Name: isolation of primary human decidual cells from the fetal membranes of term placentae
Uploaded: 2018-04-30T14:45:00
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Gli autori vorrei ringraziare i donatori, la Biobanca di RCWIH e il Mount Sinai Hospital/UHN dipartimento di ostetricia e ginecologia per gli esemplari umani utilizzati in questo studio. Vorremmo ringraziare i membri del laboratorio liscivia, particolarmente il Dr. Caroline Dunk per il suo aiuto con lo sviluppo del metodo. Questo lavoro è sostenuto dal fondo benvenuto Burroughs (grant #1013759).

Placente sono raccolti dal termine sano, non in donne di manodopera in fase di sezioni cesarean elettive. La raccolta, elaborazione e USA e getta di campioni umani rispettano le direttive del Consiglio di Mount Sinai Hospital etica. Un consenso scritto è ottenuto da ogni paziente. Questo studio è approvato dal comitato etico di ricerca presso il Mount Sinai Hospital.
1. preparati
Nota: Tutti i passaggi devono essere condotti sotto una cappa aspirante e tutte le attr...

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	<li>Brosens, N., Hayashi, N., White, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+receptor+regulates+decidual+prolactin+expression+in+differentiating+human+endometrial+stromal+cells.">Progesterone receptor regulates decidual prolactin expression in differentiating human endometrial stromal cells.</a> Endocrinology. 140, 4809-4820 (1999).</li><li>Bell, S. C., D'Arcangues, C., Frase, I. S., Newton, J. R., Odlind, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Decidualization and relevance to menstruation. , 187-212 (1990).</li><li>Kariya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+inhibits+in+vitro+decidualization+of+human+endometrial+stromal+cells.">Interleukin-1 inhibits in vitro decidualization of human endometrial stromal cells.</a> Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 73, 1170-1174 (1991).</li><li>Dimitriadis, E., Robb, L., Salamonsen, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+11+advances+progesterone-induced+decidualization+of+human+endometrial+stromal+cells.">Interleukin 11 advances progesterone-induced decidualization of human endometrial stromal cells.</a> Molecular and Human Reproduction. 8, 636-643 (2002).</li><li>Wu, W. -. X., Brooks, J., Glasier, A. F., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+decidualization+and+prolactin+mRNA+and+production+at+different+stages+of+human+pregnancy.">The relationship between decidualization and prolactin mRNA and production at different stages of human pregnancy.</a> Society for Endocrinology. 14, 255-261 (1995).</li><li>Bell, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+secretion+of+protein+by+the+endometrium+and+decidua.">Synthesis and secretion of protein by the endometrium and decidua.</a> Implantation: Biology and Clinical Aspects. , 95-118 (1988).</li><li>Croy, B. A., Chantakru, S., Esadeg, S., Ashkar, A. A., Wei, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decidual+natural+killer+cells:+key+regulators+of+placental+development.">Decidual natural killer cells: key regulators of placental development.</a> Journal of Reproductive Immunology. 57, 151-168 (2002).</li><li>Smarason, A. K., Gunnarsson, A., Alfredsson, J. H., Valdimarsson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytosis+and+monocytic+infiltration+of+decidua+in+early+pregnancy.">Monocytosis and monocytic infiltration of decidua in early pregnancy.</a> Journal of Clinical and Laboratory Immunology. 21, 1-5 (1986).</li><li>Daiter, E., Pampfer, S., Yeung, Y. G., Barad, D., Stanley, E. R., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+colony-+stimulating+factor-1+in+the+human+uterus+and+placenta.">Expression of colony- stimulating factor-1 in the human uterus and placenta.</a> Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 74, 850-858 (1992).</li><li>Casey, M. L., Cox, S. M., Beutler, B., Milewich, L., MacDonald, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cachectin/tumor+necrosis+factor-alpha+formation+in+human+decidua.+Potential+role+of+cytokines+in+infection-induced+preterm+labor.">Cachectin/tumor necrosis factor-alpha formation in human decidua. Potential role of cytokines in infection-induced preterm labor.</a> Journal of Clinical Investigation. 83, 430-436 (1989).</li><li>Lala, P. K., Kennedy, T. G., Parhar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+lymphocyte+alloreactivity+by+early+gestational+human+decidua.+II.+Characterization+of+the+suppressor+mechanisms.">Suppression of lymphocyte alloreactivity by early gestational human decidua. II. Characterization of the suppressor mechanisms.</a> Cellular Immunology. 127, 368-381 (1988).</li><li>Shynlova, O., Nedd-Roderique, T., Li, Y., Dorogin, A., Nguyen, T., Lye, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infiltration+of+myeloid+cells+into+decidua+is+a+critical+early+event+in+the+labour+cascade+and+post-partum+uterine+remodelling.">Infiltration of myeloid cells into decidua is a critical early event in the labour cascade and post-partum uterine remodelling.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 17, 311-324 (2013).</li><li>Osman, I., Young, A., Ledingham, M. A., Thomson, A. J., Jordan, F., Greer, I. A., Norman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+density+and+pro-inflammatory+cytokine+expression+in+human+fetal+membranes,+decidua,+cervix+and+myometrium+before+and+during+labour+at+term.">Leukocyte density and pro-inflammatory cytokine expression in human fetal membranes, decidua, cervix and myometrium before and during labour at term.</a> Molecular Human Reproduction. 9, 41-45 (2003).</li><li>Farine, T., Lye, S. J., Shynlova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+maternal+leukocytes+are+activated+in+response+to+cytokines+secreted+by+uterine+tissues+of+pregnant+women.">Peripheral maternal leukocytes are activated in response to cytokines secreted by uterine tissues of pregnant women.</a> Journal of Cellular and Molecular Immunology. 14, 635-638 (2017).</li><li>Hamilton, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+infiltrate+the+human+and+rat+decidua+during+term+and+preterm+labor:+evidence+that+decidual+inflammation+precedes+labor.">Macrophages infiltrate the human and rat decidua during term and preterm labor: evidence that decidual inflammation precedes labor.</a> Biology of Reproduction. 86, 39 (2011).</li><li>Casey, M. L., Cox, S. M., Word, A., Macdonald, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines+and+infection-induced+preterm+labour.">Cytokines and infection-induced preterm labour.</a> Reprodution Fertility and Development. 2, 499-510 (1990).</li><li>Yellon, S. M., Mackler, A. M., Kirby, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+leukocyte+traffic+and+activation+in+parturition.">The role of leukocyte traffic and activation in parturition.</a> Journal of the Society for Gynecologic Investigation. 10, 323-338 (2003).</li><li>Gomez-Lopez, N., StLouis, D., Lehr, M. S., Sanchez-Rodriguez, E. N., Arenas-Hernandez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+in+term+and+preterm+labor.">Immune cells in term and preterm labor.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 11, 571-581 (2014).</li><li>Xu, Y., Plazyo, O., Romero, R., Hassan, S. S., Gomez-Lopez, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+leukocytes+from+the+human+maternal-fetal+interface.">Isolation of leukocytes from the human maternal-fetal interface.</a> Journal of Visualized Experiments. 99, (2015).</li><li>Trundley, T., Gardner, L., Northfield, J., Moffett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+isolation+of+cells+from+the+human+fetal-maternal+interface.">Methods for isolation of cells from the human fetal-maternal interface.</a> Methods in Molecular Medicine. 122, 109-122 (2006).</li><li>Jividen, K., Movassagh, M. J., Jazaeri, A., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+methods+for+establishing+primary+human+endometrial+stromal+cells+from+hysterectomy+specimens.">Two methods for establishing primary human endometrial stromal cells from hysterectomy specimens.</a> Journal of Visualized experiments. 87, (2014).</li><li>Pelekanos, R. A., Sardesai, V. S., Futrega, K., Lott, W. B., Kuhn, M., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+expansion+of+mesenchymal+stem/stromal+cells+derived+from+human+placenta+tissue.">Isolation and expansion of mesenchymal stem/stromal cells derived from human placenta tissue.</a> Journal of Visualized experiments. 112, (2016).</li><li>De Clercq, K., Hennes, A., Vrien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization.">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. 121, (2017).</li><li>Zhang, J., Shynlova, O., Sabras, S., Bang, A., Briollais, L., Lye, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunophenotyping+and+activation+status+of+maternal+and+peripheral+blood+leukocytes+during+pregnancy+and+labour,+both+term+and+preterm.">Immunophenotyping and activation status of maternal and peripheral blood leukocytes during pregnancy and labour, both term and preterm.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 10, 2386-2402 (2017).</li></ol>

Il protocollo descritto qui di seguito viene illustrato un costo e tempo efficace metodo per l'isolamento primarie cellule deciduali raccolti dalle membrane fetali della placenta umana intera legislatura che è altamente accessibile e semplice. Il successo di questo protocollo dipende da due fattori critici, (1) l'efficacia di raschiatura deciduali dallo strato corion delle membrane fetali e (2) la cura con cui vengono gestite le cellule deciduali in tutto il protocollo. È importante che la contaminazione del tessuto co...

L'endometrio, uno dei più attivi tessuti femminili adulti, subisce drammatica che ritocca ogni ciclo mestruale in risposta alla stimolazione di ormoni ovarici, estrogeni (E2) e progesterone (P4). La decidua, noto anche come l'endometrio incinta, è un tessuto riproduttivo criticamente importante che si è formato alla fine della fase di postovulatory a seguito di P4-driven differenziazione seguendo la fase proliferativa di E2-dominante. Le cellule deciduali sono responsabili della secrezione di fattori ormonali per l'impianto della blastocisti successo e sviluppo dell'interfaccia utero-placentare per il mantenimento della tolleranza materno fetale documento non autografo.
Decidualizzazione è necessaria per l'impianto e conseguente rimodellamento delle arterie a spirale deciduale. Cellule stromali dell'endometrio subiscono decidualizzazione, sotto il controllo di P4 e cAMP, durante la fine della fase luteinica del ciclo mestruale1. Questo processo è iniziato intorno ai vasi sanguigni e si sparge durante lo stroma, suggerendo il suo ruolo nel rimodellamento vascolare e del leucocita traffico regolamento. Questa trasformazione cellulare è caratterizzata da una morfologia circolare, aumento delle dimensioni nucleare e l'espansione del reticolo endoplasmico e apparecchiatura di Golgi2. Proteina di cellule stromali sono in grado di produrre fattori paracrini che sostengono l'impianto della blastocisti e caratterizzato dalla secrezione di numerosi ormoni (cioè prolattina), fattori di crescita angiogenici, fattore di crescita insulinico binding protein-1 (IGFBP-1), della prostaglandina (pagina) E (stimolatore di cAMP intracellulare), citochine, componenti della matrice extracellulare e nutrienti essenziali per placentare l'impianto e sviluppo3,4,5,6 .
La popolazione delle cellule deciduali non è esclusivamente composto da cellule stromali proteina ma contiene anche popolazioni leucocitarie deciduali grande, gravidanza-specifiche. Decidualizzazione comporta edema localizzato transitorio e afflusso di cellule Natural killer (NK), cellule T, cellule dendritiche e macrofagi. La più grande sottopopolazione del leucocita è le cellule NK uterine, composto da circa 50-70% di tutti i leucociti materni infiltrante la decidua che sono una fonte di citochine e fattori angiogenici che possono aiutare nel processo di decidualizzazione e aumentare in numero tutta la gravidanza7. Macrofagi, essendo la seconda più grande sottopopolazione di cellule immunitarie, si trovano intorno al sito di impianto e aumentano durante la gravidanza8. Essi sono una fonte di citochine e fattori di crescita quali il fattore (CSF-1)9, fattore di necrosi tumorale α (TNFα)10 e della prostaglandina di stimolazione della Colonia (PG) E11.
Durante la gravidanza e prima del lavoro di termine, la decidua è una fonte importante di citochine e chemochine responsabile per l'attivazione del leucocita periferico materno e successiva migrazione nei tessuti uterini per avviare il lavoro. Gli studi sugli animali hanno mostrato che numerose citochine pro-infiammatorie sono up-regolate nella decidua del mouse durante il travaglio, come TNF-a, IL-6, IL-12 e IL-1b12. Nella decidua umana, citochine pro-infiammatorie IL-1b, IL-6 e IL-8 (principali chemoattractant del neutrofilo) mostrano maggiore espressione durante il travaglio rispetto ai non del lavoro13. Questi secreti citochine risultato in un'attivazione e l'afflusso dei leucociti nei tessuti deciduali14; un aumento dei macrofagi deciduali e infiltrazione di neutrofili in entrambi l'essere umano e del ratto è visto durante il travaglio a termine, con infiltrazione deciduale precede myometrial 4 volte maggiore, che indica una cascata di attivazione tra questa due-adiacente tessuti uterini 15. questi leucociti infiltranti producono in grado di attivare le contrazioni sincrone del myometrium16di PGs, metalloproteinasi della matrice (MMPs) per avviare la membrana rompersi17,18, così come citochine pro-infiammatorie per amplificare il processo di attivazione uterina ('tempesta di citochina').
A causa di molte funzioni importanti delle cellule deciduali, come giocare un ruolo critico nel mantenere la tolleranza materno-fetale nella gestazione iniziale e coinvolte nell'attivazione del lavoro a termine, il processo di impianto diverse patologie possono verificarsi durante gravidanza. Per esempio, (1) infertilità a causa di mancato impianto ricorrenti e perdita ricorrente di gravidanza possono essere causati da un guasto di decidual maturazione; (2) restrizione della crescita intrauterina (IUGR) e preeclampsia a causa di sviluppo improprio e disfunzione del decidua/placenta o trasformazione compromesso vascolare allo svincolo deciduali myometrial; così come la nascita pretermine (3) che può derivare da attivazione prematura deciduale.
Alla luce di questi disordini importanti, accoppiati con i limiti etici e pratici degli umani in vivo studi, stabilire linee di cellule deciduali umano primario è essenziale per l'analisi in vitro con lo scopo di comprendere meglio e migliorare la gestione clinica delle complicanze della gravidanza. Pertanto, l'obiettivo della nostra ricerca era di sviluppare un protocollo che permette l'isolamento di cellule deciduali primarie umane con cella ad alta resa e attuabilità raccolti da membrane fetali di placente a termine. Questo protocollo attuale chiaramente descrive un metodo di tempo e costi efficaci per isolamento di specifici sottotipi di decidual cellule che essere utilizzato per una varietà di analisi in vitro . Caratterizzazione dell'abbondanza e fenotipo di decidual sub-popolazioni a termine e confronto al primo o al secondo acetonide è cruciale per la definizione dei loro ruoli durante la gestazione umana.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salt solution with calcium and magnesium</td>
			<td>Prepared in facility (LTRI)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salt solution without calcium and magnesium</td>
			<td>Prepared in facility (LTRI)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaper pads</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large surgical scissors</td>
			<td>AL Medical</td>
			<td>2018-12-20.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large surgical forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11000-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic disposable cell scraper (25 cm)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mm (size 60 mesh) metal sieve</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1020-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable scalpel with plastic handle (#21)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile plastic petri dish (diameter 10 cm)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1473.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile specimen container (urine cup, 4.5 oz)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon filter (70 mm)</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>21008-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrocyte lysis buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue, 0.4% solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Reichert</td>
			<td>1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 culture media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11835-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>080-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normocin (50mg/ mL)</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-nr-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic top filtration unit (0.22 mm membrane, 500 mL)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 2, lyophilized powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soy bean trypsin inhibitor, powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9003-250mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase powder</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA powder)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope - Leica DMI 6000B</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging Flow cytometer - Image Stream MK2</td>
			<td>Amnis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDEA software</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated Vimentin antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC H7-conjugated CD45 antibody</td>
			<td>BD</td>
			<td>641399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-conjugated Cytokeratin antibody</td>
			<td>MACs Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-080-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP -conjugated Cytokeratin 7 antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP2-47941PCP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor450 Fixable Viability dye</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>65-0863-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin primary antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 7 primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M7018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat IgG</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 secondary antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 secondary antibody</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A-11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary human decidual cells from the fetal membranes of term placentae

La decidua, noto anche come l'endometrio incinta, è un tessuto riproduttivo criticamente importante. Le cellule deciduali, costituite principalmente da proteina cellule stromali e le cellule immuni, sono responsabili della secrezione di fattori ormonali e infiammatorie che sono critici per l'impianto di blastocisti successo, sviluppo placenta e svolgere un ruolo inizio del lavoro a termine e pretermine. Molte complicazioni di gravidanza possono derivare da perturbazioni di un delicato equilibrio di diverse popolazioni cellulari che comprende decidua. Alterazioni nella proporzione di tipi specifici delle cellule deciduali possono interferire con questi processi cruciali e aumentare il rischio di sviluppare gravi complicazioni della gravidanza, come il mancato impianto dell'embrione, restrizione della crescita intrauterina, preeclampsia e travaglio pretermine. Il protocollo descritto qui di seguito viene illustrato un costo e tempo metodo efficace per l'isolamento di cellule deciduali umane primarie raccolti da membrane fetali di placente a termine. Combinando la digestione enzimatica e delicata rottura meccanica del tessuto deciduale, un'alta resa delle cellule deciduali è stata ottenuta con virtualmente nessuna contaminazione del corion. Cosa importante, sono state caratterizzate cellule deciduali isolate (cellule stromali (55-60%), leucociti (35%), epiteliale (% 1) o cellule del trofoblasto (0,01%)) e mantenuto alta attuabilità (80%) che è stata confermata dall'analisi di citometria a flusso imaging multicolor. Questo protocollo è specifico per il parietalis decidua e può essere adattato alle placente di primo e secondo trimestre. Una volta isolato, cellule deciduali possono essere utilizzate per una moltitudine di applicazioni sperimentali con l'obiettivo di comprendere il ruolo delle sottopopolazioni differenti delle cellule deciduali a complicazioni durante la gravidanza.

Per convalidare l'efficienza e la vitalità delle cellule isolate, sono stati caratterizzati da due metodi: citometria a flusso e immunocitochimica (ICC). 4 popolazioni di cellule sono state mirate; cellule stromali proteina sono stati rilevati dall'anticorpo anti-vimentin, pan-leucocita marcatore CD45 era utilizzato per identificare le cellule immunitarie deciduali, cytokeratin è stato usato per rilevare le cellule epiteliali/endoteliale e infine, citocheratina 7 è stato utilizzato per...

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Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Questo protocollo viene illustrato un metodo per l'isolamento di cellule deciduali umane primarie raccolti da membrane fetali di placente di termine che possono essere utilizzate per una varietà di applicazioni (cioè immunocitochimica, citometria a flusso, ecc.) con l'obiettivo per studiare il ruolo delle diverse popolazioni cellulari in complicazioni di gravidanza.

Isolamento di cellule deciduali umane primarie dalle membrane fetali del termine intempestivo della placenta

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Pelle Punch Biopsia Espianto Cultura per la derivazione di fibroblasti umani primari

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

Isolamento, Cultura e Imaging di Human Fetal pancreatici gruppi di cellule

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolamento di cancro cellule staminali da campioni umani di cancro alla prostata

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Due metodi per stabilire primarie cellule umane endometriale stromali da isterectomia campioni

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolamento, Crioconservazione e Cultura umani Cellule epiteliali Amnion per le applicazioni cliniche

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Isolamento di cellule umane endoteliali linfatico da Multi-parametro fluorescenza-attivato cell sorting

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Isolamento e propagazione di cellule tumorali circolanti da un mouse cancro modello

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Isolamento e coltura di cellule endoteliali primarie dalle arterie e vene Canine

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...