Name: micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes
Uploaded: 2018-10-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes at JoVE.com

Jessica Hall onu değerli tartışma için teşekkür ederiz.

1. embriyolardan için birincil böcek Spermatocyte hücre kültürü hazırlanması
<ol><li>Slayt hazırlama<ol>
<li>75 x 25 mm cam slayt slayt Merkezi Kes şunu 20 mm çapında dairesel delik olan elde edilir. Not: Bu pencere cam merkezi bir deliği olan bir cam slayt boyutu kadar tek bir sayfaya gelen kesilmiş.</li>
		<li>25 x 25 mm #1.5 coverslip koşmak-den geçerek Bunsen burner alev 2 s.</li>
		<li>Cam slayt delik kenarındaki vakum gres uygulayın</li>
		<li>Coverslip olduğu gibi resim...

<ol>
	<li>Chambers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+II.+The+cell+aster:+a+reversible+gelation+phenomenon.">Microdissection studies II. The cell aster: a reversible gelation phenomenon.</a> Journal of Experimental Zoology. 23 (3), 483-505 (1917).</li><li>Carlson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdissection+studies+of+the+dividing+neuroblast+of+the+grasshopper,+Chortophaga+viridifasciata.">Microdissection studies of the dividing neuroblast of the grasshopper, Chortophaga viridifasciata.</a> Chromosoma. 5 (3), 199-220 (1952).</li><li>Nicklas, R. B., Staehly, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+I.+The+mechanics+of+chromosome+attachment+to+the+spindle.">Chromosome micromanipulation. I. The mechanics of chromosome attachment to the spindle.</a> Chromosoma. 21 (1), 1-16 (1967).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+II.+Induced+reorientation+and+the+experimental+control+of+segregation+in+meiosis.">Chromosome micromanipulation. II. Induced reorientation and the experimental control of segregation in meiosis.</a> Chromosoma. 21 (1), 17-50 (1967).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+3.+Spindle+fiber+tension+and+the+reorientation+of+mal-oriented+chromosomes.">Chromosome micromanipulation. 3. Spindle fiber tension and the reorientation of mal-oriented chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 43 (1), 40-50 (1969).</li><li>Nicklas, R. B., Ward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elements+of+error+correction+in+mitosis:+microtubule+capture,+release,+and+tension.">Elements of error correction in mitosis: microtubule capture, release, and tension.</a> Journal of Cell Biology. 126 (5), 1241-1253 (1994).</li><li>Li, X., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+forces+control+a+cell-cycle+checkpoint.">Mitotic forces control a cell-cycle checkpoint.</a> Nature. 373 (6515), 630-632 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+the+force+produced+by+the+mitotic+spindle+in+anaphase.">Measurements of the force produced by the mitotic spindle in anaphase.</a> Journal of Cell Biology. 97 (2), 542-548 (1983).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forces+that+move+chromosomes+in+mitosis.">The forces that move chromosomes in mitosis.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 17, 431-449 (1988).</li><li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation.+IV.+Polarized+motions+within+the+spindle+and+models+for+mitosis.">Chromosome micromanipulation. IV. Polarized motions within the spindle and models for mitosis.</a> Chromosoma. 39 (1), 1026 (1972).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+chromosomes+and+centrosomes+on+spindle+assembly+as+observed+in+living+cells.">The impact of chromosomes and centrosomes on spindle assembly as observed in living cells.</a> Journal of Cell Biology. 129 (5), 1287-1300 (1995).</li><li>Nicklas, R. B., Lee, G. M., Rieder, C. L., Rupp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+cut+mitotic+spindles:+clean+cuts+and+stable+microtubules.">Mechanically cut mitotic spindles: clean cuts and stable microtubules.</a> Journal of Cell Science. 94 (Pt 3), 415-423 (1989).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomes+initiate+spindle+assembly+upon+experimental+dissolution+of+the+nuclear+envelope+in+grasshopper+spermatocytes.">Chromosomes initiate spindle assembly upon experimental dissolution of the nuclear envelope in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Biology. 131 (5), 1125-1131 (1995).</li><li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+distribution:+experiments+on+cell+hybrids+and+in+vitro.">Chromosome distribution: experiments on cell hybrids and in vitro.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London B. 227 (955), 267-276 (1977).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reduction+of+chromosome+number+in+meiosis+is+determined+by+properties+built+into+the+chromosomes.">The reduction of chromosome number in meiosis is determined by properties built into the chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 150 (6), 1223-1232 (2000).</li><li>Church, K., Nicklas, R. B., Lin, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulated+bivalents+can+trigger+mini-spindle+formation+in+Drosophilamelanogaster+spermatocyte+cytoplasm.">Micromanipulated bivalents can trigger mini-spindle formation in Drosophilamelanogaster spermatocyte cytoplasm.</a> Journal of Cell Biology. 103 (6), 2765-2773 (1986).</li><li>Forer, A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+autosome+movements+and+of+sex-chromosome+movements+on+sex-chromosome+segregation+in+crane+fly+spermatocytes.">Influence of autosome movements and of sex-chromosome movements on sex-chromosome segregation in crane fly spermatocytes.</a> Chromosoma. 40 (4), 417-442 (1973).</li><li>Camenzind, R., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-random+chromosome+segregation+in+spermatocytes+of+Gryllotalpa+hexadactyla.+A+micromanipulation+analysis.">The non-random chromosome segregation in spermatocytes of Gryllotalpa hexadactyla. A micromanipulation analysis.</a> Chromosoma. 24 (3), 324-335 (1968).</li><li>Ault, J. G., Felt, K. D., Doan, R. N., Nedo, A. O., Ellison, C. A., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-segregation+of+sex+chromosomes+in+the+male+black+widow+spider+Latrodectus+mactans+(Araneae,+Theridiidae).">Co-segregation of sex chromosomes in the male black widow spider Latrodectus mactans (Araneae, Theridiidae).</a> Chromosoma. 126 (5), 645-654 (2017).</li><li>Felt, K. D., Lagerman, M. B., Ravida, N. A., Qian, L., Powers, S. R., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+the+amphitelically+attached+univalent+X+chromosome+in+the+spittlebug+Philaenus+spumarius.">Segregation of the amphitelically attached univalent X chromosome in the spittlebug Philaenus spumarius.</a> Protoplasma. 254 (6), 2263-2271 (2017).</li><li>Golding, A. E., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotype,+sex+determination,+and+meiotic+chromosome+behavior+in+two+pholcid+(Araneomorphae,+Pholcidae)+spiders:+implications+for+karyotype+evolution.">Karyotype, sex determination, and meiotic chromosome behavior in two pholcid (Araneomorphae, Pholcidae) spiders: implications for karyotype evolution.</a> PLoS One. 6, e24748 (2011).</li><li>Doan, R. N., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+reveals+an+XO-XX+sex+determining+system+in+the+orb-weaving+spider+Neoscona+arabesca+(Walckenaer).">Micromanipulation reveals an XO-XX sex determining system in the orb-weaving spider Neoscona arabesca (Walckenaer).</a> Hereditas. 146 (4), 180-182 (2009).</li><li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+chromosomes+reveals+that+cohesion+release+during+cell+division+is+gradual+and+does+not+require+tension.">Micromanipulation of chromosomes reveals that cohesion release during cell division is gradual and does not require tension.</a> Current Biology. 14 (23), 2124-2129 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology Micromanipulator. DIY High Precision Micromanipulator. , (2018).</li><li>Ellis, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+micromanipulators.">Piezoelectric micromanipulators.</a> Science. 138 (3537), 84-91 (1962).</li><li>Ellis, G. W., Begg, D. A., Zimmerman , . A. M., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+micromanipulation+studies.">Chromosome micromanipulation studies.</a> Mitosis/Cytokinesis. , 155-179 (1981).</li><li>Powell, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microforge+attachment+for+the+biological+microscope.">A microforge attachment for the biological microscope.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 72 (4), 214-217 (1953).</li><li>Alsop, G. B., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubules+continuously+dictate+distribution+of+actin+filaments+and+positioning+of+cell+cleavage+in+grasshopper+spermatocytes.">Microtubules continuously dictate distribution of actin filaments and positioning of cell cleavage in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Science. 117 (Pt 8), 1591-1602 (2004).</li><li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaphase'+and+cytokinesis+in+the+absence+of+chromosomes.">Anaphase' and cytokinesis in the absence of chromosomes.</a> Nature. 382, 466-468 (1996).</li></ol>

Uygulama ile kromozomlar hücre içinde hareket etme ikinci doğa olabilir. Yeterince sert ve yeterince ince uçlu iğneler "püf noktası," zor imalatı, ama bu yetenek aynı zamanda uygulama ile geliyor. Halocarbon yağda taşındığında deforme ince iğneler hücrede kromozomlar itmek için yararlı olmayacaktır. Çok iğneler onların ipuçları görülebilir ve gibi büyük olarak 1/3 bir kromozom genişliğinin (ya da daha büyük) hücre öldürmek çok büyük olasılıkla künt. Kromozomlar itmek yeterince iy...

Embriyolardan bir kromozom congression, iğ denetim noktası ve anafaz kromozom taşımalar için mekanizma parçaları ortaya koymuştur. Embriyolardan deneylerin sonuçlarını açıklayan ilk yayın Robert Chambers1tarafından yapıldı. Chambers mekanik bir micromanipulator bir ekli cam iğneyle sitoplazma, farklı hücre tipleri birkaç soruşturma eskiden. Kromozomlar ve birçok diğer hücresel bileşenleri canlı hücrelerdeki görselleştirme izin kontrast yöntemleri ne yazık ki, o zaman mevcut değildi, bu yüzden Chambers deneyler gibi hücresel bileşenleri yeniden konumlandırma etkileri göstermiyor. Kromozom konumu değişmiş erken micromanipulations Chambers aparatı böyle manipülasyonlar anafaz çekirge neuroblasts2 kromozom silah konumunu değiştirmek gösterilen iğ midzone anafaz hücrelerdeki süpürme eskiden . Nicklas ve işbirlikçileri kromozom3germe, onları iğ ayırma ve sabitleme bir hale gelmesini3,4, inducing kromozom, iyi micromanipulations gerçekleştirmek için ilk idi bir gerginlik kromozom5,6,7uygulama ve anafaz8,9mil sayısı tarafından üretilen kuvvetleri ölçerek malorientation. Diğer iş Nicklas laboratuvar tarafından sitoplazmik granüller işlenmiş10 de olabileceğini ve centrosomes embriyolardan11tarafından yeniden konumlandırılmış gösterdi. Embriyolardan sadece kromozomlar ve diğer hücresel bileşenleri taşımak için kullanışlı değildir. Embriyolardan iğne temiz bir şekilde mitotik iğ demembranated hücreler12 yoluyla kesebilir veya nükleer zarf13dağıtılması için kullanılabilir. Buna ek olarak, bitişik hücreleri embriyolardan14,15tarafından erimiş.
Böyle bir yelpazede yapılabilir ilginç deneyler ile embriyolardan kullanarak, ilk bakışta şaşırtıcı embriyolardan deneyler çok az kromozom biyologlar tarafından yapılmıştır. Bu eksikliği için bir nedeni omurgalı dokulardan türetilir ve kromozom hareketleri eğitimi için yaygın olarak kullanılan mitotically bölme kültürlü hücreleri micromanipulate için son derece zor olmasıdır. Bu doku kültürü hücreler genellikle bir kortikal sitoiskeleti "embriyolardan engel" iğne ve kromozomlar da iğne tarafından erişilemiyor veya bir hücre rüptürü ve ölüm önde gelen hücreye iğne biler var. Biz ve embriyolardan, kullanan diğer Denemecileri embriyolardan için mükellef olması için eklem bacaklılar hücreleri bulduk. Eklem bacaklılar spermatocytes kolayca halocarbon yağ tabakası altında yayılır ve daha az güçlü bir kortikal sitoiskeleti hücre membran hücre bölünmesi sırasında temel gibi görünüyor. Böylece, eklem bacaklılar testis meiotically bölünmesi hücre (spermatocytes) iyi bir kaynağı sağlamak ve mitotically bölme (spermatogonia) embriyolardan için kolayca erişilebilir kromozom ile hücreleri. Düzenleme sırasında sabit bir çekirge spermatocyte bir seri kesit iğneyi asla hücre zarı nüfuz ortaya; hücre zarının iğne (Nicklas R.B., kişisel iletişim) deforms. Spermatocytes böcek ve örümcek özellikleri bir dizi micromanipulated başarıyla, çekirge, dua eden mantids, meyve sinekleri, Vinç sinekler, cırcır, spittlebugs, pervane, kara dul örümcekler, Bodrum örümcekler ve küre-dokuma örümcekler edilmiştir 3,7,17,18,19,20,21,22. Böcekler kültürlü, mitotically bölme hücrelerden micromanipulated olabilir. Örneğin, birincil bir kültür çekirge neuroblasts kromozomlar kolayca-ebilmek var olmak micromanipulated2,23kromozom var. Biz bu hücreler ile teknik test etmedim ama mevcut Drosophila elde edilen satırları kültürlü ve diğer böcekler-ecek da var olmak micromanipulatable, şüpheli. Biz nasıl çekirge ve cırcır böcekleri hücre bölünmesi için embriyolardan hazırlanabilir gösterir. Cırcır böcekleri en evde beslenen hayvan stok--dan yılın herhangi bir zamanda elde etmek kolaydır. Çekirge, sadece sürece araştırmacı bir laboratuvar koloni erişebilir, ama kullanılan türler (Melanoplus sanguinipes) kolayca hücreleri ve uzun, kolay manipüle kromozomlar basık yaz aylarında kolayca elde edilebilecek.
Başka bir nedeni neden embriyolardan deneyler biyologlar küçük bir avuç tarafından yapılmıştır kromozomlar iyi hareket micromanipulators pazarda nadiren kullanılabilir olmasıdır. Biz bir joystick kontrol edilen piezoelektrik micromanipulator hiçbir titreşim, drift veya gecikme arasında joystick hareketi ve iğne hareketi ile iğne hareketi kontrol eder ama manipülatörler diğer türleri de başarıyla kromozomlar zorlayabilir bulduk çevresinde hücre. Eski teknolojiyi kullandıkları rağmen Ellis ve Begg25,26 tarafından tasarlanmış micromanipulators kromozomlar, embriyolardan için idealdir. Piezoelektrik micromanipulators mevcut ve yaygın olarak kullanılan Elektrofizyoloji içinde. Ancak, bu micromanipulators genellikle joystick kontrol edilen değildir. Joystick kontrolü için başarılı bir embriyolardan gerekli düzgün hareketleri anahtarıdır ve çok özel bir joystick için kromozom embriyolardan işe Şu anda mevcut piezoelektrik micromanipulators yapmak için inşa edilmelidir. En iyisi joystick kontrol edilen piezoelektrik micromanipulators joystick hareketi doğrudan bir iğne hareket çevirir doğrudan pozisyon kontrol var.
Yeni tasarlanmış piezoelektrik micromanipulator piyasada bulunan yerlerinden kolayca değiştirilebilir ve bazı küçük 3-b yazdırılan bileşenleri inşa ve de kromozom embriyolardan24için çalışıyor. Micromanipulator ayarlanabilir duyarlılık, el ile kaba konumlandırma ve hiçbir titreşim, drift veya doğrudan pozisyon kontrol iğne ve iğne hareket gecikme vardır. Bilim adamları talimatları mevcut online24kullanarak micromanipulator gerçekleştirebilmesi. Aşağıda bir birincil spermatocyte hücre kültür hazırlama ve micromanipulating yöntemler vardır o kültür hücreleri içinde kromozomlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">VWR micro cover glass</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48366 249</td>
			<td style="width:167px;">25x25 mm, no 1.5</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dow Corning High Vacuum Grease</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td>AA44224-KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">KEL-F Oil #10</td>
			<td style="width:71px;">Ohio Valley Specialty Chemical</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microdissecting Scissors, Stainless Steel</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3271-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dumont #5 fine foreceps</td>
			<td style="width:71px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">0.85 mm outer diameter, 0.65 mm inner diameter Pyrex glass tube&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Drummond Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Custom order--call to request</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Inverted, Phase contrast microscope with 10X or 16X low magnification objective and 60X or 100X high magnification objective</td>
			<td style="width:71px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">microforge</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Narashige</td>
			<td style="width:119px;">MF-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:216px;">micromanipulator</td>
			<td style="width:71px;">either custom built or Burleigh PCS-6000 with custom piezo-controlling joystick</td>
			<td style="width:119px;">PCS-6300</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

micromanipulation of chromosomes in insect spermatocytes

Kromozomların embriyolardan kromozom congression, iğ denetim noktası ve anafaz kromozom taşımalar için mekanizma aydınlatıcı için gerekli bir yöntem olmuştur ve ne kromozom hareketlerini kontrol anlamanın anahtarı olmuştur hücre bölünmesi sırasında. Yetenekli bir biyolog bir micromanipulator kromozomlar iğ, kromozomlar hücrenin içinde yeniden konumlandırmak için ve kuvvetler küçük cam iğne ile çok iyi bir ipucu kullanarak kromozomlar uygulamak için gelen ayırmak için kullanabilirsiniz. Süre tedirginlikler kromozomlar optik yakalama gibi diğer yöntemleri ve diğer kullanımlar bir lazer kullanılarak yapılmış, bugüne kadar başka bir yöntem onlarca yüzlerce mikron az hücre hasar yok olan ölçekte hücresel bileşenleri yeniden konumlandırma sağlar .
Seçim ve özellikle canlı hücre görüntüleme ve embriyolardan, kullanımda çekirge ve kriket spermatocyte birincil kültürlerinin hazırlanması açıklayan kromozomların embriyolardan için uygun hücre hazırlık Burada açıklanan. Buna ek olarak, biz ona bağlı bir cam iğne ile kromozomlar hücrenin ve bir joystick kontrol edilen piezoelektrik micromanipulator kullanımı içinde hareket etmek için kromozomlar sayesinde bunun bölünen hücreler içinde yeniden konumlandırmak için kullanılmak üzere bir iğne inşaatı gösteriyor. Bir örnek sonuç bir kromozom bir mil içinde bir birincil spermatocyte dan ayırmak için ve bu kromozom hücre içinde yeniden konumlandırmak için bir micromanipulator kullanımını göstermektedir.

Şekil 6 2 bitişik çekirge birincil spermatocytes bir örnek embriyolardan embriyolardan olası kullanımlar çeşitli örnekler gösterir. Bu deney yapıldı bir ters, faz kontrast mikroskop kullanarak. 0:00 (gösterilen çırpınış içinde min:s) görüntü manipülasyon önce her iki hücreleri gösterir. Alt hücredeki bir kromozom embriyolardan iğne tarafından uygulanan gerilim altında gösterilir (0:05; siyah ok) ve o zaman tamamen müstakil iğ ...

Watch this Scientific Journal Video about Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes at JoVE.com

Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes

Bu protokol için seçim ve uygun hücreler embriyolardan için hazırlanması ve piezoelektrik micromanipulator kullanımı bu hücrelerde kromozom yeniden konumlandırmak için açıklar.

Embriyolardan kromozomların böcek Spermatocytes

The micromanipulation of chromosomes has been an essential method for illuminating the mechanism for chromosome congression, the spindle checkpoint, and ...

Bu yöntem hücre biyolojisinde, mil kontrol noktasını tatmin ederken gerilimin ne kadar önemli olduğu ve miosiste kromozom davranışında mil eki üzerindeki rolün ne olduğu gibi anahtar soruların yanıtlatımı na yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, deneycinin canlı hücredeki kromozomlara gerilim uygulamasına veya yeniden konumlandırılmasına olanak tanıyan öldürücü olmayan bir teknik olmasıdır. Başlamak için, merkezinden kesilmiş 20 milimetre çapında dairesel delik ile 75 tarafından 25 milimetrelik bir slayt hazırlayın.Sonra, bir 25 ile 25 milimetre lik bir kapak 1.5 kapak iki saniye boyunca bir bunsen brülör alev ile yarık çalıştırın. Cam kaydıraktaki deliğin kenarına vakum yağı uygulayın. Daha sonra, kapağı deliğin üzerine yerleştirin ve sıkı bir mühür oluşturmak için bastırın.Kaydırağı ters çevirin ve yeni oluşturulan diseksiyonu halokarbon yağıyla doldurun. Bazı yetişkin erkek kriket elde ettikten sonra, doğrudan kanat tomurcukları arkasında, karın uzun eksenine paralel dorsal yüzeyi kesmek için diseksiyon makas kullanın. Daha sonra, yavaşça dış iskelet içinde kesim yoluyla testisleri itmek için karın sıkmak.Forceps kullanarak, diseksiyon kuyusu içine izole testisler yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu altında, testisleri daha küçük parçalara bölmek ve herhangi bir yağ çıkarmak için ince işaretleme forceps kullanın. Daha sonra, kapak yarık yüzeyinde yağ altında testislerin içeriğini yayıldı.Yayılan kısmı ancak çıplak gözle görülebilir kadar testislerin içeriğini yaymaya devam edin. Gerekirse ek yağ yüklü diseksiyon kuyuları kullanılabilir. İlk olarak, bunsen brülör alev bir cam tüp sonuna yerleştirin.150 derecelik bir açı ve dar cam boru uzun bir alan oluşturmak için boru ucunu tutun. Daha önce oluşturulan açıdan uzanan ince bölge yaklaşık 10 milimetre uzunluğunda olacak şekilde ince bölgede boru kırın. Mikroforge kullanarak, cam iğneucu eritin, iğne ve mikroforge platin tel arasında 45 derecelik bir açı oluşturan.Daha sonra, aynı anda ısı kapatırken tel cam çekin. Önceden hazırlanmış slaytı ters faz kontrast mikroskobunun aşamasına yerleştirin. Ardından, bölünen hücreleri bulun ve mümkün olan en düşük büyütmeyi kullanarak görüş alanında ortalayın.Mikroiğneyi mikromanipülatörün iğne tutucuya yerleştirin. Daha sonra mikroiğneyi mikroskobun ışık yoluna manuel olarak yerleştirin. Mikroskobu hücreleri içeren düzlemin üzerinde birkaç odak düzlemine odakla.Daha sonra, x ve y eksenlerinde iğnenin gölgesini bulmak için mikroiğneyi birkaç kez yeniden konumlandırmak için joystick kumandasını kullanın. İpucunun konumu görünene kadar iğne pozisyonunu ayarlayın, ardından ucu nüz ekseni boyunca iğnenin konumunu noktalanana kadar ayarlayın. Sonra, hücrelere yeniden odaklanın ve mikroskobu hücre düzleminin hemen üstüne odakla.Daha sonra, ucu bu odak düzleminde odak noktası olacak şekilde iğnenin konumunu yeniden. Daha yüksek büyütme amacı nı ve daha yüksek duyarlılık ayarını kullanarak bu işlemi tekrarlayın. Hücrelere yeniden odaklanın ve konumlarını ayarlayın, böylece görüş alanının merkezinde kalırlar.Hücre içinde kromozomlar iter gibi mikroiğne kontrol etmek için joystick kullanın. İğne ucunun hücrelerin üzerindeki düzlemde kaldığından emin olun. Kromozomu hareket ettirebilmek için hücrenin üst kısmındaki bir kromozoma odaklanın.Daha sonra, iğne ucunu odak haline getirmek için joystick üzerindeki z eksenini ayarlayın ve x ve y'deki joystick ile iğneyi hareket ettirin. İğnenin ucunu doğrudan ilgi kromozomunun üzerine yerleştirin ve istenilen yöne doğru itin. Kromozomu milden ayıracak kadar gerilim uygulayın.Son olarak, kromozomu hücrenin herhangi bir yerine yerleştirin. Bu protokolü kullanarak, mikromanipülasyon kullanarak bir mili bir kromozom yeniden konumlandırmak, gerginlik uygulamak ve tamamen ayırmak mümkündür. Bu örnekte, manipüle edilmiş iki kromozom, mikromanipülasyon iğnesi ile sürekli olarak dürtülerek iğe tekrar bağlanmaktan uzak tutulmuştur.Bir kez hakim, örnekler manipülasyon için hazırlanabilir ve mikromanipülatör 15 ila 20 dakika içinde yerolabilir. Mikromanipülasyon deneyleri birkaç saniye ile birkaç saat arasında sürebilir. Bu prosedürü denerken, hücrenin yan tarafındaki kromozomları kapak fişinden en uzak şekilde manipüle etmeyi unutmamak önemlidir.Bu teknik, geliştirildikten sonra hücre biyolojisi alanında araştırmacıların çekirge ve peygamber devesindeki mil kontrol noktasını keşfetmelerinin önünü açmıştır.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

Bir Co-kültür Sistemde nöronal bağlantıları Oluşumunda değerlendirilmesi için bir optogenetic Yaklaşım

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Gelişmekte olan mikroenjeksiyon Hedef Tekniği<em&gt; Xenopus</em&gt; Böbrek

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Aktif ERK Mekansal ve Zamansal Analizi<em&gt; C. elegans</em&gt; Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Uygulama için yeniden programlamak Germ hücreleri için C. elegans nöronlarda RNAi ve transkripsiyon faktörü ifade ısı şok bağlı

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Hücre toplama Trans Drosophila çentikle bağlama değerlendirmek için deneyleri-ligandlar ve onun inhibisyon CIStarafından-ligandlar

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Düğüm ve Notochordal plaka Gastrulating fare embriyo Tarama elektron mikroskobu ve bütün Dağı ayirt kullanarak görselleştirme

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

Insan kaynaklı pluripotent kök hücre türetilen nöral hücrelerin terapötik transplantasyonu ile fare beyin yaralanması kontrollü Kortiik darbe modeli

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...