Name: isolation of primary human decidual cells from the fetal membranes of term placentae
Uploaded: 2018-04-30T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke donorerne, RCWIH BioBank, og Mount Sinai Hospital/UHN Institut for Obstetrik og Gynækologi for de menneskelige prøver, der anvendes i denne undersøgelse. Vi vil gerne takke medlemmerne af lud lab, især Dr. Caroline Dunk for hendes hjælp med metodeudvikling. Dette arbejde støttes af Burroughs velkommen fond (grant #1013759).

Efterbyrd er indsamlet fra sunde sigt, ikke i labor kvinder, der gennemgår elektiv kejsersnit sektioner. Indsamling, forarbejdning og engangs menneskelige prøver overholde retningslinjerne for bestyrelsens Mount Sinai Hospital etik. En skriftlig samtykke fra hver enkelt patient. Denne undersøgelse er godkendt af etik forskningsudvalg på Mount Sinai hospitalet.
1. præparater
Bemærk: Alle trin skal udføres under et stinkskab og alle kirurgiske udstyr skal være s...

<ol>
	<li>Brosens, N., Hayashi, N., White, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+receptor+regulates+decidual+prolactin+expression+in+differentiating+human+endometrial+stromal+cells.">Progesterone receptor regulates decidual prolactin expression in differentiating human endometrial stromal cells.</a> Endocrinology. 140, 4809-4820 (1999).</li><li>Bell, S. C., D'Arcangues, C., Frase, I. S., Newton, J. R., Odlind, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Decidualization and relevance to menstruation. , 187-212 (1990).</li><li>Kariya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+inhibits+in+vitro+decidualization+of+human+endometrial+stromal+cells.">Interleukin-1 inhibits in vitro decidualization of human endometrial stromal cells.</a> Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 73, 1170-1174 (1991).</li><li>Dimitriadis, E., Robb, L., Salamonsen, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+11+advances+progesterone-induced+decidualization+of+human+endometrial+stromal+cells.">Interleukin 11 advances progesterone-induced decidualization of human endometrial stromal cells.</a> Molecular and Human Reproduction. 8, 636-643 (2002).</li><li>Wu, W. -. X., Brooks, J., Glasier, A. F., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+decidualization+and+prolactin+mRNA+and+production+at+different+stages+of+human+pregnancy.">The relationship between decidualization and prolactin mRNA and production at different stages of human pregnancy.</a> Society for Endocrinology. 14, 255-261 (1995).</li><li>Bell, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+secretion+of+protein+by+the+endometrium+and+decidua.">Synthesis and secretion of protein by the endometrium and decidua.</a> Implantation: Biology and Clinical Aspects. , 95-118 (1988).</li><li>Croy, B. A., Chantakru, S., Esadeg, S., Ashkar, A. A., Wei, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decidual+natural+killer+cells:+key+regulators+of+placental+development.">Decidual natural killer cells: key regulators of placental development.</a> Journal of Reproductive Immunology. 57, 151-168 (2002).</li><li>Smarason, A. K., Gunnarsson, A., Alfredsson, J. H., Valdimarsson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytosis+and+monocytic+infiltration+of+decidua+in+early+pregnancy.">Monocytosis and monocytic infiltration of decidua in early pregnancy.</a> Journal of Clinical and Laboratory Immunology. 21, 1-5 (1986).</li><li>Daiter, E., Pampfer, S., Yeung, Y. G., Barad, D., Stanley, E. R., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+colony-+stimulating+factor-1+in+the+human+uterus+and+placenta.">Expression of colony- stimulating factor-1 in the human uterus and placenta.</a> Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 74, 850-858 (1992).</li><li>Casey, M. L., Cox, S. M., Beutler, B., Milewich, L., MacDonald, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cachectin/tumor+necrosis+factor-alpha+formation+in+human+decidua.+Potential+role+of+cytokines+in+infection-induced+preterm+labor.">Cachectin/tumor necrosis factor-alpha formation in human decidua. Potential role of cytokines in infection-induced preterm labor.</a> Journal of Clinical Investigation. 83, 430-436 (1989).</li><li>Lala, P. K., Kennedy, T. G., Parhar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+lymphocyte+alloreactivity+by+early+gestational+human+decidua.+II.+Characterization+of+the+suppressor+mechanisms.">Suppression of lymphocyte alloreactivity by early gestational human decidua. II. Characterization of the suppressor mechanisms.</a> Cellular Immunology. 127, 368-381 (1988).</li><li>Shynlova, O., Nedd-Roderique, T., Li, Y., Dorogin, A., Nguyen, T., Lye, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infiltration+of+myeloid+cells+into+decidua+is+a+critical+early+event+in+the+labour+cascade+and+post-partum+uterine+remodelling.">Infiltration of myeloid cells into decidua is a critical early event in the labour cascade and post-partum uterine remodelling.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 17, 311-324 (2013).</li><li>Osman, I., Young, A., Ledingham, M. A., Thomson, A. J., Jordan, F., Greer, I. A., Norman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+density+and+pro-inflammatory+cytokine+expression+in+human+fetal+membranes,+decidua,+cervix+and+myometrium+before+and+during+labour+at+term.">Leukocyte density and pro-inflammatory cytokine expression in human fetal membranes, decidua, cervix and myometrium before and during labour at term.</a> Molecular Human Reproduction. 9, 41-45 (2003).</li><li>Farine, T., Lye, S. J., Shynlova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+maternal+leukocytes+are+activated+in+response+to+cytokines+secreted+by+uterine+tissues+of+pregnant+women.">Peripheral maternal leukocytes are activated in response to cytokines secreted by uterine tissues of pregnant women.</a> Journal of Cellular and Molecular Immunology. 14, 635-638 (2017).</li><li>Hamilton, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+infiltrate+the+human+and+rat+decidua+during+term+and+preterm+labor:+evidence+that+decidual+inflammation+precedes+labor.">Macrophages infiltrate the human and rat decidua during term and preterm labor: evidence that decidual inflammation precedes labor.</a> Biology of Reproduction. 86, 39 (2011).</li><li>Casey, M. L., Cox, S. M., Word, A., Macdonald, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines+and+infection-induced+preterm+labour.">Cytokines and infection-induced preterm labour.</a> Reprodution Fertility and Development. 2, 499-510 (1990).</li><li>Yellon, S. M., Mackler, A. M., Kirby, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+leukocyte+traffic+and+activation+in+parturition.">The role of leukocyte traffic and activation in parturition.</a> Journal of the Society for Gynecologic Investigation. 10, 323-338 (2003).</li><li>Gomez-Lopez, N., StLouis, D., Lehr, M. S., Sanchez-Rodriguez, E. N., Arenas-Hernandez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+in+term+and+preterm+labor.">Immune cells in term and preterm labor.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 11, 571-581 (2014).</li><li>Xu, Y., Plazyo, O., Romero, R., Hassan, S. S., Gomez-Lopez, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+leukocytes+from+the+human+maternal-fetal+interface.">Isolation of leukocytes from the human maternal-fetal interface.</a> Journal of Visualized Experiments. 99, (2015).</li><li>Trundley, T., Gardner, L., Northfield, J., Moffett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+isolation+of+cells+from+the+human+fetal-maternal+interface.">Methods for isolation of cells from the human fetal-maternal interface.</a> Methods in Molecular Medicine. 122, 109-122 (2006).</li><li>Jividen, K., Movassagh, M. J., Jazaeri, A., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+methods+for+establishing+primary+human+endometrial+stromal+cells+from+hysterectomy+specimens.">Two methods for establishing primary human endometrial stromal cells from hysterectomy specimens.</a> Journal of Visualized experiments. 87, (2014).</li><li>Pelekanos, R. A., Sardesai, V. S., Futrega, K., Lott, W. B., Kuhn, M., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+expansion+of+mesenchymal+stem/stromal+cells+derived+from+human+placenta+tissue.">Isolation and expansion of mesenchymal stem/stromal cells derived from human placenta tissue.</a> Journal of Visualized experiments. 112, (2016).</li><li>De Clercq, K., Hennes, A., Vrien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization.">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. 121, (2017).</li><li>Zhang, J., Shynlova, O., Sabras, S., Bang, A., Briollais, L., Lye, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunophenotyping+and+activation+status+of+maternal+and+peripheral+blood+leukocytes+during+pregnancy+and+labour,+both+term+and+preterm.">Immunophenotyping and activation status of maternal and peripheral blood leukocytes during pregnancy and labour, both term and preterm.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 10, 2386-2402 (2017).</li></ol>

Protokollen beskrevet her viser en omkostninger og tid effektiv metode til at isolere primære decidual celler indsamlet fra de føtale membraner af hele den menneskelige sigt efterbyrd, der er meget tilgængeligt og ligetil. Succes i denne protokol er afhængige af to kritiske faktorer, (1) effektivitet af decidual skrabning fra chorion-laget af føtale membraner og (2) den omhu, hvormed håndteres de decidual celler i hele protokollen. Det er vigtigt at chorion væv forurening er kontrolleret ved at sikre, at ingen er ...

Endometriet, en af de mest aktive voksne kvindelige væv, gennemgår dramatiske remodeling hver menstruationscyklus i respons på stimulation af æggestokkene hormoner, østrogen (E2) og progesteron (P4). Decidua, også kendt som gravid endometriet, er en kritisk vigtige reproduktive væv, der dannes ved udgangen af den postovulatory fase som følge af P4-drevet differentiering efter E2-dominerende proliferativ fase. Decidual celler er ansvarlige for udskillelsen af hormonelle faktorer for vellykket blastocyst implantation og udvikling af grænsefladen utero-placenta for at opretholde maternel tolerance over for den føtale allograft.
Decidualization kræves for implantation og efterfølgende remodellering af decidual spiral arterier. Endometrie stromale celler underkastes decidualization, under kontrol af P4 og cAMP, sen luteal fase af menstruationscyklus1. Denne proces er indledt omkring blodkar og breder sig i hele stroma, tyder på sin rolle i Vaskulaturen remodellering og leukocyt handel forordning. Denne cellulære transformation er karakteriseret ved en cirkulær morfologi, øget nukleare størrelse og udvidelse af ru endoplasmatiske reticulum og Golgi apparatet2. Decidualized stromale celler er i stand til at producere paracrine faktorer støtte blastocyst implantation og karakteriseret ved udskillelsen af talrige hormoner (dvs. prolaktin), angiogene vækstfaktorer, insulin vækstfaktor bindende protein-1 (IGFBP-1), prostaglandin (PG) E (stimulator af intracellulære cAMP), cytokiner, ekstracellulære matrix komponenter og næringsstoffer afgørende for placenta implantation og udvikling af3,4,5,6 .
Den decidual celle befolkning består ikke udelukkende af decidualized stromale celler, men indeholder også store, graviditet-specifikke decidual leukocyt populationer. Decidualization indebærer forbigående lokaliseret ødem og tilstrømning af Natural killer (NK) celler, T-celler, dendritiske celler og makrofager. Den største leukocyt delpopulation er de uterine NK celler, bestående af ca. 50-70% af alle mødres leukocytter infiltrerer decidua, som er en kilde af cytokiner og angiogene faktorer, som kan støtte i decidualization processen og stigning i antallet i hele graviditeten7. Makrofager, at være den næststørste delpopulation af immunceller, er fundet i nærheden af webstedet implantation og øge under graviditet8. De er en kilde af cytokiner og vækst faktorer såsom koloni stimulerende faktor (CSF-1)9, tumor nekrose faktor α (TNFα)10 og prostaglandin (PG) E11.
Under graviditeten, og før sigt arbejdskraft er decidua en væsentlig kilde til cytokiner og kemokiner ansvarlig for maternel perifere leukocyt aktivering og efterfølgende migration i de uterine væv at indlede arbejdskraft. Dyreforsøg viste, at mange pro-inflammatoriske cytokiner er op-reguleret i mus decidua under fødslen, såsom TNF-a, IL-6, IL-12, og IL-1b12. I den menneskelige decidua udviser pro-inflammatoriske cytokiner IL-1b, IL-6 og IL-8 (store neutrofile chemoattractant) højere udtryk i løbet af arbejdskraft i forhold til ikke i labor13. Disse udskilles cytokiner resultatet i en aktivering og tilstrømning af leukocytter i decidual væv14; en stigning i decidual makrofag og neutrofile infiltration i både menneskelige og rotte er set under sigt arbejdskraft, med decidual infiltration forud myometrial bukkes 4 gange større, der angiver en kaskade af aktivering mellem denne to-tilstødende uterin væv 15. disse infiltrerer leukocytter producerer PGs i stand til at aktivere synkron sammentrækninger af myometrium16, matrix metalloproteinases (MMPs) at indlede membran briste17,18, samt pro-inflammatoriske cytokiner til at forstærke uterine aktivisering oparbejde ('cytokin storm').
På grund af mange vigtige funktioner i decidual celler, såsom at spille en afgørende rolle i implantation proces, opretholdelse af maternel-føtal tolerance i tidlige drægtighed og deltager i aktivering af arbejdskraft på sigt, kan forskellige patologier opstå under graviditet. For eksempel kan (1) infertilitet på grund af tilbagevendende implantation fiasko og tilbagevendende graviditet tab skyldes en fejl i decidual modning; (2) intrauterin vækst begrænsning (IUGR) og preeclampsia på grund af forkert udvikling og dysfunktion af decidua/moderkagen eller kompromitteret vaskulære transformation på decidual-myometrial junction; samt (3) præterm fødsel, som kan følge af for tidlig decidual aktivering.
I lyset af disse store lidelser, kombineret med de etiske og praktiske begrænsninger af menneskelige i vivo undersøgelser, oprettelse af primære menneskelige decidual cellelinjer er afgørende for in vitro- analyse med det formål at bedre forståelse og forbedrer kliniske håndtering af graviditetskomplikationer. Formålet med vores forskning var derfor, at udvikle en protokol, som giver til isolering af menneskelige primære decidual celler med høj celle udbytte og levedygtighed indsamlet fra de føtale membraner af udtrykket efterbyrd. Denne aktuelle protokol klart beskrives en tid og omkostninger effective metode for isolering af specifikke undertyper af decidual celler der bruges til en bred vifte af in vitro- analyser. Karakterisering af overfloden og fænotype af decidual delpopulationer på sigt og sammenligning til første eller andet trimester er afgørende for at definere deres roller i hele menneskelige drægtighed.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salt solution with calcium and magnesium</td>
			<td>Prepared in facility (LTRI)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salt solution without calcium and magnesium</td>
			<td>Prepared in facility (LTRI)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaper pads</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large surgical scissors</td>
			<td>AL Medical</td>
			<td>2018-12-20.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large surgical forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11000-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic disposable cell scraper (25 cm)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mm (size 60 mesh) metal sieve</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1020-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable scalpel with plastic handle (#21)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile plastic petri dish (diameter 10 cm)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1473.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile specimen container (urine cup, 4.5 oz)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon filter (70 mm)</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>21008-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrocyte lysis buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue, 0.4% solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Reichert</td>
			<td>1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 culture media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11835-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>080-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normocin (50mg/ mL)</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-nr-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic top filtration unit (0.22 mm membrane, 500 mL)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 2, lyophilized powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soy bean trypsin inhibitor, powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9003-250mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase powder</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA powder)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope - Leica DMI 6000B</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging Flow cytometer - Image Stream MK2</td>
			<td>Amnis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDEA software</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated Vimentin antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC H7-conjugated CD45 antibody</td>
			<td>BD</td>
			<td>641399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-conjugated Cytokeratin antibody</td>
			<td>MACs Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-080-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP -conjugated Cytokeratin 7 antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP2-47941PCP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor450 Fixable Viability dye</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>65-0863-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin primary antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 7 primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M7018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat IgG</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 secondary antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 secondary antibody</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A-11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary human decidual cells from the fetal membranes of term placentae

Decidua, også kendt som gravid endometriet, er en kritisk vigtige reproduktive væv. Decidual celler, består hovedsagelig af decidualized stromale celler og immunceller, er ansvarlig for udskillelsen af hormonelle og provokerende faktorer, som er afgørende for vellykket blastocyst implantation, placenta udvikling og spiller en rolle den indledning af arbejdskraft på sigt og præmature. Mange graviditetskomplikationer kan opstå fra perturbationer af en fin balance mellem forskellige cellepopulationer bestående af decidua. Ændringer i andelen af specifikke decidual celletyper kan forstyrre disse afgørende processer og øge risikoen for at udvikle alvorlige komplikationer af graviditet, såsom embryo implantation fiasko, intrauterin vækst begrænsning, præeklampsi og præmature arbejdskraft. Den protokol, der er skitseret her viser en omkostninger og tid effektiv metode til isolering af primær decidual menneskeceller indsamlet fra de føtale membraner af udtrykket efterbyrd. Ved at kombinere enzymatisk fordøjelse og blid mekanisk afbrydelse af det decidual væv, blev et højt udbytte af decidual celler opnået med stort set ingen chorion forurening. Vigtigere, isoleret decidual celler blev præget (stromale celler (55-60%), leukocytter (35%), epithelial (1%) eller trofoblast (0,01%) celler) og vedligeholdes højt levedygtighed (80%), hvilket blev bekræftet af flerfarvet imaging flow flowcytometri assay. Denne protokol er specifikke for decidua parietalis og kan tilpasses til første og andet trimester efterbyrd. Når isoleret, kan decidual celler bruges til en lang række eksperimentelle applikationer med henblik på at forstå rollen, som forskellige decidual celle delpopulationer i graviditetskomplikationer.

For at validere effektivitet og levedygtighed af de isolerede celler, de var præget af to metoder: flow flowcytometri og immuncytokemi (ICC). 4 cellepopulationer var målrettet; decidualized stromale celler blev opdaget af anti-vimentin antistoffet, pan-leukocyt markør CD45 blev brugt til at identificere decidual immunceller, cytokeratin blev brugt til at registrere epitelial/endotelceller og endelig cytokeratin 7 blev brugt til at registrere nogen potentielle trofoblast (chorion eller ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae at JoVE.com

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Denne protokol viser en metode til isolering af primær decidual menneskeceller indsamlet fra de føtale membraner i sigt efterbyrd, som kan bruges til en lang række applikationer (dvs. immuncytokemi, flowcytometri, etc.) med det formål at studere rollen, som forskellige cellepopulationer i graviditetskomplikationer.

Isolering af primære humane Decidual celler fra de føtale membraner af udtrykket efterbyrd

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

Hud Punch Biopsi Eksplantation Culture for Udledning af primære humane fibroblaster

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolation, karakterisering og sammenlignende differentiering af humane Dental Pulp stamceller fra blivende tænder ved hjælp af to forskellige metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

Isolation, Kultur og Imaging for Human Føtal pankreascelle Clusters

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolering af kræft stamceller fra humane Prostata Cancer Prøver

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

To metoder til fastsættelse primære humane Endometriecancer stromacellers fra Hysterektomi Prøver

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolation, Kryopræservering og dyrkning af humane amnion epitelceller ved kliniske anvendelser

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Isolering af human lymfeendotelceller af Multi-parameter Fluorescens-aktiveret cellesortering

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Isolation og formering af cirkulerende tumorceller fra en mus Cancer Model

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Isolering og dyrkning af Primære endotelceller fra Canine arterier og vener

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...