Name: isolation of primary human decidual cells from the fetal membranes of term placentae
Uploaded: 2018-04-30T14:45:00
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著者は、この研究で使用される人間の標本のドナー、RCWIH バイオバンク マウント シナイ病院/UHN 産科婦人科を感謝したいです。灰汁ラボ、特に博士キャロラインのダンク シュート法開発と彼女の助けのためのメンバーに感謝したいと思います。この作品はバロウズようこそ基金 (グラント #1013759) によってサポートされます。

胎盤は、選択科目の帝王を受ける労働女性ではなく、健康的な用語から収集されます。収集、処理、およびひと試料の使い捨ては、マウント シナイ病院倫理委員会のガイドラインに従います。各患者からの書面による同意を得た本研究は、マウント シナイ病院研究倫理委員会で承認されています。
1. 準備
注: すべての手順は、ヒューム フードの下で...

<ol>
	<li>Brosens, N., Hayashi, N., White, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+receptor+regulates+decidual+prolactin+expression+in+differentiating+human+endometrial+stromal+cells.">Progesterone receptor regulates decidual prolactin expression in differentiating human endometrial stromal cells.</a> Endocrinology. 140, 4809-4820 (1999).</li><li>Bell, S. C., D'Arcangues, C., Frase, I. S., Newton, J. R., Odlind, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Decidualization and relevance to menstruation. , 187-212 (1990).</li><li>Kariya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+inhibits+in+vitro+decidualization+of+human+endometrial+stromal+cells.">Interleukin-1 inhibits in vitro decidualization of human endometrial stromal cells.</a> Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 73, 1170-1174 (1991).</li><li>Dimitriadis, E., Robb, L., Salamonsen, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+11+advances+progesterone-induced+decidualization+of+human+endometrial+stromal+cells.">Interleukin 11 advances progesterone-induced decidualization of human endometrial stromal cells.</a> Molecular and Human Reproduction. 8, 636-643 (2002).</li><li>Wu, W. -. X., Brooks, J., Glasier, A. F., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+decidualization+and+prolactin+mRNA+and+production+at+different+stages+of+human+pregnancy.">The relationship between decidualization and prolactin mRNA and production at different stages of human pregnancy.</a> Society for Endocrinology. 14, 255-261 (1995).</li><li>Bell, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+secretion+of+protein+by+the+endometrium+and+decidua.">Synthesis and secretion of protein by the endometrium and decidua.</a> Implantation: Biology and Clinical Aspects. , 95-118 (1988).</li><li>Croy, B. A., Chantakru, S., Esadeg, S., Ashkar, A. A., Wei, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decidual+natural+killer+cells:+key+regulators+of+placental+development.">Decidual natural killer cells: key regulators of placental development.</a> Journal of Reproductive Immunology. 57, 151-168 (2002).</li><li>Smarason, A. K., Gunnarsson, A., Alfredsson, J. H., Valdimarsson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytosis+and+monocytic+infiltration+of+decidua+in+early+pregnancy.">Monocytosis and monocytic infiltration of decidua in early pregnancy.</a> Journal of Clinical and Laboratory Immunology. 21, 1-5 (1986).</li><li>Daiter, E., Pampfer, S., Yeung, Y. G., Barad, D., Stanley, E. R., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+colony-+stimulating+factor-1+in+the+human+uterus+and+placenta.">Expression of colony- stimulating factor-1 in the human uterus and placenta.</a> Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 74, 850-858 (1992).</li><li>Casey, M. L., Cox, S. M., Beutler, B., Milewich, L., MacDonald, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cachectin/tumor+necrosis+factor-alpha+formation+in+human+decidua.+Potential+role+of+cytokines+in+infection-induced+preterm+labor.">Cachectin/tumor necrosis factor-alpha formation in human decidua. Potential role of cytokines in infection-induced preterm labor.</a> Journal of Clinical Investigation. 83, 430-436 (1989).</li><li>Lala, P. K., Kennedy, T. G., Parhar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+lymphocyte+alloreactivity+by+early+gestational+human+decidua.+II.+Characterization+of+the+suppressor+mechanisms.">Suppression of lymphocyte alloreactivity by early gestational human decidua. II. Characterization of the suppressor mechanisms.</a> Cellular Immunology. 127, 368-381 (1988).</li><li>Shynlova, O., Nedd-Roderique, T., Li, Y., Dorogin, A., Nguyen, T., Lye, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infiltration+of+myeloid+cells+into+decidua+is+a+critical+early+event+in+the+labour+cascade+and+post-partum+uterine+remodelling.">Infiltration of myeloid cells into decidua is a critical early event in the labour cascade and post-partum uterine remodelling.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 17, 311-324 (2013).</li><li>Osman, I., Young, A., Ledingham, M. A., Thomson, A. J., Jordan, F., Greer, I. A., Norman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+density+and+pro-inflammatory+cytokine+expression+in+human+fetal+membranes,+decidua,+cervix+and+myometrium+before+and+during+labour+at+term.">Leukocyte density and pro-inflammatory cytokine expression in human fetal membranes, decidua, cervix and myometrium before and during labour at term.</a> Molecular Human Reproduction. 9, 41-45 (2003).</li><li>Farine, T., Lye, S. J., Shynlova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+maternal+leukocytes+are+activated+in+response+to+cytokines+secreted+by+uterine+tissues+of+pregnant+women.">Peripheral maternal leukocytes are activated in response to cytokines secreted by uterine tissues of pregnant women.</a> Journal of Cellular and Molecular Immunology. 14, 635-638 (2017).</li><li>Hamilton, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+infiltrate+the+human+and+rat+decidua+during+term+and+preterm+labor:+evidence+that+decidual+inflammation+precedes+labor.">Macrophages infiltrate the human and rat decidua during term and preterm labor: evidence that decidual inflammation precedes labor.</a> Biology of Reproduction. 86, 39 (2011).</li><li>Casey, M. L., Cox, S. M., Word, A., Macdonald, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines+and+infection-induced+preterm+labour.">Cytokines and infection-induced preterm labour.</a> Reprodution Fertility and Development. 2, 499-510 (1990).</li><li>Yellon, S. M., Mackler, A. M., Kirby, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+leukocyte+traffic+and+activation+in+parturition.">The role of leukocyte traffic and activation in parturition.</a> Journal of the Society for Gynecologic Investigation. 10, 323-338 (2003).</li><li>Gomez-Lopez, N., StLouis, D., Lehr, M. S., Sanchez-Rodriguez, E. N., Arenas-Hernandez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+in+term+and+preterm+labor.">Immune cells in term and preterm labor.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 11, 571-581 (2014).</li><li>Xu, Y., Plazyo, O., Romero, R., Hassan, S. S., Gomez-Lopez, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+leukocytes+from+the+human+maternal-fetal+interface.">Isolation of leukocytes from the human maternal-fetal interface.</a> Journal of Visualized Experiments. 99, (2015).</li><li>Trundley, T., Gardner, L., Northfield, J., Moffett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+isolation+of+cells+from+the+human+fetal-maternal+interface.">Methods for isolation of cells from the human fetal-maternal interface.</a> Methods in Molecular Medicine. 122, 109-122 (2006).</li><li>Jividen, K., Movassagh, M. J., Jazaeri, A., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+methods+for+establishing+primary+human+endometrial+stromal+cells+from+hysterectomy+specimens.">Two methods for establishing primary human endometrial stromal cells from hysterectomy specimens.</a> Journal of Visualized experiments. 87, (2014).</li><li>Pelekanos, R. A., Sardesai, V. S., Futrega, K., Lott, W. B., Kuhn, M., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+expansion+of+mesenchymal+stem/stromal+cells+derived+from+human+placenta+tissue.">Isolation and expansion of mesenchymal stem/stromal cells derived from human placenta tissue.</a> Journal of Visualized experiments. 112, (2016).</li><li>De Clercq, K., Hennes, A., Vrien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization.">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. 121, (2017).</li><li>Zhang, J., Shynlova, O., Sabras, S., Bang, A., Briollais, L., Lye, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunophenotyping+and+activation+status+of+maternal+and+peripheral+blood+leukocytes+during+pregnancy+and+labour,+both+term+and+preterm.">Immunophenotyping and activation status of maternal and peripheral blood leukocytes during pregnancy and labour, both term and preterm.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 10, 2386-2402 (2017).</li></ol>

ここで説明されているプロトコルは、非常に身近で簡単な一次脱落膜細胞を分離するための効果的な方法で採集された全体ひと満期胎盤の胎児膜時間とコストを示しています。このプロトコルの成功は 2 つの重要な要因、(1) (2) プロトコルを通して脱落膜細胞の処理とケアと胎児膜の絨毛膜層から脱落膜を削りの効率に依存しています。絨毛膜組織汚染がどれもが誤って含まれて脱落膜をこ?...

子宮内膜、最も活発な大人女性組織の 1 つは、劇的改造卵巣ホルモン、エストロゲン (E2) とプロゲステロン (P4) によって刺激への応答の各月経周期を経る。脱落膜、妊娠子宮内膜として知られているは、E2 支配的な増殖期に続く P4 駆動型分化の結果として postovulatory のフェーズの終了によって形成される非常に重要な生殖組織です。脱落膜細胞が分泌ホルモンの要因成功した胚盤胞の着床、胎児移植する母体を維持するため子宮胎盤インタ フェースの開発を担当。
エストロージェンは、注入と脱落膜らせん動脈のそれに続く改造に必要です。子宮内膜間質細胞は、月経周期1の後半の黄体期における P4 とキャンプの制御の下でエストロージェンを受けます。このプロセスは、血管と血管リモデリングと規制を人身売買白血球におけるその役割を示唆している間質全体に広がる周り開始です。この携帯の変換は、円形の形態、核サイズの増加と粗面小胞体とゴルジ装置2の拡大が特徴です。Decidualized 間質細胞は胚盤胞移植を支援パラクライン因子を作り出すことができる、多数のホルモン (プロラクチンすなわち)、血管新生因子、インスリン成長因子結合蛋白質 1 の分泌によって特徴づけられる(IGFBP 1), プロスタグランジン (PG) E (細胞内 cAMP の刺激)、サイトカイン、細胞外マトリックス成分と胎盤注入と開発3,4,5,6 に不可欠な栄養素.
脱落膜細胞の人口が decidualized の間質細胞のみで構成されていないも大きく、妊娠特有の脱落膜白血球ポピュレーションが含まれています。エストロージェンには、ローカライズされた一過性の浮腫とナチュラル キラー (NK) 細胞、T 細胞、樹状細胞、大食細胞の流入が含まれます。最大白血球サブポピュレーションが子宮 NK 細胞は、サイトカインの源である脱落膜・血管新生因子エストロージェン プロセスの援助し、の増加可能性のある浸潤母体のすべての白血球の約 50-70% を構成します。妊娠7全体の数です。大食細胞、免疫細胞の二番目に大きい集団をされて、移植部位周辺、妊娠8の間に増加します。彼らはサイトカインの源であり、成長因子などコロニー刺激要因 (CSF-1)9、腫瘍壊死因子 (tnf α) α10とプロスタグランジン (PG) E11。
妊娠中、長期的な労働者の前に、両名はサイトカインやケモカイン母体末梢血白血球の活性化と労働を開始する子宮の組織への移行のための責任の主要なソースです。動物研究ことを示した多数のプロ炎症性サイトカイン マウス脱落膜の調整、労働中によう TNF は、IL-6、イリノイ-12 と IL-1 b12。ひと脱落膜における炎症性サイトカイン IL-1 b、IL-6 と IL-8 (主要な好中球走化性因子) は労働労働13ではなくに比べて高い発現を展示します。これら分泌されるサイトカインの活性化、白血球の流入の結果脱落膜組織14;脱落膜浸潤子宮 4 倍大きく、この 2 つが隣接して子宮組織の活性化のカスケードを示すの前で長期的な労働者中、見ると脱落膜マクロファージと両方人間の好中球浸潤およびラットの増加15. PGs16子宮筋の収縮を同期をアクティブ化することを作り出すこれら白血球の浸潤、マトリックスメタロプロテアーゼ (Mmp) 膜を開始する破裂17,18, と同様子宮アクティベーション プロセス (「サイトカイン ストーム」) を増幅する炎症性サイトカイン。
初期妊娠期では、労働力の活性化に参加することで母体・胎児の公差を維持注入プロセスで重要な役割を再生などの脱落膜細胞の多くの重要な機能のため異なることができます中に発生します。妊娠。脱落膜の成熟の障害から再発着床障害再発妊娠の損失の原因 (1) 不妊につながる例えば、(2) 子宮内の成長の制限 (IUGR) と不適切な開発と脱落膜・胎盤や子宮脱落膜ジャンクション; 妥協血管変形の機能不全による妊娠中毒症(3) 早産、早期脱落膜活性化起因することができます。
研究生体内で人間の倫理的、実用的な制限と相まって、これらの主要な疾患に照らして体外より良い理解を目的とした分析のため不可欠です主のひと脱落膜細胞株を確立して妊娠合併症の臨床管理を改善します。したがって、我々 の研究の目的細胞の高と生存期間胎盤の胎児膜から収集したひと脱落膜細胞の分離を可能にするプロトコルを開発することでした。現在このプロトコルを細胞の脱落膜の特定のサブタイプの分離の明確に時間と費用の有効な方法について説明します様々 な体外分析に使用します。豊かさの特性と用語と最初または 2 番目の妊娠との比較で脱落のサブ集団の表現型人間の妊娠の中で自分の役割を定義することが重要です。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salt solution with calcium and magnesium</td>
			<td>Prepared in facility (LTRI)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s balanced salt solution without calcium and magnesium</td>
			<td>Prepared in facility (LTRI)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaper pads</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large surgical scissors</td>
			<td>AL Medical</td>
			<td>2018-12-20.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large surgical forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11000-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic disposable cell scraper (25 cm)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mm (size 60 mesh) metal sieve</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1020-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable scalpel with plastic handle (#21)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile plastic petri dish (diameter 10 cm)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1473.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile specimen container (urine cup, 4.5 oz)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon filter (70 mm)</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>21008-952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrocyte lysis buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue, 0.4% solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Reichert</td>
			<td>1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 culture media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11835-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>080-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normocin (50mg/ mL)</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-nr-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic top filtration unit (0.22 mm membrane, 500 mL)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 2, lyophilized powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soy bean trypsin inhibitor, powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9003-250mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase powder</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA powder)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disc confocal microscope - Leica DMI 6000B</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging Flow cytometer - Image Stream MK2</td>
			<td>Amnis</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDEA software</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated Vimentin antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC H7-conjugated CD45 antibody</td>
			<td>BD</td>
			<td>641399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-conjugated Cytokeratin antibody</td>
			<td>MACs Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-080-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP -conjugated Cytokeratin 7 antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP2-47941PCP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor450 Fixable Viability dye</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>65-0863-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin primary antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokeratin 7 primary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M7018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat IgG</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-2028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 secondary antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 secondary antibody</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A-11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary human decidual cells from the fetal membranes of term placentae

脱落膜、妊娠子宮内膜として知られている、非常に重要な生殖組織であります。脱落膜細胞は、主に decidualized の間質細胞と免疫細胞の構成は成功した胚盤胞移植、胎盤発育に欠かせないし、の役割を果たすホルモンや炎症性因子の分泌を担当されて、用語と早産で労働の開始。脱落膜を構成する異なる細胞集団の微妙なバランスの摂動から多くの妊娠合併症が生じる。脱落膜細胞の特定の種類の割合に変化がこれらの重要なプロセスを中断、妊娠、妊娠中毒症、子宮内胎児発育制限胚着床障害などの重篤な合併症の発症リスクを高めると早産。ここで説明されているプロトコルは、コストと時間的胎盤の胎児膜から収集した主のひと脱落膜細胞の隔離のための効果的な方法を示しています。酵素消化と脱落膜組織の穏やかな機械的破壊を組み合わせて、絨毛膜の汚染の事実上なしで脱落膜細胞の高収率が得られました。重要なは、孤立した脱落膜細胞が特徴付けられた (間質細胞 (55-60%)、白血球 (35%)、上皮 (1%) または (0.01%) 栄養膜細胞) マルチカラー イメージング流れ cytometry の試金によって確認された高い生存率 (80%) を維持。このプロトコルは脱落膜の parietalis に固有、最初と 2 番目の妊娠の胎盤に適応することができます。一度分離、脱落膜細胞は多数の妊娠合併症で別の脱落膜細胞集団の役割を理解することを目指して実験的アプリケーションを使用できます。

効率性と隔離されたセルの実行可能性を検証するため、彼らは 2 つの方法により特徴づけられた: 流れの cytometry と免疫細胞化学 (ICC)。4 細胞集団を対象としました。decidualized 間質細胞は抗ビメンチン抗体によって検出された汎白血球マーカー CD45 は脱落膜免疫細胞を識別するために使用された、サイトケラチンは、上皮・内皮細胞の検出に使用された、サイトケラチ...

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Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

このプロトコルは、アプリケーション (すなわち免疫細胞化学、フローサイトメトリー、等) の様々 な使用することができます長期胎盤の胎児膜から収集した主のひと脱落膜細胞の分離方法を示しますを目指して妊娠合併症の異なる細胞集団の役割を研究。

用語胎盤の胎児膜から主のひと脱落膜細胞の分離

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

部分的に膵臓を摘出された患者からのヒト膵島の単離

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

プライマリーヒト線維芽細胞の導出のために皮膚パンチ生検植文化

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

単離、特徴付けと二つの異なる方法を使用して永久歯に由来するヒト歯髄幹細胞の分化の比較

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

ヒト胎児膵臓細胞クラスターの単離、培養、およびイメージング

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

ヒト前立腺癌サンプルからがん幹細胞の単離

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

子宮摘出標本から初代ヒト子宮内膜間質細胞の確立するための2つの方法

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

臨床応用のためのヒト羊膜上皮細胞の単離、凍結保存と文化

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

マルチパラメータ蛍光活性化細胞選別によるヒトリンパ内皮細胞の単離

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

マウス癌モデルからの循環腫瘍細胞の単離と伝播

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

犬の動脈と静脈からの初代内皮細胞の単離および培養

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...