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वयस्क Drosophila melanogaster दिमाग में मशरूम शरीर और Photoreceptor न्यूरॉन्स के विच्छेदन और Immunofluorescent धुंधला

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

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RNAi और हीट शॉक-प्रेरित प्रतिलेखन कारक अभिव्यक्ति के आवेदन के लिए सी. एलिगेंस में न्यूरॉन्स के लिए रोगाणु कोशिकाओं reprogram

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

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सेल एकत्रीकरण परख सीआईएसद्वारा ट्रांस-लाइगैंडों और उसके निषेध के साथ Drosophila पायदान के बंधन का मूल्यांकन करने के लिए-लाइगैंडों

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Gastrulating माउस में नोड और Notochordal प्लेट visualizing इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग कर भ्रूण

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल व्युत्पन्न तंत्रिका कोशिकाओं के चिकित्सीय प्रत्यारोपण के साथ माउस मस्तिष्क चोट के नियंत्रित Cortical प्रभाव मॉडल

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...