Name: a multi-well format polyacrylamide-based assay for studying the effect of extracellular matrix stiffness on the bacterial infection of adherent cells
Uploaded: 2018-07-05T13:00:00
Duration: 11 min 51 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells at JoVE.

M. teşekkür ederiz altbilgi, R. Lamason, M. Rengaranjan ve üyeleri, tartışmalar ve deneysel destek için Theriot Lab. Bu eser gelişmiş çalışma (F.E.O.), Stanford Yüksek Lisans Bursu (F.E.O.) ve Amerikan Kalp Derneği (E.E.B.) için NIH R01AI036929 (J.A.T.), HHMI (J.A.T.), HHMI Gilliam bursu tarafından desteklenmiştir. Akış Sitometresi Stanford paylaşılan FACS tesisinde gerçekleştirildi.

Yazarlar ifşa gerek yok.

Hücreleri sadece da böylece etkileyen kritik hücre fonksiyonları ve davranışları45,46gen ifade ve protein faaliyetlerini, hücre morfolojisi etkileyen fiziksel çevre, yardımlar çeşitli hissedebiliyorum. Hücre ECM sertliği giderek hareket, farklılaşma, yayılması ve sonuçta hücre kader47,48,49önemli bir modülatör teşekkür ederiz. Hücreler ve onların ECM arasındaki karmaşık biyomekanik etkileşim anlamada birçok son gelişmeler rağmen az şey bilinmektedir hakkında nasıl çevre sertlik hücreleri duyarlılık bakteriyel enfeksiyona etkiler. Bu tür çalışmaları kolaylaştırmak için biz polyacrylamide hydrogels enfeksiyon deneyleri50ile uyumlu olan tunable sertlik, köklü imalatı dayalı bu roman çok iyi tahlil geliştirilmiştir. Geleneksel olarak, hücre doku kültüründe bir bakteriyel enfeksiyon cam veya yaklaşık 1-3 büyüklük en yapışık hücreleri8,51doğal ECM ağır olan polistren yüzeyler üzerinde çalışılmıştır. Burada açıklanan tahlil yeni karayolları fizyolojik ilgili çevre sertlik rejimi etkileşimlerde bakteri-host incelenmesi etkinleştirerek açılır.
Sunulan testin kavram kanıtı için HMEC-1 hücreleri modeli yapisan konak hücreleri ve Lm bir modeli bakteriyel patojen olarak olarak seçilmiştir. Ancak, tahlil için daha fazla çalışmaları durumunda uygun şekilde genişletilebilir. Bu tür çalışmalar farklı memeli yapisan ana hücre tiplerinin enfeksiyon bakteri ve virüsler de dahil olmak üzere ek patojenlerin içerebilir. Bu özel tahlil için jeller protein kaplı kollajen ile ben, ama ana hücre türüne bağlı olarak, ek faiz hidrojel ana hücrelerinin kolaylaştırmak için farklı ECM protein-kaplama, laminin veya fibronektin, gibi kullanmak mümkündür 52. konak hücre türüne göre değişir bir ek dikkate belirlenmesi için hidrojel sertlik aralığı olur. Sertlik aralığı belirli bir ana hücre tipi için fizyolojik ilgili nedir ve ne kadar iyi bir monolayer verilen sertlik hidrojel. şekillendirme barındıran verdiği bağlı olmalıdır Benzer şekilde, muayene olmak istediğiniz modeli patojen bağlı olarak hafif değişiklikler burada açıklanan enfeksiyon tahlil uygulanması gerekebilir.
Üretim polyacrylamide hydrogels24,50,53 bazı benzersiz özellikleri yatıyor için önceki yöntemleri ile karşılaştırıldığında tahlil yenilik önerilen enfeksiyon tahlil içine entegre. İlk olarak, hydrogels çok iyi cam alt levha, aynı anda birden çok koşul tarama sağlayan yanı sıra belirli yordamları Otomasyonu inşa edilir. Birden çok koşul aynı zamanda veya böyle bir yaklaşım, sonucunu konak hücre geçit ve ana bilgisayarlara bulaştırmak için eklendi bakteri kesin sayısı gibi faktörler tarafından etkilenmiş olabilir bu yana birden fazla çoğaltır çok önemli inceleyerek kontrolü, hangi sık sık değiştirmek bağımsız denemeler arasında. Ek bir benzersiz özelliği bu testin hydrogels yüksekliği yaklaşık 40 µm, hangi geleneksel mikroskobu kullanarak görüntüye ince olması. Biz başarıyla hem canlı cep mikroskobu ve hücre fiksasyon ve yüksek arka plan floresans tanıtımı olmadan görüntüleme tarafından takip immunostaining gerçekleştirebilirsiniz gösterdi. Son olarak, hydrogels ile bir tek odak düzlem sınırlı floresan lastikteki gömülü üst bir iki kat yapılır. Bu öznitelik görüntüleme sırasında müdahale odak ışık olacak sağlar. Boncuk varlığı onlar üniforma ve geliştirmek belgili tanımlık ifa TFM ve MSM24,32,41sağlamak için jeller yüzey topografyası muayene sağlar. TFM ve MSM, sırasıyla sertlik matrisler değişen üzerinde ikamet eden hücrelerin hücre-ECM ve hücre-hücre kuvvetleri hesaplamak mümkündür. Bu roman tahlil kullanarak, aynı anda her iki çevre sertlik ve enfeksiyon katkı karşılaştırarak fiziksel kuvvetlerin böyle ölçümleri yapmak mümkündür. Böyle bir yaklaşım, mekanik onun ders boyunca belirlenen ana bilgisayar cep telefonundan etkisi enfeksiyon kapmış. Ayrıca, hücre hücre içi stresleri evrimi MSM kullanılarak hesaplanabilir ve monolayer bariyer bütünlüğünü bir ölçüsü olarak kullanılabilir. Son olarak, çok iyi tahlil doğası göz önüne alındığında, farmakolojik ve genetik tedirginlikler konak hücre mekaniği ve enfeksiyon arasındaki karmaşık etkileşim daha derinlemesine araştırmak için bir bakteriyel enfeksiyon ile aynı anda tanıtmak mümkün.
Doğal sınırlama tekniğin etkisi substrat sertlik yatıyor bir tane hücre proliferasyon oranı üzerinde olabilir. Tipik olarak, enfeksiyon deneyleri, konak hücre yoğunluğu farklı koşullar altında aynı olduğundan emin olmak ihtiyacımız var. Hücre yoğunluğu tek başına ana enfeksiyona yatkınlık üzerinde bir etkisi olabilir çünkü. Konak hücreleri kullanılan HMEC-1 hücreleri ne zaman hydrogels 24 h için numaralı seribaşı numarasına önemli bir fark gösterme. Ancak, farklı hücre tipleri fark yayılmasına bağlı olarak enfeksiyon studies önyargı hidrojel sertlik, sergi. Hücreleri monolayers oluşturmaz veya üzerinde de hydrogels, belirli hücre tipleri çok yumuşak matrisler (Örneğin, insan göbek kordonu endotel hücreleri veya Madin-Darby köpek böbrek seribaşı oluşur gibi eklemek değil benzer şekilde, enfeksiyon önyargı ortaya çıkabilir epitel hücreleri seribaşı 0,6-kPa hydrogels54,55üzerinde). Patojenler ile ilgili olarak bazı bakteriler (Örneğin, Borrelia burdgorferi) üzerine ekleyebilirsiniz ev sahipliği hücreleri ve onları işgal ama aynı zamanda onları transmigrate56. Biz henüz bu tahlil patojen hicret çalışmaları için çalışmaya devam eder, ancak bu mümkün görünüyor, endotel hücreleri PA hydrogels üzerinde tohumlari transmigrating nötrofil önceki çalışmalar57başarılı bir şekilde çalışması için dokümante edilmiş test etmedim. Akrilamid ve BIS-akrilamid24,25,26 uygun konsantrasyonlarda karıştırılarak verilen Young katsayısı polyacrylamide hydrogels üretmek nasıl gösteren çalışmalar yapılan bir çok olmuştur ,27. Ancak, özellikle bir değişen sertlik hydrogels üzerinde ikamet eden hücreler TFM deneyler yapmak istediği zaman, AFM veya diğer girinti teknikleri58ile hydrogels beklenen sertliği doğrulamak önemlidir. Beklenen değer hafif sapmalar kullanılan farklı bir çözücü veya yaşlı akrilamid hisse senedi çözümünü nedeniyle ortaya çıkabilir veya yolu AFM tarafından gerçekleştirilen (Örneğin, AFM uç şekli) ölçüleri vardır. Son olarak, burada sunulan yaklaşım konak hücreleri daha gerçekçi ve fizyolojik olarak ilgili 3D senaryodan farklı olabilir 2D matrisler üzerinde tohum üzerinde temel alır. Ancak, 3D jelleri tunable sertlik ile üretim, onları konak hücreleri ile tohum ve sonra onları patojenler ile bulaşmasını hala kapsar bazı teknik sorunlar. Yine de, biz yakın gelecekte biz enfeksiyon bir 3D ortamda çalışmak için geçerli tahlil uzatmak mümkün olacağını tahmin.
Ön sonuçlar ile birlikte açıklanan protokol sağlar bu roman tahlil enfeksiyon yapisan konak hücre patojen bakteriler nicel bir moda ve bir çok daha fazlası ile çalışmak için son derece yararlı bir araç olabilir kanıt özetlemek gerekirse, fizyolojik olarak ilgili ortamı daha önceden incelenecek. Tahlil akış sitometresi, immunostaining gibi bir çok teknik performansı ile uyumlu olmasıdır hydrogels önerilen kurulum yatıyor polyacrylamide imalatı güç ışık mikroskobu tarafından takip ve çekiş kuvvet mikroskobu. Tahlil patojenler, biz her iki tarafından patojenleri ana bilgisayarları enfekte stratejileri çözülüyor ve gelişimini kolaylaştıran önemli bir etkiye sahip olacaktır tahmin göre farklı yapisan ana hücre tiplerinin enfeksiyon ile ilgili çalışmalar için kullanılabilir. enfeksiyonlara karşı tedavi müdahaleler.

En hayvan dokularında komşu hücreleri ve hücre dışı matriks (ECM) eklemek genellikle yapisan hücrelerdir. Anchorage onların ECM hücrelerin çoğalması ve hayatta kalma1,2hücre için hücre hareketliliği değişen birçok hücresel süreçler için önemlidir. ECM hücresel anchorage ECM kompozisyon ve sertlik üzerinde bağlıdır. Dinamik olarak yeniden düzenleyerek kendi sitoiskeleti, buna karşılık eleştirel alter hücre biyomekanik ve işlevleri3,4,5,6 hücre-ECM ve hücre-hücre yapışıklıklar hücreleri ikinci değişikliklere yanıt . ECM sertlik alanı (yani, anatomik konumu), zaman (yani, yaşlanma) ve patofizyolojik işlemleri (Örneğin, damar sertliği, kanser, enfeksiyon, vb) değişebilir. Örneğin, yaygın olarak bu endotel kabul edildikten bulunan hücreleri daha sert-yumuşak matrisler ile karşılaştırıldığında artan kuvvetleri onların ECM ve birbirlerine uygulamak ve artan hareketliliği ve nükleer silahların yayılmasına karşı7,8sergilemek. Aynı şekilde, daha sert matrisler üzerinde ikamet eden fibroblastlar yüksek contractile kuvvetleri onların ECM vermek ve artan nükleer silahların yayılmasına karşı hareketliliği ve ECM üretimi9,10,11göster. Hücre mekaniği ve ECM sertlik yanıt kapsamlı için çeşitli hücre tiplerinin, yapisan konak hücreleri arasındaki ilişki incelenmiştir onların ECM ve bakteriyel enfeksiyonlar sertliği hala büyük ölçüde bilinmemektedir.
ECM sertlik bakteri konak hücre etkileşimleri rol çalışmaya, L. Monositogenez (Lm) modeli patojen seçildi. LM sistemik enfeksiyon çeşitli memeli ev sahibi olarak neden olabilir her yerde bir gıda kaynaklı bakteri var. Bu fakültatif intraselüler patojen Bağırsak epitel vasküler endothelia farklı türde çaprazlayan tarafından uzak organlara taşıyabilirsiniz. Kan - beyin bariyerini ihlal, Lm menenjit neden olabilir ve plasenta haçlar, o kendiliğinden kürtaj12,13neden olabilir. LM farklı konak hücre tipleri bulaşabilir ve çok farklı patojenik stratejileri kullanarak yapabilirsiniz. LM enfeksiyonu çoğunlukla epitel hücreleri, bağlamında daha az nasıl Lm-ebilmek bulaştırmak hakkında bilinen iken ve yan yol endotel hücreleri kan damarları14,15,16lümen astar çalışılmıştır. Ayrıca, hala nasıl Lm'ın yetenek bu konak hücreleri istila ve sonra yayıldı endotel hücreleri bulunduğu ECM sertliği gelen büyük ölçüde bilinmeyen 's. LM ve birkaç ek bakteriyel türler (yani, Rickettsia'nin parkeri) onlar için her ikisi de enfekte hücreleri onların sitoplazma istila ve hücre-hücre yayma17 kolaylaştırmak ev sahibi aktin sitoiskeleti yararlanmak , 18 , 19. bu ana bilgisayar aktin polimerizasyon yolları ile müdahale etmek ve onların ileri itiş16,20kolaylaştırmak aktin kuyruklu yıldız kuyrukları üretmek için sağlayan proteinler ifade aracılığıyla ulaşmak. Enfeksiyon sonucu olarak, dinamik olarak hala tam karakterize, potansiyel olarak onların ECM ve her sarfetmek fiziksel güçleri de dahil olmak üzere ana bilgisayar hücreleri biyomekanik etkileyen bir şekilde yeniden düzenlemek ana hücrenin aktin sitoiskeleti ihtiyacı diğer. Bu işlemleri incelemek için insan mikrovasküler endotel hücreleri (HMEC-1) modeli konak hücreleri üç nedenden dolayı seçilmiştir: 1. endotel hücreleri son derece mechanosensitive onlar sürekli fiziksel ipuçları21; değişen için sunulur olarak bilinmektedir 2. lm endotel hücreleri enfekte için istihdam stratejileri hala büyük ölçüde bilinmeyen22vardır; ve 3. HMEC-1 bir ölümsüzleştirdi hücre hattı ve bu nedenle, kolaylıkla kültürlü ve genetik manipülasyon için tabi.
Konak hücre bakteriyel enfeksiyon hücreleri cam veya önemli ölçüde çoğu hücreleri12,14,23fizyolojik ECM sert polistren yüzeylerde tohum tarafından okudu vitro çoğunlukla olmuştur. Enfeksiyon seribaşı olan sertlik fizyolojik ilgili bir matris hücre incelemek ve ECM sertlik hücreleri enfeksiyon üzerinde rolü bakteriyel patojenler tarafından aydınlatmak için ince imalatı dayalı yenilikçi bir yaklaşımla takip Çok iyi plakaları tunable sertlik microbead gömülü polyacrylamide hydrogels. Önerilen yaklaşım yenilik çok iyi biçimi nedeniyle aynı anda birden çok koşul izleme sağlar ve yüzeylerde inşa edilir belirli biçimi nedeniyle bir çok teknik ile uyumlu olduğunu yatıyor. HMEC-1 hücreleri bu protein kaplı hydrogels tohumlari ve içselleştirilmesi floresan olmak veya yapısal floresan olan farklı Lm suşları ile enfekte. ECM sertlik enfeksiyon duyarlılık ana bilgisayar HMEC-1 hücre üzerinde rolü akış sitometresi tarafından değerlendirilmiştir. Ayrıca, immunostaining ve floresan mikroskopi yapışan ve içselleştirilmiş bakteriler arasında ayırt etmek için kullanılmıştır. Son olarak, çekiş kuvveti mikroskopisi (TFM) başarıyla Lm enfeksiyon konak endotel hücreleri sarfetmek çekiş stresleri üzerinde etkisi onların matrisler enfeksiyon sırasında tanımlamak için gerçekleştirildi. Sunulan tahlil daha fazla çalışmalar ECM sertlik etkisi enfeksiyon duyarlılık yapisan hücre farklı hücre hatları veya patojenler kullanarak etkinleştirmek için kolayca değiştirilebilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:831px;" width="829">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Reagents</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Sodium hydroxide pellets</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:151px;">S318-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">(3-Aminopropyl)triethoxysilane</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">A3648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">25% gluteraldehyde</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">G6257-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">40% Acrylamide</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">A4058-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Bis-acrylamide solution (2%w/v)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:151px;">BP1404-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fluorospheres carboxylate-modified microspheres, 0.1 &#956;m, yellow-green fluorescent (505/515)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>F8803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Ammonium Persulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP17925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">TEMED</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">T9281-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Sulfo-SANPAH</td>
			<td>Proteochem</td>
			<td style="width:151px;">c1111-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Collagen, Type I Solution from rat</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">C3867-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">9224-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">HEPES, Free acid</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">4018-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Leibovitz&#39;s L-15 medium, no phenol red</td>
			<td style="width:149px;">Thermofischer</td>
			<td style="width:151px;">21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MCDB 131 Medium, no glutamine</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td style="width:151px;">10372019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Foundation Fetal Bovine Serum, Lot: A37C48A</td>
			<td>Gemini Bio-Prod</td>
			<td>900108 500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Epidermal Growth Factor, EGF</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hydrocortisone</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">H0888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine 200mM</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SH3003401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DPBS 1X</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SH30028FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gentamicin sulfate</td>
			<td>MP biomedicals</td>
			<td>194530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cloramphenicol</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">C0378-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DifcoTM Agar, Granulated</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">214530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BBL TM Brain-heart infusion</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">211059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hoechst 33342, trihydrochloride, trihydrate - 10 mg/ul solution in water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Formaldehyde 16% EM grade</td>
			<td>Electron microscopy</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Listeria monocytogenes antibody</td>
			<td style="width:149px;">Abcam</td>
			<td style="width:151px;">ab35132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor&#174; 546 conjugate</td>
			<td>Thermofischer</td>
			<td style="width:151px;">A-11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">0.25% trypsin-EDTA , phenol red</td>
			<td>Thermofischer</td>
			<td style="width:151px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">COLLAGENASE FROM CLOSTRIDIUM HISTOLYTIC</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">C8051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptomycin sulfate</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:151px;">3810-74-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sucrose</td>
			<td style="width:149px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:151px;">8510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:149px;">Thermofischer</td>
			<td>28364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">MES powder</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">M3885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">KCl</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">3040-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">MgCl2</td>
			<td style="width:149px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:151px;">2444-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EGTA</td>
			<td style="width:149px;">Acros</td>
			<td style="width:151px;">40991</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Disposable lab equipment</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">12 mm circular glass coverslips</td>
			<td style="width:149px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:151px;">12-545-81</td>
			<td>No. 1.5 Coverslip | 10 mm Glass Diameter | Uncoated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass bottom 24 well plates</td>
			<td style="width:149px;">Mattek</td>
			<td style="width:151px;">P24G-1.5-13-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5 ml polystyrene tubes with a 35 &#956;m cell strainer cap&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">T-25 flasks</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">353118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">50 ml conical tubes</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">15 ml conicals tubes</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">352196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Disposable Serological Pipettes (1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml)</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">357551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pasteur Glass Pipettes</td>
			<td style="width:149px;">VWR</td>
			<td>14672-380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pipette Tips (1-200 &#956;l, 101-1000 &#956;l)</td>
			<td style="width:149px;">Denville</td>
			<td style="width:151px;">P1122, P1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Powder Free Examination Gloves</td>
			<td style="width:149px;">Microflex</td>
			<td style="width:151px;">XC-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Cuvettes bacteria</td>
			<td style="width:149px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:151px;">67.746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Razors</td>
			<td style="width:149px;">VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Syringe needle</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">0.2um sterilizng bottles</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Scientific</td>
			<td>566-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">20 ml syringes</td>
			<td style="width:149px;">BD</td>
			<td style="width:151px;">302830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">0.2um filters</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:151px;">723-2520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">wooden sticks</td>
			<td style="width:149px;">Grainger</td>
			<td>42181501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Saran wrap</td>
			<td style="width:149px;">Santa Cruz Biotechnologies</td>
			<td style="width:151px;">sc-3687</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Plates bacteria</td>
			<td style="width:149px;">Falcon</td>
			<td style="width:151px;">351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Large/non-disposable lab equipment</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Tissue Culture Hood</td>
			<td style="width:149px;">Baker</td>
			<td style="width:151px;">SG504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Hemacytometer</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td>Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Bacteria incubator</td>
			<td style="width:149px;">Thermo Scientific</td>
			<td>IGS180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Tissue culture Incubator</td>
			<td style="width:149px;">NuAire</td>
			<td style="width:151px;">NU-8700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:355px;">Vacuum chamber/degasser</td>
			<td style="width:149px;">Belart</td>
			<td style="width:151px;">42025</td>
			<td>37&#730;C and 5% CO2</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted Nikon Diaphot 200 epifluorescence microscope</td>
			<td style="width:149px;">Nikon</td>
			<td>NIKON-DIAPHOT-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cage Incubator</td>
			<td style="width:149px;">Haison</td>
			<td style="width:151px;">Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scanford FACScan analyzer&#160;</td>
			<td>Stanford and Cytek upgraded FACScan</td>
			<td style="width:151px;">Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pipette Aid</td>
			<td style="width:149px;">Drummond</td>
			<td>4-000-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Pipettors (10 &#956;l, 200 &#956;l, 1000ul)</td>
			<td style="width:149px;">Gilson</td>
			<td colspan="2">F144802, F123601, F123602</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">pH meter</td>
			<td style="width:149px;">Mettler Toledo</td>
			<td>30019028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">forceps</td>
			<td style="width:149px;">FST</td>
			<td>11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">1 L flask</td>
			<td style="width:149px;">Fisherbrand</td>
			<td>FB5011000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Autoclave machine</td>
			<td style="width:149px;">Amsco</td>
			<td style="width:151px;">3021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Stir magnet plate</td>
			<td style="width:149px;">Bellco</td>
			<td>7760-06000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Magnet stirring bars</td>
			<td style="width:149px;">Bellco</td>
			<td>1975-00100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:149px;">Beckman</td>
			<td style="width:151px;">DU 640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:355px;">Scanford FACScan analyzer</td>
			<td style="width:149px;">Cytek Biosciences</td>
			<td style="width:151px;">Custom Stanford and Cytek upgraded FACScan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Software</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Microscope Software (&#956;Manager)</td>
			<td style="width:149px;">Open Imaging</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Matlab</td>
			<td style="width:149px;">Matlab Inc</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:355px;">Flowjo</td>
			<td style="width:149px;">FlowJo, LLC</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:355px;">Automated image analysis software, CellC</td>
			<td style="width:149px;">https://sites.google.com/site/cellcsoftware/</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td>The software is freely available. Eexecutable files and MATLAB source codes can be obtained at https://sites.google.com/site/cellcsoftware/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a multi-well format polyacrylamide-based assay for studying the effect of extracellular matrix stiffness on the bacterial infection of adherent cells

Hücre dışı matriks sertlik hücresel davranış, işlev ve kader genel olarak etkilemek için bilinen birden çok çevre mekanik uyaranlara kapsar. Her ne kadar giderek daha fazla yapışık hücre tipleri yanıt matris sertlik için karakterize, bakteriyel enfeksiyon hücreleri yatkınlık bağlıdır üzerinde matris sertlik yapışık olarak büyük ölçüde bilinmeyen nasıl bakteriyel enfeksiyon üzerinde etkisidir biyomekanik konak hücre. Bu hücrelerin bulunduğu matris sertliği konak endotel hücreleri duyarlılık bir bakteriyel enfeksiyona bağlıdır ve konağın enfeksiyon bakteri hücreleri-ecek değişmek onların biyomekanik öngörmekteyiz. Bu iki hipotezler test etmek için endotel hücreleri modeli ev sahipliği yapan ve Listeria Monositogenez bir model patojen kullanılmıştır. Roman çok iyi biçim tahlil geliştirerek, gösterdiğimiz matris sertlik etkisi enfeksiyon L. Monositogenez tarafından endotel hücrelerinin kantitatif akış sitometresi ve mikroskopi tarafından takip immunostaining ile değerlendirilebilir. Buna ek olarak, çekiş kuvveti mikroskopisi kullanılarak, ana bilgisayar endotel hücre biyomekanik olarak L. Monositogenez enfeksiyon etkisini ele. Hücreleri, onların hücre dışı matriks biyomekanik Hofstede anlama yolunda önemli bir adım olan bakteriyel enfeksiyon yapisan hücre, doku ilgili mekanik etkisi analizi için önerilen yöntem sağlar ve patojen bakteriler. Bu yöntem aynı zamanda paralel olarak her deney birçok çoğaltır gerçekleştirmek önemli olduğu için hücre biyomekanik ve yanıt-e doğru yüzey sertliği çalışmalar diğer türleri çok çeşitli geçerlidir.

HMEC-1 hücre ECM sertlik bağımlı duyarlılık Lm enfeksiyon: Değişen sertlik PA hydrogels, tüm yüzeyi kaplı kollajen ile ben, çok iyi cam alt tabakalarına Adım 1 Protokolü'nün içinde açıklandığı gibi inşa edilmiştir (bkz. Şekil 1). AFM ölçümleri gerçekleştirilen26,27 daha önce açıklandığı gibi hydrogels tam sertliği onaylamak için (bkz: Şekil 2). Son çalışmalar endotel hücre membran yerel uyumluluk 70 kPa (Örneğin, aort)36,37,38için, 1 kPa (Örneğin, beyin dokusu) arasında olabilir göstermiştir 39 , 40. bu nedenle, HMEC-1 hücreleri ile aşağıdaki sertlik matrisler üzerinde ikamet eden enfeksiyon test etmek seçti: 0.6 kPa, 3 kPa, 20 kPa ve 70 kPa. Her hidrojel sertlik için altı hydrogels sonuçları tekrarlanabilirlik değerlendirmek için fabrikasyon.
Akış Sitometresi ECM sertlik bağımlı duyarlılık HMEC-1 hücre Lm enfeksiyon değerlendirmek için kullanılan (bkz. Şekil 3). HMEC-1 hücreleri hücre içi bakteriler tek (bakınız Şekil 1 L - 1N) algılanmasını sağlayan bir floresan marker içselleştirilmesi (actAp::mTagRFP), sonra ifade eden bir Lm gerilme (JAT985) ile bulaşmış. JAT985 da ActA ActA aktin kuyruklu yıldız kuyrukları ve sonraki bakteriyel yayılması oluşumu için gerekli olduğundan hücre hücre yayılan bakteri devre dışı bırakılması, yoksun. 7 - 8 h sonrası enfeksiyon, HMEC-1 hücreleri enfeksiyon akış sitometresi kullanarak değerlendirildi. Tek hücre analizi sağlamak için hücre sayısı dağılımı toplu yan dağılım çizim karşı ileri kullanarak geçişli ve sonra ikinci bir perdeleme adım autofluorescence sergi hücreleri dışlamak için gerçekleştirildi (bkz: Şekil 3A - 3 C ). Şekil 3 ' te tasvir ilk sonuçlar HMEC-1 enfeksiyonu Lm ile yaklaşık iki kat olduğunu göstermek için yumuşak 0.6 kPa hydrogels üzerinde bulunan hücreleri ile karşılaştırıldığında sert 70 kPa hydrogels bulunan HMEC-1 hücreleri daha büyük (bkz: Şekil 3B - 3D). sert yumuşak matrisler ile karşılaştırıldığında bulunan HMEC-1 hücrelerinin artan Lm enfeksiyon duyarlılık nedeniyle olabilir: 1. HMEC-1; üzerine Lm yapışma arttı 2. artan Lm işgal içine HMEC-1; ya da 3. ikisini birlikte yukarıdaki meydana gelen. Hangi hipotez tutar sınamak için HMEC-1 hücreleri (3 kPa) yumuşak ve sert (70 kPa) hydrogels numaralı seribaşı ve yapısal Lm ifade GFP ile enfekte (bkz. Şekil 4A - 4 C). Örnekleri kısa bir süre sonra enfeksiyon tespit edildi ve dış (yapışan) bakteriler antikorları ile lekeli. Nicel mikroskobu kullanarak, önemli ölçüde daha fazla bakteri konak hücreleri sert yumuşak jeller (bkz. Şekil 4D) karşılaştırıldığında çalıştırabilen zaman HMEC-1'e bağlı kalarak vardır bulundu. Akış Sitometresi verilerle tutarlı, önemli ölçüde daha fazla bakteri vardır ne zaman sert yumuşak jeller (bkz. Şekil 4E) karşılaştırıldığında üzerinde konak hücreleri ikamet HMEC-1 tarafından içselleştirilmiş. Ancak, HMEC-1 hücrelere Lm (bakteri içselleştirilmiş/toplam bakteri sayısı) işgali verimliliği benzer yüzey sertliği ne olursa olsun (bkz. Şekil 4F).
Çekiş kuvveti mikroskopisi Lm-enfekte HMEC-1 hücre: LM enfeksiyon HMEC-1 hücre enfekte konak hücreleri kendi bariyer bütünlüğünü etkileyen ek onların ECM ya da birbirlerine, gücünü de dahil olmak üzere, biyomekanik değişiklik. Bu durumda hücre-ECM çekiş güçleri ve hücre içi tensional kuvvetleri hesaplamak için Monolayer stres mikroskobu41 hesaplamak için çekiş kuvveti mikroskopisi32 kullanarak olabilir olup olmadığını değerlendirmek istedi. Şekil 5 deformasyon alanı, çekiş stres alan ve farklı zaman puan sonrası enfeksiyon, 20-kPa hydrogels bulunan HMEC-1 hücrelerinin hücre içi gerginlik alan haritalar gösteriyor. Rakamlar 5A - 5 D bakın bulaşmamış kontrol HMEC-1 hücrelere rakamlar 5E süre - 5 H bakın enfeksiyon 300 bakteri/hücreye eşit çokluğu, Lm ile enfekte HMEC-1 hücrelere. Bu hastalık bulaşmamış tek kontrol hücreleri için görülmektedir değil ise bu ön çalışma enfekte HMEC-1 hücreleri Lm, bir enfeksiyonla süresince büyüklüğü onların hücre-ECM ve hücre içi gerilmeler azaltmak öneriyor.
ECM sertlik bağımlı Lm yayma HMEC-1 monolayers arasında: Hızlandırılmış mikroskobu etkisini araştırmak için kullanılan Lm yayma yoluyla HMEC-1 monolayers üzerinde matris sertlik vardır. LM monolayer yayılır gibi bir odak zaman (bkz: Şekil 6A ve Video Şekil 1 ve 2) bir fonksiyonu büyür enfeksiyon bakteri oluşturun. Enfeksiyon odağı alan bir dışbükey hull, bakteri42etrafında noktalar kümesi kapsayan en küçük dışbükey Çokgen çizim tarafından ölçüldü. L. Monositogenez hücre hücre yayılmış bir monolayer konak hücre aracılığıyla verimliliğini ölçmek için alan hiçbir standart ölçü olduğunu. Formanın verimliliği değerlendirmek için bazı ana hücreleri bir enfeksiyon odağı41yılında sayılır ve başkaları el ile enfeksiyon ana hücreleri43grup etrafında çizilmiş sınırları var. L. Monositogenez yayılan verimliliğini ölçmek için otomatik, tutarlı ve hesaplama açısından ucuz bir işlem olduğundan bakteri bir dışbükey çokgen çizmek seçtik. Böylece, o (bkz: Şekil 6B ve Video Şekil 1 ve 2) 3 kPa matrisler üzerinde seribaşı karşılaştırıldığında 70 kPa hydrogels üzerine tohumlari HMEC-1 hücrelerindeki enfeksiyon odağı alanındaki hafif bir düşüş bulduk. Enfeksiyon odağı büyüme oranı belirlemek için radyal mesafe bir fonksiyonu olarak enfeksiyon odağı alan kare kökünü alarak ve bu pi ile bölme çizildi. Bu matematiksel dönüşüm enfeksiyon odağı şekli kabaca dairesel44olduğunu varsayar. Odak büyüme hızını ölçmek için (yani, yamaç) her iki 3 ve 70 kPa matrisler için radyal mesafe değişim oranı ölçüldü. Bu yaklaşım enfeksiyon odağı daha hızlı ve tekdüze 3-kPa matrisler tohumlari HMEC-1 hücrelerdeki büyüdü aydınlatılmamıştır. Ancak, odak önemli ölçüde yavaş (ilk 200 dk) ve biraz daha yavaş (200-600 dk) (bkz. Şekil 6C) 70-kPa matrisler numaralı seribaşı hücreleri büyüdü. Nitekim, enfeksiyon odağı, ortalama olarak daha yavaş 70-kPa matrisler, özellikle ilk 200 dk sırasında iki kat büyüdü daha fazla veri çözümlemesi onaylandı (bkz. Şekil 6D).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57361/57361fig3.jpg"> Şekil 3 : Lm işgali HMEC-1 hücre ECM sertlik bağımlı duyarlılık ölçülen akış sitometresi kullanarak .  HMEC-1 hücreleri Lm (JAT985) ile enfekte ve enfeksiyon akış sitometresi tarafından analiz edildi. A. Bu panel ileri dağılım çizim temsilcisi HMEC-1 hücreler tek bir kuyudan geliyor için karşı tarafı gösterir. Toplu dağıtım hücre (solda) enkaz dışlamak ve birini kardeşler veya üçüz kardeşler (sağda) hücre için geçişi ile seçildi. B. HMEC-1 üzerinde yumuşak 0.6 kPa kaplama için bu grafik hücre başına Lm floresan yoğunluğu logaritması histogramını gösterir. C. bu grafik HMEC-1 sert 70 kPa hydrogels üzerinde kaplama için hücre başına Lm floresan yoğunluğu logaritması histogramını gösterir. Çubuk grafikler için N = 4-6 çoğaltır farklı renklerle gösterilir. Bulaşmamış kontrol hücreleri histogram mordur. Ne bulaşmışsa tanımlamak için kullanılan kapı kırmızı renkte gösterilir. MOI 100 ve enfeksiyon biçilen 8 h sonrası enfeksiyon. D. veri göstermek enfekte HMEC-1 hücreleri hidrojel sertlik karşı yüzdesi (N = 5). Yatay çubuklar data'nın ortalama tasvir. P-değeri hesaplanmıştır non-parametrik Wilcoxon sırası Sum testi ile. <a href="/files/ftp_upload/57361/57361fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Video Figure 1" src="/files/ftp_upload/57361/57361mov1.jpg"> Video Şekil 1: hücre içi Lm (kırmızı kanalı) HMEC-1 hücre monolayer (faz) yoluyla yayılması numaralı seribaşı 3-kPa substrat. Hücreleri iyi'nın L-15 ortam içinde yansıma (% 10 FBS, gentamisin 20 µg/mL) bir çevre odası 37 ˚C equilibrated iç. Görüntüleri her 5 dk toplanmıştır. Bu videoyu izlemek için buraya tıklayın 15 kare/s <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57361/Video_Figure_1.mov" target="_blank">lütfen film hızıdır. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Video Figure 2" src="/files/ftp_upload/57361/57361mov2.jpg"> Video resim 2: hücre içi Lm (kırmızı kanalı) HMEC-1 hücre monolayer (faz) yoluyla yayılması numaralı seribaşı 70-kPa substrat. Hücreleri iyi'nın L-15 ortam içinde yansıma (% 10 FBS, gentamisin 20 µg/mL) iç çevre bir odası equilibrated 37 ° C'ye Görüntüleri her 5 dk toplanmıştır. Bu videoyu izlemek için buraya tıklayın 15 kare/s <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57361/Video_Figure_2.mov" target="_blank">lütfen film hızıdır. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>Young katsayısı (E, kPa)</td>
			<td>Akrilamid % (üzerinden % 40 hisse senedi)</td>
			<td>Bisacrylamide % (' % 2'stok)</td>
		</tr>
<tr>
<td>0,6</td>
			<td>3</td>
			<td>0,045</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>5</td>
			<td>0.075</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>10</td>
			<td>0.075</td>
		</tr>
<tr>
<td>20</td>
			<td>8</td>
			<td>0.195</td>
		</tr>
<tr>
<td>70</td>
			<td>10</td>
			<td>0,45</td>
		</tr>
</tbody></table> Tablo 1. Polyacrylamide (PA) hydrogels değişen sertlik, kompozisyonu. Bu tabloda, hisse senedi % 40 akrilamid çözüm yüzdesi ve yüzdesini stok % 2 bis-akrilamid çözüm verilen sertlik (Young katsayısı, E) elde etmek için farklı sütunlarında belirtilmiştir.
<img alt="Supplemental Material" src="/files/ftp_upload/57361/57361supfig1.jpg"> Ek malzeme 1. Hesaplama hesaplanan çekiş gerilmeler hücre içi gerginliği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57361/Supplemental_Material_1.docx" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells at JoVE.

A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells (Video) | JoVE

Bakteriyel enfeksiyon yapisan hücre hücre dışı matriks sertlik etkisi problama için çok iyi biçim polyacrylamide tabanlı tahlil geliştirdik. Bu tahlil akış sitometresi, immunostaining ve çekiş kuvvet mikroskobu, hücreler, hücre dışı matriks ve patojen bakteriler arasında biyomekanik etkileşimlerin nicel ölçümler için izin ile uyumludur.

Hücre dışı matriks sertlik etkisi yapışık hücreleri bakteriyel enfeksiyon türleri çalışmak için çok iyi Format Polyacrylamide tabanlı tahlil

Extracellular matrix stiffness comprises one of the multiple environmental mechanical stimuli that are well known to influence cellular behavior, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion (Video) | JoVE

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda (Video) | JoVE

Hücre-kaderi ardından<em&gt; E. coli</em&gt; Faj Lambda tarafından Enfeksiyon Sonrası

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

A Visual Assay to Monitor T6SS-mediated Bacterial Competition

A Visual Assay to Monitor T6SS-mediated Bacterial Competition (Video) | JoVE

T6SS aracılı Bakteriyel Rekabet Monitör A Görsel Assay

Type VI secretion systems (T6SSs) are molecular  nanomachines allowing Gram-negative bacteria to transport and inject proteins  into a wide variety of ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis (Video) | JoVE

Ana-Hücre RNA sentezi üzerinde Viral Enfeksiyon Etkisi Tedbir tıklayın Kimya Kullanımı

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay (Video) | JoVE

Bir kullanma Pnömokok Kolonizasyon üzerinde Probiyotiklerin Etkileri incelenmesi<em&gt; In Vitro</em&gt; Yapışma Deneyi

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow (Video) | JoVE

Akış adlı lökositlerin üzerine Stromal hücreler Etkilerinin İncelenmesi

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells (Video) | JoVE

Bir Geçirgen Membran Ekle tabanlı Enfeksiyon Sisteminin Uygulanması memeli konakçı hücreleri üzerinde salgılanan Bakteriyel Toksinler Etkilerinin Eğitim için

Many bacterial pathogens secrete potent toxins to aid in the destruction of host tissue, to initiate signaling changes in host cells or to manipulate ...

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance (Video) | JoVE

Vitronectin bakteriyel yapışma ve Serum direnç rolü eğitim için deneyleri

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice (Video) | JoVE

İzole Kapların vazodilatasyon ve Sıkı cilt Fare Ekstraselüler Matrix İzolasyonu

The interferon regulatory factor 5 (IRF5) is crucial for cells to determine if they respond in a pro-inflammatory or anti-inflammatory fashion. IRF5's ...

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm (Video) | JoVE

Pamuk Yeşilkurt bir densovirüs Host Fitness Host doku Dağılımı, İletim-modunu ve Etkisi incelenmesi için Protokoller

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...