Name: a multi-well format polyacrylamide-based assay for studying the effect of extracellular matrix stiffness on the bacterial infection of adherent cells
Uploaded: 2018-07-05T13:00:00
Duration: 11 min 51 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells at JoVE.

M. 우리의 감사 합니다 바닥글, R. Lamason, M. Rengaranjan, 및 그들의 토론 및 실험적인 지원에 대 한 Theriot 연구소의 멤버. 이 작품은 고급 연구 (F.E.O.)에 스탠포드 대학원 친교 (F.E.O.), 및 미국 심장 협회 (E.E.B.)에 대 한 NIH R01AI036929 (J.A.T.), HHMI (J.A.T.), HHMI 길 리엄 친목에 의해 지원 되었다. Cytometry는 스탠포드 공유 FACS 시설에서 수행 되었다.

저자는 공개 없다.

세포는 다양 한 세포의 형태 뿐만 아니라 그들의 유전자 표현과 단백질 활동, 따라서 영향을 미치는 중요 한 세포 기능 및 동작45,46에 영향을 미칠 수 있는 물리적 환경 신호를 느낄 수 있다. 셀의 ECM의 강성은 점점 세포 운동 성, 차별화, 확산, 그리고 궁극적으로 세포 운명47,,4849의 중요 한 변조기로 평가 됩니다. 비록 많은 최근 발전 셀과 그들의 ECM 간의 복잡 한 biomechanical 상호 작용 이해에 왔다, 거의 어떻게 환경 강성에 대 한 세균 감염에 세포의 민감성에 영향을 하는 것이 알려져 있습니다. 이러한 연구를 촉진 하기 위하여 우리는이 소설 다 잘 분석 결과 감염 분석50와 호환 되는 가변 강성의 polyacrylamide hydrogels의 기초가 튼튼한 제조에 따라 개발. 전통적으로, 조직 문화에 있는 세포의 세균성 감염 유리 또는 폴리스 티 렌 표면에 약 1-3 배나 가장 부착 세포8,51의 자연 ECM 보다 엄격한 공부 되었습니다 했다. 여기서 설명 하는 분석 결과 순수 관련 환경 강성 정권에서 박테리아-호스트 상호 작용의 연구를 활성화 하 여 새로운 고속도로 엽니다.
분석 결과 제시의 개념 증명에 대 한 HMEC-1 셀 모델 부착 호스트 세포와 Lm 모델 세균성 병원 체로 선택 되었다. 그러나, 적절 하 게 수정 하는 경우 분석 결과 추가 연구에 대 한 확장할 수 있습니다. 이러한 연구는 박테리아와 바이러스를 포함 하 여 다른 병원 균에 의해 다른 포유류 부착 호스트 세포 유형의 감염을 포함할 수 있다. 이 특정 분석 결과 대 한 젤은 단백질 코팅 콜라겐, 하지만 호스트 세포 유형에 따라 laminin 등 fibronectin, 다른 ECM 단백질-코팅는 하이드로 겔에 대 한 관심의 호스트 세포의 부착을 용이 하 게 사용 하는 52. 호스트 셀 형식에 따라 추가 고려 공부 하이드로 겔 강성 범위입니다. 경직성의 범위는 특정 호스트 셀 형식에 대 한 순수와 관련 되 고 얼마나 잘 그 호스트 첨부 주어진된 강성 히드로. 에 단층을 형성에 의존 해야 마찬가지로, 검사를 원하는 모델 병원 체에 따라 약간의 수정 여기에 설명 된 감염 분석 결과에 구현 해야 할 수 있습니다.
제조 polyacrylamide hydrogels24,,5053 특정 독특한 기능에서 속 인 다에 대 한 이전 방법에 비교 하 여 분석 결과의 혁신 제안된 감염 분석 결과에 통합. 먼저,는 hydrogels 특정 절차의 자동화 뿐 아니라 동시에 여러 조건의 심사를 가능 하 게 다 잘 유리 하단 접시에 만들어집니다. 자주 변경 동시 또는 이러한 접근의 결과 박테리아 감염 호스트에 추가의 정확한 수 호스트 셀 통로 같은 요인에 의해 영향을 받을 수 있습니다 이후 여러 복제는 중요 한 검토에서 여러 조건을 모니터링, 사이 독립 실험. 이 분석 결과의 추가 독특한 기능이입니다는 hydrogels 약 40 µ m, 높이 기존의 현미경을 사용 하 여 이미지를 충분히 얇은. 우리는 우리가 수 성공적으로 수행 하는 라이브 셀 현미경 셀 고정, 그리고 immunostaining 없이 높은 배경 형광 이미징, 다음 것을 보였다. 마지막으로,는 hydrogels 형광 microbeads, 단일 초점 평면에 포함 된 데 위쪽으로 두 개의 레이어로 만들어집니다. 이 특성은 이미징 동안 방해 밖으로의 초점 빛 있을 것입니다 보장 합니다. 구슬의 존재는 균일 하 고 TFM 및 MSM24,,3241의 성능을 향상 하 젤의 표면 지형 모두 시험을 수 있습니다. TFM 및 MSM, 셀 강성 행렬을 변화에 있는 각각의 세포-ECM 및 셀 힘을 계산 가능 하다. 이 새로운 분석 결과 사용 하 여, 그것은 모두 기여 환경 강성 및 감염을 동시에 비교 하 여 물리적 힘의 그런 측정을 만들 수 있습니다. 이러한 접근 방식은, 다음 효과 감염 역학 그것의 과정을 통해 결정 될 수 있다 주인 세포에 있다. 또한, 세포의 세포내 스트레스의 진화는 MSM을 사용 하 여 산출 될 수 있다 고는 단층의 방 벽 완전성의 측정으로 사용할 수 있습니다. 마지막으로, 분석 결과의 멀티 잘 성격을 감안할 때, 동시에 세균 감염, 호스트 세포 역학과 감염 사이 복잡 한 상호 작용을 더 깊이 조사와 약리학 및 유전자 섭 소개 가능 하다.
기술의 고유한 제한 효과 기판 강성에 있다 하나 세포의 확산 속도에 할 수도 있습니다. 일반적으로, 감염 분석에서 우리가 다른 조건 하에서 호스트 세포 밀도 동일 확인 해야 합니다. 그건 셀 밀도 자체 호스트 감염의 민감성에 영향을 미칠 수 있기 때문에. 호스트 셀으로 사용 된 HMEC-1 세포는 hydrogels에 24 h에 대 한 시드 때 그들의 수에 큰 차이가 표시 되지 않습니다. 그러나, 다른 세포 유형 감염 연구 편견 수 있는 하이드로 겔 강성에 따라 차동 확산을 전시 수 있습니다. 마찬가지로, 감염 바이어스 셀 monolayers를 형성 하지 않는다 또는 hydrogels, 특정 세포 유형 (예를들면, 인간 탯 줄 내 피 세포 또는 Madin-다 비 개 신장 매우 부드러운 행렬에 시드는 때 발생에 첨부 하지 않습니다 때 발생할 수 있습니다. 상피 세포 시드 0.6-kPa hydrogels54,55에). 병원 균을 걱정 하는 만큼 특정 박테리아 (예를 들어, 보렐 리아 burdgorferi)에 연결할 수 호스트 세포와 그들을 침공 하지만 수 있습니다 또한 그들을 통해 transmigrate56. 우리는 아직 테스트 하지 경우이 분석 결과 병원 체 환생 연구 일 것 이다 호 중구 transmigrating PA hydrogels에 시드 내 피 세포에 대 한 이전 연구57성공적으로 작동 하도록 문서화 되었습니다 이후 가능한 것 같다. 연구 실시 polyacrylamide hydrogels 주어진된 탄성 계수의 아크릴 아 미드와 비스 아크릴 아 미드24,25,26의 적절 한 농도 혼합 하 여 제조 하는 방법을 보여 주는 많은 되었습니다. ,27. 그러나, 하나 다양 한 경직의 hydrogels에 세포에 TFM 실험을 수행 하고자, 특히 때 그것은 hydrogels AFM 또는 다른 들여쓰기 기법58의 예상된 강성을 확인 하는 중요 한. 예상 값에서 약간의 편차는 다른 용 매 사용 또는 세 아크릴 재고 솔루션을 발생할 수 있습니다 또는 방법 AFM으로 측정 수행 (예를 들어AFM 팁의 모양). 마지막으로, 여기에 소개 하는 접근은 더 현실적이 고 순수 관련 3D 시나리오에 따라 다를 수 있는 2D 매트릭스에 호스트 셀 시드에 기반 하 고 있다. 그러나, 가변 강성과 3D 젤을 제조, 호스트 세포와 그들을 시드 및 병원 체, 그들을 감염 아직도 포함 하는 특정 기술적인 어려움. 그럼에도 불구 하 고, 우리는 가까운 장래에 우리 수 있을 것입니다 3D 설정에서 감염을 공부에 대 한 현재 분석 결과 확장 하는 예상.
정리해 보면, 예비 결과 함께 설명된 프로토콜이 소설 분석 결과 공부 양적 방식에서 및 훨씬 더에서 병원 성 박테리아 부착 호스트 세포의 감염에 대 한 매우 유용한 도구가 될 수 있다는 증거를 제공 이전 시험 보다 생리 적으로 관련 환경입니다. Polyacrylamide 제안 설정에서 hydrogels 거짓말 분석 결과 여러 기법 cytometry, immunostaining 등의 성능 호환에 날조의 뒤에 가벼운 현미경 검사 법, 그리고 견인 힘 현미경 검사 법. 분석 결과 다른 부착 호스트 세포 유형의 감염을 포함 하는 연구에 모두 탈피는 병원 체 감염 호스트 전략의 개발 촉진에 큰 영향을 미칠 것입니다 기대 하는 병원 체에 의해 사용할 수 있습니다. 감염에 대 한 치료 적 중재

대부분 동물의 조직에서 세포는 일반적으로 부착 하 고, 이웃 세포와의 세포 외 기질 (ECM) 연결. 그들의 ECM에 세포의 앵커리지 확산 및 생존1,2셀을 셀 운동에서 배열 하는 많은 세포질 과정을 위해 중요 하다. ECM에 세포 앵커리지 ECM 구성과 강성에 따라 달라 집니다. 동적으로 자신의 골격, 차례로 비판적으로 변경할 셀 역학 및 기능3,,45,6 세포-ECM 및 셀 유착을 다시 정렬 하 여 후자에 있는 변화에 응답 하는 셀 . ECM 경직 시간 (즉, 노화), 그리고 pathophysiological 프로세스 (예를 들면, 동맥 경화, 암, 감염, 등) 공간 (즉, 해 부 위치), 달라질 수 있습니다. 예를 들어, 그것은 널리 그 내 피 세포에 엄격한-부드러운 행렬에 비해 그들의 ECM을 서로 게 증가 된 힘을 발휘 하 고 증가 운동 성 및 확산7,8전시. 마찬가지로, fibroblasts 엄격한 행렬에 있는 그들의 ECM 높은 수축 성 힘을 느 꼈 고 증가 확산, 운동 성, 및 ECM 생산9,,1011. 비록 셀 역학 및 ECM 강성에 대 한 응답 연구 광범위 하 게 다양 한 세포 유형, 부착 호스트 셀 사이의 관계에 대 한 그들의 ECM, 그리고 세균 감염의 강성 여전히 크게 불명 하다.
ECM 강성 박테리아 호스트 세포 상호 작용의 역할을 연구 하기 L. monocytogenes (Lm) 모델 병원으로 선정 되었다. Lm은 다양 한 포유류 호스트에서에서 조직의 감염을 일으킬 수 있는 유비 쿼터 스 음식을 매개로 박테리아 이다. 이 facultative 세포내 병원 체는 혈관 endothelia의 다른 종류를 이동 하 여 먼 장기에 장 상피에서 이동할 수 있습니다. 혈액-뇌 장벽을 위반, Lm 수 막 염, 발생할 수 있습니다 하 고 태 반을 십자가, 그것은 자연 유산12,13발생할 수 있습니다. Lm 종류 다른 호스트를 감염 시킬 수 있습니다 그리고 뚜렷한 병원 성 전략을 사용 하 여 이렇게 수 있습니다. Lm 감염 Lm 감염 시킬 수 있는 방법에 대해 훨씬 덜 알려져 있지만 고 혈관14,,1516의 루멘을 일렬로 세우는 바이패스 내 피 세포 상피 세포의 맥락에서 주로 공부 되었습니다 했다. 또한, 그것은 하지 아직 크게 알려진 내 피 세포가 있는 ECM의 강성이 호스트 세포를 침입 하 고 다음 확산 Lm의 능력을 변조 하는 어떻게. Lm 및 몇 가지 추가적인 세균 종 (즉, 리케차 parkeri) 그들은 둘 다 감염 세포 그들의 세포질에 침략 하 고 촉진 셀 보급17 호스트의 말라 골격의 활용 , 18 , 19. 그들은 그들이 호스트 걸 중 합 경로와 방해 하 고 그들의 앞으로 추진16,20를 용이 하 게 말라 혜성 꼬리를 생산 하는 단백질의 표현을 통해 달성. 감염의 결과로 주인 세포의 말라 골격 특징 아직도 완전히, 잠재적으로 그들은 그들의 ECM에 고 각을 발휘 하는 물리적인 힘을 포함 하 여 호스트 셀의 역학에 영향을 미치는 방식으로 동적으로 다시 정렬할 필요가 다른. 이러한 프로세스 검사, 인간의 microvascular 내 피 세포 (HMEC-1) 선택 되었다 모델 호스트 셀 세 가지 이유: 1. 내 피 세포로 그들은 끊임없이 물리적 신호21; 변화에 노출 되는 mechanosensitive을 높은 것으로 알려져 있습니다 2. Lm 내 피 세포를 감염 시키기 위해 사용 하는 전략은 여전히 크게 알 수 없는22; 그리고 3입니다. HMEC-1는 불멸 하 게 셀 라인 고 수, 그러므로, 쉽게 경작 되며 유전자 조작 대상이.
호스트 세포의 세균성 감염 유리 또는 폴리스 티 렌 기판은 대부분 셀12,,1423의 생리 ECM 보다 훨씬 엄격한 셀 시드 여 공부 생체 외에서 주로 왔다. 누구의 강성은 순수 관련 매트릭스에 시드 세포의 감염을 확인 하 고 세균성 병원 체에 의해 세포의 감염에 ECM 강성의 역할을 명료 하, 우리 따라 얇은 조작에 따라 혁신적인 접근 microbead 임베디드 polyacrylamide hydrogels 다 잘 판에 가변 강성의. 제안 된 방법의 참신은 그는 다 잘 포맷으로 동시에 여러 조건을 모니터링 수 호환 기판에 내장 되어 특정 방법에의 한 여러 기술에 있습니다. HMEC-1 세포에이 단백질 코팅 hydrogels 시드 되었고 감염 되 고 국제화에 따라 형광 또는 constitutively 형광은 다른 Lm 긴장 된. 호스트 HMEC-1 세포의 감염 민감성에 ECM 강성 역할 cytometry에 의해 평가 되었다. 또한, immunostaining 및 형광 현미경 고집 하 고 내 면 박테리아를 사용 되었다. 마지막으로, 견인 힘 현미경 검사 법 (TFM) 감염 동안 그들의 행렬에 호스트 내 피 세포 발휘 견인 스트레스에 Lm 감염의 영향을 특성을 성공적으로 수행 되었다. 제시 분석 결과 다른 세포 또는 병원 체를 사용 하 여 부착 세포의 감염 민감성에 ECM 경직성의 영향에 대 한 연구를 더 사용 하도록 쉽게 수정할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:831px;" width="829">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Reagents</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Sodium hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:151px;">S318-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">(3-Aminopropyl)triethoxysilane</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">A3648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">25% gluteraldehyde</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">G6257-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">40% Acrylamide</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">A4058-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Bis-acrylamide solution (2%w/v)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:151px;">BP1404-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fluorospheres carboxylate-modified microspheres, 0.1 &#956;m, yellow-green fluorescent (505/515)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>F8803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Ammonium Persulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP17925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">TEMED</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">T9281-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Sulfo-SANPAH</td>
			<td>Proteochem</td>
			<td style="width:151px;">c1111-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Collagen, Type I Solution from rat</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">C3867-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">9224-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">HEPES, Free acid</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">4018-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Leibovitz&#39;s L-15 medium, no phenol red</td>
			<td style="width:149px;">Thermofischer</td>
			<td style="width:151px;">21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MCDB 131 Medium, no glutamine</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td style="width:151px;">10372019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Foundation Fetal Bovine Serum, Lot: A37C48A</td>
			<td>Gemini Bio-Prod</td>
			<td>900108 500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Epidermal Growth Factor, EGF</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hydrocortisone</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">H0888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine 200mM</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SH3003401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DPBS 1X</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SH30028FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gentamicin sulfate</td>
			<td>MP biomedicals</td>
			<td>194530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cloramphenicol</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">C0378-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DifcoTM Agar, Granulated</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">214530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BBL TM Brain-heart infusion</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">211059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hoechst 33342, trihydrochloride, trihydrate - 10 mg/ul solution in water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Formaldehyde 16% EM grade</td>
			<td>Electron microscopy</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Listeria monocytogenes antibody</td>
			<td style="width:149px;">Abcam</td>
			<td style="width:151px;">ab35132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor&#174; 546 conjugate</td>
			<td>Thermofischer</td>
			<td style="width:151px;">A-11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">0.25% trypsin-EDTA , phenol red</td>
			<td>Thermofischer</td>
			<td style="width:151px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">COLLAGENASE FROM CLOSTRIDIUM HISTOLYTIC</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">C8051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptomycin sulfate</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:151px;">3810-74-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sucrose</td>
			<td style="width:149px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:151px;">8510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:149px;">Thermofischer</td>
			<td>28364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">MES powder</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">KCl</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">3040-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">MgCl2</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">2444-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EGTA</td>
			<td style="width:149px;">Acros</td>
			<td style="width:151px;">40991</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Disposable lab equipment</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">12 mm circular glass coverslips</td>
			<td style="width:149px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:151px;">12-545-81</td>
			<td>No. 1.5 Coverslip | 10 mm Glass Diameter | Uncoated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass bottom 24 well plates</td>
			<td style="width:149px;">Mattek</td>
			<td style="width:151px;">P24G-1.5-13-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5 ml polystyrene tubes with a 35 &#956;m cell strainer cap&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">T-25 flasks</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">353118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">50 ml conical tubes</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">15 ml conicals tubes</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">352196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Disposable Serological Pipettes (1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml)</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">357551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pasteur Glass Pipettes</td>
			<td style="width:149px;">VWR</td>
			<td>14672-380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pipette Tips (1-200 &#956;l, 101-1000 &#956;l)</td>
			<td style="width:149px;">Denville</td>
			<td style="width:151px;">P1122, P1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Powder Free Examination Gloves</td>
			<td style="width:149px;">Microflex</td>
			<td style="width:151px;">XC-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Cuvettes bacteria</td>
			<td style="width:149px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:151px;">67.746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Razors</td>
			<td style="width:149px;">VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Syringe needle</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">0.2um sterilizng bottles</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Scientific</td>
			<td>566-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">20 ml syringes</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">302830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">0.2um filters</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:151px;">723-2520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">wooden sticks</td>
			<td style="width:149px;">Grainger</td>
			<td>42181501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Saran wrap</td>
			<td style="width:149px;">Santa Cruz Biotechnologies</td>
			<td style="width:151px;">sc-3687</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Plates bacteria</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Large/non-disposable lab equipment</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Tissue Culture Hood</td>
			<td style="width:149px;">Baker</td>
			<td style="width:151px;">SG504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Hemacytometer</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td>Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Bacteria incubator</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Scientific</td>
			<td>IGS180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Tissue culture Incubator</td>
			<td style="width:149px;">NuAire</td>
			<td style="width:151px;">NU-8700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:355px;">Vacuum chamber/degasser</td>
			<td style="width:149px;">Belart</td>
			<td style="width:151px;">42025</td>
			<td>37&#730;C and 5% CO2</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted Nikon Diaphot 200 epifluorescence microscope</td>
			<td style="width:149px;">Nikon</td>
			<td>NIKON-DIAPHOT-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cage Incubator</td>
			<td style="width:149px;">Haison</td>
			<td style="width:151px;">Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scanford FACScan analyzer&#160;</td>
			<td>Stanford and Cytek upgraded FACScan</td>
			<td style="width:151px;">Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pipette Aid</td>
			<td style="width:149px;">Drummond</td>
			<td>4-000-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pipettors (10 &#956;l, 200 &#956;l, 1000ul)</td>
			<td style="width:149px;">Gilson</td>
			<td colspan="2">F144802, F123601, F123602</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">pH meter</td>
			<td style="width:149px;">Mettler Toledo</td>
			<td>30019028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">forceps</td>
			<td style="width:149px;">FST</td>
			<td>11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">1 L flask</td>
			<td style="width:149px;">Fisherbrand</td>
			<td>FB5011000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Autoclave machine</td>
			<td style="width:149px;">Amsco</td>
			<td style="width:151px;">3021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Stir magnet plate</td>
			<td style="width:149px;">Bellco</td>
			<td>7760-06000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Magnet stirring bars</td>
			<td style="width:149px;">Bellco</td>
			<td>1975-00100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:149px;">Beckman</td>
			<td style="width:151px;">DU 640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:355px;">Scanford FACScan analyzer</td>
			<td style="width:149px;">Cytek Biosciences</td>
			<td style="width:151px;">Custom Stanford and Cytek upgraded FACScan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Software</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Microscope Software (&#956;Manager)</td>
			<td style="width:149px;">Open Imaging</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Matlab</td>
			<td style="width:149px;">Matlab Inc</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Flowjo</td>
			<td style="width:149px;">FlowJo, LLC</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:355px;">Automated image analysis software, CellC</td>
			<td style="width:149px;">https://sites.google.com/site/cellcsoftware/</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td>The software is freely available. Eexecutable files and MATLAB source codes can be obtained at https://sites.google.com/site/cellcsoftware/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a multi-well format polyacrylamide-based assay for studying the effect of extracellular matrix stiffness on the bacterial infection of adherent cells

세포 외 기질 강성 일반적 기능, 세포질 행동과 운명에 영향을 잘 알려진 여러 환경 기계 자극 중 구성 되어 있습니다. 하지만 점점 더 많은 부착 세포 유형 응답 매트릭스 강성, 성격 어떻게 세포의 민감성 세균 감염에 매트릭스 강성에 따라 점착으로 크게 알려진 이다 세균성 감염의 효과에 호스트 세포의 역학입니다. 우리는 세균 감염을 호스트 내 피 세포의 민감성이이 세포 상주 하는 매트릭스의 강성에 따라 달라 집니다 그리고 그들의 역학 변경 됩니다 호스트의 감염 박테리아와 세포 가설. 이러한 두 가지 가설을 테스트 하기 위해 내 피 세포 모델 병원 체로 모델 호스트 및 Listeria monocytogenes 로 사용 되었다. 소설 다 잘 포맷 분석 결과 개발 하 여 우리는 L. monocytogenes 여 내 피 세포의 감염에 매트릭스 강성 효과 양적 cytometry 및 immunostaining 뒤에 현미경 검사 법을 통해 평가 될 수 있다 다는 것을 보여줍니다. 또한, 견인 힘 현미경 검사 법을 사용 하 여 호스트 내 피 세포 역학에 L. monocytogenes 감염의 효과 수 공부 될. 셀, 그들의 기질 간의 biomechanical 상호 이해를 향한 중요 한 단계는 부착 세포의 세균성 감염에 조직 관련 역학의 영향의 분석에 대 한 수 있습니다 제안된 된 방법 및 병원 성 박테리아입니다. 이 메서드는 또한 다양 한 다른 유형의 세포 역학 및 기판 강성에 대 한 응답에 대 한 연구에 적용 가능한 각 실험에 동시에 많은 복제를 수행할 수 있어야 하는 것이 중요 이죠.

ECM 강성 종속 민감성 HMEC-1 셀의 Lm 감염: 다양 한 경직의 PA hydrogels, 모든 표면 코팅 콜라겐과 나, 프로토콜의 1 단계 에 설명 된 대로 다 잘 유리 하단 플레이트에 건설 되었다 ( 그림 1참조). AFM 측정26,27 위에서 설명한 대로 hydrogels의 정확한 강성을 확인 수행 했다 ( 그림 2참조). 과거 연구는 내 피 세포의 지하실 멤브레인의 로컬 준수 범위 1 kPa (예를 들어, 뇌 조직)에서 70 kPa (예, 대동맥)36,,3738, 39 , 40. 따라서, 우리는 HMEC-1 세포와 다음 강성 행렬에의 감염을 테스트 하기로: 0.6 kPa, 3 kPa, 20 kPa, 및 70 kPa. 각 하이드로 겔 강성에 대 한 6 hydrogels 결과의 재현성을 평가 하기 위해 조작 했다.
Cytometry ECM 강성 종속의 자화 율 HMEC-1 셀 Lm 감염을 평가 하는 데 사용 되었다 ( 그림 3참조). HMEC-1 세포는 세포내 박테리아만 (참조 그림 1 L - 1N)의 탐지를 허용 국제화 (actAp::mTagRFP), 후 형광 마커를 표현 하는 Lm 스트레인 (JAT985) 감염 되었습니다. JAT985는 또한 ActA를, ActA 말라 혜성 꼬리와 연속적인 세균성 보급의 형성에 필요한 이므로 셀을 확산 박테리아 억제를 결여 된다. 7-감염 된 후 8 h, HMEC-1 세포의 감염 cytometry 사용 하 여 평가 했다. 단일 셀의 분석을 위해, 셀 카운트의 분포의 대량 측 점도 대 앞으로 사용 하 여 문이 했다 고 두 번째 제어 단계 autofluorescence를 전시 하는 셀을 제외 하 수행한 다음 ( 그림 3A - 3 C 참조 ). 예비 결과 그림 3 에 표시 된 표시 HMEC-1 감염 Lm는 약 두 배 HMEC-1 셀 소프트 0.6 kPa hydrogels에 있는 세포에 비해 뻣 뻣 한 70 kPa hydrogels에 있는 더 큰 (참조 그림 3B - 3D). 부드러운 행렬에 비해 뻣 뻣 한에 HMEC-1 세포의 증가 Lm 감염 민감성으로 인해 수: 1. HMEC-1;에 Lm 접착 증가 2. 증가 된 Lm 침공 HMEC-1; 또는 3입니다. 모두 위의 공동 발생입니다. 테스트는 가설 보유, HMEC-1 셀 소프트 (3 kPa)에 뻣 뻣 한 (70 kPa) hydrogels 시드 되었고 감염 constitutively GFP Lm 표현 된 ( 그림 4A - 4 C참조). 감염 직후 샘플 고정 하 고 외부 (접착) 박테리아 항 체로 얼룩진 했다. 양적 현미경을 사용 하 여, 우리는 호스트 셀 (참조 그림 4D) 소프트 젤에 비해 뻣 뻣 한에 있는 때 HMEC-1을 준수 하는 훨씬 더 많은 박테리아는 발견. 교류 cytometry 데이터와 일치, 거기는 훨씬 더 많은 세균 때 호스트 세포 ( 그림 4E참조) 소프트 젤에 비해 뻣 뻣 한에 있는 HMEC-1 내 면. 그러나, HMEC-1 셀에 Lm의 침공 효율성 (박테리아의 박테리아 내 면/총 수)은 기판 강성에 관계 없이 비슷한 (참조 그림 4F).
HMEC-1 Lm에 감염 된 세포의 견인 힘 현미경: HMEC-1 세포의 Lm 감염 첨부 파일 그들의 ECM 또는 서로 게 그들의 방 벽 완전성에 영향을 미치는의 강도 포함 하 여 감염 된 호스트 셀의 역학을 변경할 수 있습니다. 우리 세포-ECM 견인 힘 및 단층 스트레스 현미경41 세포내 긴장 힘을 계산 하기 위해 계산을 견인 힘 현미경32 를 사용 하 여 경우 될 수 있는 여부를 평가 하고자 했다. 그림 5 는 변형 필드, 견인 스트레스 필드, 및 HMEC-1에 감염 된 후 다른 시간 포인트에서 20 kPa hydrogels 세포의 세포내 긴장 분야의 지도 묘사 한다. 그림 5A - 5 D 그림 5E 동안 감염된 제어 HMEC-1 셀 참조- 5 H 300 박테리아/셀 크거나 감염의 다양성에서 Lm 감염 HMEC-1 셀 참조. 이 예비 작업 반면 그 감염 되지 않은 컨트롤 셀에 대 한 관찰 하지 감염된 HMEC-1 셀 Lm, 감염의 과정에서 그들의 세포-ECM 및 세포내 스트레스의 크기를 줄이기 위해 제안 합니다.
HMEC-1 monolayers에 걸쳐 ECM 강성 종속 Lm 보급: 시간 경과 현미경 효과 조사 하는 데 사용 되었다 HMEC-1 monolayers 통해 Lm 보급에 매트릭스 강성. Lm는 단층을 통해 확산, 박테리아 감염 (참조 그림 6A 및 비디오 그림 1 과 2) 시간의 기능으로 성장의 초점을 만들. 감염 초점 영역 볼록 선체, 작은 볼록 다각형 박테리아42주위 점의 집합을 포함 하 여 측정 했다. 호스트 세포의 단층을 통해 L. monocytogenes 세포-세포의 효율성을 측정 하는 필드에는 아무 표준 통계가입니다. 확산 효율 평가, 일부는 감염 초점41, 호스트 세포의 수를 계산 했습니다 그리고 다른 사람이 수동으로 감염 호스트 세포43의 그룹 주위에 그려진된 경계. 우리는 박테리아, 주위 볼록 다각형을 그리는 L. monocytogenes 확산의 효율성을 측정 하는 자동화 된, 일관성, 그리고 계산 저렴 한 과정 이기 때문에 선택 했습니다. 이렇게 함으로써, 우리는 70 kPa hydrogels 3 kPa 매트릭스 ( 그림 6B 및 비디오 그림 1 및 2참조)에 씨앗을 품고 그에 비해에 시드 HMEC-1 셀에 감염 초점 영역에서 약간의 감소를 발견. 감염 초점의 성장의 속도 확인 하려면 방사형 거리 감염 초점 영역의 제곱근 pi를 나눈이 여 시간의 기능으로 구성 했다. 이 수학적 변환 감염 초점의 모양을 대략 원형44가정 합니다. 초점 성장 속도 측정 하 두 3-70 kPa 행렬에 대 한 방사형 거리의 변화 (즉, 기울기)의 속도 측정 했다. 이 방법은 감염 초점 성장 3-kPa 행렬에 시드 HMEC-1 셀에 신속 하 고 단순하게는 해명. 그러나, 초점에서에서 성장 했다 상당히 느린 (첫 200 분)와 약간 느린 (200 ~ 600 분) 70 kPa 매트릭스 ( 그림 6C참조)에 시드 셀. 추가 데이터의 분석 그 감염 초점 성장, 평균, 2 배 느리게 70 kPa 행렬에 특히 첫 번째 200 분 동안 확인 하는 사실, ( 그림 6D참조).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57361/57361fig3.jpg"> 그림 3 : Lm 침공에 HMEC-1 셀의 ECM 강성 종속 민감성 cytometry 사용 하 여 측정 .  HMEC-1 셀 Lm (JAT985)에 감염 되었다 하 고 감염 cytometry에 의해 분석 되었다. A.이 패널 하나의 우물에서 오는 대표 HMEC-1 셀에 대 한 앞으로 점도 대 측면을 보여줍니다. 셀의 대량 배포 파편 (왼쪽)를 제외 하 고 세포 남자 또는 세 쌍둥이 (오른쪽) 게이팅을 통해 선정 됐다. B.이 그래프로 Lm 형광 강렬의 로그의 히스토그램 셀 당 HMEC-1 도금 부드러운 0.6 인민군에 대 한. C.이 그래프로 Lm 형광 강렬의 로그의 히스토그램 셀 당 HMEC-1 뻣 뻣 한 70 kPa hydrogels에 도금. N에 대 한 히스토그램 = 4-6 복제는 서로 다른 색상으로 표시 됩니다. 제어 감염 되지 않은 세포의 히스토그램은 보라색입니다. 어떤 감염을 정의 하는 데 사용 하는 게이트는 빨간색으로 표시 됩니다. 나는 100 이며 감염 된 감염 된 후 평가 8 h. D. 데이터 표시 하이드로 겔 강성 대 HMEC-1 세포 감염된의 비율 (N = 5). 가로 막대가 데이터의 평균을 묘사. P-값 계산 비패라메트릭 Wilcoxon 순위 합계 테스트와 함께. <a href="/files/ftp_upload/57361/57361fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Video Figure 1" src="/files/ftp_upload/57361/57361mov1.jpg"> 비디오 그림 1: HMEC-1 셀 단층 (단계)를 통해 세포내 Lm (빨강 채널)의 보급 3-kPa 기판에 시드. 셀 Leibovitz의 L-15 미디어에서 촬영 했다 (10 %FBS, gentamicin의 20 µ g/mL) 환경 챔버를 37 ˚C에 equilibrated 내부. 이미지 마다 5 분을 수집 했다. 동영상 속도 15 프레임/s. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57361/Video_Figure_1.mov" target="_blank">하십시오가이 비디오를 보려면 여기를 클릭 하십시오. (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>
<img alt="Video Figure 2" src="/files/ftp_upload/57361/57361mov2.jpg"> 비디오 그림 2: HMEC-1 셀 단층 (단계)를 통해 세포내 Lm (빨강 채널)의 보급 70 kPa 기판에 시드. 셀 Leibovitz의 L-15 미디어에서 촬영 했다 (10 %FBS, gentamicin의 20 µ g/mL) 내부 환경 챔버를 equilibrated 37 ° c 이미지 마다 5 분을 수집 했다. 동영상 속도 15 프레임/s. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57361/Video_Figure_2.mov" target="_blank">하십시오가이 비디오를 보려면 여기를 클릭 하십시오. (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>탄성 계수 (E, kPa)</td>
			<td>(40% 재고)에서 아크릴 아 미드 %</td>
			<td>(2% 재고)에서 Bisacrylamide %</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.6</td>
			<td>3</td>
			<td>0.045</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>5</td>
			<td>0.075</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>10</td>
			<td>0.075</td>
		</tr>
<tr>
<td>20</td>
			<td>8</td>
			<td>0.195</td>
		</tr>
<tr>
<td>70</td>
			<td>10</td>
			<td>0.45</td>
		</tr>
</tbody></table> 표 1입니다. 다양 한 경직의 polyacrylamide (PA) hydrogels의 구성. 이 테이블에서 재고 40% 아크릴 솔루션의 비율과 비율의 재고 2% 두번째-아크릴 솔루션 주어진된 강성 (탄성 계수, E)를 달성 하기 위해 서로 다른 열에 표시 됩니다.
<img alt="Supplemental Material" src="/files/ftp_upload/57361/57361supfig1.jpg"> 보충 자료 1입니다. 계산 계산 된 견인 긴장에서 세포내 긴장의. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57361/Supplemental_Material_1.docx" target="_blank">이 파일을 다운로드 하려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells at JoVE.

A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells

우리는 다 잘 형식 polyacrylamide 기반 분석 결과 부착 세포의 세균성 감염에 기질 경직성의 영향 조사에 대 한 개발 했습니다. 이 분석 결과 cytometry, immunostaining, 그리고 견인 힘 현미경 검사 법, 양적 측정 셀, 그들의 기질, 및 병원 성 박테리아 사이 biomechanical 상호 작용의 수와 호환 됩니다.

부착 세포의 세균성 감염에 기질 경직성의 영향을 공부 다 잘 형식 Polyacrylamide 기반 분석

Extracellular matrix stiffness comprises one of the multiple environmental mechanical stimuli that are well known to influence cellular behavior, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

세균성 접착 연구에 전단 응력을 소개합니다

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

연구

면역학 및 감염병학

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

에 셀 운명을 따라<em&gt; E. 대장균</em&gt; 파지 람다에 의해 감염 후

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

A Visual Assay to Monitor T6SS-mediated Bacterial Competition

T6SS로 인한 세균 경쟁을 모니터링 할 비주얼 분석

Type VI secretion systems (T6SSs) are molecular  nanomachines allowing Gram-negative bacteria to transport and inject proteins  into a wide variety of ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

호스트 세포 RN​​A의 합성에 바이러스 감염의 효과를 측정하는 클릭 화학을 사용하여

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

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를 사용하여 폐렴 구균 식민지에서 생균제의 효과를 조사<em&gt; 체외</em&gt; 준수의 분석

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

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Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

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