Name: practical use of rna interference: oral delivery of double-stranded rna in liposome carriers for cockroaches
Uploaded: 2018-05-01T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Practical Use of RNA Interference: Oral Delivery of Double-stranded RNA in Liposome Carriers for Cockroaches at JoVE.com

Diese Studie wurde unterstützt durch Zuschüsse aus Taiwan (Ministerium für Wissenschaft und Technologie, 100-2923-B-002-002-MY3 und 106-2313-B-002-011-MY3, H.J.L.), der Tschechischen Republik (gewähren Agentur der Südböhmischen Universität, GAJU gewähren Y.H.L 065/2017/P), und Spanien ( Gewähren Sie spanischen Wirtschaftsministerium und Wettbewerbsfähigkeit, räumt CGL2012-36251 und CGL2015-64727-P X.B. und der katalanischen Regierung 2014 SGR 619 X.B.); Es erhielt auch finanzielle Unterstützung aus dem Europäischen Fonds für wirtschaftliche und Regionalentwicklung (FEDER Mittel zu X.B.).

(1) Synthese und Vorbereitung der dsRNA
<ol><li>DsRNA-Ziel-Sites in der 3' untranslatierten Region der Zielgene zu identifizieren. Die DsTub dient zur Ausrichtung auf das α-Tubulin (Wanne) Gen (GenBank Zbl-Nummer: KX228233), und DsEGFP wie ein negativer DsRNA-Steuerelement aus der Abfolge von konzipiert ist grüne Fluoreszenz-Protein (EGFP; GenBank Zbl-Nummer: LC311024).</li>
	<li>Führen Sie standard PCR Verstärkung um die DsRNA-Vorlagen mit Gen-spezifische Primer, enthält die T7 promotorsequenz synthetisieren (5'-...

<ol>
	<li>Hammond, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dicing+and+slicing:+The+core+machinery+of+the+RNA+interference+pathway.">Dicing and slicing: The core machinery of the RNA interference pathway.</a> FEBS Lett. 579, 5822-5829 (2005).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 111-128 (2010).</li><li>Wynant, N., Santos, D., Vanden Broeck, J., Jeon, K. 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Biol. 37, 176-183 (2007).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+RNAi+efficacy+among+insect+species+is+attributable+to+dsRNA+degradation+in+vivo.">Variation in RNAi efficacy among insect species is attributable to dsRNA degradation in vivo.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 77, 1-9 (2016).</li><li>Wynant, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification,+functional+characterization+and+phylogenetic+analysis+of+double+stranded+RNA+degrading+enzymes+present+in+the+gut+of+the+desert+locust,+Schistocerca+gregaria.">Identification, functional characterization and phylogenetic analysis of double stranded RNA degrading enzymes present in the gut of the desert locust, Schistocerca gregaria.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 46, 1-8 (2014).</li><li>Huang, J. -. H., Belles, X., Lee, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+hypertrehalosemic+hormone+receptor+in+relation+to+hemolymph+trehalose+and+to+oxidative+stress+in+the+cockroach+Blattella+germanica.">Functional characterization of hypertrehalosemic hormone receptor in relation to hemolymph trehalose and to oxidative stress in the cockroach Blattella germanica.</a> Exp. Endocrinol. 2, 114 (2012).</li><li>Lin, Y. -. H., Lee, C. -. M., Huang, J. -. H., Lee, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+regulation+of+permethrin+susceptibility+by+glutathione+S-transferase+(BgGSTD1)+in+the+German+cockroach+(Blattella+germanica).">Circadian regulation of permethrin susceptibility by glutathione S-transferase (BgGSTD1) in the German cockroach (Blattella germanica).</a> J. Insect Physiol. 65, 45-50 (2014).</li><li>Lozano, J., Kayukawa, T., Shinoda, T., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+taiman+in+insect+metamorphosis.">A role for taiman in insect metamorphosis.</a> PLOS Genet. 10, 1004769 (2014).</li><li>Lozano, J., Monta&#241;ez, R., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiR-2+family+regulates+insect+metamorphosis+by+controlling+the+juvenile+hormone+signaling+pathway.">MiR-2 family regulates insect metamorphosis by controlling the juvenile hormone signaling pathway.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 112, 3740-3745 (2015).</li><li>Lin, Y. -. H., Huang, J. -. H., Liu, Y., Belles, X., Lee, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+delivery+of+dsRNA+lipoplexes+to+German+cockroach+protects+dsRNA+from+degradation+and+induces+RNAi+response.">Oral delivery of dsRNA lipoplexes to German cockroach protects dsRNA from degradation and induces RNAi response.</a> Pest Manag. Sci. 73, 960-966 (2017).</li><li>Gharavi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chiral+cationic+polyamines+for+chiral+microcapsules+and+siRNA+delivery.">Chiral cationic polyamines for chiral microcapsules and siRNA delivery.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 23, 5919-5922 (2013).</li><li>Whyard, S., Singh, A. 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Biol. 22, 574-583 (2013).</li><li>Liu, J., Smagghe, G., Swevers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+response+of+BmToll9-1+and+RNAi+machinery+genes+to+exogenous+dsRNA+in+the+midgut+of+Bombyx+mori.">Transcriptional response of BmToll9-1 and RNAi machinery genes to exogenous dsRNA in the midgut of Bombyx mori.</a> J. Insect Physiol. 59, 646-654 (2013).</li><li>Airs, P. M., Bartholomay, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+for+mosquito+and+mosquito-borne+disease+control.">RNA interference for mosquito and mosquito-borne disease control.</a> Insects. 8, 4 (2017).</li><li>Taning, C. N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+RNAi+to+control+Drosophila+suzukii:+Laboratory+testing+against+larval+and+adult+stages.">Oral RNAi to control Drosophila suzukii: Laboratory testing against larval and adult stages.</a> J. Pest Sci. 89, 803-814 (2016).</li><li>Wu, S. Y., McMillan, N. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidic+systems+for+in+vivo+siRNA+delivery.">Lipidic systems for in vivo siRNA delivery.</a> AAPS J. 11, 639-652 (2009).</li><li>Tam, Y. Y. C., Chen, S., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+lipid+nanoparticles+for+siRNA+delivery.">Advances in lipid nanoparticles for siRNA delivery.</a> Pharmaceutics. 5, 498-507 (2013).</li><li>Xia, Y., Tian, J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+surface+properties+on+liposomal+siRNA+delivery.">Effect of surface properties on liposomal siRNA delivery.</a> Biomaterials. 79, 56-68 (2016).</li></ol>

Dieses Protokoll stellt eine Methode für wirksame RNAi durch mündliche Lieferung von DsRNA Lipoplexes, denen Schutz gegen Ribonuklease Verdauung in den Mitteldarm Saft der deutschen Schabe. Wie in anderen Studien in verschiedenen Insektenarten gezeigt, der Armen RNAi-Effekt durch mündliche Lieferung von DsRNA vor allem durch den Abbau von DsRNA8,9,10entfallen. Dieses Protokoll produziert Liposomen, die als schützende Fahrzeu...

RNAi ist durch einen Mechanismus eines Posttranskriptionale stummschaltungs-Signalwegs, ausgelöst durch DsRNA Moleküle in viele Eukaryonten1als eine wirksame Methode, Knockdown Genexpression nachgewiesen. Im letzten Jahrzehnt Studie geworden RNAi ein nützliches Werkzeug, um die Funktionen von Genen aus Entwicklung, Verhalten zu studieren, durch Abbau der Expression bestimmter Gene mittels Injektion und/oder Fütterung von DsRNA in verschiedenen Taxa Insekten2,3. Aufgrund der Spezifität und Robustheit der abbauende Wirkung ist die Anwendung der RNAi derzeit als mögliche Strategie zur Pest Control Management4,5geprüft. Jedoch sehr unterschiedlich die Effizienz der RNAi Insektenarten, je nach den verschiedenen Genen angestrebt und die Versandmethoden. Eine wachsende Zahl von beweisen deutet darauf hin, dass die Instabilität der DsRNA, die durch Ribonuclease abgebaut wird, ein kritischer Faktor bei der begrenzten Wirksamkeit von RNAi5,6 ist. Zum Beispiel hat die geringe Sensitivität der RNAi in Manduca Sexta durch die Tatsache erklärt worden, dass die DsRNA gemischt mit Hämolymphe innerhalb von 1 Stunde7schnell abgebaut wurde. Ebenso ist die Anwesenheit von Alkali Nukleasen in den Mitteldarm die aufgenommenen DsRNA effizient zu degradieren, stark korreliert mit geringe RNAi-Effizienz in verschiedenen Insektenordnungen8,9,10.
Die mündlichen Lieferung von DsRNA ist besonders interessant für die Anwendung der RNAi in einer Pest Control-Strategie, sondern eine Methode, um den Abbau von DsRNA durch Nukleasen in den Mitteldarm verzögern nicht noch entwickelt wurde, die hätten des Potenzials, wirksam sichern RNAi durch Fütterung. Jedoch wurde die Teilnahmslosigkeit der RNAi mündlichen Lieferung von DsRNA berichtet, durch große Menge an DsRNA, z. B. 50 µg in Bombyx Mori, Fütterung oder kontinuierlich füttern für 8 Tage (8 µg DsRNA insgesamt) in der Locust-Spezies. Die Deutsche Schabe, Blattella Germinica, reagiert sehr empfindlich auf RNAi durch die Injektion von DsRNA11,12,13,14, aber ist nicht ansprechend auf DsRNA durch Fütterung. Vor kurzem, Lin Et al. (2017) haben gezeigt, dass die DsRNA mit Liposomen Träger führt zu erfolgreichen RNAi, Zuschlag die α-Tubulin -gen-Expression in den Mitteldarm und Trigger erhebliche Mortalität der deutschen Schabe15gekapselt. Wie der Abbau von DsRNA in den Mitteldarm der limitierende Faktor für mündliche RNAi ist, dienen die Liposomen-Träger als Vehikel DsRNA vor Erniedrigung, zu schützen, die bei anderen Insekten mit starken Nuklease Aktivitäten im Darm leicht anwendbar ist. Der Hinweis, der Grund für die Wahl des bestimmten Transfection Reagens (siehe Tabelle der Materialien) wir verwendet wie Liposomen Träger in das aktuelle Protokoll ist, dass es für Insekten Zelle Zeile Transfektion mit weniger Toxizität getestet wurde nach dem Anweisungen des Herstellers. Nach dem Vergleich der verschiedenen Liposom Transfection Systeme in Gharavi Et al. (2013) 16, ist die Effizienz der transfecting kleine interferierende RNA (SiRNA) ungefähr gleich zwischen diesem und anderen handelsüblichen Systemen, die für DsRNA-Delivery-Systeme in anderen Insekten17,18 verwendet wurden . Darüber hinaus ist unsere Fütterung Methode vorsichtig genug, um die richtige Menge an DsRNA von jeder Schabe eingenommen wird, und dass die Ergebnisse sind robust und bestätigten zu gewährleisten. Zusammenfassend lässt sich sagen zeigen die dieses Protokolls und die Ergebnisse, dass mit DsRNA Lipoplexes DsRNA Stabilität verbessert und die Tür für das Design der Strategie mündlichen Lieferung von RNAi öffnet, die ist ein vielversprechender Ansatz zur Schädlingsbekämpfung in der Zukunft.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1124px;" width="1123">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">GenJe Plus DNA in vitro Transfection reagent</td>
			<td style="width:133px;">SignaGen</td>
			<td style="width:157px;">SL100499</td>
			<td style="width:481px;">for lipoplexes preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blend Taq plus</td>
			<td style="width:133px;">TOYOBO&#160;</td>
			<td style="width:157px;">BTQ-201</td>
			<td>for PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fast SYBR Green Master Mix</td>
			<td style="width:133px;">ABI&#160;</td>
			<td style="width:157px;">4385612</td>
			<td>for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">FirstChoice RLM-RACE Kit</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">AM1700</td>
			<td>for 3&#39; UTR identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">AMB13345</td>
			<td>for dsRNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TURBO DNase</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">AM2239</td>
			<td>remove DNA template from dsRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRIzol</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">15596018</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RQ1 RNase-Free Dnase</td>
			<td style="width:133px;">Promega</td>
			<td style="width:157px;">M6101</td>
			<td>remove DNA template from total RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chloroform&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">C2432</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">2-Propanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">I9516</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>24102</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Diethyl pyrocarbonate, DEPC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">D5758</td>
			<td>for RNase free water preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">glucose solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">G3285</td>
			<td>for lipoplexes preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride, NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">S7653</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Potassium chloride, KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">P9333</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Calcium chloride, CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Magnesium chloride hexahydrate, MgCl2.6H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">M2670</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">EGTA&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">E3889</td>
			<td>enzyme inhibitor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dissecting scissor</td>
			<td style="width:133px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>cockroach dissection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fine tweezers</td>
			<td style="width:133px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>cockroach dissection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">flexible tweezer</td>
			<td style="width:133px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>cockroach holding&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pipetman</td>
			<td style="width:133px;">RAININ</td>
			<td style="width:157px;">P10</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:133px;">Axygen</td>
			<td>MCT175C, PCR02C</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">pipette tip&#160;</td>
			<td style="width:133px;">Axygen</td>
			<td></td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">vortexter</td>
			<td style="width:133px;">Digisystem</td>
			<td style="width:157px;">vm1000</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Minispin centrifuge</td>
			<td style="width:133px;">The Gruffin Group</td>
			<td style="width:157px;">GMC 206</td>
			<td>for liquid spin down&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:133px;">ALC</td>
			<td style="width:157px;">PK121R</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pH meter&#160;</td>
			<td style="width:133px;">JENCO</td>
			<td style="width:157px;">6071</td>
			<td>for pH adjust</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">micro-volume spectrophotometer</td>
			<td style="width:133px;">Quawell</td>
			<td style="width:157px;">Q3000</td>
			<td>nucleic acid quantitative</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">PCR Thermal cycler</td>
			<td style="width:133px;">ABI&#160;</td>
			<td style="width:157px;">2720</td>
			<td>for template PCR or&#160; dsRNA synthesis incubation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">quantitative real-time PCR</td>
			<td style="width:133px;">ABI&#160;</td>
			<td style="width:157px;">StepOne plus</td>
			<td>gene expression quantitative</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifugal Vacuum Concentrators</td>
			<td style="width:133px;">eppendorf</td>
			<td style="width:157px;">5301</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multipette&#160;</td>
			<td style="width:133px;">eppendorf</td>
			<td style="width:157px;">xstream</td>
			<td>for real-time PCR sample loading&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose I</td>
			<td style="width:133px;">amresco</td>
			<td style="width:157px;">0710</td>
			<td>for nucleic acid electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub gene specfifc forward preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>GGG ACA AGC CGG AGT GCA GA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub gene specfifc reverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TCC TGC TCC TGT CTC GCT GA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsTub template forward primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA CAA GCC GGA GTG CAG&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsTub template reverse primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT CCT GCT CCT GTC TCG CTG&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsEGFP template forward preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT ATG GTG AGC AAG GGC GAG GAG</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsEGFP template reverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT GGC GGA TCT TGA AGT TCA CC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub qPCR forward primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>GGA CCG CAT CAG GAA ACT GGC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub qPCR reverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>CCA CAG ACA GCC TCT CCA TGA GC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">ef1 qPCR forward primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>CGC TTG AGG AAA TCA AGA AGG A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">ef1 qPCRreverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>CCT GCA GAG GAA GAC GAA G</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

practical use of rna interference: oral delivery of double-stranded rna in liposome carriers for cockroaches

RNA-Interferenz (RNAi) hat für die Aufdeckung der biologischen Funktionen von zahlreichen Genen weit angewendet worden und hat als eine Pest Control Tool betriebliche durch Störung der wesentlichen Genexpression vorgesehen. Obwohl verschiedene Methoden, wie Injektion, füttern und Tränken, für die erfolgreiche Durchführung der doppelsträngige RNA (DsRNA) gemeldet worden sind, ist die Effizienz der RNAi durch mündliche Lieferung von DsRNA hochvariablen unter verschiedenen Insektengruppen. Die Deutsche Schabe, Blattella Germanica, ist sehr empfindlich auf die Injektion von DsRNA, wie von vielen bisher veröffentlichten Studien gezeigt. Die vorliegende Studie beschreibt eine Methode, um nachzuweisen, dass die DsRNA gekapselt mit Liposomen Träger ausreichen, um den Abbau von DsRNA Mitteldarm Fruchtsaft zu verzögern. Vor allem die kontinuierliche Beschickung der DsRNA deutlich von Liposomen verkapselt reduziert den Tubulin-Ausdruck in den Mitteldarm und führte zum Tod von Kakerlaken. Abschließend könnte die Formulierung und Verwendung von DsRNA Lipoplexes, die DsRNA gegen Nukleasen zu schützen, eine praktische Anwendung der RNAi für Schädlingsbekämpfung in der Zukunft.

Ein vereinfachtes Schema des Protokolls für die mündlichen Lieferung von DsRNA präsentiert sich in Abbildung 1, wo die wichtigsten Schritte für die Vorbereitung der DsRNA Lipoplexes gezeigt werden.
Um den Schutz von Liposomen Trägern auf DsRNA Abbau in den Mitteldarm Saft B. Germanica, ein ex-Vivo -Test wo DsTub Lipoplexes mit Mitteldarm Saft inkubiert wurden durchgeführt wur...

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Practical Use of RNA Interference: Oral Delivery of Double-stranded RNA in Liposome Carriers for Cockroaches

Praktische Anwendung der RNA-Interferenz: mündliche Lieferung von Double-Stranded RNA in Liposomen Träger für Schaben

Diese Handschrift zeigt die Erschöpfung der Gen-Expression in den Mitteldarm der deutschen Schabe durch orale Einnahme von doppelsträngige RNA in Liposomen verkapselt.

RNA interference (RNAi) has been widely applied for uncovering the biological functions of numerous genes, and has been envisaged as a pest control tool ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transkription und Capping von Gaussia-Luciferase mRNA von HeLa-Zelle Transfektion Gefolgt

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Forschung

Biologie

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

Chromatin Isolierung von RNA-Reinigung (Chirp)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Substrate Generation for Endonucleases of CRISPR/Cas Systems

Substrat Generation für Endonukleasen der CRISPR / Cas-Systeme

The  interaction of viruses and their prokaryotic hosts shaped the evolution of  bacterial and archaeal life. Prokaryotes developed several strategies to ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Mit RNA-Interferenz Feeding Strategy to Screen for Genes in Body Größe der Rechtsetzung in der Nematode Beteiligte<em&gt; C. elegans</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

Depletion of Ribosomal RNA for Mosquito Gut Metagenomic RNA-seq

Depletion der ribosomalen RNA für Mosquito Gut metagenomische RNA-seq

The mosquito gut accommodates dynamic microbial communities across different stages of the insect's life cycle. Characterization of the genetic capacity ...

RNA Catalyst as a Reporter for Screening Drugs against RNA Editing in Trypanosomes

RNA-Katalysator als Reporter für Drogen-Screening gegen RNA-Editing in Trypanosomen

Substantial progress has been made in determining the mechanism of mitochondrial RNA editing in trypanosomes. Similarly, considerable progress has been ...

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

Larven RNA-Interferenz in das rote Mehlkäfer,<em&gt; Tribolium castaneum</em

The red flour beetle, Tribolium&#160;castaneum, offers a repertoire of experimental tools for genetic and developmental studies, including a fully ...

Production of Double-stranded DNA Ministrings

Die Produktion von Doppelstrang-DNA-Ministrings

We constructed linear covalently closed (LCC) DNA minivectors as a non-viral gene-delivery vector alternative produced via a simple platform in vivo. DNA ...

TChIP-Seq: Cell-Type-Specific Epigenome Profiling

TChIP-Seq: Cell-Type-Specific Epigenom Profilierung

Epigenetic regulation plays central roles in gene expression. Since histone modification was discovered in the 1960s, its physiological and pathological ...