Name: practical use of rna interference: oral delivery of double-stranded rna in liposome carriers for cockroaches
Uploaded: 2018-05-01T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Practical Use of RNA Interference: Oral Delivery of Double-stranded RNA in Liposome Carriers for Cockroaches at JoVE.com

이 연구는 대만 (사역의 과학 및 기술, 가장 100-2923-B-002-002-MY3 하 고 H.J.L.를 106-2313-B-002-011-MY3)에서 교부 금에 의해 지원 되었다 체코 공화국 (부여 기관 남쪽 보 헤 미아 대학 GAJU 부여 065/2017/P Y.H.L), 및 스페인 ( 스페인 경제와 경쟁력, CGL2012-36251 및 CGL2015-64727-P X.B., 그리고 카탈루냐어 정부에 부여 부여 2014 SGR 619 X.B.); 그것은 또한 경제 및 지역 개발 (X.B. 페더 자금)에 대 한 유럽 기금에서의 재정 지원을 받았다.

1. 합성 및 dsRNA의 준비
<ol><li>대상 유전자의 3' 되지 않은 지역에 dsRNA 대상 사이트를 식별 합니다. Α-tubulin (욕조) 유전자를 대상으로 사용 되는 dsTub (은행 승인 번호: KX228233), 그리고 dsEGFP의 순서에서 부정적인 dsRNA 제어 설계 향상 된 녹색 형광 단백질 (EGFP; 은행 승인 번호: LC311024).</li>
	<li>T7 발기인 순서를 포함 하는 유전자 특정 뇌관으로 dsRNA 템플릿 합성 표준 PCR 증폭을 수행 (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3...

<ol>
	<li>Hammond, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dicing+and+slicing:+The+core+machinery+of+the+RNA+interference+pathway.">Dicing and slicing: The core machinery of the RNA interference pathway.</a> FEBS Lett. 579, 5822-5829 (2005).</li><li>Bell&#233;s, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+drosophila:+RNAi+in+vivo+and+functional+genomics+in+insects.">Beyond drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 111-128 (2010).</li><li>Wynant, N., Santos, D., Vanden Broeck, J., Jeon, K. 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Biol. 46, 1-8 (2014).</li><li>Huang, J. -. H., Belles, X., Lee, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+hypertrehalosemic+hormone+receptor+in+relation+to+hemolymph+trehalose+and+to+oxidative+stress+in+the+cockroach+Blattella+germanica.">Functional characterization of hypertrehalosemic hormone receptor in relation to hemolymph trehalose and to oxidative stress in the cockroach Blattella germanica.</a> Exp. Endocrinol. 2, 114 (2012).</li><li>Lin, Y. -. H., Lee, C. -. M., Huang, J. -. H., Lee, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+regulation+of+permethrin+susceptibility+by+glutathione+S-transferase+(BgGSTD1)+in+the+German+cockroach+(Blattella+germanica).">Circadian regulation of permethrin susceptibility by glutathione S-transferase (BgGSTD1) in the German cockroach (Blattella germanica).</a> J. Insect Physiol. 65, 45-50 (2014).</li><li>Lozano, J., Kayukawa, T., Shinoda, T., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+taiman+in+insect+metamorphosis.">A role for taiman in insect metamorphosis.</a> PLOS Genet. 10, 1004769 (2014).</li><li>Lozano, J., Monta&#241;ez, R., Belles, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiR-2+family+regulates+insect+metamorphosis+by+controlling+the+juvenile+hormone+signaling+pathway.">MiR-2 family regulates insect metamorphosis by controlling the juvenile hormone signaling pathway.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 112, 3740-3745 (2015).</li><li>Lin, Y. -. H., Huang, J. -. H., Liu, Y., Belles, X., Lee, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+delivery+of+dsRNA+lipoplexes+to+German+cockroach+protects+dsRNA+from+degradation+and+induces+RNAi+response.">Oral delivery of dsRNA lipoplexes to German cockroach protects dsRNA from degradation and induces RNAi response.</a> Pest Manag. Sci. 73, 960-966 (2017).</li><li>Gharavi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chiral+cationic+polyamines+for+chiral+microcapsules+and+siRNA+delivery.">Chiral cationic polyamines for chiral microcapsules and siRNA delivery.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 23, 5919-5922 (2013).</li><li>Whyard, S., Singh, A. D., Wong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ingested+double-stranded+RNAs+can+act+as+species-specific+insecticides.">Ingested double-stranded RNAs can act as species-specific insecticides.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 39, 824-832 (2009).</li><li>Luo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+responses+of+migratory+locusts+to+systemic+RNA+interference+via+double-stranded+RNA+injection+and+feeding.">Differential responses of migratory locusts to systemic RNA interference via double-stranded RNA injection and feeding.</a> Insect Mol. Biol. 22, 574-583 (2013).</li><li>Liu, J., Smagghe, G., Swevers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+response+of+BmToll9-1+and+RNAi+machinery+genes+to+exogenous+dsRNA+in+the+midgut+of+Bombyx+mori.">Transcriptional response of BmToll9-1 and RNAi machinery genes to exogenous dsRNA in the midgut of Bombyx mori.</a> J. Insect Physiol. 59, 646-654 (2013).</li><li>Airs, P. M., Bartholomay, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+for+mosquito+and+mosquito-borne+disease+control.">RNA interference for mosquito and mosquito-borne disease control.</a> Insects. 8, 4 (2017).</li><li>Taning, C. N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+RNAi+to+control+Drosophila+suzukii:+Laboratory+testing+against+larval+and+adult+stages.">Oral RNAi to control Drosophila suzukii: Laboratory testing against larval and adult stages.</a> J. Pest Sci. 89, 803-814 (2016).</li><li>Wu, S. Y., McMillan, N. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidic+systems+for+in+vivo+siRNA+delivery.">Lipidic systems for in vivo siRNA delivery.</a> AAPS J. 11, 639-652 (2009).</li><li>Tam, Y. Y. C., Chen, S., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+lipid+nanoparticles+for+siRNA+delivery.">Advances in lipid nanoparticles for siRNA delivery.</a> Pharmaceutics. 5, 498-507 (2013).</li><li>Xia, Y., Tian, J., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+surface+properties+on+liposomal+siRNA+delivery.">Effect of surface properties on liposomal siRNA delivery.</a> Biomaterials. 79, 56-68 (2016).</li></ol>

이 프로토콜은 독일 바퀴벌레의 midgut 주스에서 ribonuclease 소화에 대 한 보호를 포함 하는 dsRNA lipoplexes의 구두 배달을 통해 효과적인 RNAi에는 메서드를 제공 합니다. 다양 한 곤충 종에 다른 연구에서와 같이, 구두 전달의 dsRNA 통해 가난한 RNAi 효과 대부분 차지 dsRNA8,,910의 저하에 의해. 이 프로토콜은 구두 전달의 dsRNA에에서 저?...

RNAi 많은 진핵생물1dsRNA 분자에 의해 트리거되는 post-transcriptional 입을 통로의 메커니즘을 통해 최저의 유전자 발현을 효과적인 방법으로 입증 되었습니다. 연구의 지난 10 년간, RNAi 주사를 통해 특정 유전자의 표현이 없애고 또는 곤충2,3의 다양 한 taxa에 dsRNA의 먹이로 동작을 개발에서 유전자의 기능 연구를 유용한 도구가 되고있다. 특이성 및 고갈 시키는 효과의 견고성, RNAi의 응용 프로그램은 현재 해충 제어 관리4,5에 대 한 잠재적인 전략으로 간주 되고있다. 그러나, RNAi의 효율 대상 다른 유전자 전달 방법에 따라 곤충 종 사이 널리 다릅니다. 증거의 성장 몸은 ribonucleases에 의해 타락은 dsRNA의 불안정 RNAi5,6의 제한 된 효능에 중요 한 요소는 나왔다. 예를 들어, Manduca sexta 에 낮은 RNAi 감도 사실 hemolymph 섞인 dsRNA 신속 하 게 저하 1 시간7에 의해 설명 되어 있다. 유사 하 게, 효율적으로 섭취 dsRNA 저하, midgut에서 알칼리 nucleases의 존재 다른 곤충 순서8,,910낮은 RNAi 효율성과 강하게 상관 된다.
DsRNA의 구두 전달 특히 해충 제어 전략에 RNAi의 응용 프로그램에 대 한 흥미 롭 지만 midgut에 nucleases에 의해 dsRNA의 저하를 지체 하는 방법을 하지 아직 개발 되었습니다, 어떤 효과적인 보장을 했합니다 먹이 통해 RNAi입니다. 그러나, 구두 전달의 dsRNA에 RNAi의 응답 다량 dsRNA, 누에나방에 예를 들어 50 µ g의 먹이 또는 지속적으로 8 일 (총에서 8 µ g dsRNA) 메뚜기 종에서 먹이 보고 되었습니다. 독일 바퀴벌레, Blattella germinica, dsRNA11,12,,1314의 주입에 의해 RNAi에 매우 민감 하지만 먹이 통해 dsRNA에 응답 하지 않습니다. 최근, 린 외. 그는 dsRNA liposome 사업자 결과 최저에 성공적인 RNAi에 α-tubulin 유전자 발현에에서 캡슐화 독일 바퀴벌레15midgut 및 트리거 상당한 사망률 (2017) 증명. DsRNA는 midgut에의 저하는 구두 RNAi에 대 한 제한 요소, liposome 사업자 저하, 쉽게 다른 곤충에 적용 가능한 용기에 강한 nuclease 활동에서 dsRNA를 보호 하기 위해 차량으로 서브. 메모, 특정 transfection 시 약을 선택 하기 위한 이유의 현재 프로토콜에서 liposome 캐리어는 그것 테스트 되었습니다 곤충 세포 선 transfection에 대 한 더 적은 독성으로 사용 ( 재료의 표참조)에 따라에 제조 업체의 지침입니다. Gharavi 외 에 다른 liposome transfection 시스템의 비교에 따르면 (2013) 16, transfecting 작은 간섭 RNA (siRNA)의 효율은 약이 고 다른 곤충17,18 dsRNA 전달 시스템에 사용 된 다른 상용 시스템 사이의 동일 . 또한, 우리의 먹이 방법은 충분히 신중 하 게 각 바퀴벌레에 의해 dsRNA의 적절 한 양을 섭취 하 고 결과 강력 하 고 확인 합니다. 요약 하자면, 현재 프로토콜 및 결과 dsRNA 안정성 향상 dsRNA lipoplexes를 사용 하 여 하는 해충에 대 한 유망한 접근 미래에 RNAi의 전략 구두 납품의 디자인에 문을 열어 보여줍니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1124px;" width="1123">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">GenJe Plus DNA in vitro Transfection reagent</td>
			<td style="width:133px;">SignaGen</td>
			<td style="width:157px;">SL100499</td>
			<td style="width:481px;">for lipoplexes preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blend Taq plus</td>
			<td style="width:133px;">TOYOBO&#160;</td>
			<td style="width:157px;">BTQ-201</td>
			<td>for PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fast SYBR Green Master Mix</td>
			<td style="width:133px;">ABI&#160;</td>
			<td style="width:157px;">4385612</td>
			<td>for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">FirstChoice RLM-RACE Kit</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">AM1700</td>
			<td>for 3&#39; UTR identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">AMB13345</td>
			<td>for dsRNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TURBO DNase</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">AM2239</td>
			<td>remove DNA template from dsRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRIzol</td>
			<td style="width:133px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">15596018</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RQ1 RNase-Free Dnase</td>
			<td style="width:133px;">Promega</td>
			<td style="width:157px;">M6101</td>
			<td>remove DNA template from total RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chloroform&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">C2432</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">2-Propanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">I9516</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>24102</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Diethyl pyrocarbonate, DEPC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">D5758</td>
			<td>for RNase free water preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">glucose solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">G3285</td>
			<td>for lipoplexes preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride, NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">S7653</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Potassium chloride, KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">P9333</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Calcium chloride, CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Magnesium chloride hexahydrate, MgCl2.6H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">M2670</td>
			<td>insect saline buffer formula</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">EGTA&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:157px;">E3889</td>
			<td>enzyme inhibitor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dissecting scissor</td>
			<td style="width:133px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>cockroach dissection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fine tweezers</td>
			<td style="width:133px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>cockroach dissection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">flexible tweezer</td>
			<td style="width:133px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>cockroach holding&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pipetman</td>
			<td style="width:133px;">RAININ</td>
			<td style="width:157px;">P10</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:133px;">Axygen</td>
			<td>MCT175C, PCR02C</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">pipette tip&#160;</td>
			<td style="width:133px;">Axygen</td>
			<td></td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">vortexter</td>
			<td style="width:133px;">Digisystem</td>
			<td style="width:157px;">vm1000</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Minispin centrifuge</td>
			<td style="width:133px;">The Gruffin Group</td>
			<td style="width:157px;">GMC 206</td>
			<td>for liquid spin down&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:133px;">ALC</td>
			<td style="width:157px;">PK121R</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pH meter&#160;</td>
			<td style="width:133px;">JENCO</td>
			<td style="width:157px;">6071</td>
			<td>for pH adjust</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">micro-volume spectrophotometer</td>
			<td style="width:133px;">Quawell</td>
			<td style="width:157px;">Q3000</td>
			<td>nucleic acid quantitative</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">PCR Thermal cycler</td>
			<td style="width:133px;">ABI&#160;</td>
			<td style="width:157px;">2720</td>
			<td>for template PCR or&#160; dsRNA synthesis incubation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">quantitative real-time PCR</td>
			<td style="width:133px;">ABI&#160;</td>
			<td style="width:157px;">StepOne plus</td>
			<td>gene expression quantitative</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifugal Vacuum Concentrators</td>
			<td style="width:133px;">eppendorf</td>
			<td style="width:157px;">5301</td>
			<td>for dsRNA or total RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multipette&#160;</td>
			<td style="width:133px;">eppendorf</td>
			<td style="width:157px;">xstream</td>
			<td>for real-time PCR sample loading&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose I</td>
			<td style="width:133px;">amresco</td>
			<td style="width:157px;">0710</td>
			<td>for nucleic acid electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub gene specfifc forward preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>GGG ACA AGC CGG AGT GCA GA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub gene specfifc reverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TCC TGC TCC TGT CTC GCT GA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsTub template forward primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGA CAA GCC GGA GTG CAG&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsTub template reverse primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT CCT GCT CCT GTC TCG CTG&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsEGFP template forward preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT ATG GTG AGC AAG GGC GAG GAG</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">dsEGFP template reverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT GGC GGA TCT TGA AGT TCA CC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub qPCR forward primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>GGA CCG CAT CAG GAA ACT GGC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">tub qPCR reverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>CCA CAG ACA GCC TCT CCA TGA GC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">ef1 qPCR forward primer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>CGC TTG AGG AAA TCA AGA AGG A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">ef1 qPCRreverse preimer</td>
			<td style="width:133px;">tri-I biotech</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td>CCT GCA GAG GAA GAC GAA G</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

practical use of rna interference: oral delivery of double-stranded rna in liposome carriers for cockroaches

RNA 간섭 (RNAi) 수많은 유전자의 생물 학적 기능을 잠복 근무에 대 한 광범위 하 게 적용 하 고 필수 유전자 발현의 중단에 의해 해충 제어 도구 운영으로 envisaged 되었습니다. 다른 메서드를 주입, 먹이, 및 몸을 담글, 이중 가닥 RNA (dsRNA)의 배달에 대 한 보고 되었습니다, 비록 구두 전달의 dsRNA 통해 RNAi의 효율은 매우 다른 곤충 집단 변수. 이전에 게시 하는 많은 연구에 의해 표시 된 독일 바퀴벌레, Blattella germanica, dsRNA 주입에 매우 민감한입니다. 현재 연구는 dsRNA liposome 사업자와 캡슐화 midgut 주스 dsRNA의 저하를 지체 시키는 충분 한지 설명 하는 방법을 설명 합니다. 특히, dsRNA 리 크게 캡슐화의 지속적인 먹이 midgut tubulin 식 감소 하 고 바퀴벌레의 죽음에 지도. 결론적으로, 수립 및 활용 dsRNA nucleases에 대 한 보호, dsRNA lipoplexes 수 곤충 해충에 대 한 RNAi의 실제적인 사용을 미래에 있습니다.

DsRNA의 구두 전달 프로토콜의 단순화 된 구조는 그림 1, dsRNA lipoplexes의 준비에 대 한 주요 단계 표시 됩니다에 표시 됩니다.
B. germanica, 비보 전 분석 결과 dsTub lipoplexes midgut 주스 incubated 했다 실시 됐다는 dsRNA의 무결성의 midgut 주스에서 dsRNA 저하 시 liposome 사업자에 의해 주어진 보호를 조사 ?...

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Practical Use of RNA Interference: Oral Delivery of Double-stranded RNA in Liposome Carriers for Cockroaches

RNA 방해의 실용적인 사용: Liposome 캐리어 바퀴벌레에 대 한 이중 가닥 RNA의 구두 납품

이 원고는의 리에 이중 가닥 RNA의 구강 섭취를 통해 독일 바퀴벌레는 midgut에 유전자 발현의 고갈 보여 줍니다.

RNA interference (RNAi) has been widely applied for uncovering the biological functions of numerous genes, and has been envisaged as a pest control tool ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

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HELA 세포 Transfection 얹는 Gaussia의 루시페라제의 mRNA의 시험 관내 스크립트 작성 및 상한에

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

연구

생물학

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

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RNA 정제에 의한 염색질 절연 (처프)

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The  interaction of viruses and their prokaryotic hosts shaped the evolution of  bacterial and archaeal life. Prokaryotes developed several strategies to ...

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선충류의 바디 크기 규정에 참여 유전자에 대한 화면으로 RNA로 인한 간섭 수유 전략을 사용하여<em&gt; C. elegans</em

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모기 내장 Metagenomic RNA-seq에 대한 Ribosomal RNA의 고갈

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Trypanosomes에서 RNA 편집에 대한 마약 검사에 대한 기자로 RNA 촉매

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Larval RNA Interference in the Red Flour Beetle, Tribolium castaneum

레드 밀가루 딱정벌레의 애벌레 RNA 간섭,<em&gt; Tribolium castaneum</em

The red flour beetle, Tribolium&#160;castaneum, offers a repertoire of experimental tools for genetic and developmental studies, including a fully ...

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이중 가닥 DNA Ministrings의 생산

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TChIP-Seq: 셀 형식 관련 Epigenome 프로 파일링

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