Name: long-term live-cell imaging to assess cell fate in response to paclitaxel
Uploaded: 2018-05-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-term Live-cell Imaging to Assess Cell Fate in Response to Paclitaxel at JoVE.com

AFB, MAV और NJG को Salic-TDRFP के निर्माण के लिए पांडुलिपि और एड्रियन एनएलएस पर टिप्पणी के लिए रयान Quinton शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । AFB और MAV NIGMS आणविक औषध प्रशिक्षण अनुदान 5T32GM008541 द्वारा वित्त पोषित हैं. NJG शमीम और अशरफ दाहोद स्तन कैंसर अनुसंधान प्रयोगशालाओं के एक सदस्य है और NIH अनुदान GM117150 और सीए-१५४५३१, करीन Grunebaum फाउंडेशन, स्मिथ परिवार पुरस्कार कार्यक्रम, Searle विद्वानों कार्यक्रम, और मेलेनोमा अनुसंधान द्वारा समर्थित है एलायंस.

इस प्रोटोकॉल रहते सेल इमेजिंग प्रयोगों के लिए गैर तब्दील और chromosomally स्थिर रेटिना pigmented उपकला (RPE-1) सेल लाइन का उपयोग करने पर केंद्रित है । हालांकि, इस प्रोटोकॉल किसी भी अनुयाई सेल लाइन के लिए अनुकूलित किया जा ?...

लंबी अवधि के लाइव सेल इमेजिंग का सबसे महत्वपूर्ण पहलू यह सुनिश्चित करने के लिए किया जा रहा है की कोशिकाओं के स्वास्थ्य की छवि है । यह आवश्यक है कि कोशिकाओं को न्यूनतम बाहरी पर्यावरणीय तनावों को उजागर क?...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>phenol red-free, DMEM:F12 media</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH3027202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 IU/ml penicillin, and 100 mg/ml streptomycin.</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin/EDTA</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>50-753-3104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well glass bottomed imaging dish</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>P12-1.5H-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paclitaxel</td>
			<td>TSZ Chem</td>
			<td>RS036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>NC0215085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental Chamber</td>
			<td>In Vivo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% CO2</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>Z03NI7432000201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-539-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm polystyrene tissue culture plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08772E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Disposable Serological Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>4488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5804R 15 amp Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>97007-370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 microliters Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>Pipetman Classic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 microliters Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>Pipetman Classic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p1000 Pipette Tips</td>
			<td>Sharp</td>
			<td>p1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p20 Pipette Tips</td>
			<td>Sharp</td>
			<td>P1121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE-1 Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator Galaxy 170S</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>CO17011005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Boy</td>
			<td>Integra</td>
			<td>156401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0267110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Ti-E-PFS Inverted Microscope for Live Cell Imaging</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MEA53100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prior X-Y Stage System and White Light LED Illuminator</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>500-H117P1N4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prior Proscan 3 Controller XYZ with Encoders</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>500-H31XYZE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Andor Digital Camera</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>D10NLC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon NIS Elements AR Software</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MQS31000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOLA LED Illuminator for Fluorescence</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>SOLA-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InVivo Environmental Chamber with CO2 Flow Control</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>Ti-IVS-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti-ND6-PFS Perfect Focus Motorized Nosepiece</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MEP59391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti-C System Condenser Turret</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MEL51000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti-C LWD LWD Lens Unit for System Condenser Turret</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MEL56200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Te-C LWD Ph1 Module</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MEH41100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFI Plan Fluor DLL 10X Objectivena 0.3 wd 16mm</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MRH10101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFI Super Plan Fluor ELWD 20xc ADM Objective</td>
			<td>Micro Video Instruments, Inc.</td>
			<td>MRH48230</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term live-cell imaging to assess cell fate in response to paclitaxel

Live-सेल इमेजिंग एक शक्तिशाली तकनीक है कि सीधे समय की विस्तारित अवधि में एकल कोशिकाओं में जैविक घटना कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पिछले एक दशक में, नई और अभिनव प्रौद्योगिकियों ने बहुत से लाइव सेल इमेजिंग की व्यावहारिकता को बढ़ाया है । कोशिकाओं को अब ध्यान में रखा जा सकता है और लगातार कई दिनों से छवि बनाई है, जबकि ३७ डिग्रीसेल्सियस और 5% सह2 सेल संस्कृति की स्थिति के तहत बनाए रखा । इसके अलावा, विभिंन प्रयोगात्मक स्थितियों का प्रतिनिधित्व देखने के कई क्षेत्रों एक साथ प्राप्त किया जा सकता है, इस प्रकार उच्च प्रवाह प्रयोगात्मक डेटा प्रदान करते हैं । लाइव सेल इमेजिंग प्रत्यक्ष दृश्य और गतिशील सेलुलर घटनाओं के लौकिक quantitation के लिए अनुमति देकर फिक्स्ड सेल इमेजिंग पर एक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है । लाइव सेल इमेजिंग भी एकल कोशिकाओं है कि अंयथा जनसंख्या का उपयोग कर याद किया गया होगा के व्यवहार में भिंनता की पहचान कर सकते है आधारित परख । यहां, हम लाइव सेल इमेजिंग प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए सेल भाग्य विरोधी mitotic दवा paclitaxel के साथ उपचार के बाद निर्णय का आकलन । हम तरीकों को प्रदर्शित करने के लिए कल्पना है कि क्या mitotically गिरफ्तार कोशिकाओं बँटवारा से सीधे मर जाते हैं या चरण में वापस पर्ची. हम यह भी वर्णन कैसे फ्लोरोसेंट ubiquitination आधारित कोशिका चक्र संकेतक (FUCCI) प्रणाली के लिए mitotic फिसलन है कि फिर से सेल चक्र में प्रवेश करने में सक्षम है से पैदा चरण कोशिकाओं के अंश का आकलन किया जा सकता है । अंत में, हम एक जीवित सेल इमेजिंग विधि का वर्णन करने के लिए परमाणु लिफाफा टूटना घटनाओं की पहचान ।

ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करना, RPE-1 H2B-GFP एक्सप्रेस कोशिकाओं एक विरोधी mitotic या वाहन नियंत्रण (DMSO) के साथ इलाज किया गया और लाइव सेल इमेजिंग द्वारा विश्लेषण । विश्लेषण से पता चला है कि नियंत्रण mi...

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Long-term Live-cell Imaging to Assess Cell Fate in Response to Paclitaxel

लाइव सेल इमेजिंग एकल कोशिकाओं या पूरी आबादी है कि तय सेल इमेजिंग अकेले द्वारा अप्राप्य है पर जानकारी का खजाना प्रदान करता है । यहां, लाइव सेल इमेजिंग प्रोटोकॉल विरोधी mitotic दवा paclitaxel के साथ उपचार के बाद सेल भाग्य निर्णय का आकलन करने के लिए वर्णित हैं ।

लंबे समय तक रहते सेल इमेजिंग Paclitaxel के जवाब में सेल भाग्य का आकलन करने के लिए

Live-cell imaging is a powerful technique that can be used to directly visualize biological phenomena in single cells over extended periods of time. Over ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window

एक वैक्यूम स्थिर इमेजिंग खिड़की के साथ फेफड़ों में लंबे समय तक उच्च संकल्प intravital माइक्रोस्कोपी

Metastasis to secondary sites such as the lung, liver and bone is a traumatic event with a mortality rate of approximately 90% 1. Of these sites, the lung ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

ट्यूमर सेल व्यवहार और ड्रग रिस्पांस के दीर्घकालिक अध्ययन के लिए प्रतिरक्षा-सक्षम होस्ट में ज़ेफराफीश बाल रोग के ट्यूमर का प्रत्यारोपण

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

लाइव सेल इमेजिंग के TGF-β/Smad3 संकेतन मार्ग में इन विट्रो और Vivo में एक एडीनोवायरस रिपोर्टर प्रणाली का उपयोग

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

लाइव सेल इमेजिंग परख ग्लियोब्लास्टोमा ब्रेन ट्यूमर स्टेम सेल प्रवासन और आक्रमण का अध्ययन करने के लिए

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Establishing Cell Lines Overexpressing DR3 to Assess the Apoptotic Response to Anti-mitotic Therapeutics

विरोधी mitotic चिकित्सकीय के लिए अपोप्तोटिक प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए DR3 व्यक्त सेल लाइनों की स्थापना

Studying the function of a gene of interest can be achieved by manipulating its level of expression, such as decreasing its expression with knockdown cell ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

एक इनवेसिव सर्जिकल बायोप्सी के जवाब में मस्तिष्क ट्यूमर सेल व्यवहार के दीर्घकालिक Intravital इमेजिंग

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

थोक और एकल-ऑर्गेनॉइड विश्लेषण के लिए वाइडफील्ड लाइव-सेल इमेजिंग का उपयोग करके मल्टीपैरामीट्रिक ट्यूमर ऑर्गेनॉइड ड्रग स्क्रीनिंग

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Quantifying Telomere Length Using Non-Radioactive Chemiluminescence Detection

Optimization of Performance Parameters of the TAGGG Telomere Length Assay

Optimization of Performance Parameters of the TAGGG Telomere Length Assay (Video) | JoVE 

टीएजीजीजी टेलोमेरे लंबाई परख के प्रदर्शन मापदंडों का अनुकूलन

Telomeres are repetitive sequences which are present at chromosomal ends; their shortening is a characteristic feature of human somatic cells. Shortening ...

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Automated Kinetic Imaging for Drug Assessment in Patient-Derived Tumor Organoids

Multiplexed Live-Cell Imaging for Drug Responses in Patient-Derived Organoid Models of Cancer

Author Spotlight: Developing Multiplexed Kinetic Assays for Organoid-Based Drug Response Analysis

Patient-derived organoid (PDO) models of cancer are a multifunctional research system that better recapitulates human disease as compared to cancer cell ...

Ovarian Cancer Organoid Passaging and Cryopreservation for Long-Term Organoid Cultivation

डिम्बग्रंथि के कैंसर ऑर्गेनॉइड पासिंग और दीर्घकालिक ऑर्गेनॉइड खेती के लिए क्रायोप्रिजर्वेशन