Name: the isolation and culture of primary epicardial cells derived from human adult and fetal heart specimens
Uploaded: 2018-04-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens at JoVE.com

هذا البحث معتمد من قبل "منظمة هولندا" للعلمية البحثية (جمعية البحث العلمي الهولندية) (يني 016.146.079) وزمالة "أبحاث لومك" على كل من هيئة علماء المسلمين، ومؤسسة بونتيوس لومك (MJG).

كل التجارب مع عينات الأنسجة البشرية أقرتها لجنة الأخلاقيات المركز الطبي بجامعة ليدن، ويتفق مع "إعلان هلسنكي". يتم تنفيذ كافة الخطوات مع المعدات المعقمة في تدفق ثقافة الخليوي مجلس الوزراء.
1-الأعمال التحضيرية
<ol><li>إعداد متوسطة أبدك بخلط دولبيكو للمتوسطة تعديل النسر (دمي?...

<ol>
	<li>Smits, A. M., Dronkers, E., Goumans, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epicardium+as+a+source+of+multipotent+adult+cardiac+progenitor+cells:+Their+origin,+role+and+fate.">The epicardium as a source of multipotent adult cardiac progenitor cells: Their origin, role and fate.</a> Pharmacological research. 127, 129-140 (2017).</li><li>Risebro, C. A., Vieira, J. M., Klotz, L., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+the+human+embryonic+and+foetal+epicardium+during+heart+development.">Characterisation of the human embryonic and foetal epicardium during heart development.</a> Development. 142 (21), 3630-3636 (2015).</li><li>Zhou, B., Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+progenitors+contribute+to+the+cardiomyocyte+lineage+in+the+developing+heart.">Epicardial progenitors contribute to the cardiomyocyte lineage in the developing heart.</a> Nature. 454 (7200), 109-113 (2008).</li><li>Smits, A., Riley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium-Derived+Heart+Repair.">Epicardium-Derived Heart Repair.</a> Journal of Developmental Biology. 2 (2), 84-100 (2014).</li><li>Chen, T. H. P., Chang, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+Induction+of+Fetal+Cardiomyocyte+Proliferation+via+a+Retinoic+Acid-Inducible+Trophic+Factor.">Epicardial Induction of Fetal Cardiomyocyte Proliferation via a Retinoic Acid-Inducible Trophic Factor.</a> Developmental Biology. 250 (1), 198-207 (2002).</li><li>Pennisi, D. J., Ballard, V. L. T., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium+is+required+for+the+full+rate+of+myocyte+proliferation+and+levels+of+expression+of+myocyte+mitogenic+factors+FGF2+and+its+receptor,+FGFR-1,+but+not+for+transmural+myocardial+patterning+in+the+embryonic+chick+heart.">Epicardium is required for the full rate of myocyte proliferation and levels of expression of myocyte mitogenic factors FGF2 and its receptor, FGFR-1, but not for transmural myocardial patterning in the embryonic chick heart.</a> Developmental Dynamics. 228 (2), 161-172 (2003).</li><li>Lavine, K. J., Yu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocardial+and+epicardial+derived+FGF+signals+regulate+myocardial+proliferation+and+differentiation+in+vivo.">Endocardial and epicardial derived FGF signals regulate myocardial proliferation and differentiation in vivo.</a> Developmental Cell. 8 (1), 85-95 (2005).</li><li>Stuckmann, I., Evans, S., Lassar, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+and+retinoic+acid,+secreted+from+the+epicardium,+are+required+for+cardiac+myocyte+proliferation.">Erythropoietin and retinoic acid, secreted from the epicardium, are required for cardiac myocyte proliferation.</a> Developmental biology. 255 (2), 334-349 (2003).</li><li>M&#228;nner, J., Schlueter, J., Brand, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+analyses+of+the+function+of+the+proepicardium+using+a+new+microsurgical+procedure+to+induce+loss-of-proepicardial-function+in+chick+embryos.">Experimental analyses of the function of the proepicardium using a new microsurgical procedure to induce loss-of-proepicardial-function in chick embryos.</a> Developmental Dynamics. 233 (4), 1454-1463 (2005).</li><li>Weeke-Klimp, A., Bax, N. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium-derived+cells+enhance+proliferation,+cellular+maturation+and+alignment+of+cardiomyocytes.">Epicardium-derived cells enhance proliferation, cellular maturation and alignment of cardiomyocytes.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49 (4), 606-616 (2010).</li><li>Eralp, I., Lie-Venema, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+Artery+and+Orifice+Development+Is+Associated+With+Proper+Timing+of+Epicardial+Outgrowth+and+Correlated+Fas+Ligand+Associated+Apoptosis+Patterns.">Coronary Artery and Orifice Development Is Associated With Proper Timing of Epicardial Outgrowth and Correlated Fas Ligand Associated Apoptosis Patterns.</a> Circulation Research. 96 (5), (2005).</li><li>Kelder, T. P., Duim, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epicardium+as+modulator+of+the+cardiac+autonomic+response+during+early+development.">The epicardium as modulator of the cardiac autonomic response during early development.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 89, 251-259 (2015).</li><li>van Wijk, B., Gunst, Q. D., Moorman, A. F. M., van den Hoff, M. J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+regeneration+from+activated+epicardium.">Cardiac regeneration from activated epicardium.</a> PloS one. 7 (9), e44692 (2012).</li><li>Zhou, B., Honor, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mouse+epicardium+modulates+myocardial+injury+by+secreting+paracrine+factors.">Adult mouse epicardium modulates myocardial injury by secreting paracrine factors.</a> The Journal of clinical investigation. 121 (5), 1894-1904 (2011).</li><li>Smart, N., Bollini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+cardiomyocytes+from+within+the+activated+adult+heart+after+injury.">De novo cardiomyocytes from within the activated adult heart after injury.</a> Nature. 474 (7353), 640-644 (2011).</li><li>Zangi, L., Lui, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Moerkamp, A. T., Lodder, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+fetal+and+adult+epicardial-derived+cells:+a+novel+model+to+study+their+activation.">Human fetal and adult epicardial-derived cells: a novel model to study their activation.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 7 (1), 1-12 (2016).</li><li>Clunie-O'Connor, C., Smits, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Derivation+of+Primary+Human+Epicardium-Derived+Cells.">The Derivation of Primary Human Epicardium-Derived Cells.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 35, 2C.5.1-2C.5.12 (2015).</li><li>Van Tuyn, J., Atsma, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+Cells+of+Human+Adults+Can+Undergo+an+Epithelial-to-+Mesenchymal+Transition+and+Obtain+Characteristics+of+Smooth+Muscle+Cells+In+Vitro.">Epicardial Cells of Human Adults Can Undergo an Epithelial-to- Mesenchymal Transition and Obtain Characteristics of Smooth Muscle Cells In Vitro.</a> Stem Cells. 25 (2), 271-278 (2007).</li><li>Bax, N. A. M., van Oorschot, A. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+epithelial-to-mesenchymal+transformation+in+human+adult+epicardial+cells+is+regulated+by+TGF&#946;-signaling+and+WT1.">In vitro epithelial-to-mesenchymal transformation in human adult epicardial cells is regulated by TGF&#946;-signaling and WT1.</a> Basic research in cardiology. 106 (5), 829-847 (2011).</li><li>Chechi, K., Richard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermogenic+potential+and+physiological+relevance+of+human+epicardial+adipose+tissue.">Thermogenic potential and physiological relevance of human epicardial adipose tissue.</a> International Journal of Obesity Supplements. 5 (Suppl 1), S28-S34 (2015).</li></ol>

هنا يصف لنا البروتوكول مفصلاً لعزل وثقافة الخلايا epicardial الأولية المستمدة من قلوب الكبار والأجنة البشرية. وقد وصف واسع النطاق لهذه الخلايا المنشورة سابقا17. وقد أظهرنا أنه يمكن الحفاظ على كل أنواع الخلايا كالخلايا الظهارية مثل حصاة كبيرة عند مثقف مع مثبط كيناز ALK5 SB431542. EMT جزء ل?...

ابيكارديوم، طبقة طلائي خلية واحدة أن مغلفات القلب، وذات أهمية حيوية للتنمية القلب وإصلاح (إعادة النظر في سميتس et al. 1)-تنمويا، ابيكارديوم تنشأ من الجهاز بروبيكارديال، هيكل صغير يقع في قاعدة القلب النامية. حول التنموية يوم E9.5 في الماوس، والحمل بعد 4 أسابيع في الإنسان، تبدأ الخلايا ترحيل من هذا الهيكل قرنبيط ويغطي عضلة القلب النامية2. حالما يتم تشكيل طبقة واحدة من خلايا الظهارية، يخضع جزء من الخلايا epicardial الظهارية الانتقالية الوسيطة (EMT). خلال EMT، خلايا تفقد خصائصها الظهارية، مثل الالتصاقات خلية خلية، والحصول النمط الظاهري الوسيطة التي يعطيها القدرة على ترحيل في عضلة القلب النامية. شكلت الخلايا المشتقة ابيكارديال (ابدكس) يمكن أن تفرق في العديد من أنواع خلايا القلب بما في ذلك الخلايا الليفية وخلايا العضلات الملساء، ويحتمل أن تكون كارديوميوسيتيس وخلايا بطانية3، رغم التمايز الأخير اثنين الخلية السكان لا يزال خاضعا للمناقشة (استعرض في سميتس et al. 4). وعلاوة على ذلك، يوفر ابيكارديوم إشارات paracrine مفيدة لعضلة القلب لتنظيم النمو والأوعية الدموية5،6،،من78. وقد أثبتت الدراسات المتعددة أن تشكيل epicardial البصر يؤدي إلى عيوب التنموية في عضلة القلب9،10والمفرج11والتوصيل نظام12، إذ تؤكد الأساسية مساهمة ابيكارديوم إلى تشكيل القلب.
على الرغم من أن في قلب الكبار موجودة ابيكارديوم كطبقة نائمة، فإنه يصبح تنشيط عند الاسكيمية13. ويجمل تنشيط epicardial بعد إصابة العديد من العمليات الموصوفة للتنمية القلب، بما في ذلك انتشار و EMT14، أن كان أقل كفاءة. من المثير للاهتمام، على الرغم من أن الآلية الدقيقة ليست مفهومة تماما، ابيكارديال المساهمة في إصلاح يمكن تحسينه من خلال العلاج مع، مثلاً، β4 ثيموسين15 أو تعديل مرناً VEGF-أ16، أسفر عن القلب يحسن وظيفة بعد احتشاء عضلة القلب. ولذلك يعتبر ابيكارديوم مصدر خلية مثيرة لاهتمام لتعزيز إصلاح الذاتية للقلب المصاب.
وكثيراً ما يرد موجز لها آليات التنمية القلب أثناء الإصابة، على الرغم من أن بطريقة أقل كفاءة. بحثاً عن المنشطات ابيكارديال، فمن بالغ الأهمية أن نتمكن من تحديد ومقارنة القدرات الكاملة ابيكارديوم الجنين والكبار. وعلاوة على ذلك، من المهم من وجهة نظر علاجية، أنه، بالإضافة إلى التجارب على الحيوانات، نتقدم بالمعرفة فيما يتعلق برد ابيكارديوم البشرية. هنا، يمكننا وصف طريقة لعزل وثقافة الكبار والجنين epicardial المشتقة الخلايا البشرية (ابدكس) في مورفولوجيا مثل الخلايا الظهارية وحمل EMT. مع هذا النموذج، ونحن نهدف إلى استكشاف ومقارنة سلوك الخلية epicardial الكبار والجنين.
والميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو استخدام المواد ابيكارديال البشرية، التي لم تدرس جيدا. الأهم من ذلك، ينص البروتوكول ثقافة العزلة وخلية وصف أسلوب موحد واحد لاشتقاق كلا ابدكس cobble الأجنة والبالغين، مما يتيح إجراء مقارنة مباشرة بين هذه المصادر الخلية اثنين. بالإضافة إلى ذلك، منذ ابيكارديوم يتم عزل استناداً إلى موقعها، تكفل أن الخلايا هي فعلا ابيكارديالي المشتقة17.
في حين تم إنشاء أساليب العزلة أبدك البشرية سابقا، هذه تعتمد في الغالب على بروتوكولات ثمرة حيث يتم مطلي قطعة من أنسجة القلب أو ابيكارديال على خلية ثقافة طبق18،19. وبالتالي يحدد هذا النهج على وجه التحديد للخلايا التي تفقد جزئيا على النمط الظاهري الظهارية من أجل ترحيل، والتي أكثر عرضه للخضوع EMT عفوية. في البروتوكول الحالي، تتم معالجتها في ابيكارديوم أولاً إلى حل وحيد خلية الذي يسمح ابدكس معزولة للحفاظ على دولته الظهارية. ولذلك يوفر هذا الأسلوب نموذجا صلبا في المختبر لدراسة epicardial EMT.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="798">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium + GlutaMAX</td>
			<td style="width:133px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21885-025</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Medium 199&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31150-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Trypsin 0.25%</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Penicillin G sodium salt</td>
			<td style="width:133px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">HP48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Streptomycin sulphate</td>
			<td style="width:133px;">Roth</td>
			<td>HP66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Trypsin 1:250 from bovine pancreas</td>
			<td style="width:133px;">Serva</td>
			<td>37289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">EDTA</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td>E4884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Gelatin from porcine skin</td>
			<td style="width:133px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture plates 6 well</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture plates 12 well</td>
			<td style="width:133px;">Corning</td>
			<td>3512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture plates 24 well</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">SB 431542</td>
			<td style="width:133px;">Tocris</td>
			<td style="width:119px;">1614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:133px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">102931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">100-1000&#181;L Filtered Pipet Tips</td>
			<td style="width:133px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">4809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">10-ml pipet</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">5-ml pipet</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">606180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Cell culture dish 100/20 mm</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">664160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10010056</td>
			<td>Or home-made and sterilized</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Eppendorf tubes 1.5 mL</td>
			<td style="width:133px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">15-ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">50-ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:133px;">Greiner bio-one</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">10 mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Needles 19 Gauge</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>301700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Needles 21 Gauge</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">EASYstrainer Cell Sieves, 100 &#181;m</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>542000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TGF&#946;3&#160;</td>
			<td style="width:133px;">R&#38;D systems</td>
			<td style="width:119px;">243-B3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Monoclonal Anti-Actin, &#945;-Smooth Muscle</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td>A2547&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Anti-Mouse Alexa Fluor 555</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td>A31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Equipment</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Name</td>
			<td style="width:133px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Pipet P1,000</td>
			<td style="width:133px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Pipet controller</td>
			<td style="width:133px;">Integra</td>
			<td style="width:119px;">155 015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:133px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Inverted Light Microscope</td>
			<td style="width:133px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">CK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:133px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Waterbath</td>
			<td style="width:133px;">GFL</td>
			<td style="width:119px;">1083</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the isolation and culture of primary epicardial cells derived from human adult and fetal heart specimens

ابيكارديوم، طبقة خلايا الظهارية تغطي عضلة القلب، له دور أساسي أثناء تطوير القلب، وكذلك في الاستجابة إصلاح القلب بعد الإصابة الدماغية. عند تنشيط، خلايا epicardial الخضوع لعملية تعرف باسم الظهارية للانتقال الوسيطة (EMT) لتوفير خلايا عضلة القلب تجديد. وعلاوة على ذلك، يساهم ابيكارديوم عن طريق إفراز العوامل الأساسية باراكريني. نقدر تماما إمكانات التجدد ابيكارديوم، مطلوب نموذج خلية بشرية. هنا أننا مخطط نموذج ثقافة رواية خلية استخلاص الخلايا الأولية المشتقة ابيكارديال (ابدكس) من أنسجة القلب الكبار والأجنة البشرية. لعزل ابدكس، ابيكارديوم تشريح من خارج العينة القلب ومعالجتها في تعليق خلية مفردة. المقبل، مطلي ابدكس ومثقف في أبدك المتوسطة التي تحتوي على مثبطات 5-كيناز كيه SB431542 للحفاظ على النمط الظاهري الظهارية بهم. EMT هو فعل التحفيز مع TGFβ. هذا الأسلوب يتيح، للمرة الأولى، دراسة عملية EMT epicardial البشرية في إعداد التي تسيطر عليها، وتيسر الحصول على مزيد من التبصر في سيكريتومي ابدكس التي يمكن أن تساعد في إنعاش القلب. وعلاوة على ذلك، يتيح هذا النهج الموحد للمقارنة المباشرة للسلوك ابيكارديال الكبار والجنين البشري.

هنا، فإننا مخطط بروتوكولا مباشرة عزل ابدكس من الكبار والجنين القلب الأنسجة البشرية (الشكل 1). هذا البروتوكول يستفيد من موقع يمكن الوصول بسهولة ابيكارديوم في خارج القلب (الشكل 1A). تلوين لصوان القلب بعد تشريح يوضح أنه يتم إزالة ابيكارديوم WT1 +...

Watch this Scientific Journal Video about The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens at JoVE.com

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

ابيكارديوم يلعب دوراً حاسما في التنمية وإصلاح القلب بتوفير عوامل النمو على الجدار احتشاء عضلة القلب وخلايا. هنا، يمكننا وصف أسلوب للثقافة البشرية خلايا epicardial الأساسية التي تمكن من دراسة ومقارنة الخصائص الإنمائية والكبار ل.

بالعزلة وثقافة الخلايا Epicardial الأولية المستمدة من عينات من قلب الكبار والأجنة البشرية

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

العزلة والكمية Immunocytochemical توصيف الخلايا عضلي الابتدائية والخلايا الليفية من العضلات الهيكلية البشرية

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

عزل الخلايا الجذعية العصبية / السلف من المنطقة المحيطة بالبطين في الجرذان الكبار والحبل الشوكي البشري

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

العزلة وثقافة Neurospheres المستمدة الدماغ الكبار الزرد

The zebrafish is a highly relevant model organism for understanding the cellular and molecular mechanisms involved in neurogenesis and brain regeneration ...

Isolation of CD 90+ Fibroblast/Myofibroblasts from Human Frozen Gastrointestinal Specimens

عزل CD 90+ الخلايا الليفية / Myofibroblasts من المجمدة الإنسان الجهاز الهضمي العينات


Fibroblasts/myofibroblasts (MFs) have been gaining increasing attention for their role in pathogenesis and their contributions to both wound healing and ...

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

النخابية ثمرة ثقافة الفحص و<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; تقييم هجرة الخلايا المشتقة النخابية-

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

العزل والتوسع في الجذعية الوسيطة / خلايا انسجة مشتقة من المشيمة البشرية الأنسجة

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

إنتاج واسع النطاق العضلية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية باستخدام تكرار للغاية الصغيرة وبناء جزيء بروتوكول التمايز

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

إعداد والثقافة من الخلايا عضلي السلائف / Myoblasts الابتدائية من العضلات الهيكلية من الكبار والمسنين البشر

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

عزل وتوصيف الخلايا الجذعية الوسيطة اللحمية من الحبل السري البشري والجنين المشيمة

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Generation and Culturing of Primary Human Keratinocytes from Adult Skin

جيل واستزراع من الخلايا الكيراتينيه البشرية الأساسية من الجلد الكبار

The main function of keratinocytes is to provide the structural integrity of the epidermis, thereby maintaining a mechanical barrier to the outside world. ...