Name: puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis
Uploaded: 2018-03-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis at JoVE.com

Gli autori ringraziano Linnea Tankred e Diana Rydholm per la zootecnia.

Cuccioli di topo BALB/c di entrambi i sessi sono stati utilizzati secondo l'istruzione per l'uso degli animali in oftalmologica e Vision Research, e i protocolli sono stati approvati dal comitato di Stoccolma per la ricerca etica animale. Topi sono stati alloggiati in cucciolate, insieme a madre durante l'allattamento, con un ciclo giorno/notte di 12 h, libero accesso a cibo e acqua e monitorati giornalmente.
Nota: Per la procedura chirurgica, topi sono stati tenuti sotto anestesia con isoflur...

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Nel presente protocollo, è presentato un nuovo metodo per l'induzione della risposta vascolare iris dalla puntura uveal. La puntura innesca meccanismi di guarigione della ferita e promuove le risposte vascolari nei iris10,11. Questo è in accordo con patologie oculari, quali PDR e NVG, dove risposte angiogeniche esacerbato dalla retina nel segmento posteriore dell'occhio culminano con lo stato clinico di rubeosis iridis, una maggiore vascolarizzazione dell'iride...

L'iride, insieme con il corpo ciliare e coroide, comprende dell'uvea, che è il tessuto più vascolarizzato dell'occhio. Sistema vascolare Iris è essenziale nel mantenimento dell'omeostasi nell'alloggiamento anteriore dell'occhio. A seguito di abbondanti connessioni anastomotiche tra le arterie e le vene, i vasi sanguigni di iris fornire nutrienti e apporto di ossigeno non solo per l'iride stessa, ma per l'intero segmento anteriore dell' occhio1.
La formazione di nuovi vasi sanguigni, o l'angiogenesi da quelle pre-esistenti, è fondamentale nei processi fisiologici, quali sviluppo e2di guarigione della ferita. L'angiogenesi è finemente regolata da una moltitudine di fattori canoniche, come fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF) e l'inibitore dell'attivatore del plasminogeno (PAI), così come molteplici fattori infiammatori e uno squilibrio di questi fattori può portare a patologica l'angiogenesi3.
Nell'occhio, la neovascolarizzazione è la causa di malattie avvistare-minaccioso, come retinopatia diabetica proliferative (PDR) e glaucoma neovascolare (NVG). In queste malattie oculari, la neovascolarizzazione focale si trova comunemente in tessuto retinico, ma lo squilibrio in infiammatorie e fattori angiogenici in entrambi i posteriori ed anteriori chambers oculare dell'occhio è stato associato con rubeosis iridis, il termine clinico per iris neoangiogenesi patologica4. Queste patologie indicano la capacità dell'adulto iride a subire l'angiogenesi. Nei topi, sistema vascolare oculare è immaturo dopo la nascita e continua maturazione post-partum. Questa peculiarità di sviluppo viene sfruttata nel modello del topo di retinopatia indotta da ossigeno, un modello che imita molto attentamente le condizioni cliniche della retinopatia della prematurità5. Inoltre, l'angiogenesi e l'infiammazione gioca un ruolo fondamentale nella guarigione meccanismi6e cicatrizzazione stessa è stata associata con l'angiogenesi modelli7.
In questo studio, descriviamo un modello del neovascularization dell'iride indotta da puntura. Uveale forature vengono eseguite nei pressi del limite esterno del limbus, che indurre il neovascularization dell'iride attivando il sistema di guarigione della ferita. Grazie alla trasparenza della cornea, sistema vascolare iride può essere analizzato facilmente in vivo di metodi non invasivi. Forato occhi presentano un aumento del letto vascolare nell'iride, che è stato associato con un aumento dell'attivazione del plasminogeno e indicatori infiammatori8. Il modello presentato ha un grande potenziale come un nuovo strumento per studiare l'angiogenesi e angiogenici composti di screening e permette la visualizzazione diretta in vivo dei processi angiogenici.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bonn eye scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>23060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas curved scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas straight scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective adapter for camera</td>
			<td>Handcrafted</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad 100-110 watts</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available in pet/veterinarian stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic 30g beveled needle</td>
			<td>KDM GmBH germany</td>
			<td>911914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iphone 4S</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>Or other high resolution image acquistion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>KDG 9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E1815 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>63140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minims tetracaine hydrochloride</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 % (w/v) Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral-buffered formalin</td>
			<td>Bioreagens</td>
			<td>0018-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline solution</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>210352</td>
			<td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 10 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 3 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.685.200</td>
			<td>Or any eppendorf style tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC plate 96-well</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3.5 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td>Or any other Pasteur pipette style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Univentor 400 anesthesia unit</td>
			<td>Univentor Limited</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild M650 surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

Descriviamo un modello del neovascularization dell'iride indotta da puntura come un modello generale per la valutazione non invasiva dell'angiogenesi. Il modello è anche rilevante per il targeting glaucoma neovascolare, una complicazione avvistare-minacciosa di retinopatia diabetica. Questo metodo si basa sull'induzione della risposta vascolare iris da una serie di forature autosigillante uveale su topi BALB/c e sfrutta la maturazione post-partum del vasculature oculare del mouse. Cuccioli di mouse subiscono uveale forature da giorno postnatale 12.5, naturalmente quando i cuccioli aprono i loro occhi, fino al giorno postnatale 24,5. Grazie alla trasparenza della cornea, sistema vascolare iride può essere analizzato facilmente attraverso il tempo con metodi non invasiva in vivo . Inoltre, l'iride semitrasparente di topi BALB/c può essere flatmounted per l'analisi dettagliata immunohistologic con la colorazione di fondo minimo non specifici. In questo modello, l'angiogenesi è determinata essenzialmente dall'infiammatorio e sistemi di attivazione del plasminogeno. Il modello indotta da puntura è il primo per indurre il neovascularization dell'iride in piccoli roditori e ha il vantaggio di consentire analisi diretta non invasiva in vivo del processo angiogenico. Inoltre, il modello può essere abbinato angiogenici modulante sostanze, che evidenzia il suo potenziale nello studio dell'angiogenesi con una prospettiva in vivo .

Cuccioli di topo BALB/c Albino alle p 12.5 sono stati sottoposti a forature uveale, ripetute ogni quarto giorno (sperimentale giorno 0, 4, 8, 12), fino al P24.5. A P27.5, topi sono stati eutanasizzati e iridi attentamente sezionato (sperimentale giorno 15). Foto degli occhi del mouse sono state scattate con una videocamera fissata ad uno stereoscopio chirurgico prima di ogni serie di puntura in ogni giorno sperimentale per valutare la valutazione non invasiva della risposta vascolare iris...

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Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

Neovascularization dell'iride, una complicazione comune della malattia della retina ischemica, può portare ad avvistare-minaccioso il glaucoma neovascular. Qui, descriviamo un protocollo murino per indurre il neovascularization iris sperimentali che possono essere utilizzati per la valutazione non invasiva delle sostanze l'angiogenesi di modulazione.

Puntura-indotta di Neovascularization dell'iride come un modello murino di Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

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