Name: whole-mount confocal microscopy for adult ear skin: a model system to study neuro-vascular branching morphogenesis and immune cell distribution
Uploaded: 2018-03-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution at JoVE.com

ونشكر ك. جيل لإدارة المختبرات والدعم التقني، J. هوكينز والموظفين من الوطنية معاهد للصحة (المعاهد الوطنية للصحة) بناء 50 منشأة الحيوان للمساعدة مع الرعاية الماوس، ور. ريد وبالدريي واو للمساعدة الإدارية. شكرا أيضا موتيجى س. و. م. أوديي لتقاسم على بروتوكول تشريح الجلد الإذن، وحروق أ لتعليمات تحريرية، وأعضاء من "مختبر الخلايا الجذعية" وبيولوجيا الأعصاب والأوعية الدموية للمساعدة التقنية ومناقشة مدروسة. ت يامازاكي أيده "الجمعية اليابانية" لتعزيز العلوم (JSPS) المعاهد الوطنية للصحة-كايتوكو. هذا العمل كان يدعمها "برنامج البحوث الداخلية الوطني للقلب" والرئة، والدم معهد (HL005702-11 إلى Y.M.)

أجريت جميع التجارب في هذا الباب تحت الموافقة من الوطني للقلب والرئة، والدم معهد (NHLBI) العناية بالحيوان واللجنة استخدام.
1-الكبار الماوس الإذن الجلد جمع
<ol><li>Euthanize الفئران الكبار بالتعرض لغاز ثاني أكسيد الكربون (CO2) في دائرة مغلقة، ثم قم بتأكيد القتل الرحيم بخلع عنق الرح...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., James, J., Nam, J., Uchida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-mount+confocal+microscopy+for+vascular+branching+morphogenesis.">Whole-mount confocal microscopy for vascular branching morphogenesis.</a> Methods Mol Biol. 843, 69-78 (2012).</li><li>Li, W., Mukouyama, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-mount+immunohistochemical+analysis+for+embryonic+limb+skin+vasculature:+a+model+system+to+study+vascular+branching+morphogenesis+in+embryo.">Whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Yamazaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Myeloid+Progenitors+Differentiate+into+Pericytes+through+TGF-beta+Signaling+in+Developing+Skin+Vasculature.">Tissue Myeloid Progenitors Differentiate into Pericytes through TGF-beta Signaling in Developing Skin Vasculature.</a> Cell Rep. 18, 2991-3004 (2017).</li><li>Mukouyama, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vessel-dependent+recruitment+of+sympathetic+axons:+looking+for+innervation+in+all+the+right+places.">Vessel-dependent recruitment of sympathetic axons: looking for innervation in all the right places.</a> J Clin Invest. 124, 2855-2857 (2014).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+CXCL12+and+VEGF-A+regulate+the+patterning+of+arterial+vessel+branching+in+developing+limb+skin.">Peripheral nerve-derived CXCL12 and VEGF-A regulate the patterning of arterial vessel branching in developing limb skin.</a> Dev Cell. 24, 359-371 (2013).</li><li>Chang, H., Wang, Y., Wu, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flat+mount+imaging+of+mouse+skin+and+its+application+to+the+analysis+of+hair+follicle+patterning+and+sensory+axon+morphology.">Flat mount imaging of mouse skin and its application to the analysis of hair follicle patterning and sensory axon morphology.</a> J Vis Exp. , e51749 (2014).</li><li>Salz, L., Driskell, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+Whole+Mount:+A+Novel+Processing+and+Imaging+Protocol+for+Thick,+Three-dimensional+Tissue+Cross-sections+of+Skin.">Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin.</a> J Vis Exp. , (2017).</li><li>Liakath-Ali, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+skin+phenotypes+revealed+by+a+genome-wide+mouse+reverse+genetic+screen.">Novel skin phenotypes revealed by a genome-wide mouse reverse genetic screen.</a> Nat Commun. 5, 3540 (2014).</li><li>Gunawan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+methyltransferase+Ezh2+controls+cell+adhesion+and+migration+through+direct+methylation+of+the+extranuclear+regulatory+protein+talin.">The methyltransferase Ezh2 controls cell adhesion and migration through direct methylation of the extranuclear regulatory protein talin.</a> Nat Immunol. 16, 505-516 (2015).</li><li>Avci, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+skin+disease+for+drug+discovery.">Animal models of skin disease for drug discovery.</a> Expert Opin Drug Dis. 8, 331-355 (2013).</li><li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+atopic+dermatitis.">Animal models of atopic dermatitis.</a> J Invest Dermatol. 129, 31-40 (2009).</li><li>Wagner, E. F., Schonthaler, H. B., Guinea-Viniegra, J., Tschachler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psoriasis:+what+we+have+learned+from+mouse+models.">Psoriasis: what we have learned from mouse models.</a> Nat Rev Rheumatol. 6, 704-714 (2010).</li><li>Nunan, R., Harding, K. G., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+challenges+of+chronic+wounds:+searching+for+an+optimal+animal+model+to+recapitulate+their+complexity.">Clinical challenges of chronic wounds: searching for an optimal animal model to recapitulate their complexity.</a> Dis Model Mech. 7, 1205-1213 (2014).</li><li>O'Brien, P. D., Sakowski, S. A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+diabetic+neuropathy.">Mouse models of diabetic neuropathy.</a> ILAR J. 54, 259-272 (2014).</li><li>Yamazaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-Mount+Adult+Ear+Skin+Imaging+Reveals+Defective+Neuro-Vascular++Branching+Morphogenesis+in+Obese+and+Type+2+Diabetic+Mouse+Models.">Whole-Mount Adult Ear Skin Imaging Reveals Defective Neuro-Vascular Branching Morphogenesis in Obese and Type 2 Diabetic Mouse Models.</a> Sci Rep. 8, (2018).</li></ol>

ويصف هذا البروتوكول تصوير الجامع-جبل إيمونونوهيستوتشيميكال من الجلد الإذن الكبار لتحليل الهياكل العصبية والأوعية الدموية وتوزيع الخلايا المناعية. ونحن نعتقد أن هذا الأسلوب له العديد من المزايا التجريبية للباحثين لدراسة morphogenesis المتفرعة والزخرفة للأعصاب المحيطية، والأوعية الدموية، وك...

يتكون الجلد من ثلاث طبقات: البشرة، الأدمة و hypodermis. قد استخدمت كنظام نموذجي لدراسة الحفاظ على الخلايا الجذعية، والتمايز، و morphogenesis في التنمية، فضلا عن تجديد وتوموريجينيسيس، والتهاب في تعليم الكبار. الجلد الغني vascularized ومعصب أن تطوير نظام الأوعية الدموية والجهاز العصبي المحيطي منسقة تنسيقاً جيدا.
وقد أثبتنا سابقا تقنية تصوير الجامع-جبل جنينية جلد مع وضع العلامات متعددة لدراسة سليمة الأعصاب المحيطية والأوعية الدموية، بما في ذلك تلك المكونات الخلوية1،2،3، 4: محاور عصبية حسية ومحاور عصبية متعاطفة، شوان خلايا الأعصاب، خلايا بطانية، بيريسيتيس، وخلايا العضلات الملساء والأوعية الدموية (فسمكس) في الأوعية الدموية. خلال الأوعية، شبكة شعرية الأولية يخضع لإعادة عرض الأوعية الدموية المكثفة ويتطور إلى شبكة المتفرعة الأوعية الدموية هرمية. في الأدمة النامية/hypodermis، فرع جنبا إلى جنب مع الأعصاب الحسية الطرفية وعروق الشرايين ثم تشكل المتاخمة للشرايين. بعد شبكة الأوعية الدموية الهرمية دقة مغطاة فسمكس، تمتد على طول الأعصاب متعاطفة ويعصب الأوعية الدموية كبيرة قطرها1،،من56. وعلى الرغم من الأهمية في الارتباط الوثيق بين نظم الأوعية الدموية والجهاز العصبي النامي، كان سؤالاً رئيسيا للتصدي لما يحدث للشبكات العصبية والأوعية الدموية في مختلف الحالات المرضية لدى البالغين. تصوير ثلاثي الأبعاد عالية الدقة ضروري نقدر المرضية، جنبا إلى جنب مع التعرف تشريحيا morphogenesis المتفرعة والزخرفة.
عادة يتم تحليل morphogenesis الخلايا العصبية والأوعية الدموية في الجلد الماوس الكبار تلطيخ قسم الأنسجة. واستخدمت دراسات أخرى تصوير الجامع-جبل من الجلد إلى تصور الأعصاب المحيطية والأوعية الدموية، بالإضافة إلى بصيلات الشعر والغدد الدهنية، ومقفه الشعرة العضلات7،،من89. ومع ذلك، سمك الجلد الكبار جعلت من الصعب تحليل الجلد على مدى عمق أكملها.
في هذه الدراسة، قمنا بتطوير تصوير الجامع-جبل عالية الدقة رواية الجلد الإذن الكبار للتغلب على هذه التحديات. الجلد الإذن متاحة لتشريح وتصوير الجامع-جبل اللاحقة من الجلد على مدى عمق أكملها. وهكذا، هو أسلوب مباشر واستنساخه بشدة التي يمكن تطبيقها لمقارنة هيكل ثلاثي الأبعاد نظم الجهاز العصبي والأوعية الدموية الطرفية في الجلد، مع القياسات القياس الكمي الشامل. أظهرنا أن المحاذاة للأعصاب المحيطية الحسية ومتعاطفة مع الأوعية الدموية كبيرة قطرها محفوظاً في الجلد الكبار. والهدف من هذا البروتوكول تصور morphogenesis المتفرعة، والزخرفة للأعصاب المحيطية، والأوعية الدموية، فضلا عن توزيع الخلايا المناعية على مستوى خلوي في نماذج الماوس الكبار في ظروف مختلفة مثل التهاب و التجديد.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 x Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>KD Medical</td>
			<td>RGE-3210</td>
			<td>PBS, without Ca2+/Mg2+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14025-092</td>
			<td>HBSS, with Ca2+/Mg2+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>PFA, fixative, diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100</td>
			<td>Detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16210064</td>
			<td>Component of blocking/washing buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Jackson Immuno research</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>Component of blocking/washing buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved fine tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>RS-5047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved tweezers</td>
			<td>Integra Miltex Vantage</td>
			<td>V918-782, V918-784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Unit 0.45 mm</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>157-0045</td>
			<td>For filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>8881501400</td>
			<td>For filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter Unit 0.22 mm</td>
			<td>Millex-GV</td>
			<td>SLGVR04NL</td>
			<td>For filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>P36934</td>
			<td>Anti-fade mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail Polish</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72180</td>
			<td>For sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop CC 2017</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>Graphics editor software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illustrator CC 2017</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>Graphics editor software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Image processing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PECAM-1 (CD31) antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1398Z</td>
			<td>Hamster IgG, vascular endothelial cell marker, 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PECAM-1 (CD31) antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553369</td>
			<td>Rat IgG2a kappa, vascular endothelial cell marker, 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-aSMA antibody conjugated with cy-3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6198</td>
			<td>Mouse IgG2a, vascular smooth muscle cell marker, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-EphB1 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-9319</td>
			<td>Goat polyclonal, venous endothelial cell marker, 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-neuron-specific Class III b-tubulin (Tuj1)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB18207</td>
			<td>Tuj1, Rabbit polyclonal IgG, pan-axonal marker, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tuj1 antibody</td>
			<td>Covance</td>
			<td>MMS-435P</td>
			<td>Mouse IgG2a, pan-axonal marker, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MBP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB40390</td>
			<td>Rabbit polyclonal IgG, myelination marker, 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Rabbit polyclonal, sympathetic neuron marker, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Peripherin antibody</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>AB1530</td>
			<td>Rabbit polyclonal, peripheral neuron marker, 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD11b antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA74G</td>
			<td>Rat IgG2b, inflammatory cell marker (macrophages), 1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45 antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-0451-85</td>
			<td>Rat IgG2b kappa, pan-hematopoietic cell marker, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3 antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA1477T</td>
			<td>Rat IgG1, immune cell marker, 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45R (B220) antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-0452</td>
			<td>Rat IgG2a kappa, inflammatory cell marker, 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11122</td>
			<td>Rabbit polyclonal, 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab13970</td>
			<td>Chicken polyclonal, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-b-gal antibody</td>
			<td>Cappel</td>
			<td>55976</td>
			<td>Rabbit polyclonal, 1:5000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-RFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab62341</td>
			<td>Rabbit polyclonal, 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG (H+L) Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11034</td>
			<td>Rabbit polyclonal secondary antibody, 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-hamster IgG (H+L) Alexa 647</td>
			<td>Jackson Immuno research</td>
			<td>127-605-160</td>
			<td>Hamster polyclonal secondary antibody, 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat IgG (H+L) Alexa 594</td>
			<td>Jackson Immuno research</td>
			<td>112-585-167</td>
			<td>Rat polyclonal secondary antibody, 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG2a Alexa 633</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21136</td>
			<td>Mouse IgG2a secondary antibody, 1:250</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-mount confocal microscopy for adult ear skin: a model system to study neuro-vascular branching morphogenesis and immune cell distribution

نقدم هنا، على بروتوكول للجلد كلياً-جبل الإذن الكبار التصوير تقنية لدراسة شاملة morphogenesis المتفرعة الأوعية الدموية العصبية ثلاثي الأبعاد والزخرفة، فضلا عن توزيع الخلايا المناعية على مستوى خلوي. ويوفر تحليل الهياكل التشريحية الأعصاب والأوعية الدموية الطرفية في أنسجة البالغين بعض الأفكار في فهم الأسلاك الوظيفية العصبية والأوعية الدموية وضمور الأعصاب والأوعية الدموية في الحالات المرضية مثل التئام الجروح. كنظام نموذجي الزاخر، وقد ركزنا على دراساتنا على جلد الإذن الكبار، ومتاحة للتشريح. ويوفر لنا البروتوكول بسيطة واستنساخه تصوير دقيق للمكونات الخلوية في الجلد كله، مثل الأعصاب المحيطية (محاور عصبية حسية ومتعاطفة مع محاور عصبية وخلايا شوان)، والأوعية الدموية (خلايا بطانية وخلايا العضلات الملساء والأوعية الدموية )، والخلايا الملتهبة. ونحن نعتقد أن هذا البروتوكول سوف تمهد الطريق للتحقيق المورفولوجية تشوهات في الأعصاب المحيطية والأوعية الدموية وكذلك الالتهاب في الجلد الإذن الكبار تحت مختلف الحالات المرضية.

كانت الماوس الكبار الإذن الخلفي الجلد (الشكل 1A) والجلد الإذن الأمامية (الشكل 1B) إيمونوستينيد مع الأجسام المضادة إلى αSMA (أحمر)، Tuj1 (الأخضر)، وبيكم-1 (أزرق). وكان الجلد الخلفي إيمونوستينيد لدراسة التوزيع العصبية المناعية باستخدام الأجسام الم?...

Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution at JoVE.com

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

هنا، نحن وصف أسلوب تصوير الجامع-جبل عالية دقة في الجلد الإذن الكامل الماوس الكبار، والتي تمكننا من تصور morphogenesis المتفرعة والزخرفة للأعصاب المحيطية، والأوعية الدموية، فضلا عن توزيع الخلايا المناعية.

الجامعة-جبل [كنفوكل] الفحص المجهري للجلد الإذن الكبار: نظام نموذجي لدراسة Morphogenesis المتفرعة العصبية والأوعية الدموية وتوزيع الخلايا المناعية

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

تصوير لايف الفطرية المناعي والتفاعلات سابق للورم الخلية باستخدام نظام التعبير / UAS محرض GAL4 في اليرقات الزرد الجلد

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Epigenetic Conversion as a Safe and Simple Method to Obtain Insulin-secreting Cells from Adult Skin Fibroblasts

تحويل جينية كطريقة آمنة وبسيطة للحصول على خلايا إفراز الأنسولين من الخلايا الليفية الجلد الكبار

Regenerative medicine requires new, fully functional cells that are delivered to patients in order to repair degenerated or damaged tissues. When such ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

أفقي جبل كامل: A معالجة الرواية والتصوير بروتوكول للثدي، ثلاثة-- الأبعاد الأنسجة عبر-- أقسام الجلد

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

تحليل كمي الجامع-جبل الفلورة السكان السلف القلب في الأجنة الماوس

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

أسلوب مبسط وفعال لعزل الخلايا الكيراتينيه البشرية الأولية من أنسجة الجلد الكبار

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

تصور بالعقدة ولوحة نوتوتشوردال في جاسترولاتينج الأجنة الماوس باستخدام الميكروسكوب الإلكتروني المسح وكله جبل الفلورة

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

نموذج في المختبر نظام التروية التوازي-لوحة لدراسة البكتيريا التمسك Graft الأنسجة

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

تحليل لتطوير دائرة القلب أثناء Embryogenesis الماوس باستخدام كامل جبل ابيفلوريسسينسي

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos

طريقه تركيب طبقات لتمديد المجهر البؤري المجهري لأجنه الزبرافيش الكاملة بفواصل زمنيه طويلة

Dynamics of development can be followed by confocal time-lapse microscopy of live transgenic zebrafish embryos expressing fluorescence in specific tissues ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

التهجين الكامل في الموقع في أجنة حمار وحشي وأنبوب تشكيل اساي في iPSC-ECs لدراسة دور Endoglin في التنمية الوعائية

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...