Name: assessing lysosomal alkalinization in the intestine of live caenorhabditis elegans
Uploaded: 2018-04-13T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans at JoVE.com

हम उपभेदों के लिए Caenorhabditis आनुवंशिकी केंद्र का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा, प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद (NSERC), और कनाडा के लिए नवाचार के लिए फाउंडेशन (CFI) धन के लिए । हम dr. Lizhen चेन का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा (सेल सिस्टम और एनाटॉमी विभाग, यूटी स्वास्थ्य सैन एंटोनियो) सभी ग. एलिगेंस प्रयोगों के लिए उसे प्रयोगशाला सुविधाओं के अप्रतिबंधित उपयोग की अनुमति देने के लिए के रूप में अच्छी तरह के रूप में डॉ Exing वांग (एसोसिएट निदेशक, ऑप्टिकल इमेजिंग सुविधा , यूटी स्वास्थ्य सैन एंटोनियो) फोकल माइक्रोस्कोपी के साथ सहायता के लिए । हम भी वीडियो शूट की सुविधा के लिए समर्थन और प्रोत्साहन प्रदान करने के लिए Dr. Myron Ignatius शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।

1. दाग और छवि आंत्र lysosomes
<ol><li>सीड निमेटोड ग्रोथ मीडिया (NGM) प्लेट्स विथ OP50
	<ol>
<li>अनुशंसित प्रोटोकॉल19 के अनुसार NGM प्लेट तैयार करें और बंद प्लेटों को कमरे के तापमान पर 2 दिनों के लिए सूखने दें ।</li>
		<li>I...

<ol>
	<li>Erjavec, N., Larsson, L., Grantham, J., Nystrom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+aging+and+failure+to+segregate+damaged+proteins+in+Sir2+mutants.">Accelerated aging and failure to segregate damaged proteins in Sir2 mutants.</a> Genes Dev. 21 (19), 2410-2421 (2007).</li><li>Madeo, F., Eisenberg, T., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+for+the+avoidance+of+neurodegeneration.">Autophagy for the avoidance of neurodegeneration.</a> Genes Dev. 23 (19), 2253-2259 (2009).</li><li>Rubinsztein, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+intracellular+protein-degradation+pathways+in+neurodegeneration.">The roles of intracellular protein-degradation pathways in neurodegeneration.</a> Nature. 443 (7113), 780-786 (2006).</li><li>Cohen, E., Bieschke, J., Perciavalle, R. M., Kelly, J. W., Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+activities+protect+against+age-onset+proteotoxicity.">Opposing activities protect against age-onset proteotoxicity.</a> Science. 313 (5793), 1604-1610 (2006).</li><li>Cuervo, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+and+aging:+the+importance+of+maintaining+&amp;#34;clean&amp;#34;+cells.">Autophagy and aging: the importance of maintaining &amp;#34;clean&amp;#34; cells.</a> Autophagy. 1 (3), 131-140 (2005).</li><li>Harrington, A. J., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+as+a+model+system+for+identifying+effectors+of+alpha-synuclein+misfolding+and+dopaminergic+cell+death+associated+with+Parkinson's+disease.">Caenorhabditis elegans as a model system for identifying effectors of alpha-synuclein misfolding and dopaminergic cell death associated with Parkinson's disease.</a> Methods. 53 (3), 220-225 (2011).</li><li>Muchowski, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding,+amyloid+formation,+and+neurodegeneration:+a+critical+role+for+molecular+chaperones?.">Protein misfolding, amyloid formation, and neurodegeneration: a critical role for molecular chaperones?.</a> Neuron. 35 (1), 9-12 (2002).</li><li>Cuervo, A. M., Dice, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+decline+in+chaperone-mediated+autophagy.">Age-related decline in chaperone-mediated autophagy.</a> J Biol Chem. 275 (40), 31505-31513 (2000).</li><li>Tonoki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+evidence+linking+age-dependent+attenuation+of+the+26S+proteasome+with+the+aging+process.">Genetic evidence linking age-dependent attenuation of the 26S proteasome with the aging process.</a> Mol Cell Biol. 29 (4), 1095-1106 (2009).</li><li>Squier, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+protein+aggregation+during+biological+aging.">Oxidative stress and protein aggregation during biological aging.</a> Exp Gerontol. 36 (9), 1539-1550 (2001).</li><li>Sarkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecules+enhance+autophagy+and+reduce+toxicity+in+Huntington's+disease+models.">Small molecules enhance autophagy and reduce toxicity in Huntington's disease models.</a> Nat Chem Biol. 3 (6), 331-338 (2007).</li><li>Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy:+cellular+and+molecular+mechanisms.">Autophagy: cellular and molecular mechanisms.</a> J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).</li><li>Boya, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+function+and+dysfunction:+mechanism+and+disease.">Lysosomal function and dysfunction: mechanism and disease.</a> Antioxid Redox Signal. 17 (5), 766-774 (2012).</li><li>Kim, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-aging+treatments+slow+propagation+of+synucleinopathy+by+restoring+lysosomal+function.">Anti-aging treatments slow propagation of synucleinopathy by restoring lysosomal function.</a> Autophagy. 12 (10), 1849-1863 (2016).</li><li>Vila, M., Bove, J., Dehay, B., Rodriguez-Muela, N., Boya, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+membrane+permeabilization+in+Parkinson+disease.">Lysosomal membrane permeabilization in Parkinson disease.</a> Autophagy. 7 (1), 98-100 (2011).</li><li>Cuervo, A. M., Dice, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+intracellular+proteolytic+systems+change+with+age?.">How do intracellular proteolytic systems change with age?.</a> Front Biosci. 3, d25-d43 (1998).</li><li>Cuervo, A. M., Dice, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+lysosomes+get+old.">When lysosomes get old.</a> Exp Gerontol. 35 (2), 119-131 (2000).</li><li>Gachet, Y., Codlin, S., Hyams, J. S., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=btn1,+the+Schizosaccharomyces+pombe+homologue+of+the+human+Batten+disease+gene+CLN3,+regulates+vacuole+homeostasis.">btn1, the Schizosaccharomyces pombe homologue of the human Batten disease gene CLN3, regulates vacuole homeostasis.</a> J Cell Sci. 118 (Pt 23), 5525-5536 (2005).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Preston, R. A., Murphy, R. F., Jones, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assay+of+vacuolar+pH+in+yeast+and+identification+of+acidification-defective+mutants.">Assay of vacuolar pH in yeast and identification of acidification-defective mutants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 86 (18), 7027-7031 (1989).</li><li>Pringle, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+microscopy+methods+for+yeast.">Fluorescence microscopy methods for yeast.</a> Methods Cell Biol. 31, 357-435 (1989).</li><li>Baxi, K., Ghavidel, A., Waddell, B., Harkness, T. A., de Carvalho, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Lysosomal+Function+by+the+DAF-16+Forkhead+Transcription+Factor+Couples+Reproduction+to+Aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of Lysosomal Function by the DAF-16 Forkhead Transcription Factor Couples Reproduction to Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 207 (1), 83-101 (2017).</li><li>Colacurcio, D. J., Nixon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disorders+of+lysosomal+acidification-The+emerging+role+of+v-ATPase+in+aging+and+neurodegenerative+disease.">Disorders of lysosomal acidification-The emerging role of v-ATPase in aging and neurodegenerative disease.</a> Ageing Res Rev. 32, 75-88 (2016).</li><li>Kang, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+screening+identifies+ATM+as+a+target+for+alleviating+senescence.">Chemical screening identifies ATM as a target for alleviating senescence.</a> Nat Chem Biol. 13 (6), 616-623 (2017).</li><li>Arrasate, M., Mitra, S., Schweitzer, E. S., Segal, M. R., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inclusion+body+formation+reduces+levels+of+mutant+huntingtin+and+the+risk+of+neuronal+death.">Inclusion body formation reduces levels of mutant huntingtin and the risk of neuronal death.</a> Nature. 431 (7010), 805-810 (2004).</li><li>Brunk, U. T., Terman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial-lysosomal+axis+theory+of+aging:+accumulation+of+damaged+mitochondria+as+a+result+of+imperfect+autophagocytosis.">The mitochondrial-lysosomal axis theory of aging: accumulation of damaged mitochondria as a result of imperfect autophagocytosis.</a> Eur J Biochem. 269 (8), 1996-2002 (2002).</li><li>Gerland, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autolysosomes+accumulate+during+in+vitro+CD8++T-lymphocyte+aging+and+may+participate+in+induced+death+sensitization+of+senescent+cells.">Autolysosomes accumulate during in vitro CD8+ T-lymphocyte aging and may participate in induced death sensitization of senescent cells.</a> Exp Gerontol. 39 (5), 789-800 (2004).</li><li>Poon, H. F., Vaishnav, R. A., Getchell, T. V., Getchell, M. L., Butterfield, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+proteomics+analysis+of+differential+protein+expression+and+oxidative+modification+of+specific+proteins+in+the+brains+of+old+mice.">Quantitative proteomics analysis of differential protein expression and oxidative modification of specific proteins in the brains of old mice.</a> Neurobiol Aging. 27 (7), 1010-1019 (2006).</li><li>Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+basis+of+lipofuscin,+ceroid,+and+age+pigment-like+fluorophores.">Biochemical basis of lipofuscin, ceroid, and age pigment-like fluorophores.</a> Free Radic Biol Med. 21 (6), 871-888 (1996).</li><li>Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reduction+in+intestinal+cell+pHi+due+to+loss+of+the+Caenorhabditis+elegans+Na+/H++exchanger+NHX-2+increases+life+span.">A reduction in intestinal cell pHi due to loss of the Caenorhabditis elegans Na+/H+ exchanger NHX-2 increases life span.</a> J Biol Chem. 278 (45), 44657-44666 (2003).</li><li>Chakraborty, K., Leung, K., Krishnan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+lumenal+chloride+in+the+lysosome+is+critical+for+lysosome+function.">High lumenal chloride in the lysosome is critical for lysosome function.</a> Elife. 6, (2017).</li></ol>

सेलुलर और आणविक घटनाओं की एक किस्म उंर बढ़ने में योगदान, जीवन इतिहास लक्षण और आनुवंशिक कारकों से प्रभावित । हमारे हाल के अध्ययन के22 पता चलता है कि प्रजनन चक्र lysosomal पीएच गतिशीलता के विनियमन के मा...

प्रोटीन समुच्चय की उपस्थिति व्यापक रूप से eukaryotic कोशिकाओं1,2,3में उंर बढ़ने की एक बानगी हो स्वीकार किया है, और गठन जो सेलुलर वार्धक्य4 के सिद्धांत ड्राइवरों के बीच होने लगा है , 5 , ६ , 7. वहां बढ़ सबूत है कि कोशिकाओं के रूप में उंर, प्रोटीन catabolism ख़राब है, प्रोटीन एकत्रीकरण में वृद्धि करने के लिए अग्रणी । उंर बढ़ने कोशिकाओं में प्रोटियोलिसिस के पतन के एक autophagy8 के रूप में अच्छी तरह के रूप में proteasome-मध्यस्थता प्रोटीन क्षरण9की हानि शामिल है । अंत में, अपरिवर्तनीय प्रोटीन ऑक्सीकरण पुरानी कोशिकाओं में वृद्धि हुई है, आगे प्रोटीन catabolism10बिगड़ती ।
Autophagy शुरू में क्षतिग्रस्त प्रोटीन के थोक क्षरण के लिए एक गैर चयनात्मक प्रक्रिया होने लगा था, लेकिन हाल के अध्ययनों से संकेत दिया है कि Autophagy प्रोटीन समुच्चय और बेकार organelles के catabolism के लिए उच्च चयनात्मक है कि नहीं कर रहे है अंय प्रोटीन निकासी तंत्र11के माध्यम से गिरावट के लिए उत्तरदाई । autophagy की प्रक्रिया के दौरान, क्षतिग्रस्त और एकत्रित प्रोटीन एक डबल-झिल्ली पुटिका autophagosome बुलाया में तनहा हैं । यह autophagosome तो lysosomes बुलाया अंलीय organelles के साथ फ़्यूज़, जो autophagosome कार्गो12के क्षरण की ओर जाता है । Lysosomes autophagic मार्ग के अंत बिंदु का प्रतिनिधित्व करते हैं और इस तरह के झिल्ली की मरंमत, transcriptional नियंत्रण और पोषक तत्वों संवेदन के रूप में अलग सेलुलर प्रक्रियाओं में भाग लेते हैं; सेलुलर homeostasis में उनकी केंद्रीकृत भूमिका पर प्रकाश डाला (रेफरी .13 में समीक्षा की) । कई अध्ययनों से lysosomal समारोह और विभिंन neurodegenerative विकारों में एक उंर पर निर्भर कमी के बीच एक संघ दिखाया है13। लगातार, पुराने कोशिकाओं में lysosomal समारोह बहाल उंर बढ़ने से संबंधित phenotypes14,15की शुरुआत में देरी कर सकते हैं । intralumen वातावरण की संरचना का अध्ययन सुझाव है कि पुरानी कोशिकाओं में lysosomal समारोह के पतन lysosomal के उत्पादन में कमी के कारण नहीं है16। वैकल्पिक रूप से, यह प्रस्तावित किया गया है कि intralysosomal अंलता, अपनी एंजाइमी गतिविधि की एक महत्वपूर्ण आवश्यकता की हानि, lysosome में छोड़ आबाद-मध्यस्थता प्रोटियोलिसिस17हो सकता है । इस परिकल्पना का पता लगाने में सक्षम होने के लिए, यह एक replicable और सुसंगत तरीके से जीवित कोशिकाओं में lysosomal पीएच में गतिशील परिवर्तन की जांच करने के लिए रिएजेंट और प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए आवश्यक है ।
सी. एलिगेंस की आंत कीड़े में प्रमुख चयापचय ऊतक है और यह प्रणालीगत homeostasis और जीवन की एक महत्वपूर्ण नियामक है । हम को विकसित किया है परख कीड़े की आंतों lysosomes के लुमेन की अंलता में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए निर्धारित कैसे lysosome-मध्यस्थता प्रोटियोलिसिस उंर बढ़ने के लिए योगदान देता है । हालांकि पीएच-संवेदनशील fluorophores पहले सी. एलिगेंस में आंतों lysosomes निशान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, वहां अभी तक एक सफल प्रोटोकॉल है कि vivo18 मेंlysosomal पीएच में छोटे वृद्धि का पता लगाने के लिए कर सकते है स्थापित करने का प्रयास नहीं किया गया है। यहां, हम एक प्रोटोकॉल है कि एक सरल और सुविधाजनक खिला प्रोटोकॉल है कि OP50 भोजन में एक पीएच-संवेदनशील fluorophore (cDCFDA) शामिल का उपयोग कर के आंतों की कोशिकाओं में lysosomal अंलता की हानि का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता प्रदान करते हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1166">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:475px;">OP50 (E. coli)</td>
			<td style="width:188px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:385px;">Order online at https://cgc.umn.edu/strain/OP50</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">5(6)-carboxy-2&#8217;,7&#8217;-dichlorofluorescein diacetate&#160;</td>
			<td style="width:188px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">C369</td>
			<td>Commonly known as cDCFDA</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:475px;">9-diethylamino-5H-benzo(a)phenoxazine-5-one and (3-{2-[(1H,1&#39;H-2,2&#39;-bipyrrol-5-yl-kappaN(1))methylidene]-2H-pyrrol-5-yl-kappaN}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]propanamidato)(difluoro)boron</td>
			<td style="width:188px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">L7528</td>
			<td>Commonly known as Lysotracker Red</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Confocal microscope (e.g. Zeiss LSM 510)</td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">ImageJ</td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Download for free from https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">LB Broth powder</td>
			<td style="width:188px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">22700041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Bacto Agar</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A5306-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">NaCl</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Bacto Peptone</td>
			<td style="width:188px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S71604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Cholesterol powder</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C3045&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">CaCl2</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">449709</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">MgSO4</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">K3PO4</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P5629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Sodium Azide</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">DMSO</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:188px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Cover Slips</td>
			<td style="width:188px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">3406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Agarose</td>
			<td style="width:188px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Incubator</td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:475px;">Mirror or other smooth flat surface</td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing lysosomal alkalinization in the intestine of live caenorhabditis elegans

निमेटोड Caenorhabditis एलिगेंस (सी. एलिगेंस) एक मॉडल प्रणाली है कि व्यापक रूप से दीर्घायु और विकासात्मक रास्ते का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है । इस तरह के अध्ययनों से पशु की पारदर्शिता, आगे करने की क्षमता और आनुवंशिक परख रिवर्स, फ्लोरोसेंट लेबल प्रोटीन पैदा करने के सापेक्ष आसानी, और फ्लोरोसेंट रंजक है कि या तो जल्दी में microinjected जा सकता है का उपयोग करने की सुविधा है भ्रूण या अपने भोजन में शामिल (ई. कोलाई तनाव OP50) को सेलुलर organelles लेबल (उदा 9-diethylamino-5H-benzo (क) phenoxazine-5-एक और (3-{2-[(1, 1 ' H-2, 2 '-bipyrrol-5-yl-kappaN (1)) methylidene]-2H-pyrrol-5-yl-kappaN}-N- [2-(dimethylamino) एथिल] propanamidato) (difluoro) बोरान) । यहां, हम एक फ्लोरोसेंट पीएच के प्रयोग के प्रति संवेदनशील डाई कि दाग आंत्र lysosomes, गतिशील के एक दृश्य readout, जीना कीड़े में lysosomal अंलता में शारीरिक परिवर्तन प्रदान प्रस्तुत करते हैं । इस प्रोटोकॉल lysosomal पीएच उपाय नहीं है, बल्कि lysosomal अंलता में शारीरिक प्रासंगिक विविधताओं का आकलन करने का एक विश्वसनीय विधि स्थापित करना है । cDCFDA एक सेल permeant यौगिक है कि फ्लोरोसेंट fluorophore 5-(और-6) में परिवर्तित कर दिया है-carboxy-2 ', 7 '-dichlorofluorescein (cDCF) पर hydrolysis intracellular द्वारा esterases । lysosomes जाल के अंदर प्रोटॉन इन organelles में cDCF, जहां यह संचित । ४.८ के अपने कम pKa के कारण, इस डाई खमीर में एक पीएच सेंसर के रूप में इस्तेमाल किया गया है । यहां हम एक खाद्य पूरक के रूप में cDCFDA के उपयोग का वर्णन करने के लिए आंत्र lysosomes की अम्लता का आकलन करने के लिए C. एलिगेंस. इस तकनीक को जीवित पशुओं में alkalinizing lysosomes का पता लगाने के लिए अनुमति देता है, और उंर बढ़ने, autophagy, और lysosomal उत्पत्ति पर अध्ययन सहित प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों के एक व्यापक रेंज है ।

cDCFDA एक पीएच-निर्भर तरीके से lysosomes दाग, और lysosomes में अपने कम pKa और तैयार ऊपर ले यह एक आदर्श पीएच सेंसर21बनाता है । cDCFDA धुंधला तीव्रता lysosomal पीएच (यानी पीएच कम कर देता है के रूप में धुंधला तीव्?...

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Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

एक कदम दर कदम गाइड सी. एलिगेंस की आंत में lysosomal अम्लता के नुकसान की जांच करने के लिए पीएच के प्रति संवेदनशील का उपयोग कर महत्वपूर्ण डाई 5 (6)-carboxy-2 ', 7 '-dichlorofluorescein diacetate (cDCFDA)

लाइव Caenorhabditis एलिगेंस की आंत में Lysosomal Alkalinization का आकलन

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

निमेटोड का प्रयोग जर्मलाइन रासायनिक विषाक्तता के व्यापक मूल्यांकन<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

में सक्रिय ERK के स्थानिक और लौकिक विश्लेषण<em&gt; सी। एलिगेंस</em&gt; जर्मलाइन

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

इन विट्रो Arabidopsis थालियाना में युग्मनज ध्रुवीकरण और भ्रूण के नमूनों की लाइव-सेल इमेजिंग के लिए बीजांड खेती

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

माउस द्वितीयक ताललेट फ्यूजन की लाइव इमेजिंग

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analy

सी. एलिगेंस आंत एक मॉडल के रूप में एक सेलुलर लुमेन Morphogenesis के लिए और Vivo में एक-कोशिका स्तर पर ध्रुवीकरण झिल्ली की उत्पत्ति: लेबलिंग द्वारा एंटीबॉडी धुंधला, RNAi के नुकसान का-समारोह विश्लेषण और इमेजिंग

Multicellular tubes, fundamental units of all internal organs, are composed of polarized epithelial or endothelial cells, with apical membranes lining the ...

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

न्यूरॉन्स में Intracellular परिवहन का विश्लेषण करने के लिए Caenorhabditis एलिगेंस के स्थिरीकरण

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

RNAi और हीट शॉक-प्रेरित प्रतिलेखन कारक अभिव्यक्ति के आवेदन के लिए सी. एलिगेंस में न्यूरॉन्स के लिए रोगाणु कोशिकाओं reprogram

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

नाभिक, प्रोटीन, और Cytoskeleton के वितरण का अध्ययन करने के लिए Caenorhabditis एलिगेंस Germline का अभिकलनी विश्लेषण

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

केनोहैबडाइटिस एलिगेंस में माइटिस समूह स्ट्रेप्टोकोक्की के कारण ऑक्सीडेटिव तनाव का अध्ययन

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented ...

Isotropic Light-Sheet Microscopy and Automated Cell Lineage Analyses to Catalogue Caenorhabditis elegans Embryogenesis with Subcellular Resolution

समदैशिक प्रकाश-शीट माइक्रोस्कोपी और स्वचालित कोशिका वंश का विश्लेषण करने के लिए सूचीपत्र caभयावहता हैडिटिस एलिगेंस भ्रूणोद्भव subcellular संकल्प के साथ

Caenorhabditis elegans (C. elegans) stands out as the only organism in which the challenge of understanding the cellular origins of an entire nervous ...