Name: micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes
Uploaded: 2018-10-22T12:30:00
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우리는 그녀의 귀중 한 토론에 대 한 제시카 홀을 감사합니다.

1. Micromanipulation에 대 한 기본 곤충 Spermatocyte 세포 배양의 준비
<ol><li>슬라이드 준비<ol>
<li>슬라이드의 중심에서 밖으로 잘라 20 m m 직경 원형 구멍 75 m m x 25 m m 유리 슬라이드를 가져옵니다. 참고:이 창 유리 유리 슬라이드 중심에 구멍의 크기를 한 시트에서 절단 했다.</li>
		<li>2 분 젠 버너 불꽃을 통해 25 m m x 25 m m #1.5 coverslip 실행 s.</li>
		<li>유리 슬라이드에 구멍의 가장자리 주위에 진공 그리?...

<ol>
	<li>Chambers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+II.+The+cell+aster:+a+reversible+gelation+phenomenon.">Microdissection studies II. The cell aster: a reversible gelation phenomenon.</a> Journal of Experimental Zoology. 23 (3), 483-505 (1917).</li><li>Carlson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+of+the+dividing+neuroblast+of+the+grasshopper,+Chortophaga+viridifasciata.">Microdissection studies of the dividing neuroblast of the grasshopper, Chortophaga viridifasciata.</a> Chromosoma. 5 (3), 199-220 (1952).</li><li>Nicklas, R. B., Staehly, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+I.+The+mechanics+of+chromosome+attachment+to+the+spindle.">Chromosome micromanipulation. I. The mechanics of chromosome attachment to the spindle.</a> Chromosoma. 21 (1), 1-16 (1967).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+II.+Induced+reorientation+and+the+experimental+control+of+segregation+in+meiosis.">Chromosome micromanipulation. II. Induced reorientation and the experimental control of segregation in meiosis.</a> Chromosoma. 21 (1), 17-50 (1967).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+3.+Spindle+fiber+tension+and+the+reorientation+of+mal-oriented+chromosomes.">Chromosome micromanipulation. 3. Spindle fiber tension and the reorientation of mal-oriented chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 43 (1), 40-50 (1969).</li><li>Nicklas, R. B., Ward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elements+of+error+correction+in+mitosis:+microtubule+capture,+release,+and+tension.">Elements of error correction in mitosis: microtubule capture, release, and tension.</a> Journal of Cell Biology. 126 (5), 1241-1253 (1994).</li><li>Li, X., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+forces+control+a+cell-cycle+checkpoint.">Mitotic forces control a cell-cycle checkpoint.</a> Nature. 373 (6515), 630-632 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+the+force+produced+by+the+mitotic+spindle+in+anaphase.">Measurements of the force produced by the mitotic spindle in anaphase.</a> Journal of Cell Biology. 97 (2), 542-548 (1983).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forces+that+move+chromosomes+in+mitosis.">The forces that move chromosomes in mitosis.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 17, 431-449 (1988).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+IV.+Polarized+motions+within+the+spindle+and+models+for+mitosis.">Chromosome micromanipulation. IV. Polarized motions within the spindle and models for mitosis.</a> Chromosoma. 39 (1), 1026 (1972).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+chromosomes+and+centrosomes+on+spindle+assembly+as+observed+in+living+cells.">The impact of chromosomes and centrosomes on spindle assembly as observed in living cells.</a> Journal of Cell Biology. 129 (5), 1287-1300 (1995).</li><li>Nicklas, R. B., Lee, G. M., Rieder, C. L., Rupp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+cut+mitotic+spindles:+clean+cuts+and+stable+microtubules.">Mechanically cut mitotic spindles: clean cuts and stable microtubules.</a> Journal of Cell Science. 94 (Pt 3), 415-423 (1989).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomes+initiate+spindle+assembly+upon+experimental+dissolution+of+the+nuclear+envelope+in+grasshopper+spermatocytes.">Chromosomes initiate spindle assembly upon experimental dissolution of the nuclear envelope in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Biology. 131 (5), 1125-1131 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+distribution:+experiments+on+cell+hybrids+and+in+vitro.">Chromosome distribution: experiments on cell hybrids and in vitro.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London B. 227 (955), 267-276 (1977).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reduction+of+chromosome+number+in+meiosis+is+determined+by+properties+built+into+the+chromosomes.">The reduction of chromosome number in meiosis is determined by properties built into the chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 150 (6), 1223-1232 (2000).</li><li>Church, K., Nicklas, R. B., Lin, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulated+bivalents+can+trigger+mini-spindle+formation+in+Drosophilamelanogaster+spermatocyte+cytoplasm.">Micromanipulated bivalents can trigger mini-spindle formation in Drosophilamelanogaster spermatocyte cytoplasm.</a> Journal of Cell Biology. 103 (6), 2765-2773 (1986).</li><li>Forer, A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+autosome+movements+and+of+sex-chromosome+movements+on+sex-chromosome+segregation+in+crane+fly+spermatocytes.">Influence of autosome movements and of sex-chromosome movements on sex-chromosome segregation in crane fly spermatocytes.</a> Chromosoma. 40 (4), 417-442 (1973).</li><li>Camenzind, R., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-random+chromosome+segregation+in+spermatocytes+of+Gryllotalpa+hexadactyla.+A+micromanipulation+analysis.">The non-random chromosome segregation in spermatocytes of Gryllotalpa hexadactyla. A micromanipulation analysis.</a> Chromosoma. 24 (3), 324-335 (1968).</li><li>Ault, J. G., Felt, K. D., Doan, R. N., Nedo, A. O., Ellison, C. A., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-segregation+of+sex+chromosomes+in+the+male+black+widow+spider+Latrodectus+mactans+(Araneae,+Theridiidae).">Co-segregation of sex chromosomes in the male black widow spider Latrodectus mactans (Araneae, Theridiidae).</a> Chromosoma. 126 (5), 645-654 (2017).</li><li>Felt, K. D., Lagerman, M. B., Ravida, N. A., Qian, L., Powers, S. R., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+the+amphitelically+attached+univalent+X+chromosome+in+the+spittlebug+Philaenus+spumarius.">Segregation of the amphitelically attached univalent X chromosome in the spittlebug Philaenus spumarius.</a> Protoplasma. 254 (6), 2263-2271 (2017).</li><li>Golding, A. E., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotype,+sex+determination,+and+meiotic+chromosome+behavior+in+two+pholcid+(Araneomorphae,+Pholcidae)+spiders:+implications+for+karyotype+evolution.">Karyotype, sex determination, and meiotic chromosome behavior in two pholcid (Araneomorphae, Pholcidae) spiders: implications for karyotype evolution.</a> PLoS One. 6, e24748 (2011).</li><li>Doan, R. N., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+reveals+an+XO-XX+sex+determining+system+in+the+orb-weaving+spider+Neoscona+arabesca+(Walckenaer).">Micromanipulation reveals an XO-XX sex determining system in the orb-weaving spider Neoscona arabesca (Walckenaer).</a> Hereditas. 146 (4), 180-182 (2009).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+chromosomes+reveals+that+cohesion+release+during+cell+division+is+gradual+and+does+not+require+tension.">Micromanipulation of chromosomes reveals that cohesion release during cell division is gradual and does not require tension.</a> Current Biology. 14 (23), 2124-2129 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology Micromanipulator. DIY High Precision Micromanipulator. , (2018).</li><li>Ellis, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+micromanipulators.">Piezoelectric micromanipulators.</a> Science. 138 (3537), 84-91 (1962).</li><li>Ellis, G. W., Begg, D. A., Zimmerman , . A. M., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation+studies.">Chromosome micromanipulation studies.</a> Mitosis/Cytokinesis. , 155-179 (1981).</li><li>Powell, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microforge+attachment+for+the+biological+microscope.">A microforge attachment for the biological microscope.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 72 (4), 214-217 (1953).</li><li>Alsop, G. B., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubules+continuously+dictate+distribution+of+actin+filaments+and+positioning+of+cell+cleavage+in+grasshopper+spermatocytes.">Microtubules continuously dictate distribution of actin filaments and positioning of cell cleavage in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Science. 117 (Pt 8), 1591-1602 (2004).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaphase'+and+cytokinesis+in+the+absence+of+chromosomes.">Anaphase' and cytokinesis in the absence of chromosomes.</a> Nature. 382, 466-468 (1996).</li></ol>

연습으로, 세포에서 염색체를 이동 하는 것은 제 2의 천 될 수 있다. 충분히 뻣 뻣 한 그리고 충분히 얇은 밀고 바늘은 어려운 "의 요령" 조작, 하지만이 기능 또한 연습으로 온다. 그래서 괜 찮 그들은 변형 halocarbon 기름에 이동할 때 바늘 셀에 염색체를 추진 하는 데 유용 되지 않습니다. 그래서 바늘 그들의 팁을 볼 수 있습니다으로 염색체의 폭의 1/3로 (또는 더 큰)는 세포를 죽 일 가능성이 매우 ?...

Micromanipulation은 염색체 congression, 스핀 들 검사점 및 anaphase 염색체 운동에 대 한 메커니즘의 일부를 공개 했다. 가장 이른 간행물 micromanipulation 실험의 결과 설명 하는 로버트 챔버1했다. 챔버는 여러 종류의 다른 세포의 세포질을 연결 된 유리 바늘 기계 micromanipulator를 사용. 불행 하 게도, 염색체와 살아있는 세포에 많은 다른 세포 구성 성분의 시각화를 허용 하는 대비 방법을 사용할 수 없었습니다, 당시 챔버 실험 재배치 같은 세포 구성 성분의 효과 표시 하지 수 있으므로. 초기 micromanipulations 염색체 위치를 변경 하는 이러한 조작 anaphase 메뚜기 neuroblasts2에서에서 염색체 팔의 위치를 변경할 수 보여주는 anaphase 셀에 스핀 들 midzone 청소 챔버 장치 사용 . 니와 그의 공동 작업자 최초로 염색체의 미세 micromanipulations 수행 염색체3스트레칭, 스핀 들에서 그들을 분리 하 고 재교육3,4, 안정화를 유도 한 염색체5,,67, 긴장을 적용 anaphase8,9스핀 들에 의해 생산 하는 힘을 측정 하 여 malorientation. 니 클 랩 다른 작업 세포질과 립 또한 조작된10 수와 micromanipulation11centrosomes의 위치를 변경할 수는 나타났다. Micromanipulation은 염색체와 다른 세포질 구성 요소 이동 단지 유용 하지 않습니다. Micromanipulation 바늘 demembranated 셀12 mitotic 스핀 들을 통해 청결 하 게 자를 수 있다 또는 핵 봉투13해산 하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 인접 한 셀 micromanipulation14,15융합 될 수 있다.
이러한 다양 한 할 수 있는 재미 있는 실험의 micromanipulation를 사용 하 여, 그것은 첫눈에 놀라운 micromanipulation 실험 거의 염색체 생물학에 의해 수행 되었습니다. 이 결핍에 대 한 이유 중 하나입니다 척추 조직에서 파생 되 고 염색체 움직임을 공부에 대 한 일반적으로 사용 되는 mitotically 분할 배양된 세포 micromanipulate 매우 어렵다. 이 조직 배양 세포는 일반적으로 바늘 "방해가 된다"는 micromanipulation의 그리고 염색체 중 하나는 바늘에 의해 도달할 수 없는 또는 바늘 세포 파열 및 죽음으로 이어지는 셀 grinds 대뇌 피 질의 골격을 있다. 우리, 그리고 micromanipulation를 사용 하 여 다른 경험 arthropod 셀 micromanipulation 의무가 있을을 발견 했다. Arthropod spermatocytes halocarbon 기름의 층에서 쉽게 확산 하 고 세포 분열 중 세포 막 내부는 훨씬 강력한 대뇌 피 질의 골격을가지고 있는 것 같습니다. 따라서, arthropod testes meiotically 분할 세포 (spermatocytes)의 좋은 소스를 제공 하 고 (spermatogonia) micromanipulation 위한 쉽게 접근할 수 있는 염색체를 가진 세포 mitotically 분할. 바늘 적 세포 막; 침투 계시는 조작 하는 동안 고정 메뚜기 spermatocyte의 직렬 구분 바늘 (니 클 R.B., 개인 커뮤니케이션) 주위 세포 막 변형. 곤충과 거미 taxa의 수에서 spermatocytes 되었습니다 micromanipulated 성공적으로, 메뚜기, 등 기도 mantids, 과일 파리, 크레인 파리, 귀뚜라미, spittlebugs, 나 방, 검은 부 거미, 지하실 거미, 천체 길 쌈 거미 3,7,17,18,19,20,,2122. 곤충에서 교양, mitotically 분할 셀 micromanipulated 될 수 있습니다. 예를 들어 기본 문화에 메뚜기 neuroblasts에서 염색체 염색체 micromanipulated2,23쉽게 될 수 있는 있다. 우리 용의자 사용 가능한 교양 라인 초파리 에서 파생 된 다른 곤충 또한 micromanipulatable, 있을 것입니다 비록 우리가 이러한 세포와 기법을 테스트 하지 않았습니다. 우리는 어떻게 메뚜기와 귀뚜라미에서 셀 분할 수 준비는 micromanipulation에 대 한 표시 됩니다. 귀뚜라미 들 언제 든 지 올해의 대부분의 애완 동물 상점에서 얻을 수 있습니다. 메뚜기는 연구원 실험실 식민지에 권한이 않으면 종 사용 (Melanoplus sanguinipes)는 쉽게 평평 하 게 셀, 그리고 긴, 쉬운 조작 염색체만 여름에 쉽게 얻을 수 있습니다.
또 다른 이유 왜 micromanipulation 실험 생물학의 작은 소수에 의해 수행 되었습니다 micromanipulators 염색체를 잘 이동 하는 시장에서 거의 사용할 수입니다. 우리는 진동, 드리프트, 또는 조이스틱 움직임와 바늘 움직임 사이의 지연 없이 바늘 움직임을 제어 하는 조이스틱 제어 압 전 micromanipulator 하지만 조작자의 다른 유형 또한 성공적으로 염색체를 밀 수 있다 발견 주변 셀에. 하지만 그들은 오래 된 기술을 사용 하 여 설계한 엘리스와 Begg25,26 micromanipulators 염색체의 micromanipulation에 이상적입니다. 압 전 micromanipulators 현재 사용할 수 있으며 일반적으로 전기 생리학;에 사용 그러나,이 micromanipulators 일반적으로 조이스틱을 제어 하지 않습니다. 조이스틱 제어는 성공적인 micromanipulation에 필요한 부드러운 움직임을 키 고 그래서 사용자 정의 조이스틱 염색체 micromanipulation 위해 일 하는 현재 사용할 수 있는 압 전 micromanipulators을 건설 한다. 최고의 작품은 조이스틱 제어 압 전 micromanipulators 직접 위치 제어를, 조이스틱의 움직임이 바늘 움직임에 직접 변환 하는 있다.
새롭게 설계 된 압 전 micromanipulator 쉽게 대체 될 수 있습니다 상용 부품 및 일부 작은 3 차원 인쇄 구성 요소를 생성할 수 있습니다 그리고 염색체 micromanipulation24를 위해 잘 작동 합니다. micromanipulator 조정 가능한 감도, 수동 거친 위치 및 진동, 드리프트, 또는 지연 바늘 운동, 그리고 바늘의 직접 위치 제어에 있다. 과학자 들은 micromanipulator 지침 사용할 수 온라인24를 사용 하 여 구성할 수 있습니다. 아래 기본 spermatocyte 세포 배양 준비 및 micromanipulating 메서드는 그 문화에 있는 세포 내에서 염색체.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">VWR micro cover glass</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48366 249</td>
			<td style="width:167px;">25x25 mm, no 1.5</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dow Corning High Vacuum Grease</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td>AA44224-KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">KEL-F Oil #10</td>
			<td style="width:71px;">Ohio Valley Specialty Chemical</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microdissecting Scissors, Stainless Steel</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3271-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont #5 fine foreceps</td>
			<td style="width:71px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">0.85 mm outer diameter, 0.65 mm inner diameter Pyrex glass tube&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Drummond Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Custom order--call to request</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Inverted, Phase contrast microscope with 10X or 16X low magnification objective and 60X or 100X high magnification objective</td>
			<td style="width:71px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">microforge</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Narashige</td>
			<td style="width:119px;">MF-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:216px;">micromanipulator</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Burleigh PCS-6000 with custom piezo-controlling joystick</td>
			<td style="width:119px;">PCS-6300</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes

염색체의 micromanipulation는 염색체 congression, 스핀 들 검사점 및 anaphase 염색체 운동에 대 한 메커니즘을 조명 하는 필수적인 방법 고 있다 염색체의 움직임을 제어 하는 무슨을 이해 하는 열쇠 셀 부 중. 숙련 된 생물학자는 micromanipulator 염색체는 세포 내에서 위치를 변경 하 고 아주 좋은 팁는 작은 유리 바늘을 사용 하 여 염색체를 힘을 적용 하는 스핀 들에서 염색체를 분리 사용할 수 있습니다. 섭 염색체 광학 트래핑 같은 다른 방법과 레이저의 다른 사용을 사용 하 여 만들 수 있습니다, 하는 동안 날짜, 아니 다른 메서드를 사용 하면 셀에 아무 손상도 거의 미크론의 수백에 10의 규모에 세포 구성 성분의 위치 .
선택과 적절 한 세포의 염색체, 메뚜기 및 귀뚜라미 spermatocyte 기본 문화권의 준비 라이브 셀 이미징 및 micromanipulation, 사용에 대 한 설명의 micromanipulation에 대 한 준비는 여기 설명합니다. 또한, 우리는 나누어 세포 내에서 염색체 위치를 그것에 붙어 있던 유리 바늘으로 세포, 그리고 조이스틱 제어 압 전 micromanipulator 사용 내 염색체 이동에 사용할 바늘의 건설을 보여줍니다. 샘플 결과 micromanipulator 기본 spermatocyte에 스핀 들에서 염색체를 분리 하 고 세포 내에서 해당 염색체 위치를 사용을 보여준다.

그림 6 micromanipulation의 가능한 사용의 몇 가지 예 2 인접 한 메뚜기 기본 spermatocytes의 샘플 micromanipulation를 보여 줍니다. 이 실험 수행 되었다 거꾸로, 단계 대조 현미경을 사용 하 여. 0:00 (시간 표시 있는 min:s) 이미지 조작 전에 두 셀을 보여 줍니다. 맨 아래 셀에 하나의 염색체 micromanipulation 바늘에 의해 적용 긴장 아래 표시 (0:05; 검은 화살표) 다음 스...

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Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes

이 프로토콜에서 선택과 그 세포 내에서 염색체 위치를 micromanipulation에 대 한 적절 한 셀의 준비와 압 전 micromanipulator의 사용을 설명 합니다.

곤충 Spermatocytes에 염색체의 micromanipulation

The micromanipulation of chromosomes has been an essential method for illuminating the mechanism for chromosome congression, the spindle checkpoint, and ...

이 방법은 스핀들 체크포인트를 만족시키는 데 긴장이 얼마나 중요한지, 미오증의 염색체 동작에서 스핀들 부착의 역할은 무엇입니까와 같은 세포 생물학의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실험자가 살아있는 세포에서 장력을 적용하거나 염색체를 재배치할 수 있는 비치명적인 기술이라는 것입니다. 시작하려면 75~25mm 슬라이드를 중앙에서 20mm 직경의 원형 구멍으로 준비합니다.그런 다음 25 mm 25 mm 번호 1.5 커버 슬릿을 번젠 버너 불꽃을 통해 2 초 동안 실행합니다. 유리 슬라이드의 구멍 가장자리 주위에 진공 그리스를 적용합니다. 그런 다음 덮개를 구멍 위에 놓고 눌러 단단한 씰을 형성합니다.슬라이드를 뒤집어 할로카본 오일로 새로 생성된 해부를 잘 채웁니다. 일부 성인 남성 크리켓을 얻은 후, 바로 날개 싹 뒤에 복부의 긴 축에 평행 등쪽 표면을 통해 절단 해부 가위를 사용합니다. 그런 다음 복부를 부드럽게 짜서 외골격의 컷을 통해 고환을 밀어 냅니다.집게를 사용하여 격리된 고환을 해부에 잘 배치합니다. 해부 현미경에서 미세 한 포인팅 포셉을 사용하여 고환을 작은 조각으로 나누고 지방을 제거하십시오. 그런 다음, 커버 슬릿의 표면에 오일 아래에 고환의 내용을 확산.확산 부분이 육안으로 거의 보이지 않게 될 때까지 고환의 내용을 계속 퍼뜨라. 필요한 경우 추가 오일 하중 해부 우물을 사용할 수 있습니다. 첫째, 분젠 버너의 불꽃에 유리 튜브의 끝을 배치합니다.튜브의 끝을 잡고 150도 각도와 좁은 유리 튜브의 확장 영역을 만듭니다. 얇은 영역에서 튜브를 끊어 이전에 생성된 각도에서 연장되는 얇은 영역은 약 10밀리미터 길이입니다. 마이크로포지를 사용하여 유리 바늘의 끝을 녹여 마이크로포지의 바늘과 백금 와이어 사이에 45도 각도를 형성합니다.그런 다음 열을 끄면서 유리를 와이어에서 멀리 당깁니다. 이전에 준비된 슬라이드를 반전된 위상 대비 현미경의 단계에 놓습니다. 그런 다음, 분할 세포를 찾아 가능한 가장 낮은 배율을 사용하여 시야에서 그들을 중도한다.마이크로니들(microneedle)을 마이크로 조작기의 바늘 홀더에 넣습니다. 그런 다음 현미경의 광 경로에 마이크로 니들(microneedle)을 수동으로 배치합니다. 현미경을 포함 하는 평면 위에 여러 초점 평면을 집중.다음으로 조이스틱 컨트롤러를 사용하여 마이크로니들을 여러 번 재배치하여 x 및 y 축에서 바늘의 그림자를 찾습니다. 팁의 위치가 보일 때까지 바늘 위치를 재조정한 다음, 팁이 초점이 될 때까지 z 축을 따라 바늘의 위치를 조정합니다. 다음으로, 세포에 다시 초점을 맞추고, 세포 평면 바로 위에 현미경을 집중합니다.그런 다음 바늘의 위치를 재조정하여 팁이 초점 평면에 초점을 맞출 수 있도록하십시오. 더 높은 배율 목표와 더 높은 감도 설정을 사용하여 이 프로세스를 반복합니다. 셀에 다시 초점을 맞추고 위치를 조정하므로 시야의 중심에 남아 있습니다.조이스틱을 사용하여 세포 내부의 염색체를 밀어 내면서 마이크로니들을 제어합니다. 바늘 끝이 셀 위의 평면에 남아 있는지 확인합니다. 염색체를 이동하려면 셀 상단 근처의 염색체에 집중하십시오.그런 다음 조이스틱의 z 축을 조정하여 바늘 끝을 초점으로 가져오고 조이스틱으로 바늘을 x와 y로 이동합니다. 바늘 의 끝을 관심있는 염색체에 직접 놓고 원하는 방향으로 밀어 넣습니다. 염색체를 스핀들에서 분리하기에 충분한 장력을 가합니다.마지막으로, 세포 내의 어느 곳에서나 염색체를 놓습니다. 이 프로토콜을 사용하면 미세 조작을 사용하여 스핀들에서 염색체를 재배치, 적용 및 완전히 분리할 수 있습니다. 이 예에서는, 2개의 조작된 염색체는 현미경 조작 바늘로 지속적으로 움직여 스핀들로 다시 붙이는 것을 막았습니다.일단 마스터되면 샘플은 조작을 위해 준비 될 수 있으며 미세 조작기를 15 ~ 20 분 안에 배치 할 수 있습니다. 마이크로 조작 실험은 몇 초에서 몇 시간까지 어디서나 걸릴 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안, 커버 슬립에서 가장 멀리 세포의 측면에 염색체를 조작하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.개발 후, 이 기술은 세포 생물학 분야의 연구원들이 메뚜기의 스핀들 체크포인트를 탐구하고 사마귀를 기도하는 길을 열었습니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

공동 문화 시스템에 신경 연결의 형성을 평가하기위한 Optogenetic 접근

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

연구

발생학

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

개발에 미세 주입을 대상으로 기술<em&gt; Xenopus의</em&gt; 신장

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

활성 ERK의 공간 및 시간 분석<em&gt; C. 엘레</em&gt; 생식선

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

기본 및 확실 한 조 혈 창시자 인간 만능 줄기 세포에서의 감독

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

C. 선 충 에서 신경 세포를 세균 세포를 재 설 정할 RNAi 및 열 충격 유도 하는 전사 인자 식의 적용

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

트랜스와 초파리 노치의 바인딩을 평가를 집계 분석 셀-Ligands 및 Cis에 의해 그것의 억제-Ligands

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

노드 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법, 면역 형광 산 전체를 사용 하 여 Gastrulating 마우스 배아에서 Notochordal 접시를 시각화

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 신경 세포의 치료 이식으로 마우스 뇌 손상의 제어 피질 영향 모델

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...